海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选 58页

学校代码：学号：分类号：密级：洽姜大營硕士学位论文题目：海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选作者：罗敦文指导教师：缪卫国教授何凡研究员专业：分子植物病理学时间：二一五年五月 IdentificationandBiologicalCharacteristicsofthreeimportantdiseasesonJackfruitandscreeningoffungicidesinHainanAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinCollegeofEnvironmentandPlantProtectionByLuoDun-wenSupervisor:MiaoWei-guoHeFanMajor:MolecularplantpathologySubmittedtime:May， 海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中巳经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体巳经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系見弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影卬、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：期：年又月凡闩本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：□半年：口一年：二年发布。论文作者签名导师签名朽円期：；年月期：年月： 摘要疲萝蜜英文名，等，是我国热带地区重要的常绿经济水果。近年来由于市场需求日益增长，海南菠萝蜜生产在各级政府的大力支持下发展迅速，全省种植面积已达万余亩。同时，近年菠萝蜜病害也呈现急剧爆发态势，已见报道的病害超过种。经笔者调查发现，菠萝蜜生产中以花果软腐病（、蒂腐病（和根腐病（为重要病害，但国内针对这三种病害还缺乏较为系统的研宄。对此，本研宄针对该三种病害展开了病原分离与鉴定、生物学特性和室内毒力测定等方面的研究，主要结果如下：、病害调查结果显示：花果软腐病在所调查的市县的各菠萝蜜种植园中均有发生，主要为害花和幼果，在不防治情况下，雄花发病率可达以上，造成授粉不良，严重影响菠萝蜜产量形成；蒂腐病在琼中地区发生较为普遍，幼果和成熟果均有感染，其发病率为左右；根腐病在所调查种植园中普遍发生，部分种植园发病率达到、采用柯赫氏法则，获得了菠萝蜜花果软腐病病原分离物株，利用序列分析，获得的序列片段，经比对，结合形态学鉴定，确定匍枝根霉为疲萝蜜花果软腐病病原菌，这与前人研宄结果一致。、利用、、、和序列综合分析，获得病原菌序列片段分别为、、、和，结合形态学观察结果，鉴定出疲萝蜜蒂腐病的病原菌为胶孢炭疽菌复合类群中的，为新确定病原菌。、利用序列分析，获得—的病原菌序列片段，经比对，结合形态学观察，确定引起菠萝蜜根腐病的病原菌为腐皮镰刀菌为新确定病原菌。、生物学特性研究表明：疲萝蜜花果软腐病病原菌（在菠萝蜜果煎汁培养基上生长最好，病原菌菌丝生长最适合温度为°；菌丝生长最适合值为最适氮源为蛋白胨；菌丝致死温度为：处理。菠萝蜜蒂腐病菌在和查彼培养基中生长最好；菌丝最适宜生长温度为。病原菌菌丝的致死温度为°处理菌丝生长最适宜值为以葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖和果糖为适宜菌丝生长的碳源；以蛋白胨、酵母浸粉和牛肉浸膏为氮源的培养较适合菌丝生长。菠萝蜜根腐病病原菌在不同培养基上生长时，其菌丝生长情况明显不同，菠萝蜜幼果煎汁培养基是最佳培养基；温度、值、碳氮源对菌丝生长差异 显著菌丝生长最佳温度为°菌丝生长最佳值为菌丝的致死温度为。处理最佳碳源为葡萄糖；最佳氮源为硝酸铵。、供试的杀菌剂中，计对对菠萝蜜花果软腐病病原菌，的苯醚甲环唑有较强的抑制效果，其为针对菠萝蜜蒂腐病病原菌，咪鲜胺锰盐抑制作用较强，分别为针对菠萝蜜根腐病病原菌，百菌清抑制作用最强，为；。关键词：菠萝蜜；病原真菌鉴定；花果软腐病；蒂腐病；根腐病；生物学特性；毒力测定 AbstractJackfruitCArtocarpusheterophyllusLam)isoneofevergreenfruit-trees?Asoneofthemostsouthprovinces，，，，，，， Colletotrichumsiamensecanleadtorootrotinjackfruit5.ThestudyonbiologicalcharacteristicsofRhizopusstolonifer(Ehrenb.exFr)VuillshowsthatthemyceliumgrewfasterwhichondieJackfruitpulp-squeezingmedium.Themostsuitabletemperaturewas28。。。°，；，，，。，。，°； 目录引言菠萝蜜概述菠萝蜜生物学特性菠萝蜜的起源和分布菠萝蜜品种的分类菠萝蜜的价值菠萝蜜的营养价值菠萝蜜的药用价值菠萝蜜加工价值菠萝蜜产业发展现状国外菠萝蜜产销概况我国菠萝蜜产销概况我国菠萝蜜产业存在的主要问题热带地区分布广泛，品质差异明显：⋯⋯⋯育种研宄不足，缺乏标准化种苗繁育基地保鲜加工技术薄弱，缺少优质品牌产品栽培管理水平不高，产出率较低菠萝蜜病害及国内外研宄现状植物真菌病害鉴定方法真菌生物学特性研宄的应用分子生物学在真菌鉴定中的应用本研究的意义材料和方法材料供试植物样本材料供试菌株供试培养基供试试剂及试剂盒等材料主要溶液和仪器试验方法菠萝蜜病害调查和病害样本采集病原真菌的分离纯化病原真菌致病性测定病原真菌形态学鉴定 2.2.5菠萝蜜真菌病害病原菌的分子鉴定病原真菌生物学特性药剂毒理学室内测定结果与分析菠萝蜜种真菌病害发生情况调查菠萝蜜花果软腐病实验结果与分析菠萝蜜花果软腐病病害症状花果软腐病病原菌分离、培养和形态学鉴定花果软腐病优势菌对菠萝蜜的致病性测定匍枝根霉生物学特性研究菠萝蜜蒂腐病试验结果与分析菠萝蜜蒂腐病症状描述菠萝蜜蒂腐病病原菌分离和培养菠萝蜜蒂腐病病原分离物致病性测定菠萝蜜蒂腐病病原菌形态特征菠萝蜜蒂腐病病原菌分子生物学鉴定菠萝蜜蒂腐病病原菌生物学特性研宄菠萝蜜根腐病实验结果与分析菠萝蜜根腐病病害症状描述菠萝蜜根腐病病原菌形态学鉴定结果菠萝蜜根腐病优势菌在培养基上特征根腐病优势菌对菠萝蜜的致病性测定菠萝蜜根腐病分子生物学鉴定菠萝蜜根腐病病原菌生物学特性研宄菠萝蜜病害病原菌室内毒力测定杀菌剂对匍枝根霉（尤、室内毒力测定杀菌剂对胶孢炭疽菌类群的室内毒力测定杀菌剂对腐皮镰刀菌、室内毒力测定结论与讨论菠萝蜜病害的分离培养和鉴定结果讨论菠萝蜜花果软腐病分离培养和鉴定结果讨论菠萝蜜蒂腐病分离培养和鉴定结果讨论菠萝蜜根腐病分离培养和鉴定结果讨论菠萝蜜病原菌生物学特性研究结果讨论菠萝蜜花果软腐病病原菌生物学特性研究结果讨论菠萝蜜蒂腐病病原菌生物学特性研宄结果讨论 4.2.3菠萝蜜根腐病病原菌生物学特性研宄结果讨论杀菌剂对菠萝蜜病原真菌的室内毒力测定结果讨论菠萝蜜花果软腐病室内毒力测定结果讨论菠萝蜜蒂腐病室内毒力测定结果讨论菠萝蜜根腐病室内毒力测定结果讨论本研宄不足下一步研宄计划参考：献致谢 海南大学硕士学位论文引言疲萝蜜概述疲萝蜜为荨麻目（桑科木菠萝属常绿热带乔木果树，原产印度南部，现在孟加拉国、斯里兰卡、缅甸、泰国、马来西亚等东南亚热带国家均有分布（毛琪等，。疲萝蜜引入我国约年左右，现在海南、广东、广西、云南、台湾以及四川南部部分地区有分布，海南岛作为我国疲萝蜜的主产地，现正逐渐由零散种植向规模化种植发展范鸿雁等，，目前疲萝蜜种植面积已达余亩（吕飞杰等，。疲萝蜜生物学特性菠萝蜜株高，叶片栖圆形或倒卵形革质，长，呈螺旋状排列，基部锲形，全缘，前端钝圆有短尖，叶柄长，托叶大。雌花长圆形或圆柱形，生于枝干或小枝上；雄花圆柱形或棒状，长宽陈封怀，。聚花果呈椭圆状、倒卵状或长圆状，成熟时重达，黄绿色至黑色，内部中间具肥厚花序轴，四周密布白色至鲜黄色的肥厚果荀（即为直接食用的果肉），果甚由花被发育而来，果荀内含种仁，种仁富含淀粉，果荀周围扁长的白色至黄色不肥厚的荀腱即为不发育的花被。疲萝蜜果为聚花果，整个聚花果的外表皮厚约，由花被管发育而成，表面有六角形突起（俗称花刺），即为一朵花的界限（毛琪等，。疲萝蜜的起源和分布菠萝蜜原产于印度南部，后逐渐向东亚、东南亚及世界各热带地区传播。目前菠萝蜜主要种植国有印度、缅甸、中国、菲律宾、越南等，东非乌干达、美洲巴西、美国夏威夷以及澳大利亚也有少量种植；中国的海南、广东、云南、台湾、福建以及四川南部部分地区也有分布（叶春海等，。海南省栽培较多，历史也较为悠久，如海南省兴隆地区海拔至范围内均有栽培，村落边缘，房前屋后等地遍布谭乐和，菠萝蜜品种的分类在我国，疲萝蜜按照果肉特征分为湿荀和干苟两类，湿苟疲萝蜜成熟时，果巷水分含量多，吃起来柔软而甜滑，纤维多而长，香气清淡，果仁中淀粉含量低。成熟干荀菠萝蜜，荀肉口感爽脆香甜，香味浓郁，果仁中含有较多淀粉。国外对菠萝蜜的分类与国内类似，大多也分为两类，即硬荀和软苟，硬荀与国内干荀特征相似，软荀与国内湿荀相似（李瑞梅等，。目前菠萝蜜规模化种植基地多以干荀黄肉为主， 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选大多消费者更倾向于买干甚果实食用，在海南省以“琼引号”为代表品种。疲萝蜜的价值疲萝蜜的营养价值菠萝蜜成熟时果肉可直接食用，果仁含淀粉量较多，即可以煮食，也可炒食，有“木本粮食”之称。果肉蜜甜，芳香，吃完后很久口内仍留有余香，素有“留齿香”旳美誉，果肉以品种不同而由白至黄，颜色鲜艳，同时富含多种营养物质，其中总糖含量达，脂肪含量达蛋白质含量达，维生素含量也较高（谭乐和等，。研宄结果表明，疲萝蜜果肉含有丰富耗、镁、钠、铁、锌、猛等有益人体的元素，有害的元素含量很少（李移等，。旌萝蜜的药用价值菠萝蜜除了果肉可鲜食，种子可煮或炒食外，其全身还具有一定的药用价值，食用疲萝蜜成熟果肉后可缓解产后少乳，增加乳汁的分泌，将果仁与肉烛煮食用，可治疗产后缺乳；菠萝蜜种子含有一种可促进胸腺、细胞的增殖和抑制细胞生长的凝集素（陈忠等，菠萝蜜果皮经发酵后，可提取制备抗水肿及消炎药物的蛋白酶，该类药物可治疗支气管炎、关节炎消除炎症与消除肿胀；疲萝蜜叶片和椰子油混合制成膏剂，对淸病、机械伤和皮肤病有特效；菠萝蜜根的提取物也有独特药效，可防治哮喘、发烧、腹浑、急性扁桃体炎；树皮的提取物则可制成镇静药；腺体肿大和脓肿时可用树液与醋混和物治疗（高爱平等，。疲萝蜜加工价值疲萝蜜因其菅养价值高，除可直接鲜食或种子煮食外，还可将菠萝蜜加工成其他加工品，如疲萝蜜果脯，菠萝蜜果干，疲萝蜜果酱，疲萝蜜脆片以及菠萝蜜果酒等，由于疲萝蜜成熟后不耐存储，单个疲萝蜜重量大，发展疲萝蜜产业深加工，开发菠萝蜜加工新产品成为其产业发展的必要环节。目前对于疲萝蜜的食用价值、保健功能以及各种深加工技术还在不断深入探究。徐华民（徐华民，通过微波对疲萝蜜果实釆用微波快速加热，利用硫熏等工艺，制备出的菠萝蜜果脯金黄柔韧、风味独特。李秀娟等（李秀娟等，将疲萝蜜按照糖：果肉为的比例糖渍个月的果肉打楽再采用调配、匀质等生产制作工艺，制作出的饮料具有浓郁的原果香气，解决了饮料的原料保藏和风味保持等问题；武杰丨等（武杰等，研制出液萝蜜果装冰琪淋；李俊侃、王天陆、郭飞燕（李俊侃等，；王天陆，；郭飞燕等，等均在各自领域里对疲萝蜜加工品的工艺参数进行了探索和研宄。 海南大学硕士学位论文疲萝蜜产业发展现状国外菠萝蜜产销概况菠萝蜜在印度、马来西亚、孟加拉国、印尼等亚热带热带地区均有种植；肯尼亚、坦桑尼亚、乌干达等非洲国家，巴西、牙买加等美洲国家以及夏威夷和澳大利亚等地也有种植（，。在亚洲国家中，印度种植面积居首位，达到年产量达其次是马来西亚、孟加拉国、泰国、菲律宾。菠萝蜜果实体型大，单果重，不便销售和食用，也不便存储和运输，在国外，除了在产地鲜果销售食用外，还多通过深加工制成加工品出售。越南对菠萝蜜深加工技术领先于其他国家，作为世界上最大的菠萝蜜加工品出口国，越南的菠萝蜜加工品畅销于全球各地市场。目前，通过延长新鲜疲萝蜜的保质期，加处理后的疲萝蜜鲜果销售至欧美等地，这使马来西亚的菠萝蜜鲜果市场发展迅猛。我国疲萝蜜产销概况令我国热带地区于多年前一种栽培菠萝蜜，年“琼引号”品种的篩选和大量种植，使海南省的菠萝蜜种植面积初具规模，目前，全省各市县均有规模化种植。自年以后，广东茂名、高州、阳东等地也建立了多个疲萝蜜种植基地，种植品种为常有菠萝蜜和泰国四季菠萝蜜。目前，我国菠萝蜜年产量约为吴刚等，主要为鲜果销售，除海南、广东、广西等产地市场外，还运输至北京、上海以及东北等北方城亩，在北方城市，其价格较高，深受消费者喜爱。菠萝蜜产地海南的春光、南国等海南本土食品加工企业已初步具备菠萝蜜果肉加工能力，包括菠萝蜜果干、脆片、糖以及薄饼等市场需求大仍需要东南亚等国进口。我国疲萝蜜产业存在的主要问题热带地区分布广泛，品质差异明显菠萝蜜是我国热带地区广泛分布的常绿乔木果树，常作为行道树，广泛分布于农村家庭院落、房屋周围以及道路两侧。菠萝蜜多采用种子进行播种，后代个体性差异显著，同一株母本实生苗后代果实良莠不齐。育种研究不足，缺乏标准化种苗繁育基地作为小宗水果，我国对波罗蜜的种质资源和育种情况研究很晚，资源收集保存等环节薄弱，没有科学化、系统化的的菠萝蜜资源进行品种认定，与国外差距较大。目前仍然没有标准化的菠萝蜜种苗繁育基地，优质果苗缺乏。 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选保鲜加工技术薄弱，缺少优质品牌产品疲萝蜜不耐存藏，我国对疲萝蜜保鲜的研宄较少，除南方等地区常有鲜果销售外，北方地区很少有售，是北方地区消费者很难接触到疲萝蜜鲜果，初次接触疲萝蜜的北方消费者很难接受疲萝蜜独特的芳香气味，使疲萝蜜的远销受到制约。对于疲萝蜜果实的深加工的科研成果转化不够，如海南省具备加工疲萝蜜成果干、疲萝蜜脆皮等产品的企业只有海南春光、南国等企业，企业少，加工规模小，利用疲萝蜜的水平较低。这使得消费者对疲萝蜜的认识渠道少，专业化企业缺乏品牌核心竞争力。栽培管理水平不高，产出率较低近十余年来，通过引进、选育和推广疲萝蜜新品种，规模化疲萝蜜种植基地在广东海南等地相继出现，管理水平有所提高，果苗繁育也由传统的种子实生改变为嫁接育苗。但海南等主产区仍有达的果树不能生产出标准商品果（吕飞杰等，。疲萝蜜病害及国内外研究现状目前，国内外对于疲萝蜜病害的研宄还不够系统深入。据国外报道，为害木疲萝的病害有多种，其中最主要的是由引起的叶斑病（。等（对孟加拉国吉大港地区疲萝蜜种植园由胶孢炭疽菌引起的疲萝蜜叶斑病进行了调查。等（，对菲律宾五个省的疲萝蜜病虫害种类进行了调查，鉴定出种病害。国内而言，己报道的疲萝蜜真菌性病害共有种，包括疲萝蜜花果软腐病（病原菌有种：；；；疲萝蜜炭症病（、链格孢叶斑病疲萝蜜叶点霉叶斑病对、拟盘多孢叶斑病、棒孢霉叶斑病、、疲萝蜜排腐病、疲萝蜜球二抱叶斑及果腐病、褐根病、红根病（、木疲萝叶斑病（；、煤烟病、木疲萝果腐病、根腐病以及丛枝病（弓明钦，李增平等，桑利伟等，。由此可见，国内外对疲萝蜜病害的研宄还不够深入系统，主要是针对病害种类鉴定进行研究，针对病原菌生物学特性研究以及防治药剂的蹄选的报道很少，还有一些病害发现后未进行鉴定病原，部分病害还可能未发现，这就需要对疲萝蜜病害进行较为系统深入的研究。 海南大学硕士学位论文植物真菌病害鉴定方法真菌生物学特性研究的应用在培养基中的菌落形态和显微孢子形态学观察是传统真菌分类鉴定的主要方法。不同种类的真菌其适应环境的能力不尽相同，在不同的环境控制下，其菌落、孢子形态特征表现有所不一，不同温度、值、湿度、光照、碳源、氮源等对菌落的影响也不一致。通过培养基在不同条件下分离培养，研宄病原真菌的形态特征和生理生化指标变化，比较其生物学特性，根据形态学对病原菌进行初步鉴定。分子生物学在真菌鉴定中的应用由于传统的分类学方法受多种因素的限制，不仅消耗时间长，还要求有丰富的分类学经验，其主观性较强，在日常操作中，常常不能准确得到病原真菌的分类地位，因此仅作为初步鉴定方法。分子生物学对于一些在形态学上很难加以鉴定的致病真菌如复合类群、生理小种等的鉴定上突显出其优势（，；，；。真菌分类研宄的分子生物学技术包括中含量测定、核酸杂交技术、限酶切片段长度多态性分析、电泳核型分析、随机扩增多态性分析（、序列分析、多位点酶切电泳、限制性片段长度多态性（，扩增片段长度多态性（，和朱研研等，陈剑山等，。中含量测定是最早利用分子生物学方法作为真菌分类的辅助手段，这种方法有其局限性，如果碱基含量相同，但碱基排列顺序不一致，其摩尔百分比差异很小，并不能认为其是同一种类，因此还需要其他鉴定方法。杂交技术其原理是真核生物为互补配对的双螺旋结构，单链可以与其同源序列的另一条完全互补配对成双链，通过对不同菌株的单链杂交，其差异性越小，说明亲缘关系越近。技术即限制性酶切片段长度多态性分析，建立于杂交基础上。不同真菌核酸序列上限制性内切酶（的识别位点不同，用相同的酶切核酸序列，获得的核酸片段大小也不一致，在凝胶电泳时呈现出不同的条带。只要选择合适，每一种真菌均能显示出其分类水平上的多态性或独特性，常用于种以下的分类，一般适用于种菌之间的比较（刘刚等，。因是对整个序列进行酶切，在电泳过程中，有时干扰项太多，而不能得到理想的特异性片段。 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选即扩增片段长度多态性分析，其原理是利用限制性内切酶（将核酸序列内切，并利用特定的小序列链接酶切片段两端，形成特异性序列片段，以此作为模板，进行扩增，经凝胶电泳，则可以只获得特异性片段的电泳条带，以此作为不同真菌的特异性分子标记。即随即扩增多态性分析，利用合成引物将目的基因组经扩增，凝胶电泳后，分析基因组片段大小和数量多态性，从而比较目的基因差异（；。即真菌核糖体基因转录间隔区分析。年等设计引物对真菌细胞内核糖体进行扩增开始，是目前真菌鉴定中最为常用的分子鉴定方法。核糖体由、、、、、七段组成（林晓民等，。、和是真菌序列的通用引物。、和相对保守，在不同的物种中存在同源性，而对于不同的物种的区的序列也不尽相同（赵杰，。最近研宄人员研宄表明由于胶孢炭疽菌的序列保守性过高，以传统形态学结合分析对胶孢炭谊菌鉴定结果不准确（韩永超等，。胶孢炭疽菌为一个复杂的复合类群，等（，采用序列和多基因结合分析的鉴定方法可以使炭疽菌属真菌的鉴定更为准确。本研究的意义海南省具有优异的气候条件，是我国疲萝蜜的主产地，目前海南疲萝蜜种植面积己有万余亩，产量和和产值领先于全国其他省市，并保持逐年增加的趋势，给产区农民创造了巨大的经济价值。随着种植面积的不断增大，疲萝蜜真菌病害发生普遍且严重，但由于疲萝蜜为小宗水果，受研究人员的重视程度不够、相关研究相对滞后，己成为严重制约疲萝蜜高效生产的主要原因之一。在此背景下，本研宄在对海南省疲萝蜜真菌病害进行调查的基础上，发现疲萝蜜花果软腐病、蒂腐病以及根腐病种真菌病害对海南省疲萝蜜产生了较大的危害，其中疲萝蜜花果软腐病虽为己报道病害，但对其生物学特性和室内毒力测定的研宄不多，蒂腐病和根腐病是未见报道或未确定病原菌的病害。本研宄拟利用形态学结合分子生物学的方法对疲萝蜜种病害的病原真菌进行分离和鉴定，明确种真菌病害的病原菌种类，通过生物学特性及室内毒力测定研究，以寻求有效防治该种重要病害的理论依据和技术支持，为海南疲萝蜜产业的稳定、健康发展提供参考。 海南大学硕士学位论文材料和方法材料供试植物样本材料病果：采自海南各疲萝蜜产区种植园“琼引号”品种的花果软腐病和蒂腐病病果。病根：采至海南各菠萝蜜产区种植园“琼引号”品种的根腐病病株。接种材料：、接种果来自海南省农业科学院热带果树研究所永发基地“琼引号”品种健康果；、接种用菠萝蜜苗来至海南省农业科学院热带果树研宄所苗圃菠萝蜜（龄）芽接苗。供试菌株实验供试菌株选取从海南省菠萝蜜病样上分离纯化得到的匍枝根霉、胶孢炭疽菌和腐皮镰刀菌进行生物学特性研宄、分析以及室内毒力测定试验。室内毒力测定供试药剂表试繊剂单剂编号药剂有效成分及含量商品名剂型生产厂家甲基硫菌灵甲基托布津江苏龙灯化学有限公司多菌灵多菌灵上海升联化工有限公司腐霉利速克灵日本住友化学株式会社稀醜吗琳尊冠河北冠龙农化有限公司咪鲜胺猛盐使百功浙江省桐庐汇丰生物化工有限公司百菌清达科宁日本横滨工厂代森猛梓大生美国陶氏益农公司：哩醚菌酷凯润巴斯夫（中国）有限公司腈菌挫诺田沈阳科创化学品有限公司苯越甲环哩世浩江苏耘农化工有限公司 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选表试验細浪剂编号名称药剂有效成分及含量商品名剂型生产厂家甲霜灵青岛奥迪斯生物科技甲霜猛梓奥悦农代森锸锌有限公司多菌灵江西正邦生物化工股溴菌多菌灵甜农漠菌灵份有限公司。稀醜吗啉福建凯立生物制品有稀醜中生凯劲中生奪素限公司嚷霜灵先正达（江苏）作物保嚷霜猛梓杀毒巩代森猛梓护有限公司苯醚甲环哩瑞士先正达作物保护苯甲啼菌酯阿米妙收啼菌酯有限公司供试培养基培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养基（马铃薯蔗糖琼脂培养基；培养基（玉米琼脂粉培养基；培养基（燕麦琼脂培养基；培养基胡萝卜琼脂培养基；培养基；培养基；培养基（周文静，菠萝蜜幼果煎汁培养基：菠萝蜜幼果，葡萄糖，琼脂粉，加水至。具体操作：取疲萝蜜幼果（月龄左右）切片后加水煮沸后用层纱布过滤，在滤液中加入葡萄糖，琼脂粉，定容至，摸拌均勾后分装，灭菌。上述培养基宜现配现用，也可灭菌后置于°保存备用，切不可长时间储存，以免影响试验结果。供试试剂及试剂盒等材料氨辛青霉素；真菌提取试剂盒（北京百泰克生物技术有限公司）；引物由上海生工生物工程公司和北京六合华大基因科技股份有限公司广州分公司合成，目的基因测序由上海生工生物工程公司和华大基因广州分公司完成；上海生工生物工程技术服务有限公司）。葡萄糖、鹿糖、麦芽糖、果糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、乱糖、淀粉、硝酸按、硫酸铵、甘氨酸、牛肉浸膏、尿素等分析纯购自广州化学试剂厂；蛋白胨购自广东省油头市生物化学制药厂，酵母浸粉购自广东环凯生物科技公司和广东省科学院微生物 海南大学硕士学位论文研究所。主要溶液和仪器溶液的配制：取室温下保存的溶液稀释倍后配制成溶液，作为电泳缓冲液。实验仪器显微镜日本公司；仪美国公司；凝胶成像系统，美国公司。试验方法疲萝蜜病害调查和病害样本采集于年月年月间分别从琼山区、澄迈、琼中、定安、文昌、万宁、临高、琼海、儋州、乐东、陵水等个市县的菠萝蜜种植园中选取具有代表性的调査点各一个，对各调查点所有菠萝蜜植株普查，选取典型发病样品作为本研究的供试样本。病原真菌旳分离纯化对于菠萝蜜真菌病害的分离根据疲萝蜜不同部位的病害样品材料，釆取不同的分离方法（方中达，。菠萝蜜花果软腐病和蒂腐病病原的分离选取从菠萝蜜种植园中采集的病果，清水冲洗，瞭干，用灭菌的￥术刀在病果病健交界处切取直径约左右的病组织块，放入升萊液中约，放入灭菌蒸馈水中清洗遍，用灭菌滤纸吸干后移至培养基上，并标明号，于°恒温培养。疲萝蜜根腐病的分离选取从菠萝蜜种植采集的病株根部，洗去表面泥沙，瞭干，用灭菌刀刮去病根表皮，切取的组织块，放入升萊溶液中约，放入灭菌蒸懐水中冲洗遍，用灭菌滤纸吸干后移至培养基上，编号，于。恒温培养。菠萝蜜病原真菌纯化和保存对于产孢的真菌釆用单抱分离法进行纯化，对于较难看到孢子的真菌则采用挑取菌落边缘菌丝重复转板培养的方法，达到菌株纯化的目的。菌株纯化后的接种于斜面培养基中°培养后，置于°下保存备用。病原真菌致病性测定菠萝蜜花果软腐病病原菌的致病性测定 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研宄及室内药剂蹄选取健康的疲萝蜜月龄左右的幼果，经乙醇表面消毒，浸泡于中灭菌水冲洗次后，将分离纯化的菌种打成菌饼，接种于处理过的健康的疲萝蜜果实上，釆用针刺菌饼、无伤菌饼处理，针刺空白培养基、无伤空白培养基作对照，每个样本处理为一组，每组五次重复，接种后°保湿培养，定期观察（范咏梅等，。疲萝蜜蒂腐病病原菌的致病性测定从健康的疲萝蜜上切取约的果蒂，经乙醇表面消毒，浸泡于中，灭菌水冲洗次后，将分离纯化的菌种打成菌饼，接种于处理过的健康的疲萝蜜果实果蒂上，采用针剌菌饼、无伤菌饼处理，设针刺空白培养基、无伤空白培养基作对照，每个样本处理为一组放置入含有一张灭菌吸水纸的玻璃培养皿内，加入灭菌水保湿，每组五次重复，接种后，°恒温培养，定期观察。疲萝蜜根腐病优势菌致病性测定、参照文献（孙文姬等，朱春雨等，将分离的菌株出现频率高的的优势菌制成孢子悬浮液或菌丝悬浮液，用浸根法接种。取一年生琼引号健康芽接苗移栽至装有经灭菌的试验用土的花盆中，移栽前用自来水冲去根部自带土壤，放入的中浸泡，再用灭菌水冲去后，实验组放于孢子悬浮液中浸泡后移栽，对照组灭菌水浸泡。移栽后实验组饶孢子或菌丝悬浮液，并覆盖保鲜膜于土层表面保湿，对照组绕灭菌水后覆盖保鲜膜保湿，放置于海南省农科院热带果树研究所苗圃中。观察其发病情况。、参照文献（李勇等，谢慧捧等，，将出现频率高的的优势菌株接种到培养基上，°恒温培养，采用针剌接种法接种，取一年生琼引号健康芽接苗移栽至装有经灭菌的试验用土的花盆中，移栽前用自来水冲去根部自带土壤，放入中浸泡灭菌水冲净后，实验组用接种针剌芽接苗距主根的根莲部表面，取直径的菌饼接种于刺伤部位，用灭菌湿棉花覆盖保湿，并用保鲜膜包裹，覆盖表土。对照组用无菌的培养基，对照和实验组各处理株，放置于海南省农科院热带果树研究所苗圃中。病原真菌形态学鉴定取分离纯化后的菌株接种于培养基上，室温下培养天后，用的灭菌的打孔器在菌落边缘打取菌饼，接种至平板中央，°下恒温培养，观察菌落形态，并制作玻片于光学显微镜下镜检，参照《真菌鉴定手册》（魏景超，和《植物病原真菌学》（陆家云，初步鉴定病原菌属或种。疲萝蜜真菌病害病原菌的分子鉴定 海南大学硕士学位论文提取的材料的获取将初步鉴定的供试菌株接种于培养基上°恒温活化后，挑取菌丝接种于液体培养基中，°静止培养后，揭取液体培养基上的菌丝层，放于超净工作台内用灭菌的吸水纸上风干，将风干菌丝装于灭菌的离心管中密封，保存备用。真菌的提取采用真菌基因组提取试剂盒（目录号：提取病原菌具体操作步骤如下：水浴到°，常温下融化灭菌的去离子水取适量样本在灭菌的研钵中，加入液氮充分研磨成细粉；转移细粉到一个的离心管中，加入°预热的和剧烈振荡混勾放入°水浴锅中期间剧烈润旋振荡次；加入，充分混勾，离心吸取上清液至分离柱中，离心后收集下液在收集的下液中加入倍体积，充分混勾后加入到一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中）；加入事先加入无水乙醇的漂洗液，离心弃掉废液；再次加入漂洗液离心弃掉废液；再次离心；取出吸附柱放入干净灭菌的离心管中，在吸附膜的中间部分两次共加入温度为。左右），室温放置离心收集；取电泳检测，其余放置于保存备用。菠萝蜜花果软腐病和根腐病病原菌基因组序列扩增运用真菌通用弓丨物’’、；进行扩增。引物由上海生工合成。反应体系为真菌模板、各，，酶，反应程序为°。°循环次；。，。保存。疲萝蜜蒂腐病病原菌序列扩增运用真菌通用引物’’、：’’和四对特异性引物（； 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选；、；：：、：；：：：；：：、：进行扩增。引物均由上海生工合成。反应体系为：真菌模板，上下游引物各，⋯，；反应程序为°；°，，循环次；。°保存。测序和分析取产物经行凝胶电泳检测后，阳性产物测序；将所得序列在中比对，选取同源性较高的序列，用构建系统发育树。病原真菌生物学特性病原菌菌饼的制备：将分离纯化鉴定的病原菌菌株接种于培养基上活化，°恒温培养后，用灭菌的打孔器沿菌落边缘打取菌饼。不同培养基对病原菌菌落生长的影响用打孔器从病原菌菌落边缘打取菌饼置于选取的、、、玉米培养基、燕麦培养基、萝卜培养基、疲萝蜜煎汁培养基、培养基中央，每个处理重复次，°恒温培养匍枝根霉培养时间较短。用十字交叉法测量培养、和后的菌落直径。温度对菌丝生长的影响挑取菌饼接种于培养基平板中央，将平板分别放于、、、、、、、、°无光恒温培养，每个处理次重复，测量方法同。病原菌菌丝致死温度测定取灭菌的离心管，加入灭菌水，每个离心管中放置片菌饼，设置、、、、、、°共个温度梯度，将放有菌饼的每个离心管放置到上述温度梯度的水浴锅中水浴预热分钟后开始计时，分钟后取出用冷水进行冷却，然后从各梯度温度处理的离心管中随机挑取菌饼接于平板上，每个平板接个相同处理的菌饼，每个处理接个平板，°培养，观察菌丝生长情 海南大学硕士学位论文况，以确认菌丝的致死温度（耿丽华等，。值对菌落生长影响用的和溶液调节培养基的值至、、、、、、、、、共个处理，接菌饼于上述个处理的中央，每个处理重复次，培养，测量方法参考。碳源对菌丝生长的影响分别用葡萄糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、淀粉等种碳源替换查彼培养基中的蔗糖，将菌饼接于上述不同碳源培养基平板中央，以无碳培养基为对照，°恒温培养测量方法参考。氮源对菌丝生长影响分别用牛肉浸膏、酵母浸粉、尿素、蛋白胨、硫酸按、硝酸铵种氮源替换查彼培养基中的硝酸钠，将菌饼接于上述不同氮源培养基平板中央，以无氮培养基为对照，°恒温培养，测量方法参考。药剂毒理学室内测定采用室内生长速率法（路嵌平等，测种杀菌剂对菠萝蜜病原菌的毒力大小。将杀菌剂用无菌水稀释后，制成含有不同药剂浓度的平板，以加入相应量灭菌水代替药剂作空白对照。取备选病原菌菌饼移至含药剂的平板中央，置于°恒温培养，每种药剂做组梯度，每组浓度梯度做个重复处理。测量方法参考并分别计算抑菌率。抑菌率空白对照菌落直径处理菌落直径空白对照菌落直径采用软件进行数据统计分析将抑菌率换算为几率值，以几率值作依变量，浓度对数作自变量建立独立回归方程，通过方程求算的几率值为时的浓度即。 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选结果与分析疲萝蜜种真菌病害发生情况调查花果软腐病在所调查的个市县的各疲萝蜜种植园中均有发生，主要发生在疲萝蜜的花和幼果上，在不防治情况下，雄花发病率可达以上，成为影响疲萝蜜果实正常授粉及产量形成的主要病害；蒂腐病（在琼中地区发生较为普遍，幼果和成熟果均有部分感染，其病害发生率为左右；根腐病在所调查的个市县菠萝蜜种植园中普遍发生，部分种植园疲萝蜜根腐病（发病严重，其病害发生率达到。疲萝蜜花果软腐病实验结果与分析疲萝蜜花果软腐病病害症状病原菌侵染后，感病果病部初期呈褐色水绩状变软腐烂，随后在病部产生一层浓密的白色直立毛状菌丝，并在病果腐烂部位中部生成灰黑或褐色霉层。病原菌主要危疲萝蜜果实，雄花较雌花更易受害，其幼花、幼果较成熟果更易受害，受虫口或机械伤的花和果实更容易受病原菌侵染（如图。图玻萝蜜花果软腐病危害症状：未受病原菌侵染的幼果；病原菌侵染的幼果花果软腐病病原菌分离、培养和形态学鉴定在：恒温相对湿度培养基培养并纯化后，获得的菌株经初步鉴定以匍枝根霉丨兄最多，其他菌分离出很少，故以匍枝根霉为优势菌。匍枝根霉彳菌丝生长旺盛、发达、迅速，左右长满培养皿，菌丝无隔膜，孢子球形或椭球形，，有分枝的匍丝与假根，孢囊梗根从 海南大学硕士学位论文生，在假根相反的方向，从菌丝上产生孢囊梗直立，暗褐色，顶端产生孢子囊，孢子囊单生，暗褐色，球形（如图魏景超，。‘图疲萝蜜花果软腐病病原菌菌落及病菌孢子囊和抱子形态特征注：培养基上菌落正面；培养基上菌落背面；、：孢子囊和孢子形态图。花果软腐病优势菌对疲萝蜜的致病性测定采用针刺伤、无伤接种两种方法对分离到的匍枝根霉菌株进行致病性测定，结果发现，接种后观察，发现针刺或无伤幼果接种的菌饼菌有菌丝长出，表面产生一层茂密白色气生菌丝其中针刺接种幼果上菌丝扩散面积更大，而无伤接种的幼果菌丝扩散面积相对较小；接种后观察发现，两种接种方法的幼果上均密布菌丝，针剌接种的空白对照均未见发病（图。 海南省液萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选氣■纖图匍枝根赛致病性測定注：对照；接种后发病症状（左为无伤接种，右为剌伤接种，后同）；接种后发病症状；感病幼果剖面：疲萝蜜花果软腐病分子生物学鉴定通过扩增，获得一条左右的清晰条带（从上到下共条条带，大小分别为、、、、和经华大基因测序显示，该病原菌片段大小为通过比对、分析，结果表明，病原菌株登录号的序列相似度为。运用近邻相接法作进化树（图，结果表明，目标菌株（与登录号为）的菌株处于同一分支，所以确定目的菌株为与形态学鉴定结果一致。 海南大学硕士学位论文；‘■■■、图病原菌目的基因片段检測结果及其序列系统发育树匍枝根霉生物学特性研究不同培养基对匍枝根霉菌丝生长的影响种供试培养基接种匍枝根霉后，°度温培养，结果表明匍枝根霉在种培养基中都能生长。在疲萝蜜煎汁培养基中，菌丝生长茂密，肉眼可观察到的孢子囊较多；在和培养基中菌丝生长较好，菌丝扩散速度较快，产生孢子也较多；在燕麦培养基，葡枝霉菌丝密集，但扩展半径较小；在胡萝卜、和玉米培养基中，匍枝根霉菌丝稀疏，可见少量孢子囊；在查彼培养基中的菌丝虽扩展半径较大，仅有微量的菌丝覆盖，几乎看不到孢子囊。说明匍枝根霉最适宜培养基为疲萝蜜煎汁培养基、培养基和培养基。「口■■■丨■图不同培养基对匍枝根霉菌丝生长的影咱；；：玉米培养基燕麦培养基胡萝卜培养基；疲萝蜜煎汁培养基査氏培养基温度对匍枝根霉菌丝生长的影响 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选在设置的种温度梯度中，°范围内菌丝均能生长，随着温度升高，菌丝生长加快，在°、°时，菌丝生长速度较快，培养菌落平均直径分别达到和，在°时，菌落直径大，菌丝茂密厚实。当温度低于°或高于°时，菌丝不生长（如图）。■。：图温度对傭枝根霉菌丝生长的胸病原菌菌丝致死温度测定将病原菌菌菌饼在、、、、、、°水浴分别处理后，冷却并接种于平板上培养，观察发现在°均能萌发长出新的菌落，而经°及以上水浴处理的菌饼菌丝不能继续生长，说明该病原菌菌丝的致死条件为°处理。值对匍枝根霉菌丝生长的影响结果表明，匍枝根霉在值为范围内的培养基均能生长，菌丝生长最适合为。当时，菌丝生长速度逐渐加快；当时，菌丝生长逐渐减慢；菌丝在碱性条件下比酸性条件下生长要快。 海南大学硕士学位论文—■■■■■■“值图值对枝根霉菌丝生长的影响不同氮源对葡枝根霉菌丝生长的影响在种氮源的培养基中，不同的氮源对匍枝根霉菌丝生长影响不同，在以尿素作氮源的培养基中几乎不生长；在以蛋白胨、甘氨酸、硫酸按、酵母浸粉作氮源的培养基中生长较好，在牛肉浸膏、摘酸钱作氮源的培养基中可以生长。在以蛋白胨和酵母浸粉作氮源的做氮源的培养基中°恒温培养后，菌丝茂密，菌落边缘整齐，孢子囊多；以硫酸按作氮源的培养基中：恒温培养后，菌丝生长快，但产孢较少；在甘氨酸为氮源的培养基中，菌丝呈黄白色，有白色孢子囊，背面成黄色；在尿素为氮源的培养基中菌饼未见菌丝长出（如图。□■「■■确酸钠硝酸按硫酸按蛋白腺甘氛酸牛肉浸膏酵母浸粉尿素图不同氧源对菌丝生长的影响疲萝蜜蒂腐病试验结果与分析疲萝蜜蒂腐病症状描述 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选该病菌可危害疲萝蜜幼果果柄，受机械损伤、低温冻害的果实易染病。初期幼果果柄表皮皱缩并呈水绩状腐烂但不脱落，有时能看到明显的白色霉层，后逐渐向果实蔓延，果蒂逐渐变褐，在田间，常可发现感染该病的病果果蒂脱水干枯而悬挂于树枝图疲萝蜜蒂腐病田间症状（侵染初期、侵染中期、侵染后期）、、疲萝蜜蒂腐病病原菌分离和培养在°恒温相对湿度培养基培养并纯化后，共获得种形态不同的菌株，分别命名为、、、、。疲萝蜜蒂腐病病原分离物致病性测定釆用针刺伤、无伤两种方法接种对分离到的上述菌株进行致病性测定，结果发现，在所有接种菌株中，编号为的菌株接种后所有处理均表现出腐烂症状，与自然条件下的发病症状相似，对照组未表现出发病。相同条件下，接种后观察，针刺接种果蒂皱缩，变褐变软，表面产生一层茂密白色气生菌丝，而无伤接种的症状表现不明显；接种后观察发现，无伤接种的果蒂表面明显皱缩变褐变软，与针刺接种在后症状相似，但气生菌丝稀少，空白对照均未见发病（图。以上结果说明，分离到的菌株可以侵染疲萝蜜果蒂引起果蒂部腐烂，机械损伤加快分离物对果蒂的侵染速度，同时果蒂的机械损伤有利于分离物的气生菌丝生长。从发病果蒂分离得到的菌株与接种菌株相同，证明原分离到的接种菌株为菠萝蜜蒂腐病病原菌。 海南大学硕士学位论文针刺，簾伤麟纏騰针刺接伤接种：图致病性测定接种后发病症状（、对照（和发病症状（疲萝蜜蒂腐病病原菌形态特征在°恒温相对湿度培养箱条件下，培养初期培养基平板上的菌落为白色，有较发达的线毛状白色至灰白色气生菌丝，背面呈白色。后期从菌落背面中部开始逐渐变黑色，正面逐渐变褐色至黑色。分生孢子梗直立无隔，分生孢子圆筒形，单细胞无色，图。通过形态学特征比对，将该病害初步鉴定为盘长孢状刺盘孢其有性世代为围小丛壳属。”图疲萝蜜蒂腐病病原菌菌落及病菌菌丝和抱子形态特征注：培养基上菌落正面；培养基上菌落背面；、：菌丝和孢子形态图。、中标尺为。、 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选、疲萝蜜蒂腐病病原菌分子生物学鉴定对疲萝蜜蒂腐病病原菌进行扩增，获得一条左右的清晰条带，华大基因测序结果显示，该病原菌片段大小为，通过比对、分析，运用近邻相接法（（，作进化树（图，结果表明，该病原菌与登录号的序列相似度为，所以确定该病原菌为与形态学鉴定结果一致。因胶孢炭疽菌是个种群较大的复合群体，为进一步确定菌株类群，分别用、、和共对引物对病原进行扩增，分别获得、、和的基因片段，通过比对，并参考提供的种胶孢炭疽参照序列利用临近相连法做系统进化树，其结果（如图表明：、、中扩增序列与均能与加登录号分别为、聚为一族，故推断该病原菌是胶孢炭疽复合类群中的：。—丨丨：—图病原菌株目的基因片段检测结果及其序到系统发育树 海南大学硕士学位论文—，广■議補⋯⋯印■■■—、■、—■瘇■—”；—一【丨》■“‘—切■￡—咖謂广，，‘—■丨丨一■—「一、如‘，■’■■—“—”■’—丨⋯■■■—图病原菌株不同保守基因片段系统发育树疲萝蜜蒂腐病病原菌生物学特性研究不同培养基对疲萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长的影响种供试培养基接种菌饼后°恒温培养，结果表明：在和查彼培养基中生长最好，培养后的平均直径达到和，其次是疲萝蜜煎汁、和胡萝卜培养基，在玉米培养基和培养基上生长较差；最不适应的培养基是燕麦培养基，培养后菌落平均直径为如阁 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选「，■□■口？门。。’丨丨“丨』丨‘‘■丨吸丨吸丨■■■“图不同培养基对蒂腐病病原菌菌丝生长的影响；；：玉米培养基燕麦培养基胡萝卜培养基萝蜜煎汁培养基；查彼培养基温度对疲萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长的影响不同温度实验结果表明，疲萝蜜蒂腐病病原菌菌饼在°没有菌丝生长，培养后其菌落直径仍然为在时可以生长但速度较缓慢，培养后，菌落直径仅为几乎不生长；°范围内，随温度升高生长量增加，在°时达到最高，之后随温度升高，生长量下降。最适生长温度为°，超过或低于°菌丝均不能正常生长（如图。「目。。為‘‘‘‘‘‘‘？°图不同温度对疲萝蜜蒂腐病病原菌菌盆生长的影响疲萝蜜蒂腐病病原菌菌丝致死温度测定将病原菌菌丝在、、、、、、°水浴分别处理后，冷却并接种于平板上观察发现在°均能萌发长出新的菌落，而经水 海南大学硕士学位论文浴处理的菌饼菌丝不能继续生长，说明该病原菌菌丝的致死温度为°，值对菠萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长的影响在设置的不同值为的°恒温培养条件下，均能生长，当值为和时，菌丝生长及其缓慢，培养的菌落直径仅为和值为时，菌丝生长最快，培养后的直径达到后随值增大，菌丝生长速度逐渐放缓，到值为时，培养，菌落直径为，由此说明的值适应范围很广（如图。■■—，““““‘““—值图不同值对液梦蜜蒂腐病病丝生长的影响碳源对菠萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长的影响在以阿拉伯糖、麦芽糖、果糖和葡萄糖为碳源的基础培养基中，—菌这生长较好，菌丝茂密，菌落边缘整齐，恒温培养后，其菌落直径分别达到、、和而以半乳糖、蔗糖和可溶性淀粉为碳源的基础培养基上的菌落直径分别为、和，木糖作为碳源时，菌丝生长速度缓慢。在基础培养基中不加碳源时，培养后，菌丝极其稀少，仅有一薄层透明菌丝覆盖（如图。 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选□口二门广。。』』丨■■丨■國无糖葡荀糖鹿糖果糖半乳糖麦芽糖水糖阿拉伯糖淀粉图不同碳源对液萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长的影响氮源对疲萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长的影响在供试的氮源中，以蛋白胨、酵母浸粉和牛肉浸膏为氮源的培养基较适合疲萝蜜蒂腐病病原菌菌丝生长，而在摘酸按、硫酸铵和尿素为氮源的培养基菌丝生长较为缓慢（如图。「口■厂内由「‘』确酸钠确酸按硫酸按蛋白腺甘氛酸牛肉浸膏酵母浸粉尿素图不同氮源对渡萝蜜蒂腐病病原菌菌盆生长的影响疲萝蜜根腐病实验结果与分析疲萝蜜根腐病病害症状描述疲萝蜜根腐病在各个树龄段均有危害，发病率在左右，部分严重田块可达以上，其感病致死率达到。发病症状明显，病树叶片变黄脱落，靠近枯黄叶片一侧根莲结合部位韧皮部和形成层腐烂，逐渐向周围扩散，伴有难闻臭味， 海南大学硕士学位论文根皮极易与木质部分离，腐烂部位由黄褐色逐渐变黑色，重病植株老根腐烂，新根不长，仅剩呈空管状根皮（如图，枝条和树干逐渐枯死。’■參图田间症状疲萝蜜根腐病病原菌形态学鉴定结果对海南省个市县（区）采集的份样品分离到的个分离物在培养基上培养，根据其菌落形态和显微形态特征，参照魏景超初步鉴定为个种属，它们是镰刀菌属、轮枝霄属、刺腐霉（、青霉属（户￡、丝核菌属等，其中嫌刀菌分离频率最高达到，每个市县采集样品均有分离到，为优势菌；刺腐霉从万宁临高两地采集样品中分离得到；轮枝霉从万宁、琼海两地采集样品中分离得到（见表。疲萝蜜根腐病优势菌在培养基上特征在培养基上气生菌丝稀少呈浅灰色薄纟戎状，培养基不变色；小型分生孢子数量较多，肾形，隔，哗；大型分生孢子近镰刀形，隔均有；厚垣孢子近球形，单生或对生，有时几个串成串珠状，生长于菌丝中间或孢子顶端（如图中、、。根据形态学特征，初步鉴定为腐皮镰刀菌有形态为赤球丛赤壳（ 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研宄及室内药剂筛选表液萝蜜根腐病病原苗分顦率分离菌株总数病原菌（分离频率样品釆集地万宁、临高、琼海、琼中、傭州、乐东、镰刀菌陵水、琼山区、澄迈、定安、文昌轮梭霄属万宁、琼海剌腐霉尸声如万宁、临高青霉属儋州、临高丝核菌属琼海、琼中木霉属儋州、临高、琼山毛霉属琼中葡萄孢吵陵水梨孢帚霉属琼山区层孔菌⑶乐东多主瘤梗单孢霉临高 海南大学硕士学位论文毫、含图菠萝蜜根腐病种分离真菌的形态特征：镰刀菌在上菌落形态（、、：镰刀菌大、小分生孢和厚垣孢子（、；葡萄孢霉在上的形态特征（；葡萄孢霉的分生孢子梗和分生孢产；：木霉属在上的形态特征（；：木霉属的分生孢子梗（木霉属：刺腐霉在上的形态特征（声；：刺腐霉卵孢子（标尺为根腐病优势菌对疲萝蜜的致病性测定选取分离频率最高的镰刀菌作为回接菌株，进行致病性测定。致病性测定结果显示：由菌液浸根法接种疲萝蜜根部，左右，接种植株叶片枯黄，随后开始脱落，植株开始表现出与田间一致相似症状，后树叶全部脱落，挖出树根，对照植株正常生长，无异常症状。用针刺接种法接种疲萝蜜根部，左右，接种植株叶面枯黄，随后开始脱落，植株开始表现出田间一致相似症状，后树叶全部脱落，挖出树根，对照植株正常生长，无异常症状（如图。接种植株从发病部位进行病原菌再分离，分离到株镰刀菌，与接种用菌株在形态学上一致。 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选鍾图腐皮镰刀菌对液萝蜜致病性测定（对照；：接种后发病症状）疲萝蜜根腐病分子生物学鉴定对回接后感病的植株分离出的株镰刀菌株进行检测（图后获得的序列片段，送华大基因广州分公司测序，经比对、分析，发现与其同源性最高的前株菌均为腐皮镰刀菌，其同源性达到，同时利用邻近相连法做系统发育树（图，结果表明分离出的病原菌株（登录号为：中、的遗传距离最近，位于遗传发育的同一分支，因此证明分离到的镰刀菌株为腐皮镰刀菌，与形态学鉴定一致。°°———■■一丨图病原菌（产物电泳检測及其序列系统发育树疲萝蜜根腐病病原菌生物学特性研究不同培养基对根腐病病原菌菌落生长的影响种供试培养基接种病原菌后在°下恒温培养，结果表明：不同培养基对病原菌的生长影响显著，病原菌在疲萝蜜果实煎汁培养基、、胡萝卜培养基上长势较好，接种后其菌落平均直径分别为、和在、、燕麦、 海南大学硕士学位论文查彼培养基中也能较好的生长，但在玉米粉培养基屮长势最差，菌丝稀疏，恒温培养后的菌落直径才，玉米培养基菌落中央背面部分为紫红色（如图。￡口§“‘■隱彡§彡§彡§§§⋯图不同培养基对根腐病病原菌菌拔生长的影响；；；玉米培养基燕麦培养基胡萝卜培养基疲萝蜜煎汁培养基；查彼培养基不同温度对根腐病病原菌菌落生长的影响不同温度实验结果表明，疲萝蜜根腐病病原菌在°和时几乎不生长，培养后其菌落直径仍然为°范围内，随温度升高生长量增加，在°时达到最高，之后随温度升高，生长量下降。最适生长温度为，超过或低于°菌丝均不能正常生长，°条件下培养菌落平均直径为，°时菌丝紧密，但扩散缓慢培养、、后菌落的平均直径分别为、和其生长速度非常缓慢（如图。一—丨‘‘‘‘‘‘‘。。。图不同温度对根腐病病原菌菌丝生长的影响 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选根腐病病原菌菌丝致死温度测定将病原菌菌丝在、、、、、、°水浴分别处理后，冷却并接种十平板上，观察发现在°均能萌发长出新的菌落，而经°水浴处理的菌饼菌丝不能继续生长，说明菠萝蜜根腐病病原菌菌丝的致死温度为°。不同值对根腐病病原菌菌落生长的影响结果表明，菌丝在值为范围内的培养基上均能生长，菌丝生长最适合为。碱性条件下比酸性条件下生长要快，在碱性条件下°培养后，菌落平均直径均超过，而酸性条件下，相同温度和时间培养，其菌落平均直径均未能超过说明该病原菌在碱性条件下能更好的生长（如图。丨■■‘■“倌图不同值对根腐病病原菌菌链生长的影响不同碳源对菌丝生长的影响疲萝蜜根腐病病原菌在不同碳源的培养基上菌丝生长也不同，在含葡萄糖、果糖、半乳糖和麦芽糖的培养基上生长直径较大，菌落颜色棉白色，菌丝较多；在木糖和阿拉伯糖培养基上虽然生长较快，培养后菌落直径均超过，但菌丝稀薄，仅有很薄一层白色透明状菌丝覆盖于培养基在庶糖、乳糖、淀粉培养基可以生长，菌丝紧密，但生长缓慢（如图。 海南大学硕士学位论文川「■：崖崖崖无糖葡萄糖鹿糖果糖乳糖半乳糖麦芽糖木糖阿拉伯糖淀粉图不同碳源对根腐病病原菌菌丝生长的影响不同氮源对菌丝生长影响不同氮源对疲萝蜜根腐病菌落生长的影响不同，确酸铵、蛋白胨、酵母浸粉和牛肉浸膏中生长最好，在°培养后，其菌落直径均超过在含硝酸钠、甘氨酸和尿素的培养基上生长较好，培养后其平均直径分别为、和在硫酸钱中生长最慢培养后，其菌落直径仅为如图。口孩咳厂确酸钠確酸按硫酸按蛋白胨甘氛酸牛肉浸眘酵母浸粉尿素图不同贫源对根腐病病原菌菌丝生长的影响菠萝蜜病害病原菌室内毒力测定杀菌剂对匍枝根霉室内毒力测定选择杀菌剂对疲萝蜜花果软腐病病原菌匍枝根霉进行室内毒力测定，结果显示：参试药剂对病原菌都有不同程度的抑制作用（表。在供试的药剂中的苯酸甲环挫对蒲萝蜜软腐病病原菌的抑制效果最好，其为腐霉利、苯甲啼菌酯、咪鲜胺猛盐和晴菌挫病原菌菌丝生长也有较好的抑制作用，其分别为胆、、 海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选和；炼酷吗琳和溴菌多菌灵的抑制作用一般，其为昭和略。表不同杀苗剂对匍枝根霉的毒力拥定药剂设置浓度毒力回归方程相关系数腐霉利，，稀酸吗啉，，咪鲜胺猛盐，腈菌哩，’苯酸甲环唑，溴菌多菌灵，苯甲啼菌酯，杀菌剂对胶孢炭疽菌类群的室内毒力测定通过杀菌剂对引起疲萝蜜蒂腐病的的室内毒力测定实验，结果表明：不同药剂对的抑制作用不同（表。在供试药剂中咪鲜胺猛盐、苯甲喃菌酯和苯酸甲环挫对菠萝蜜蒂腐病病原菌的抑制作用较强，分别为、和，其次是的炼醜中生、漠菌多菌灵、多菌灵、耽挫酸菌酷和代森猛锌，其值为。表不同杀苗细对的毒力拥定药剂设置浓度毒力回归方程相关系数多菌灵，，咪鲜胺猛盐，，，百菌清，，比唑酸菌酯苯酷甲环哩，溴菌多菌灵，，，稀酰中生，苯甲啼菌酯，， 海南大学硕士学位论文杀菌剂对腐皮镰刀菌室内毒力测定通过杀菌剂对引起菠萝蜜根腐病的腐皮镰刀菌的室内毒力测定实验，结果表明：不同的药剂对腐皮镰刀菌均有不同程度的抑制作用（表。在供试药剂中，百菌清对菠萝蜜根腐病病原菌的抑制作用最强，为苯甲嚼菌酷、苯醚甲环哩和腈菌唾对菠萝蜜根腐病病原菌也有较好的抑制作用，其值为昭其次是溴菌多菌灵、甲霜猛锌、噪霜猛锌、腐霄利、代森猛锋和稀酰中生，其为甲基硫菌灵和條酰吗啉对引起疲萝蜜根腐病的腐皮镰刀菌的抑制作用较弱，其分别为和。表杀菌剂对腐皮镰刀的毒力測定药剂设置浓度（毒力回归方程相关系数甲基硫菌灵，腐霉利，稀酰吗啉，百菌清，代森猛锌，，腈菌挫，，苯魅甲环哩，，，甲霜猛祥，，，溴菌多菌灵，，，稀醜中生，，嗎霜猛锌’，苯甲啼菌酯，， 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研宄及室内药剂蹄选结论与讨论本研究通过对海南省主要疲萝蜜种植园进行病害调查、病原分离与鉴定等，掌握了海南疲萝蜜真菌病害发生情况，确定了引起海南疲萝蜜花果软腐病、疲萝蜜蒂腐病和疲萝蜜根腐病的病原物。调查结果显示：海南省疲萝蜜规模化种植品种以“琼引号”为主，疲萝蜜花果软腐病是由匍枝根霉侵染引起，疲萝蜜蒂腐病是由胶孢炭疽菌复合类群中的侵染引起，疲萝蜜根腐病则是由腐皮镰刀菌侵染疲萝蜜根部或根莲部引起，其中由和引起的疲萝蜜蒂腐病和疲萝蜜根腐病为首次发现。疲萝蜜病害的分离培养和鉴定结果讨论疲萝蜜花果软腐病分离培养和鉴定结果讨论匍枝根霉可引起多种植物病害，等（，于年在腐烂的甘薯中分离到匍枝根霉；毕阳等（毕阳等，研究表明匍枝根霉在常温下储运能感染甜瓜，造成甜瓜毁灭性的损坏。本研宄对疲萝蜜花果软腐病的分离采用常规组织分离法，利用形态学鉴定方法进行鉴定，结果表明：疲萝蜜花果软腐病病原菌在分离培养基的分离过程中生长极为迅速，通过挑取边缘菌丝较易纯化培养，获得的病原真菌经柯赫氏法则验证，经鉴定证明匍枝根霉是引起疲萝蜜花果软腐病的病原菌这与文献报道的一致（弓明钦，；李增平等，。通过对分离得到的匍枝根霉的序列分析，结果显示其重复序列较多，在上比对时，前组序列均显示为匍枝根霉，但序列覆盖率和同源性均不高，因此说明方法对于匍枝根霉的分子生物学鉴定不太适用，这也是目前相关研究中存在的普遍问题，至于用何种分子生物学方法对匍枝根霉进行精确鉴定还需要进一步探索。在对匍枝根霉进行致病性测定时，针剌接种的处理感病，而对照未发病，说明机械损伤能够增加匍枝根霉侵染疲萝蜜果实的几率。花果软腐病是疲萝蜜的主要病害，发生普遍而严重，在所调查的产区均有发生，严重影响菠萝蜜产业的产量。作为病原菌，匍枝根霉兄■，腐生性较强，无疲萝蜜果实时，可以在土壤和枯枝落叶上营腐生生活，较难防治，在生产管理时，加强田间管理，加强肥水管理，提高植株抗病能力，及时清除田间病果、枯枝落叶和杂草，有利于减少病原菌侵染。菠萝蜜蒂腐病分离培养和鉴定结果讨论本研究通过分离、致病性测定、形态学特性和序列分析确定菠萝蜜蒂腐病病原菌为胶孢炭疽菌，胶孢炭疽菌为一个大的复合类群，为进一步确定病原，利用、、和共对引物扩增并测序，结 海南大学硕士学位论文果表明，引起疲萝蜜蒂腐病的病原菌是胶孢炭疽菌复合类群中的■引起疲萝蜜蒂腐病时表现为：表皮皱缩变褐变软、腐烂、有时在表面可看到一层浓密白色菌丝，并向果实部位蔓延。可可球色单隔孢吵￡也可引起疲萝蜜果实果蒂部位腐烂（李增平等，而可可球色单隔孢引起的病果果皮变的黑软而发臭，生成黑色域毛状霉层李增平等，，这与引起疲萝蜜蒂腐病的症状明显不同。通过对‘琼引号’疲萝蜜果实果蒂刺伤部位和无伤部位接种对照，对比发现针刺伤部位接种后果蒂很快感病，无伤部位接种果蒂感病较慢。由此可知，在实验室离体条件下，胶孢炭疽菌对于疲萝蜜果蒂无论有无损伤均可以侵染，但对有机械损伤的果蒂部位则更易侵染。这与琼中岭头茶场出现大面积疲萝蜜蒂腐病病情相一致：年底年初海南省出现低温天气，中部山区温度较其他地区温度更低，作为典型热带果树的疲萝蜜果蒂部本身较为细小，受冻害较为严重，受机械损伤的果实更易受到侵染。胶孢炭疽菌是炭谊菌属内最大的一复合群，危害种类繁多，可以引起多种植物发生炭疽病（徐红梅等，。胶孢炭疽菌可引起疲萝蜜叶片叶斑病，在果实成熟期可引起果腐。而由胶孢炭疽菌复合群中的引起‘琼引号’的疲萝蜜幼果蒂腐病尚未见报道，该病害引起疲萝蜜蒂腐病的致病机理是否与其引起疲萝蜜炭疽病的致病机理一致还需要进一步研究。疲萝蜜根腐病分离培养和鉴定结果讨论疲萝蜜根腐病是一种病原菌侵染疲萝蜜根部而致使疲萝蜜根部腐烂、最终植株整株干枯死亡的重要病害。经过对海南省个市县（区）采集的份疲萝蜜样品进行病菌分离和纯培养，结果显示，根据分离到的个分离物在培养基上的菌落形态和显微形态特征，参照文献（魏景超，初步鉴定为个种，它们是镰刀菌轮枝霉、刺腐霉声、青霉、丝核菌舰等，其中分离频率最高达到的是镰刀菌，每个市县釆集样品均有分离到，为优势菌。通过对优势分离菌株的形态鉴定，致病性测定和序列分析表明，腐皮镰刀菌是疲萝蜜根腐病的优势病原之一。腐皮镰刀菌可以侵染多种植物引起根腐病（冯茜等，柴一秋等，杨颖等，黄芳等，，是一类研究的比较多的镰刀菌。引起植物根腐病的真菌种类根据植物类别有所不同，常见的有镰刀菌，疫霉菌，腐霉菌，丝核菌，链格孢菌，还有一些其他真菌。年俞大紱等（俞大线等，研宄得出导致蚕豆枯萎、根干枯病和黄枯病的病原分别为燕麦镰刀菌（、腐皮镰刀菌（和尖孢镰刀菌（；来元直（来元直，经分离接种证实引起黄麻根腐病的病害为 海南省疲萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选；堪多仁等报道称可引起小麦菌核性根腐病。向玉英等（向玉英等，等在河南省东部及北京地区对一年生杨树苗木包括加杨的紫根腐病的研宄中出其病原菌为；刘泉狡等（刘泉姣等，于年从甘薯根腐病上分离得到腐皮镰孢甘薯专化型，经回接证实其为甘薯根腐病的病原菌；张良院等（张良院等，提出发光假蜜环菌可导致多种果树发生根腐病；邱德勒（邱德励，于年在洪雅林场对杉木根腐病进行了研宄得出杉木根腐病的主要病原菌是终极腐霉（；陈守常等（陈守常等，对四川油桐根腐病进行了研究报道四川油桐根腐病是由腐皮镰刀引起；何永华（何永华在刺槐根腐病的研究中提出刺槐根腐病是由丝核菌侵染引起；年，贾中和等（贾中和等，对拜城地区的胡麻根腐病进行研宄发现胡麻根腐病是由侵染发生；谬作清等（谬作清等，提出、、、、等可引起三七根腐病；刘亚亚等（刘亚亚等，提出粉红单端孢霉、尖孢镰刀菌和立枯丝核菌可引起掌叶大黄根腐病；这对于研究疲萝蜜根腐病病害具有较髙的参考利用价值。在不同生态条件下，是否有其它病原菌引起疲萝蜜根腐病，以及腐皮镰刀菌引起疲萝蜜根腐病的的侵染过程和致病机制还需要进一步研究。蓝萝蜜病原菌生物学特性研究结果讨论疲萝蜜花果软腐病病原菌生物学特性研究结果讨论匍枝根霉的生物学特性研宄结果表明，匍枝根霉在种供试培养基上均能较好的生长，最适宜培养基为疲萝蜜煎汁培养基、培养基和培养基；最适培养温度为°菌丝的致死温度为°，；菌丝生长最适合为蛋白胨、甘氨酸、硫酸按、酵母浸粉做氮源的培养基中生长较好。引起疲萝蜜花果软腐病的匍枝根霉以营腐生生活为主，其生存能力强，生长速度快，因此在各类培养基中均能较好的生长。菠萝蜜蒂腐病病原菌生物学特性研究结果讨论的生物学特性研究表明，在和查彼培养基中菌丝生长最好，其最适培养基为和查彼培养基；的最适温度为°菌丝的致死温度为°；最佳碳源为阿拉伯糖、麦芽糖、果糖和葡萄糖，最适值为以蛋白胨、酵母浸粉和牛肉浸膏为氮源的培养较适合菌丝生长。通过对引起疲萝蜜蒂腐病的的生物学特性与引起其他作物炭疽病害的生物学特性的对比来看，与其他炭疽菌的生物学特性有相似性也有差 海南大学硕士学位论文异，这可能是因为炭疽菌本身是一个大的复合类群，其种间本身可能存在一定的差异性。疲萝蜜根腐病病原菌生物学特性研究结果讨论腐皮镰刀菌的生物学特性研究结果表明，腐皮镰刀菌在菠萝蜜果实煎汁培养基、、胡萝卜培养基上长势较好，在玉米粉琼脂培养基中生长情况最弱；最适生长温度为°，菌丝的致死温度为°；菌丝生长最适合为蔗糖、葡萄糖、果糖、半乳糖和麦芽糖可以作为腐皮镰刀的较好碳源，较适宜菌丝生长的氮源为硝酸铵、蛋白胨、酵母浸粉和牛肉浸膏。引起菠萝蜜根腐病的腐皮镰刀菌与前人对腐皮镰刀的生物学特性研宄结果（周亚丽，；朱蕾，有相似性。杀菌剂对菠萝蜜病原真菌的室内毒力测定结果讨论疲萝蜜花果软腐病室内毒力测定结果讨论通过杀菌剂对引起菠萝蜜花果软腐病的匍枝根霉的室内毒力测定显示：每种药剂对菠萝蜜花果软腐病都有不同程度的抑制作用。在供试的药剂中的苯醚甲环唑对菠萝蜜软腐病病原菌的抑制效果最好，其为腐霉利、苯甲啼菌酯、咪鲜胺锰盐和晴菌唑对菠萝蜜花果软腐病病原菌菌丝生长也有较好的抑制作用，其分别为、昭、昭和烯酰吗啉和溴菌多菌灵对菠萝蜜花果软腐病病原菌的抑制作用一般，其为和因此在田间防治菠萝蜜花果软腐病的过程中，可以选用的苯醚甲环唑，腐霉利、苯甲瞭菌酯、咪鲜胺锰盐和晴菌唑作为参考。对于匍枝根霉抑制剂的研究较多，赵丽芳等（赵丽芳等，通过翘鳞肉齿菌菌丝对匍枝根霉的抑制试验证实翘鳞肉齿菌菌丝对匍枝根霉的抑制作用较强；卞生珍等（卞生珍等，提出氯硝胺可强烈抑制匍枝根霉的生长；张桂芝等（张桂枝等，提出对羟基苯甲酸己酯对匍枝根霉对有抑菌性能；张香美等张香美等，提出小根蒜汁可以抑制匍枝根霉的孢子萌发；桑维钧等（桑维钧等，在腐烂竹荪上分离得到匍枝根霉，并通过药效试验后确定倍液施保功对匍枝根霉的抑制率达到钟丽娟等（钟丽娟等，提出多菌灵和甲基托布津超对匍枝根霉引起甘薯软腐病菌有较明显的抑制作用；贾盼盼等（贾盼盼等，提出，壳寡糖可以较好抑制杏果实采后病害的匍枝根霉兄对的生长；王刚霞等（王刚霞等通过实验得出核桃青皮提取物可以抑 海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选制匍枝根霉的生长；张国辉等（张国辉等，于年报道华重楼软腐病的病原为匍枝根霉对，并提出多菌灵和甲基托布津可以防治华重楼软腐病。疲萝蜜蒂腐病室内毒力测定结果讨论室内毒力实验结果表明：不同药剂对的抑制作用不同。在供试药剂中咪鲜胺锰盐、苯甲嘧菌酯和苯醚甲环唑对菠萝蜜蒂腐病病原菌的抑制作用较强，分别为、和，其次是的烯酰中生、溴菌多菌灵、多菌灵、吡唑醚菌酯和代森锰锌，其值为。对于炭疽菌引起的病害的药剂筛选的文献报道较多，华永刚等（华永刚等，研宄认为退菌特、多菌灵、百菌清能够较好的防治柿炭疽菌；姜于兰等（姜于兰等，提出苯醚甲环唑对批橘炭疽病菌的抑菌作用较强，；凌金锋等（凌金锋等，通过实验得出施保克乳油、施保功可湿性粉剂、势克乳油对贡樹炭疽病菌的抑制作用较好的结论；邓维萍等（邓维萍等，报道咪鲜胺可以有效抑制葡萄胶孢炭疽菌的生长；曾祥国等（曾祥国等，报道好立克、丙环咪鲜胺和施保功可以有效防治草莓胶孢炭疽病病菌；刘霞等（刘霞等，报道对核桃炭疽病菌生长有较强抑制作用的是咪鲜胺、戊唑醇和三唑酮三种药剂；余柯达等（余柯达等，提出复合型杀菌剂苯甲丙环唑和多福锌可作为今后防治茶花和佛手炭痕病的有效杀菌剂。可以选择咪鲜胺锰盐、苯甲嘧菌酯和苯醚甲环唑作为大田试验药剂进入下一步试验。蓝萝蜜根腐病室内毒力测定结果讨论室内毒力实验结果表明：在供试药剂中，百菌清对菠萝蜜根腐病病原菌的抑制作甩最强，为苯甲嘧菌酯、苯醚甲环唑和腈菌唑对引起菠萝蜜根腐病病原菌有较好抑制作用，其值为；其次是溴菌多菌灵、甲霜锰锌、噁霜锰锌、腐霉利、代森锰锌和烯酰中生其为；甲基硫菌灵和稀酰吗啉对引起菠萝蜜根腐病的腐皮镰刀菌的抑制作用较弱，其分别为和。本次研究仅对菠萝蜜病害的室内药剂进行筛选，要将筛选药剂在大田应用，还需要对所选药剂进行田间药效试验，这也是本研究下一步开展工作的思路。 海南大学硕士学位论文研究不足及下一步研究计划本研究不足菠萝蜜作为小宗水果，对菠萝蜜的研宄报道不多，本研宄虽然对菠萝蜜花果软腐病、菠萝蜜蒂腐病和菠萝蜜根腐病进行了相关研究，但仍不足：对菠萝蜜病害研究不够全面，仅仅对种真菌病害进行了部分研宄，菠萝蜜其他病害还有待进一步研宄。引起菠萝蜜花果软腐病的匍枝根奪的片段重复序列较多，利用对进行测序，不利于序列比对。未对菠萝蜜病害致病机理进行研宄。仅仅对相关病原进行了室内毒力学测定，未进行田间药效试验。下一步研究计划下一步实验研宄主要基于以下几个方面：：：从报道来看，菠萝蜜其他病害研宄的不多，鉴定大多局限于传统的形态学鉴定，接下来将对菠萝蜜其他病害做分子鉴定的研宄。利用其他分子生物学方法对引起菠萝蜜花果软腐病的病原菌进行研宄。对菠萝蜜病害进行致病机理方面的研宄。对杀菌剂进行田间试验，筛选出能够防治菠萝蜜病害的药剂，探索科学的肥水管理措施，达到防病增产的效果。筛选出较为抗病品质较好的种质。 海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂蹄选参考文献毕阳，张维一杀菌剂和热水处理损伤接种果实控制哈密瓜的采后病害植物保护学报，卞生珍觀卫军哈密瓜常温贮运保鲜剂的研制食品科技，，脾封怀广东植物志第一卷广州：广东科技出版社，陈忠杨爱珍，黄宝莲，等海南菠萝蜜凝集素的分离纯化及其生物学特性初探湖北农业科学，陈守常，肖育贵油桐根腐病致病菌腐皮镰孢新专化型研宄四川林业科技，陈小均，何海永，潭清群等种杀菌剂对白术根腐病病菌的室内毒力测定江苏农业科学’柴一秋，陈利锋，王金生甘薯根腐病病原菌粗毒素对甘薯生长的影响植物病理学报，陈剑山，郑服丛序列分析在真菌分类鉴定中的应用安徽农业科邓维萍杨敏，杜飞等葡萄胶孢炭疽菌对种麦角留醇脱甲基抑制剂类杀菌剂的敏感性农药学学报，范咏梅，郝敬喆，潘明启，等吐鲁番地区葡萄生长期果实腐烂病研宄初报植物保护方中达植病研宄方法版北京：中国农业出版社，范鸿雁，王祥和菠萝蜜高产栽培技术海口海南出版社，冯茜，黄云巩春梅等，芎根腐病菌的生物学特性四川农业大学学报，高爱平等全身都是宝的“热带水果皇后”一菠萝蜜中国果菜，郭飞燕，纪明慧舒火明等海南液萝蜜果胶的提取工艺研宂食品工业科技弓明钦木菠萝果腐病的防治热带林业科技，弓明钦木疲萝软腐病的初步研究热带林业，耿丽华，李长虎，等番茄颈腐根腐病病原鉴定及不同条件对其生长的影响植物病理学 海南大学硕士学位论文报；，黄甫吴军华菠萝蜜果酱生产工艺的研究食品工业科技）何永华刺槐根腐病的研究四川林业科技，韩永超，向发云，曾国样等草莓根颈腐烂病的病原鉴定中国农业科学，华永刚，姜礼元，林福平等柿炭疽菌的室内药效试验中国森林病虫，，贾盼盼刘晓丹吝晨晨，等壳寡糖对杏果实采后主要病原菌抑菌作用的研宄新疆农业科学，贾中和，杨方向军胡麻黑根腐病病原菌鉴定新疆农业科学，姜于兰，周小燕不同杀菌剂对相橘炭疽病病菌的室内毒力测定贵州农业科学，焦凌梅菠萝蜜营养成分与开发利用价值广西热带农业，，谌多仁，李健，柴义生，等小麦菌核性根腐病的初步研宄山东农学院学报，妒吕飞杰，彭艳，何凡等我国菠萝蜜生产现状及发展优势分析中国热带农业刘爱勤，桑利伟，孙世伟，等海南省菠萝蜜主要病虫害识别与防治热带农业科李瑞梅，胡新文，郭建春，等菠萝蜜研宄概述亚热带植物科学，李鼠李尚德，陈杰菠萝蜜微量元素含量的分析广东微量元素科学，李秀娟，林文权菠萝蜜饮料的研制食品工业科技，，李俊侃，王天陆菠萝蜜果酒的研制中国酿造，李增平，张萍卢华楠海南岛木菠萝病害调查及病原鉴定热带农业科学来元直浙江省黄麻新病害根腐病的初步研宄植物病理学报，’刘泉姣，叶道纯徐作挺甘薯根腐病的初步研宄植物病理学报，李勇，刘时轮，杨成明，等北京地区柴胡根腐病的病原菌鉴定植物病理学报骆众平郑服从农药学科群实验指导海口海南出版社；刘亚亚，陈垣，郭凤霞，等掌叶大黄根腐病病原菌的分离与鉴定草业学报】陆家云植物病原真菌学北京：中国农业出版社刘刚，周与良真菌分类技术的进展微生物学通报，林晓民，李振岐，王少先真菌的特点及在外生菌根菌鉴定中的应用西北农业学 海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研宄及室内药剂筛选李增平，郑服丛热区植物常见病害诊断图谱北京：中国农业出版社，凌金锋，彭埃天，宋晓兵等种杀菌剂对贡柑炭疽病菌的生物活性测定研究广东农业科学，，刘霞，杨克强，朱玉凤等种杀菌剂对核桃炭疽病病原菌胶孢炭疽菌的室内毒力农药学学报，缪作清李世东，刘杏忠，等三七根腐病病原研宄中国农业科学毛琪，叶春海李映志菠萝蜜研究进展中国农学通报，钱庭玉木菠萝天牛类害虫幼虫记述热带作物学报邱德勋杉木根腐病初步研宄林业科学谭乐和，王令霞，朱红英菠萝蜜的营养物质成份与利用价值广西热作科技，桑利伟，刘爱勤，谭乐和，等木菠萝果腐病中一种新病原菌的分离和鉴定热带作物学报，桑维钧宋宝安，，练启仙等竹恭球腐烂致病真菌种类鉴定与药剂筛选西南农业大学学报，孙文姬简桂良刘秀兰，等山东菏泽地区牡丹根腐病病原真菌的分离鉴定植物病理学报，，谭乐和等海南省兴隆地区菠萝蜜种质资源调查与分析植物遗传资源科学，武杰王立峰菠萝蜜果浆冰琪淋的研制冷饮与速冻食品工业，王天陆菠萝蜜脆片生产技术研究食品研究与开发，⑷吴刚，陈海平，桑利伟，等中国菠萝蜜产业发展现状及对策热带农业科学，，王刚霞，彭新援，吴忠红，等核桃青皮提取物对几种釆后病原真菌抑制作用的研宄食品工业科技，魏景超真菌鉴定手册版上海：上海科学技术出版社，向玉英徐梅卿杨树紫根腐病发生及防治的研宄植物病理学报，徐华民疲萝蜜果脯生产工艺技术的研究食品科学，谢慧婷，谭海文，唐小丽等迷迭香根腐病病原菌的鉴定植物病理学报，，徐红梅，管兰华，韩正敏不同胶抱炭疽菌菌株比较南京林业大学学报，刑来君，李明春普通真菌学北京：高等教育出版社，叶春海，吴钿丰锋等菠萝蜜种质资源调查及果实形状的相关分析热带作物学 海南大学硕士学位论文报，俞大紱，方中达云南省蚕豆枯萎病和茎腐病的研宄科学通报，余柯达，路梅，叶美娟等茶花和佛手胶孢炭疽菌对不同类型杀菌剂敏感性研究浙江师范大学学报（自然科学版杨颖，耿丽华，王建设等甜瓜根腐病病原分离与抗源鉴定华北农学报赵丽芳冯颖，陈晓鸣，等翘鳞肉齿菌抑菌试验研宄西南林学院学报，，张桂芝，杨世忠，张唯一酷类物质及其化学修饰物抗真菌的构效关系研宄食品科学张香美，刘焕云，王春霞，等小根蒜抑菌作用的初步研宄安徽农业科学，，钟丽娟，赵新海，张庆华等甘薯软腐病菌的分离鉴定及室内抑菌试验山东农业科学，张国辉，任永权，李娇梅，等华重楼软腐病的病原鉴定与病害分析中国农学通，张良皖，李桂良，刘秋芬，等果树根腐病的研宄病原鉴定与病菌侵染规律初步探讨植物病理学报，⑶朱春雨，刘西莉，董槿，等麻黄根腐病病原物的分离及鉴定植物病理学报，，朱研研王耀耀，付美红，等真菌分类鉴定研究进展河北化工，赵杰序列分析及其在植物真菌病害分子检测中的应用陕西农业科学周亚丽长春地区蝴蝶兰根腐病病原菌鉴定及化学防治效果研宄吉林农业大学硕士毕业论文；朱蕾蒙古黄蔑根腐病病原菌的分离鉴定及药剂筛选防治研宄甘肃农业大学硕士毕业论文，，曾祥国，向发云张鹏等十三种杀菌剂对草莓胶孢炭疽菌的室内毒力测定湖北农业科学， 海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选，，，，，，，，，，，，，，，，，， 海南大学硕士学位论文附录项目资助本文受以下项目资助：农业部热带作物种质资源保护项目（海南省自然科学基金项目（琼科号；海南省科研院所技术开发专项（海南省农业科学院农业科技创新专项资金项目（。在学期间发表论文罗敦文，范鸿雁，罗志文菠萝蜜蒂腐病病原菌分离与鉴定中国南方果树，罗敦文，缪卫国，范鸿雁菠萝蜜蒂腐病病原菌分离与鉴定中国植物保护学会热带作物病虫害防治专业委员会暨年热区植保科技论坛论文摘要集，年月日，，海南海口。 海南省菠萝蜜三种重要病害病原鉴定、生物学特性研究及室内药剂筛选致谢值此论文完成之际，，首先我要向尊敬的导师缪卫国教授、何凡研究员以及指导老师范鸿雁老师表示最衷心的感谢和诚挚的敬意。时光如梭转眼三年的研究生学习生活即将结束。三年来，三位老师渊博的知识、谦虚谨慎的治学态度以及宽厚善良的处世方式―，永远值得我学习。三位老师在我的论文试验设计、试验开展以及论文的撰写过程中，倾注了大量的心血，在我的学习和试验上给予了悉心的教诲和指导，使我获益良多。三年来，老师们在我的生活和工作方面也给予了我诸多的关怀和帮助，在此我表示万分感激，不辜负恩师们的期望。另外，王祥和老师对本研究也给予了大量的指导和鼓励，尤其在本课题的样本采集等方面给予了非常大帮助，在此，致以诚挚的谢意。特别感谢范鸿雁老师和罗志文师兄对试验及论文写作过程中给予的悉心指导和无私帮助。同时，感谢林春花老师和郭利军、胡福初等师兄的无私支持和帮助在他们的帮助下，我完成了实验以及论文写作中的部分工作，感谢我的室友张怀军对我的帮助和支持。感谢海南大学环植学院、海南省农业科学院果树所全体老师、员工及同学对我在学习、生活上的帮助和关心。感谢海南省东方市农业局的领导和全体同事对我学业的理解、支持和帮助。在此，我还要感谢我的家人对我学习工作的大力支持，感谢他们对我生活无微不至的关怀和照顾！有了这样强大的后盾，使我在这三年能专心致力实验研究。最后，向关心、爱护和给予我帮助的所有人再一次致以诚挚的谢意！罗敦文二—五年六月