单花种蜂蜜中蛋白质及氨基酸组分研究 67页

ＨＩ丄ｃ．；訂Ｉ＇＇－直＼，＇，ＶＩＩ＂，？＊—分类号：ＴＳ２０７．３学校代码：１０的７密级：公开、達学号：２０１２２０７４７硕±亨恆巧交ＭＡＳＴＥＲＳＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ单花种蜂蜜中蛋白质及氨基酸组分研究？■－‘１．ｒ声，；：；Ｖ；．‘＿学科若称：食品科学：周厚报指导老师作者：曹讳教授‘西北大学学位评定委员会，二〇－五年． 西北大学学位论文知识产权声明书本人完全了解西北大学关于收集、保存、使用学位论文的规定。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论文被查阅和借阅。本人授权西北大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。，学位论文作者签名：指导教师签名：斧主年／月＾日年《月／Ｐ曰西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，本论文不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西北大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：＾八＞；年屋月日（ 摘要蜂蜜的质量和商品价值与其花源有关。由于不同单花种蜂蜜之间的商品价值存在较大差异，蜂蜜惨假现象越来越严重。因此，单花种蜂蜜的花源鉴别技术研究是当前亟待开展的工作。本文Ｗ蜂蜜蛋白质和氨基酸为切入点、，研究了不同花源蜂蜜的蛋白质含量－ＰＡＧＥ图蛋白质犯Ｓ谱、蛋白质巧光光谱Ｗ及蜂蜜中游离氨基酸和蛋白质氨基酸组成，为蜂蜜的质量控制提供依据。？化（１）８种单花种蜂蜜的蛋白质含量在３９８別±１７．８９１８巧．１１１．１９ｍｇ／ｋｇ之间。同种单花种蜂蜜的蛋白质含量差异显著，如娶花蜜，，陕西延川娶花蜜的蛋白质含量最高为１２８９．４５＋１３．４３ｍｇ／ｋｇ，而山西五台山的最低，为５９８Ｊ６±１０．４１ｍｇ／ｋｇ；不同花源的单花种蜂蜜的蛋白质含量差异也非常显著，其中龙眼蜜的蛋白质含量最高，为１６５０．９１ｍｇ／ｋｇ（均值），洋槐蜜的蛋白质含量最低，为５４３．６５ｍｇ／ｋｇ（均值）。２ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分（）对不同蜂蜜蛋白质的析发现，所有样品的蛋白质分子质量集中在－￣￣１４．４９７ｋＤａ之间，其中分子质量为７４ｋＤａ和５８ｋＤａ的两条蛋白质谱带是８种单花种蜂蜜共有条带。同种单花种蜂蜜的蛋白质条带数基本相同，并且各蛋白质条带的分子质量也基本相同，蛋白质组成差异不显著。不同花源的单花种蜂蜜的蛋白质条带差异显￣著，如娶花蜜在１７ｋＤａ处呈现出特有蛋白质条带，该蛋白质可作为麥花蜜区别于其他蜂蜜的特征蛋白质。（３）采用焚光光谱分析蜂蜜蛋白质的巧光吸收特征，结果表明，８种单花种蜂蜜蛋白质的最大巧光吸收峰分别在３２４ｎｍ、３２６ｒｎｎ和３２８ｎｍ处，为酪氨酸和色氨酸的巧光吸收波段；不同花源的单花种蜂蜜蛋白质的最大萊光吸收峰差异不显著，但其焚光吸收强度差异盈著，其中麥巧蜜的焚光吸收强度远高于其他单花种蜂蜜。（４）采用反相高效液相色谱分析了８种单花种蜂蜜中游离氨基酸和蛋白质氨基酸，８，的组成，结果表明种单花种蜂蜜中的游离氨基酸数量多且种类齐全总含量在￣ｍ￣５．２８３１７．６３４ｇ／ｇ之间，其中脯氨酸的含量最高，约占游离氨基酸总量的４１．６２６７．９１％。不同产地的同种单花种蜂蜜中游离氨基酸组成存在较大差异，不同花源蜂蜜中游离氨基酸的种类差异不显著，但其含量差异显著。对蜂蜜中蛋白质氨基酸组成比较分析发现，蜂蜜蛋白质中氨基酸种类差异不显著。，但其含量差异显著－关键词：蜂蜜，蛋白质，ＳＤＳＰＡ細基酸组成，炎光光谱，氨Ｉ ＡｂｓｔｒａｃｔＱｕａｌｉｔｙａｎｄｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｖａｌｕｅｏｆｈｏｎｅａｒｅｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｆｌｏｒａｌｏｒｉｇｉｎ．Ｔｈｅｒｅａｒｅｙｓｉｇｎｉ巧ｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｏｎｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｖａｌｕｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｍｏｎｏｆｌｏｒａｌｈｏ打ｅｙ，ｗｈｉｃｈＫｓｕｌｔｓｉｎｔｈｅｓｅｒｉｏｕｓｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆａｄｕｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙ．Ｔｈｕｓｔｈｅ巧化ａｒｃｈｏｆｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｆｌｏｒａｌｏｒｉｉｎｓｈｏｕｌｄｂｅｌａｕｎｃｈｅｄａｔｒｅｓｅｎｔ．Ｔｈｉｓａｅｒｂｅａｎｗｉ化ｍａｏｒｒｏｔｅｉｎｇｐｐｐｇｊｐａｎｄａｍ－ｃｅｉｎｏａｃｉｄｉｎｈｏｎｅａｎｄｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｄ化ｅｃｏｎｔｅ打ｔＳＤＳＰＡＧＥａｔｔｅｒｎｆｌｕｏＫｓｃｅ打ｙｇ，ｐ，ｓｅｃｔｒｏｓｃｏａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｏｓｉｔｉｏｎｏｆｒｏｔｅｉ打ｉｎｈｏｎｅｗｈｉｃｈｒｏｖｉｄｅｄ化ｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｐｐｙｐ，ｐｙｐｆｏｒｔｈｅｕａｌｉｔｃｏｎｔｒｏｌｏｆｈｏｎｅ．ｑｙｙ１ＴｈｅＫｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄ化ａｔｔｈｅｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｅｉｈｔｋｉｎｄｓｏｆｍｏｎｏｆｌｏｒａｌｈｏｎｅ（）ｐｇｙｗ±？ｅｒｅｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ３９８．３１１７．８９１８３９．１０±１１．１９ｍ／ｋ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｇｇｇ＊ｏｎｒｏ１：ｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅｓａｍｅｋｉｎｄｏｆｈｏｎｅ．Ｔｈｅｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆｕｕｂｅｈｏｎｅｙｆｉｏｍｐｙｐｊｊｓｈａａｎｘｉｗａｓｔｈｅｈｉｈｅｓｔａｍｏｎａｌｌｓａｍｌｅｓａｔ１２８９．４５±１３．４３ｍｇ／ｋｗｈｉｌｅｔｈａｔｆｒｏｍｓｈａｎｘｉｇｇｐ，ｇ，ｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔａｔ５９８．７６±１０．４１ｍ／ｋ．Ｔｈｅｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｍｏｎｏｆｌｏｒａｌｈｏｎｅｆｒｏｍ，ｇｇｐｙｄｉｆｅｒｅｎｔｆｌｏｒａｌｏｒｉｇｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅｒｏｂｉｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆｌｏｎａｎｈｏｎｅｙｗａｓｐｇｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ，ａｔ１６５０．９１ｍｇ／ｋｇ（ｍｅａｎ，ｗｈｅｒｅａｓｔｈａｔｏｆａｃａｃｉａｈｏｎｅｙｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔ，ａｔ５４３．６５）ｍｇ／ｋｇｍｅａｎ．（）－２ＴｈｒｏｕｈａｎＳＤＳＰＡＧＥａｎａｌｓｉｓｏｆｒｏｔｅｉｎｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｈｏｎｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｈｔ（）ｇｙｐｙ，ｇｏｆｒｏ？ｔｅｉｎｏｆａｌｌｓａｍｌｅｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ１４．４ｋＤａ化９７ｋＤａ．Ｔｈｅｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｓｏｆ７４ｋＤａａｎｄｐｐｐ？ｍｅ５８ｋＤａｗｅｒｅｆｏｕｎｄｉｎａｌｌｓａｍｐｌｅｓ．Ｈｏｎｅｙａｃｕｉｒｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓａｅｆｌｏｒａｌｏｒｉｉ打ｈａｄｔｈｅｓａｍｑｇｎｕｍｂｅｒｏｆｐｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｓａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｓｗａｓｂａｓｉｃａｌｌｙｔｈｅｓａｍｅ．ｐＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｍｏｓｉｔｉｏｎｏｆｒｏｔｅｉｎｗａｓｎｏｔｓｉｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｂｕｔｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｓｏｆｐｐｇｐｎ？ｍｏｎｏｆｌｏｒａｌｈｏｎｅｙｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｔｆｌｏｒａｌｏｒｉｇｉｎｗｅｒｅｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｉｆｅｒｅｎｔ．１７ｋＤａｐｒｏｔｅｉｎｅｘｉｓｔｅｄｏｎｌｙｉｎｊｕｊｕｂｅｈｏｎｅｙａｎｄａｌｓｏａｃｔｓａｓｔｈｅｓｐｅｃｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｏｆｊｕｊｕｂｅｈｏｎｅｙｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｆｒｏｍｏｔｈｅｒｈｏｎｅｙ，（３）Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｐｅｃｔｒｕｍａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｉｎｈｏｎｅｙｄｅｍｏｎｓｔａｔｅｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｂｓｏｒｔｉｏｎｅａｋｓｏｆｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅａｔ３２４ｒｕｎ３２６ｎｍａｎｄ３２８ｎｍｗｈｉｃｈｗｅｒｅａｒｔｐｐｐ，，ｐ＊ｏｆ－ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆｔｙｒｏｓｉｎｅａｎｄｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ．Ｔｈｅｉｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｏｆｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｂｕｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉ巧ｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ巧ｕｏｒｅｓｃｅ打ｃｅｉ打ｔｅｎｓｉｔｙａｎｄｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｏｆｕｕｂｅｈｏｎｅ，ｙｊｊｙ打 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目录一第章绪论１Ｕ蜂蜜资源的概况１１．１．１蜂蜜种类１１丄２蜂蜜的化学成分１１丄３蜡蜜产业的发展现状３１．２蜂蜜中蛋白质和氨基酸在鉴别蜂蜜来源及惨假方面的研究进展３１４．２．１蜂蜜中氯基酸组成的研究１．２．２蜂蜜蛋白质电泳行为的研究４１．２．３蜂蜜中酶活性的研究５１．２．４蜂蜜蛋白质特异性的研究６１．２．５其他方法６１６．３本文研究的意义和内容１．３．１本研究的目的和意义６１．３．２本研究的主要内容７第二章单花种蜂蜜中的蛋白质含量８２８．１胃２．２实验材料与方法８２８．２．１材料与试剂２．２．２仪器与设备９２１０．２．３实验方法２．３结果与分析１１２．３．１不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质含量的比较分析１１２．３．２不同花源蜂蜜蛋白质含量的比较分析１１２．４本章小结１３－ＰＡＧＥ研究第Ｈ章单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ１４３．１引言１４３．２实验材料与方法１４３．２．１材轉与试剂１４ＩＶ ３２．２６．仪器与设备１３．２．３实验方法１６３．３结果与分析１８－３．３．１不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ的比较分析１８ＳＤＳ－３．３．２不同花源蜂蜜蛋白质ＰＡＧＥ的比较分析２０３．４本章小结２２第四章单花种蜂蜜蛋白质的巧化光谱研究２４４．１引言２４４．２实验材料与方法２４４．２．１材料与试剂２４４２４．２．２仪器与设备４．２．３实验方法２５４．３结果与分析２５４．３．１不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质炎光光谱的比较分析２５４．３．２不同花源蜂蜜蛋白质巧光光谱的比较分析２８４．４本章小结３０第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究３１５１．１引胃３５．２实验材料与方法３１５．２．１材料与试剂３１５．２．２仪器与设备３１５．２．３实验方法３２５．３结果与分析３４５．３．１方法学考察３４５３２单花．．种蜂蜜中游离氨基酸的组成３５５．３．３单花种蜂蜜蛋白质的氨基酸组成４４５．４本章小结５０总结５１５３参考：＾献攻读硕±学位期间取得的科研成果巧致谢６０Ｖ 西北大学硕±学位论文第一章绪论１．１蜂蜜资源的概况１．１．１蜂蜜种类中国幅员迂阔，可利用的蜜源植物十分丰富，因此我国蜂蜜种类较多，有３０余种，ｕｆｌ如娶花蜜、油菜蜜、构杞蜜、龙眼蜜、荆条蜜和向日葵蜜等。蜂蜜的分类依据较多，常见的有巧源、颜色和收获方式等；虽然分类方法多样，但根据花源分类最常见，可分一为单花种蜂蜜和杂花蜜。般花源不同，蜂蜜的质量和商品价值也略有不同。１丄２蜡蜜的化学成分蜂蜜是蜜蜂采集蜜源植物的花蜜或蜜露，与自身分泌物混合后，经巢脾转化至成熟Ｗ的天然甜物质。因花源、蜂种、气候和环境条件的差异，蜂蜜的化学成分也会发生不Ｗ同程度的变化。目前，己经在蜂蜜中发现并鉴定出了１８０余种不同成分，主要包括糖ｔｗｉ类、水分、蛋白质、氨基酸、矿物质、酶类和酿类化合物等。１丄２．１糖类一％Ｗ蜂蜜是种高度复杂的糖类漏合物，其中糖类是主要成分且占蜂蜜总量的７５上￣Ｐ气除了葡萄糖和果搪８５９５％；糖类中Ｗ葡萄糖和果糖含量最高，占蜂蜜总糖分的外，蜂蜜中还存在少量薦糖和麦芽糖。根据国际食品法典委员会、欧盟和中国ＧＢ—一１４９６３２０１１《食品安全国家标准蜂蜜》对蜂蜜标准的规定，葡萄糖和果糖的含量Ｐ一’Ｗ至少占蜂蜜总量的如上，庶糖的含量必须在５％Ｗ下。此外，蜂蜜的些物理性质、（如吸湿性粘度和结晶性等）与糖类化合物含量密切相关。由于果糖甜于葡萄糖，因此二者间比值会影响蜂蜜的风味和曰感；另外，低于室温蜂蜜易于结晶，其原因是由于葡萄糖浓度过饱和。由于糖类的特殊性，其含量差异也常用于鉴别蜂蜜来源Ｗ及渗假１Ｍ２［］〇１丄２．２水分。水分在蜂蜜中含量较高，仅次于糖类蜂蜜中所含水分的高低直接影响蜂蜜的成熟程度蜜源桂物的花期レッ及当地气候干湿差异直接影响蜂蜜中水分含量。据报道，ｎ３－Ｗ蜂蜜的平均含水量在１８％左右，通常不超过２０％。１丄２．３酿类化合物酪类化合物是蜂蜜中主要的抗氧化成分，主要包括敌酸类化合物和黄丽类化合物，１ １第一章绪论一其含量的高低直接影响着蜂蜜的抗氧化活性；定范围内，酶类化合物的含量越島，蜂ｌｗｎｔ蜜的抗氧化活性越强。此外，蜂蜜颜色差异也与酶类化合物密切相关。酌类化合物主要来源于蜜源植物的花蜜、花粉或蜂胶，其种类和含量受花源、产地和气候条件等影响除了具有抗氧化活性外，酷类化合物的种类和含量也是蜂蜜来源鉴别的重要依据，目前国内外己经通过建立蜂蜜酷酸化合物的指纹图谱来鉴别蜂蜜的来源。１丄２．４蛋白质一７［］蜂蜜中存在少量的蛋白质，其含量般不超过蜂蜜总量的０．５％。蜂蜜蛋白质的、、含量受蜂种（意大利蜂和中华±蜂）花源产地和化存条件的影响，如采自中华±蜂ＰＵ的蜂蜜蛋白质含量要高于采自意大利蜂的蜂蜜，蜂蜜蛋白质含量会因为肛存时间过长和温度的升高而降低。由于蛋白质自身的特异性，因此蜂蜜蛋白质差异可为蜂蜜来源和惨假鉴别提供参考依据。Ｌ１．２．５氨基酸氨基酸是蛋白质分子的基本结构单位，是蜂蜜营养价值体现的重要组成部分。蜂蜜１％中的氨基酸数量多且种类齐全，其含量约为蜂蜜总量的。其中脯氨酸是蜂蜜中氨基？酸的主要组成部分，占蜂蜜氨基酸总量的５０８５％。除脯氨酸外中的氨基酸还，蜂蜜有２０余种，如酪氨酸、谷氨酸、苏氨酸、鄉氨酸和甘氨酸等。由于蜜源植物是蜂蜜中２ｗ，ａ氨基酸的主要提供者，因此蜂蜜中氨基酸的组成差异可用于鉴别蜂蜜来源Ｗ及慘假。１．１．２．６酶类研究发现，蜂蜜中的酶类主要来自于蜜蜂自身分泌物和蜜源植物的花粉或花蜜，常ｐｓｉ见的有淀粉酶、还原酶和过氧化氨酶等，它们在人体生理代谢中起着非常重要的作用；此外，蜂蜜中的酶类也是蜂蜜蛋白质的组成部分。蜂蜜中酶的活性和含量受很多因素影响，如蜂种、花源、酿蜜时间和化存时间及温度，高温处理和长时间贬存都会使酶活性Ｐ４１降低。１丄２．７矿物质蜂蜜中的矿物成分非常丰富，如Ｍｇ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｎ、Ｃｕ、Ｓｉ、Ａ１、ＰＳ－Ｃｒ、Ｐ、Ｎｉ等，其中Ｃａ、Ｍｇ、Ｚｎ含量最高，Ｆｅ、Ｍｎ、Ｃｕ次之气蜂蜜的矿物元素主要来自于蜜源植物，其种类和含量因花源不同存在差别；此外，蜂蜜的矿物质含量还与蜜源植物所生活的±壤有着一Ｃ定关系，如蜂蜜中的ａ含量随着±壤的含巧量而变化ｎ２５２６’ｌ［］－ＯＥＳ分析发ａ、Ｃａ、。Ｔｅｒｒａｂ等对鳄梨蜜中矿物成分的ＩＣＰ现，Ｂ、Ａ１Ｃｕ、Ｃｏ、２ 西北大学硕±学位论文Ｃｒ、Ｋ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｍｇ、Ｎａ、巧、Ｚｎ、Ｎｉ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ、Ｓｅ和Ｌｉ为所测蜂蜜的共有矿物ＰＷ、－ＭＳ测定了６成分，其中Ｍｇ、ＣａＮａ、Ｋ、Ｓ、Ｐ和Ｓｉ含量最离。陈兰珍等采用ＩＣＰ种不同花源蜂蜜（麥花蜜、槐花蜜、斎枝蜜、野桂花蜜、构杞蜜和苦瓜蜜）的矿物元素，结果表明Ｃａ、Ｆｅ、Ｚｎ、Ｍｎ、Ｃｕ、Ｓｅ和Ｍｏ在这６种蜂蜜中含量比较丰富，且不同花源ＰＳ。Ｐｉｓａｎｉ项ｉ蜂蜜中的矿物元素差异显著等ｊ定了意大利蜂蜜中的矿物元素种类和含量，结果表明，Ｃａ、．Ｍｇ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｋ、Ｎａ和Ｓｒ为共有元素且含量较高；Ｔｈ的含量最低（约为Ｉ／ｋ）如、Ｍｎ、Ｎｉ、Ｂａ、Ｃｄ、Ｃｏ、Ａｓ、Ｕ和徘的含量介于两者之间。由于蜂蜜ｐｇｇ；一中矿物元素种类和含量会随着巧源和主壤的不同发生定变化，因此蜂蜜的矿物元素差异也可作为蜂蜜来源鉴别的重要参考依据。１丄２．８其他成分、７Ｃ除了糖类ｊ分、蛋白质、氨基酸、矿物质、靡类和醇类化合物等化学成分外，蜂蜜中还含有维生素、有机酸和挥发性成分等。Ｂ族维生素和维生素Ｃ是蜂蜜中含量最丰一。富的维生素，主要来自于蜜源植物的花粉由于蜂蜜般呈酸性，因此蜂蜜申的维生素ｕ，ｗ。不易被破坏，；但不当的加工过程会使维生素破坏导致蜂蜜中维生素含量减少蜂ｐｄｈｉ蜜中还存在少量的有机酸（如脱落酸），其含量的高低直接影响着蜂蜜的ｐ。孙雨安Ｐｉ］对河南产的不同种类蜂蜜挥发性成分分析发现等，所有蜂蜜样品中其检测出种化合物，其中４４种为共有成分，挥发性成分的种类和含量随花源不同存在较大差异。粟Ｐ２－－ＭＳ分析了新疆４种蜂蜜有志等噪用ＳＰＭＥＧＣ（沙安蜜、油菜蜜、葵花蜜Ｗ及棉花■１４４，蜂蜜）中的挥发油成分，共鉴定出种化合物其中芳棒醇、雪松醇、４荫品醇和３－、油菜蜜苯基丙帰酵分别为沙孽蜜、葵花蜜和棉花蜂蜜的特征性挥发成分。１丄３蜂蜜产业的发展现状一。蜂蜜因具有很高的营养价值，所Ｗ深受人们喜爱由于蜂蜜的主要成分与工业中些甜味剂十分相似，因此蜂蜜渗假和造假的成本低廉，导敦蜂蜜接假和造假现象越来越Ｐ３１严重。近年来，蜂蜜渗假和造假现象得到了快速的蔓延，正品蜂蜜市场受到了严重影响。然而蜂蜜来源和珍假的鉴别技术还不完善且检测费用较高，无法对市场上的蜂蜜做ｊ全面的甄别，ｌ，仅靠传统鉴别手段己无法达到区分真伪的目的因此单花种蜂蜜来源ｙ及４工作Ｐ１惨假鉴别技术的研究是当前亟待开展的。１．２蜂蜜中蛋白质和氯基酸在鉴别蜂蜜来源及渗假方面的研究进展蜂蜜来源Ｗ及渗假的鉴别可Ｗ追溯到１９世纪末，欧洲人利用光学显微镜观察欧洲３ 第一章绪论一些国家所产蜂蜜中的花粉形态，据此来推断和确定蜂蜜的来源。随着蜂蜜抱粉学的不断发展、亚洲和美洲的许多国家立足本国的植物资源，开展了大量的蜂蜜抱粉分，欧洲Ｓ１？Ｐ。析工作，积累了丰富的研究资料随着科学技术的发展，各种高端的检测手段和现代数据统计分析技术已经逐步应用于鉴别蜂蜜来源Ｗ及惨假。近年来，电泳、ＧＣ（气相色谱）、ＨＰＬＣ（液相色谱）、ＧＣ／ＭＳ（气质联用）和核磁共振等分析技术己经用于检测蜂蜜中的糖类化合物、酪类化合物、挥发性成分和蛋白质等。这些分析方法相互结合Ｗ及数据统计分析技术的应用为蜂蜜来源和渗假的鉴别提供了大量有用的信息。目前，国内外对蜂蜜中蛋白质的研究不多。本文分析了蜂蜜中蛋白质和氨基酸的相关研究、、，总体包括蜂蜜中氨基酸组成的研究蜂蜜蛋白质电泳行为的研究蜂蜜中酶活性的研究Ｗ及蜂蜜蛋白质特异性的研究。１．２．１蜂蜜中氨基酸组成的硏究蜂蜜中的氨基酸数量多且种类齐全，其含量约为蜂蜜总量的１％。其中脯氨酸是蜂￣５０８５％蜜中氨基酸的主要组成部分，其含量在的之间。此外，蜂蜜中的氨基酸还有２０余种，如酪氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缀氨酸、组氨酸和甘氨酸等。由于蜜源植物是蜂蜜中氨基酸的主要提供者，因此蜂蜜中氨基酸的组成差异可用于鉴别蜂蜜花２２Ｗ’ｌ源Ｗ及渗假。Ｐ６化较分析不Ｄａｖｉｅｓ同花源蜂蜜中的氨基酸組成发现，蜜源植物不同，蜂蜜中的氨一Ｐ７地区蜂蜜中的某些氨基酸含量差异也非常大ｌ基酸组成存在显著差异，甚至同。Ｇｉ化ｅｒｔ等通过气相色谱分析４个国家（英国、澳大利亚、阿根廷和加拿大）所产蜂蜜中的游离氨基酸组成，结果表明，这４个国家蜂蜜中的游离氨基醋在种类和含量上均存在显著差ＰＷ异，说明地区差异影响蜂蜜中游离氨基酸的组成。Ｐ紅ｅｚＡｒｑｕｉｌｌｕｅ利用离效液相色谱研究了西班牙所产的不同花源的蜂蜜样品，共检测出１６种氨基酸，并通过数据统计分Ｐｓｌ析技术鉴别出了其植物来源。Ｐｉｒｉｎｉ利用气相色谱分析了６种不同花源蜂蜜的氨基酸组成一些，结果表明，氨基酸的种类和含量受花源的影响较大，其中某些氨基酸可作为（如色氨酸。蜂蜜的特有氨基酸、半化氨酸和精氨酸等）１．２．２蜂蜜蛋白质电泳行为的研究电泳ｅｌｅｃｔｒｏｏｒｅｓｉｓ是指带电颗粒在电场中向与其电性相反的电极泳动的过程。目（ｐｈ）前，电泳技术已广泛地应用于生物化学、药理学、免疫学、微生物学Ｗ及食品化学等各４ 西北大学硕±学位论文个领域。电泳的分类依据多样，如按照电泳原理分类（区带电泳和界面电泳）、电解质系统分类（凝胶电泳、亲和电泳、等点聚焦和免疫电泳等）Ｗ及有无支持体分类（自由１１１电泳和区带电泳）等，其中毛细管电泳、双向电泳和凝胶电泳３种技术比较成熟，这３种电泳技术中凝胶电泳最为常用。蜂蜜蛋白质电泳行为研究中应用较多的为ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳，其原理是通过在凝胶和样品介质中加入蛋白质变性剂，忽略蛋白ｗｗ质电荷因素的影响，Ｗ达到蛋白质的电泳行为仅受其分子量大小影响的目的；此方法ＳＤＳ－ＰＡＧＥ应用比较广泛操作简单且耗时少，因此。＾＂在１９８７年，Ｍａｒｓｈａｌｌ和Ｗｉｌｌｉａｍｓ耐澳大利亚产的不同花源蜂蜜样品进行了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分化从得到的电泳图谱上发现了１９个蛋白质条带，然而这些蛋白条带之，表明这些蜂蜜在蛋白质组成上差异较小间差异不显著，还需要对其蛋白质的结构和组成进斤分析ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱的比。邓建军等对不同产地养麦蜜、安花蜜和洋槐蜜的较分析发现一，蜂蜜蛋白质组成受蜂蜜产地的影响较大，此外还发现同产地的不同花源一种蛋白质蜂蜜蛋白质电泳图谱中的某些蛋白质条带非常相似，这说明蜂，很可能为同４３ｌ蜜蛋白质的组成受地理来源和花源影响ｏｎｔ。Ｗ等对亚洲和欧洲的５种单花种蜂蜜中蛋一－白质ＳＤＳＰＡＧＥ图谱的比较分析发现，其中两条蛋白质条带非常相似，可能是同种蛋ＷＭｒ－ＰＡ邸分白质，为了弄清它们确切的分子量，ｏｎ利用蛋白质ａｒｋｅ做标准进行ＳＤＳ析，结果表明这两条蛋白质条带的分子量分别为５６ｋＤａ和巧ｋＤａ，分别来自于中华±蜂和意大利蜂。１．２．３蜂蜜中酶活性的研究研究发现，常，蜂蜜中的靡类主要来自于蜜蜂自身分泌物和蜜源植物见的有淀粉酶、还原酶和过氧化氨酶等，是蜂蜜蛋白质的重要组成部分，它们在人体的生理代谢中起着非常重要的作用蜂蜜中酶的活性和含量受很多因素影响，如蜂种、花源、酿蜜时间ＰＷ一。蜂蜜中研究较多酶是淀粉酶和胆存时间及温度，它是种动物性酶，主要来自于蜜口’Ｗ蜂自身的分泌物，是蜂蜜中较为特殊的酶。由于动物性酶的稳定性比工业淀粉酶差ＳＷｊ得多，因此蜂蜜中的淀粉酶值是确定蜂蜜质量好坏的重要指标。国占宝等对要花蜜、荆条蜜和洋槐蜜中淀粉酶活性的影响因素分析发现，温度是影响淀粉酶活性的主要因素，此外ｐＨ过离或过低Ｗ及储存不当都会加快蜂蜜中淀粉酶的活性降低。玄红专等研究了不同温度对蜂蜜中淀粉酶值的影响，经分析发现不同花源蜂蜜淀粉酶值存在一定差异且同种蜂蜜的淀粉酶值随温度升高而降低。此外，李军生Ｗ等比较分析了蜂蜜样品中淀粉酶在不同肚存温度和时间下的活性变化规律，结果表５ 第一章绪论，天然蜂蜜的淀粉酶值在低温条件下基本保持不变明，但贬存温度升高Ｗ及储存时间延长会加快蜂蜜淀粉酶值降低。鲍会梅等还发现，天然蜂蜜中惨入庶糖或淀粉会使其淀粉酶值下降。１．２．４蜂蜜蛋白质特异性的研究免疫印迹法是高分辨率凝胶电泳与免疫化学分析技术相结合的杂交技术，具有分析、、、容量大特异性强敏感度高等优点，受，；此外蜂种花源＾及±壤条件等因素的影响不同蜂蜜蛋白质的特异性比较强，因此免疫巧迹法也被用来鉴别蜂蜜的来源Ｗ及惨假。ＷｓｌＢａｒｏｎｉ等利用蜂蜜蛋白质特异性强的特点，Ｗ蜜源植物的花粉提取物制备抗体，ｓ分别作用于各种蜂蜜ｔｑ，根据蜂蜜对各种抗体的反应来确定各种蜂蜜的特征蛋白质。Ｗｏｎ等对来自中华王蜂和意大利蜂的２种蜂蜜蛋白特异性分析发现，这２种蜂蜜蛋白质的结构存在显著差异，它们仅与自身抗体发生反应，即使惨有极少的其他蛋白质也能被鉴别出来。目前，通过蛋白质特异性来研究蜂蜜蛋白质差异的报道很少，虽然这种方法耗时舞力，但是其离灵敏度和高准确度值得我们继续研究。１．２．５其他方法除了Ｗ上方法外【Ｗ，质谱技术也被用来鉴别不同蜂蜜的蛋白质差异，如ＷｏｎＬｅｅ，等利用ＭＡＬＤ－ＩＴＯＦＭＳ（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）对亚洲和欧洲蜂蜜蛋白质分子量与结构信息的分析发现亚洲和欧洲蜂蜜中均存在蜂王浆主蛋白质－，１（ＭＲＪＰ１），它们之间的同源性在９０％Ｗ上。１．３本文研究的意义和内容１．３．１本研究的目的和意义中国是世界蜂蜜生产大国３０一，单花种蜂蜜至少有多种上，些单花种蜂蜜如刺槐蜜、荆条蜜、油菜蜜、极树蜜、安花蜜及龙眼蜜等具有较高的商品价值。随着经济快速发展，人们对蜂蜜的需求不断増加。由于不同种类单花种蜂蜜之间的商品价值存在较一些蜂蜜生产者Ｗ次充好大差异，，导致蜂蜜渗假现象越来越严重。然而蜂蜜来源和惨假的鉴别技术还不完善且检测费用较高，无法对市场上的蜂蜜做全面的甄别，仅靠传统的鉴别手段已无法准确的鉴别蜂蜜真伪。因此鉴别蜂蜜来源和惨假的研究工作亟待开一ＰＷｉ展，Ｗ找出种快速、简单和准确的鉴别方法ｌ本文Ｗ蜂蜜蛋白质和氨基酸为切入点，研究不同来源蜂蜜中蛋白质和氨基酸的差６ 西北大学硕±学位论文异，为蜂蜜的质量控制提供依据。１．３．２本研究的主要内容８（麥花蜜、、本文研究了种单花种蜂蜜、油菜蜜、洋槐蜜、构杞蜜龙眼蜜、锻树蜜荆条蜜和葵花蜜）的蛋白质含量、蛋白质电泳图谱、蛋白质巧光光谱Ｗ及蜂蜜中的游离氨基酸和蛋白质氨基酸组成。１．３．２．１单花种蜂蜜蛋白质含量测定Ｗ８种花源的２８个单花种蜂蜜为研究对象，测定其蛋白质含量，分析产地和花源对单花种蜂蜜蛋白质含量的影响。－１．．３．２２单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳＰＡＧＥ研究－ＳＤＳＰＡＧＥ８ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图采用方法，分析种单花种蜂蜜蛋白质的谱，研究产地和花源对蜂蜜蛋白质行为影响。１．３．２．３单花种蜂蜜蛋白质的癸光光谱研究采用巧光光谱对８种单花种蜂蜜蛋白质进行分析，研究产地和花源对蜂蜜蛋白质结构的影响。１．３．２．４单花种蜂蜜中游离氨基酸及蛋白质氨基酸的组成研究利用反相高效液相色谱测定８种花源的２８个单花种蜂蜜中游离氨基酸和蛋白质氨基酸组成，比较分析蜂蜜中氨基酸组成的差异。７ 第二章单花种蜂蜜中的蛋白质含量第二章单花种蜡蜜中的蛋白质含量２．１引言蜂蜜中含有糖类、水分、蛋白质、氨基酸、矿物质、酶类、酪类化合物和挥发性物Ｗ质等１８０多种不同成分。因具有独特的颜色和气味，蜂蜜已经广泛应用于食品行业；此外，蜂蜜还具有抗氧化、抗茵和提高免疫力等生物活性，可加速烫烧伤组织愈合、改＆Ｗｔ善胃肠销化功能等，也越来越多的应用于传统医学。一０．５％蜂蜜中存在少量的蛋白质，其含量般不超过蜂蜜总量的；蜂蜜蛋白质的种Ｐ１、、类和含量受蜂种（意大利蜂和中华±蜂）蜜源植物产地和贬存条件的影响，其蛋白质差异可作为蜂蜜来源鉴别Ｗ及渗假鉴别的重要指标。本文通过测定８种花源的２８个单花种蜂蜜中的蛋白质含量，分析产地和花源对蜂蜜蛋白质含量的影响。２．２实验材料与方法２．２．１材料与试剂８种单花种蜂蜜的２８个样品分别采自陕西、山西、河南、河北、内蒙古、新疆、宁－夏、广西、迁宁、黑龙江、四川、湖北和浙江的不同地方，蜂蜜样品信息见表２１。－本章所用试剂：牛血清蛋白（西安科吴生物工程有限责任公司）、考马斯亮蓝Ｇ２５０（西安科吴生物工程有限责任公司）、憐酸二氨巧、磯酸氨二钢、９５％乙醇和８５％磯酸。表２－１８种单花种蜂蜜样品信息表样品编号蜂蜜种类植物源产地采集时间Ｚ１专花蜜ＺｉｚｉｐｈｉｉｓｊｕｊｕｂａＭＵＩ．山西临县２０１２Ｚ２巧花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ．山西五台山２０１２之３巧花壑ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭＳＩ１．河南灵宝２（Ｈ２Ｚ４麥花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ．河北赵县２０１２Ｚ５麥花蜜Ｚｉｚｉｐｈｕｓ拥ｕｂａＭＵｌ．陕西延川２０１２Ｚ６娶花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ．陕西佳县２０１２Ｚ７麥花蜜Ｚｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊ地ａＭｉｌｌ．陕西大蒜２０１２８ 西北大学硕±学位论文Ｚ８夢花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉ＂．陕西吴堡２０１２Ｊ１荆条蜜Ｖｋｅｘ打ｅｇｕｎｄｏｖａｒ．迂宁鞍山２０１２Ｊ２荆条蜜Ｖｉｔｅｘ打ｅｇｕｎｄｏｖａｒ．河南辉县２０１２Ｊ３荆条蜜Ｖｉｔｅｘｎｅｇｕｎｄｏｖａｒ．山西平定２０１２Ｃｌ洋槐蜜ＲｏｂｉｎｉａｓｅｕｄａｃａｃｉａＬ．陕西临渣２０１２ｐＣ２洋槐蜜Ｒｏｂｉｎｉ过ｓｅｕｄａｃａｃｉａＬ．河南卢氏２０１２ｐＣ３泮焼蜜Ｒｏｂｉｎｉａｓｍｋｃａｃｊａｌｕ．辽宁鞍山２０１２ｐＤ１根树蜜ＴｉｌｉａｔｕａｎＳ巧ｓｚｙｌ．黑龙江２０１２Ｄ２锻树蜜Ｔｉｌｉ泣ｔｕａｎＳ巧ｓｚｙｌ．吉林２０１２Ｌ１龙眼蜜Ｄｌｍｏｃａｒｐｕｓ１〇打ｇａｎｌｏｕｒ．四川灵山２０１２Ｌ２龙眼蜜Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎｌｏｕｒ．广东茂名２０口Ｌ３龙眼蜜Ｄｉｗｏｃａｉｐｕｓｋｍｇａｎ！ｏｕｒ．广西植平２（Ｈ２Ｇ１拘杞蜜ＬｙｃｉｕｍｃｈｉｎｃｎｓｅＭｉｌｌ．宁夏中宁县２０１２Ｇ２构杞蜜ＬｙｃｉｕｍｃｈｉｎｃｎｓｅＭｉｌｌ．宁夏孔滩２０１２Ｇ３构杞蜜Ｌｙｃｉｕｍｃｈｉ打ｃ打洗Ｍｉｌｌ．宁夏新堡２（Ｕ２；皆Ｋ１葵花蜜ＨｅｌｉａｎｔｈｕｓａｎｎｕｕｓＬ．浙江２（Ｕ２Ｋ２葵花蜜ＨｅｌｉａｎｔｂｕｓａｎｎｕｕｓＬ．内蒙古２０１２Ｋ３葵花蜜抹ｅＵａｎ也版ａｉｍｍｓＬ．新疆２０１２Ｙ１油菜蜜Ｂｒａｓｓｉｃａｒ帮ａＵｉｍ．四川内江２ＣＵ２Ｙ２油菜蜜Ｂｒａｓｓｋａ拘ｐａＵｘｍ．湖北荆州２０口Ｙ３油莱蜜ＢｒａｓｓｉｃａｒａｐａＵｎｎ．陕西汉中２０１２２．２．２仪器与设备－２实验中所用仪器与设备见表２。９ 第二章单花种蜂蜜中的蛋白质含量表２－２仪器名称、型号和生产广家名称型号生产厂家电子分析天平ＢＳＡ－ＣＷ北京赛多利斯科学仪器有限公司７５－紫外何见分光光度计ＵＶ１ＧＤ上海分析仪器总厂高速台式离也机了６以１６０上海安亭科学仪器厂数显恒温水浴锅ＨＨ－２国华电器有限公司－超声波清洗器ＫＱ１００Ｂ昆山市超声仪器有限公司２．２．３实验方法Ｐ３采用考马斯亮蓝法测定蜂蜜中的蛋白质含量。具体方法如下：：精密称取化１牛血清蛋白标准品．０标准蛋白质溶液ｇ，使用ＰＢＳ缓冲液配制成１ｍｇ／ｍｌ牛血清蛋白溶液。－：２５０１００ｍＬ考马斯亮蓝试剂精密称取考马斯亮藍Ｇｍｇ，溶于５０９５％乙醇中，然后加入１００ｍＬ８５％磯酸，摇匀并用蒸馈水稀释至１０００ｍＬ。：蜂蜜样品待测蜂蜜溶液分别称取５，并将其溶于５ｍＬ蒸溜水中，混匀，５０００ｒ／ｍｉｎｇ‘ｌＯｍｉｎ，Ｃ冰箱中保存备用。离也，收集上清液定容至ｌＯｍＬ，置于４－ｍ制作标准曲线：按表２３配制溶液，摇匀后放置５ｉｎ，使用紫外／可见分光光度计在巧５ｎｍ处测定吸光度。Ｗ５％ｎｍ处的吸光度为纵坐标，牛血清蛋白含量为横坐标绘制标准曲线。表２－３蛋白质标准曲线的测定试管编号０１２３４５６牛血清蛋白溶液（ｍＬ）０．００．１０．２０．４０．６０．８１．０阳Ｓ缓冲液（ｍＬ）１．００．９０乂０．６０．４０．２０．０考马斯亮蓝溶液（ｍＬ）５．０５．０５．０５．０５．０５．０５．０蜂蜜样品测定：取各种蜂蜜样品化５ｍＬ，分别加入到１０ｍＬ试管中，然后依次加入０．５ｍＬＰＢＳ缓冲液和５址考马斯亮蓝溶液，摇匀后放置５ｍｉｎ，使用紫外／可见分光光巧５ｒｎｎ处的吸３。度计测定光度，每个样品平行测定次１０ 西北大学硕±学位论文２．３结果与分析２．３．１不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质含量的比较分析－８８４－个花源的２个蜂蜜中的蛋白质含量见表２。由表２４可Ｗ看出，８种单花种蜂蜜３９８？．３山７．８９１８３９．１化１１．１９ｍ／ｋ之间．／ｋ。中的蛋白质含量在ｇｇ，平均值为％１６０ｍｇｇ蜂蜜中的蛋白质含量通常低于５０００ｍｇ／ｋｇ，主要来自于蜜蜂自身的分泌物和蜜源桂物的花粉或花蜜，本研究所测的２８个单花种蜂蜜的蛋白质含量远小于这个值。由表２－４可知，有些单花种蜂蜜蛋白质含量的最低值和最高值差异较大，呈现出明显的产地差异，蜂蜜采集地区越接近蛋白质含量之间的差别越小。如麥花蜜，陕西延川产的含量为１２８９．４紅１３．４３ｍｇ／ｋｇ，山西五台山产的含量为５９８．７狂１０．４１ｍｇ／ｋｇ；洋槐蜜，迁宁鞍山产的含量为７４１．７０±６．９１ｍｇ／ｋｇ，河南卢氏产的含量为３９８．３１±１７．８９ｍｇ／ｋｇ，而陕西临渣产的含量为４９０．９４＊１４．４４ｍｇ／ｋｇ，更接近于河南卢氏的含量此外，油菜蜜、龙眼蜜、葵花蜜及荆条蜜的蛋白质含量都呈现明显的地区差异。蜂蜜蛋白质量存在ｆ的差异可能是由于不同地区的蜜源植物化蜜情况、气候和±壤等情况不同，导致酿得的蜂蜜在成分中蛋白质含量也会发生变化。２．３．２不同花源峰蜜蛋白廣含量的比较分析除了地区差异对蜂蜜蛋白质含量的影响外，不同花源的蜂蜜蛋白质含量之间也存在－－明显差异（图２１）。由图２１可知，龙眼蜜的蛋白质含量最高，为１６５０．９１ｍ／ｋ均值），ｇｇ．，＾ｋ洋槐蜜的蛋白质含量最低，为５４３．６５ｍｇ／ｇ（均值），其他单花种蜂蜜按照蛋白质含量島低依次为葵花蜜（１２３０．６７ｍｇ／ｋｇ）、油菜蜜（１０２８．７１ｍｇ／ｋｇ）、安花蜜（９２１．３５ｍｇ／ｋｇ）、构杞蜜（９２６．２２ｍｇ／ｋ）、荆条蜜（７４２．５４ｍ／ｋ）和锻树蜜（６４义７８ｍ／ｋ）。ｙ■上结果ｇｇｇｇｇ表明，不同花源的蜂蜜蛋白质含量差异显著，其原因可能是不同蜜源植物的花粉或花蜜所含蛋白质的含量存在差异。１１ 第二章单花种蜂蜜中的蛋白质含量－２０００１＾ＤＯ１８。。意：Ｉ扫１６００－Ｖｍ？－Ｓ１４００秦１１Ｔ＾１＊：！：：？１＂＇：ｉＥＳＳＢＢＢＳＳＺＪＣＤＬＧＫＹＨｏｎｅａｍｌｅｙＳｐＺ－專花蜜－－－－－－（，Ｊ荆条蜜，Ｃ洋槐蜜，Ｄ极树蜜，心龙眼蜜，Ｇ构杞蜜，Ｋ葵花蜜，Ｙ油菜蜜）－图２１８种单花种蜂蜜的蛋白质含量（均值）表２４８种单花种蜂蜜的蛋白质含量（ｍ／ｋ）ｇｇ样品蜂蜜种类产地蛋白质浓度ｍｇ／ｋｇ样品蜂蜜种类产地蛋白质浓度ｍｇ／ｋｇｅ＾Ｚ１巧花蜜山西临县１１７６．６１±１１．Ｄ．３３±１０．１４的１根树蜜黑龙江６巧？１Ｚ２孝花蜜山西五台山５９８／７６＋９．４４Ｄ２巧树蜜吉林６５８．２２＋１０．４３４ｉｂＺ３娶花蜜河南灵宝８３．１２±１８．０３Ｌ１龙眼蜜四川灵山１６１５．５４＋１１．２ｌ＊＊＋。Ｚ４麥巧蜜河北赵县８９１．４２＋４．６４Ｌ２龙眼蜜广东茂名１４９８１１１．３６．０ｄＺ５要花蜜陕西延川１２２２．７９±８．８ｌＬ３龙眼蜜广西桂平１８３９１０＋１１．Ｗ．＋＊＊ｈＺ６孝花蜜陕西佳县１２１９１．．．３０８５２Ｇ１构杞蜜宁夏中宁县９０５．２０±２０６〇＞＊Ｚ７９４．８２１．１Ｇ２构杞蜜宁夏孔滩８９５７安花蜜陕西大蔚±２６．０８＋１】．４１ｉｍｇＺ８巧花蜜陕西吴堡６２３．９４６．９３Ｇ３构杞蜜宁夏新堡９７８±．３７＋１２．＂山＊＊＋６Ｊ１荆条蜜迂宁鞍８９３．２１＋１５．１１Ｋ１葵花蜜浙江１５Ｗ．７２１１．５５°＋ｆＪ２荆条蜜河南辉是５１７．０２１３．３０Ｋ２葵花蜜内蒙古１０化２２±１４．５６＋？＜Ｊ３荆条蜜山西平定８１７１１２６Ｋ１１．０７±．４０．３葵花蜜新疆０２２０．６８°＋？Ｃ１洋槐蜜陕西临渣４９０４４Ｙ１．．９±１．４４油菜蜜四川内江９４９．５７５９７°？＋Ｃ２洋槐蜜河南卢氏３％．３１±１７．８９Ｙ２油菜蜜９８０．７５１５湖北荆州．７６ｋ６Ｃ３洋槐蜜江宁鞍山７４１７０±６ｌ．．．９Ｙ３油菜蜜陕西汉中１１５５８２±８肥１２ 西北大学硕±学位论文２．４本章小结本研究测定了不同产地和花源的２８个单花种蜂蜜中的蛋白质含量。结果表明，由于不同地区的蜜源植物沁蜜情况、气候和±壤等不同Ｗ及不同蜜源植物的花粉或花蜜所含蛋白质不同，导致蜂蜜蛋白质含量不仅随着产地不同发生变化，而且还受蜜源植物差异的影响。１３ 第兰章单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究第三章单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究３．１引言电泳技术最早可Ｗ追溯到１９世纪，１８０７年俄国物理学家Ｒｅｕｓｓ首先发现了电泳现象３７ｉｕｓ，电泳，直到１９年瑞典的Ｔｉｓｅｌ建立了分离蛋白质的界面电泳之后技术才开始应Ｗ用。近年来，电泳技术己广泛地应用于生物化学、分析化学、免疫学、微生物学及食品化学等各个领域。目前，国内关于蜂蜜蛋白质的研究较少。本文对中国产的８种单花种蜂蜜的５０个样品作了－ＰＡＧＥ分化目的是通过蜂蜜蛋白质电泳行为来研究不同蜂蜜蛋白质组成ＳＤＳ么间的差异，为鉴别蜂蜜来源Ｗ及渗假提供依据。３．２实验材料与方法３．２．１材料与试剂８种花源的５０个单花种蜂蜜分别采自陕西、山西、河南、河北、迂宁、四川、宁夏、３－内蒙古、浙江、广化新疆、黒龙化和湖北的不同地区，见表１。本章所用试剂；蛋白质Ｍａｒｋｅｒ西安科吴生物工程有限责任公司、磯酸二氨钢、磯（）酸氨二钢Ｎ－、氯化销、丙巧酷胺（西安科吴生物工程有限责任公司）、Ｎ甲叉双丙稀醜，胺（西安科吴生物工程有限责任公司）、Ｈ哲甲基氨基甲烧（Ｔｒｉｓ）（西安科吴生物工程有限责任公司）、盐酸、十二烧基横酸销（西安科吴生物工程有限责任公司）、琉基乙醇、甘油、滨酶藍、甘氨酸（西安科吴生物工程有限责任公司）、无水乙醇、冰乙酸、考马｜｜－－斯亮蓝民２５０（西安科吴生物工程有限责任公司）、过硫酸钱、ＮＮＮＮ四甲基乙二胺，，，ＴＥＭＥＤｏ（）３－表１８种单花种蜂蜜样品信息表样品编号蜂蜜种类植物源产地采集时间Ｚ１巧花蜜Ｚｉｚｉｐｈ肪姆ｕｂａＭｉｌｌ陕西隹县２０口Ｚ２巧花蜜Ｚｊｚｉｐｈｕｓ州ｕｂａＭｉｌｌ陕西延川２０１２巧巧花蜜Ｚｉｚｉｐｈｕｓ如ｕｂａＭｉｌ！陕西吴堡２０１２Ｚ４巧花蜜Ｚｉｚｉｐｈ拟州ｕｂａＭｉｌｌ陕西大窺２ＣＨ２巧巧花蜜Ｚｉｚｉｐｈｕｓ则ｕｂａＭＵ１山西临县２０口１４ 西北大学硕±学位论文Ｚ６巧花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌ！山西五台山２０１２Ｚ７巧花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉＵ河北赵县２０１２Ｚ８審花蜜ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ河南灵宝２０１２Ｊ１荆条蜜Ｖｉｔｅｘ打ｅｇｕｎｄｏｖａｒ河北赞皇县２０口Ｊ２荆条蜜Ｖｉｔｅｘｎｅｇｕｎｄｏｖａｒ河南辉县２０１２Ｊ３荆条蜜Ｖｉｔｅｘ打ｅｇｉｍｄｏｖａｒ妊宁鞍山２０１２Ｊ４則条蜜Ｖｉｔｅｘｎｅｇｉｍｄｏｖａｒ山西平定２０口Ｊ５荆条蜜Ｖｉｔ放ｎｅｇｕｎｄｏｖａｒ山西翠峰山２０１２Ｊ６荆条蜜Ｖｉｔ燃ｎｅｇｕｎｄｏｖａｒ山西巨城２０１２Ｃ１禅槐蜜ＲｏｂｉｎｉａｓｅｕｄａｃａｃｉａＬ．陕西淳化２０１２ｐ０１禅槐蜜ＲｏｂＪｎｋｓｅｕｄａｃａｃｈＬ．陕西缓德２０１２ｐＣ３洋槐蜜Ｒｏｂｉｎｉａｓｅｕ舶ｃａｃｉａＬ．陕西清涧２０１２ｐＣ４禅槐蜜民ｏｂｉｎｉａｓｅｕ舶ｃａｃｉａＬ．陕西延长２０１２ｐＣ５泮槐蜜ＲｏｂｋｄａｓｅｕｄａｃａｃｉａＬ．陕西临違２０１２ｐＣ６洋魄蜜Ｒｏｂｉｎｉａｓｅｕｄａｃａｃｉ泣ｈ．陕西宜川２０口ｐＣ７泮槐蜜ＲｏｂＭａｓｅｕｄａｃａｃｉａｌ＾２０．河南卢巧１２ｐＣ８洋槐蜜Ｒｏｂｉｎｉ泣ｓｅｕｄａｃａｃｉａＬ．瓦宁鞍山２０１２ｐＤ１锻树蜜ＴｉｌｉａｔｕａｎＳｚｙｓｚｙｌ．黑龙江哈尔滨２０１２Ｄ２？树蜜ＴｉｌｉａｔｉｍｉＳ巧ｓｚｙｌ．黑龙江伊春２０１２Ｄ３瑕树蜜Ｔｉｌｉ３ｔｉｍｉＳ２ｙｓ如吉林２０１２Ｌ１死眼蜜Ｄｉｍｏｃａｉｐｕｓ１〇打ｇａｎｌｏｕｒ．四川灵山２０１２Ｌ２龙眼蜜Ｄｈｎｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎｌｏｕｒ．潭州２０１２Ｌ３龙眼蜜Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎｌｏｕｒ．大新２０口Ｌ４龙眼蜜Ｄｈｎｏｃａｒｐｕｓｋｍｇａｎｌｏｕｒ．广东茂名２０１２Ｌ５龙眼蜜Ｄｈｎｏｃａｒｐｕｓｋｍｇａｎｌｏｕｒ．广西桂平２０１２Ｌ６龙眼蜜Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎｌｏｕｒ．广西玉林２０１２Ｌ７巧眼蜜Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｈｎｇａｎｌｏｕｒ．广西南宁２０１２Ｌ８巧眼蜜Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ］ｏｎｇａｎｌｏｕｒ．广西平南２０１２巧 第Ｓ葦单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ硏究ｉｎｃｎｓｅｌ］Ｇ１构杞蜜ＬｙｃｉｕｍｃｈＭ．宁夏中宁县２０１２Ｇ２构杞蜜ＬｙｃｉｍｎｃｈｉｎｃｎｓｅＭｉｌｌ．宁夏孔滩２０１２Ｇ３构杞蜜ＬｙｃｉｕｍｃｈｉｎｃｎｓｅＭｉｌｌ．宁夏新堡２（Ｈ２Ｇ４构杞蜜Ｌｙｃｉｕｍｃｈｉｍ打ｓｅＭＨ１．宁夏石蘭趴２０１２Ｋ１葵花蜜ＨｅｌｉａｎｔｈｕｓａｍｍｓＬ．内蒙古２０１２Ｋ２葵花蜜ＨｅｌｉａｎｔｈｕｓａｎｍｕｓＬ．新疆２（Ｈ２Ｈ．Ｋ３葵花蜜ｅｈａｎｔｈｕｓａｎｎｕｕｓＬ．渐江２０口Ｋ４葵花蜜ＨｅｌｉａｎｔｈｕｓａｎｎｕｕｓＬ．甘肃２０口Ｋ５葵巧蜜Ｈｅｌｉａｎ曲ＵＳａｎｍｉｕｓＬ．吉林２０１２Ｙ１油菜蜜Ｂｍｓｓｉｃ这ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．湖北荆州２ＣＨ２ｉｃａｃａｉｓＹ２油菜蜜ＢｍｓｓｍｐｅｓｔｒＬ．湖北当阳２（Ｈ２Ｙ３油莱蜜Ｂｒａｓｓｉｃ沒ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．陕西汉中２０口ｉｃａＨＹ４油菜蜜ＢｒａｓｓｃａｍｐｅｓｔｓＬ．陕西勉县２０口Ｙ５油莱蜜ＢｒａｓｓｋａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．四川内汪２０１２Ｙ６油菜蜜ＢｒａｓｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．四川自贡２０１２Ｙ７油菜蜜ＢｒａｓｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｉｉｓＬ．四川绵旧２０１２Ｙ８油菜蜜ＢｒａｓｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．四川眉山２０口３．２．２仪器与设备３－实验中所用仪器与设备见表２。表３－２仪器名称、型号和生产厂家名称型号生产厂家电予分析天平ＢＳＡ－ＣＷ北京赛多利斯科学仪器有限公司数显恒温水浴锅ＨＨ－２国华电器有限公司－超声波清洗器ＫＱｌ００Ｂ昆山市超声攸器有限公司高速冷冻离也机Ｈ－１８５０Ｒ湖南湘仪离也机化器有限公司一电脑Ｈ恒多用电泳仪ＤＹＹ－１１北京市六仪器厂３．２．３实验方法３．２．３．１蜂蜜粗蛋白质的制备１６ 西北大学硕±学位论文分别称取５蜂蜜样品，将其溶于５ｍＬ蒸馈水中，漏匀，５０００ｒ／ｍｉｎ离也１０ｍｉｎ，ｇ’Ｃ冰。收集上清液，定容至ｌＯｍＬ，置于４箱中保存备用３Ｓ－ＰＡＧＥ．２．３．２８种单花种蜂蜜的ＳＤ－样品溶解液：在５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液（Ｈ６．８）中加入０．５ＳＤＳ、０．５ｍＬ琉ｐｇ基乙醇、５ｍＬ甘油和１０ｍ漠醇蓝５０ｍＬ。ｇ，定容至电极缓冲液：分别称取３．０２ｇＴｒｉｓ、１４．４２ｇ切ｙ、ＩｇＳＤＳ，溶于蒸馈水中并定容至１０００ｍＬ。Ｒ－２５０染色液称取化２５考马斯亮蓝，溶于１００ｍＬ固定液（含５０％乙醇和１０％ｇ冰乙酸的水溶液）。脱色撤含２０％己醇和７％冰乙酸的水溶液。（１）装片取合适的２块已清洁干燥的玻璃板，组装成灌簿平板膜，用强有力的夹子夹紧后放在平板膜座上。５－（２）装胶使用１２％的分离胶和％的浓缩胶，凝胶缓冲体系的具体配方如表３３。３－３根据表配制分离胶溶液，立即通过恒流粟将凝胶溶液灌入组装好的平，疫轻混匀后一３．５ｃｍ为止。再板凝胶膜中，至分离胶溶液离度离玻璃板上端在分离胶表面加入层水，一封住胶面，Ｗ促进聚合并使分离胶表面平直。室温下凝胶４０ｍｉｎ到个小时后，可Ｗ一看到层界面。吸除水层，然后灌注浓缩胶溶液并插入相应的梳子。，表示已经凝胶完全静置３０ｍｉｎ左右。待凝胶结束后取出梳子。（３）加样分别取各种蜂蜜粗蛋白２０＾１１，加入到等体积的样品溶解液中，摇匀，３？ｍ沸水煮沸５ｉｎ，使蛋白质变性。用移液枪分别吸取１０叫，只保留分子量的效果因素－蛋白质Ｍａｒｋｅｒ和各种蜂蜜粗蛋白质样品加到电泳泳道，具体加样顺序如表３４。７０？８０Ｖ（４）电泳加样后立即进行电泳，样品在浓缩胶中低压电泳（），当样品ｍ处，关进入分离胶界面时调节电压至１２０Ｖ，直至样品达到分离胶底部上方约１ｃ掉电源，结束电泳。（５）染色及脱色将胶片轻轻取下，用蒸馈水清洗干净后，加入２００ｍＬ染色液，一．２００ｍＬ染色个半小时左右染色后，加入脱色液进巧脱色，直到胶中的蛋白质条带清晰可见。１７ 第Ｈ章单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究表３－３不连续缓冲体系分离胶巧浓缩胶配制比例（分离胶１２％）浓缩胶（５％）２蒸馈水（ｍＬ）．８２．９〇３０／〇凝胶胆液（血）４．００．８３－—分离胶缓冲液（１ｌ／Ｔｒｉ．５．５ｍｏＬｓＨＣｌｍＬ）２－—０浓缩胶缓冲液（ｌ．Ｏｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌｍＬ）．６３１０％ＳＤＳＬ１００５０（ｎ）〇１０／〇过硫酸终仙）１００５０１％ＴＥＭＥＤＬ）５００５００（ｎ表３－４蜂蜜样品的加样序号图号泳道号Ｍ１２３４５６７８－Ｚ３１ＡＭａｒｋｅｒ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｚ７Ｚ８（）３－ＭＪ１（Ｂ）ａｒｋｅｒ１Ｊ２Ｊ３Ｊ４Ｊ５化－ＭａｒｋｅｒＣ３ｌＣｌＣ２Ｃ３Ｃ４Ｃ５Ｃ６Ｃ７Ｃ８（）－ＭａｒｋｅｒＤ３１Ｄ１Ｄ２Ｄ３（）－Ｍａ３１ＥｒｋｅｒＬＩＬ２Ｌ３Ｌ４Ｌ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８（）３－ｌＦＭａｒｋｅｒＹ１Ｙ２Ｙ３Ｙ４Ｙ５Ｙ６Ｙ７Ｙ８（）－ＭａｒｋｅｒＫ２３ｌＧ：１ＫＫ３Ｋ４Ｋ５（）３－１ＭａｒｋｅｒＧ１Ｇ２拍Ｇ４师３－２Ｍａｒｋｅｒ巧巧蜜油菜蜜洋槐蜜荆条蜜锻树蜜龙眼蜜构杞蜜葵花蜜３．３结果与分析３－．３．１不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ的比较分析不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱见图３－１，根据蛋白质标准的迁移率对相对分子质量绘制标准曲线，通过回归方程得到蜂蜜蛋白质的相对分子量。对８种单花种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明，８种单花种蜂蜜的蛋白质分子质量？９７ｋＤａ之间主要集中在１４．４，不同产地的同种蜂蜜蛋白质条带数基本相同，并且各蛋白质条带的分子质量也基本相同－，这说明不同产地的同种蜂蜜的蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ图谱之间差异不显著。化 西北大学硕±学位论文－不同产地的安花蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ６条蛋白质条带构成３１图谱主要由（图￣￣？￣￣（Ａ）），各蛋白质条帯分子质量分别为８５成３、７４ｋＤａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ、４５ｋＤａ、￣￣７ｋＤａ？８５ｋ￣￣￣１，其中分子质量为Ｄａ、７４ｋＤａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ、１７ｋＤａ的５个条带一－的蛋白质含量最丰富，为巧花蜜主要蛋白质条带；此外，在２７４５ｋＤａ之间还有些蛋白质条带－，由于其浓度较低，导致蛋白质条带很浅由图３１（Ａ）可Ｗ看出，虽然一不同产地的萝花蜜蛋白质种类基本相同，但其含量存在定差异，陕西延川（泳道２）￣的１７１０）３蛋白的含量明显高于山西五台山（泳道６）和河北赵甚（泳道７），然而山西？５３五台山（泳道６）和河北赵县（泳道７）的ｋＤａｕ蛋白的含量明显高于其他６个产地。６－ＰＡＧＥ图谱均含有７个蛋白质条带－个产地的荆条蜜蛋白质的ＳＤＳ（图３１（Ｂ）），￣８５紅￣￣？￣）３、７４ｋＤａ、６５．５ｋＤａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ、其蛋白质分子量也基本相同，分别为？￣？？￣￣２３防３和２０齡其中条带５８ｋＤａ、７４ｋＤａ、５３ｋＤａ、６５．５ｋＤａ的蛋白质含量较丰富，为荆条蜜主要的蛋白质条带。在蛋白质含量上，不同产地的荆条蜜之间略有差异，河南辉县。（泳道２）和河北赞皇县（泳道１）的蛋白质含量略低于其他４个产地８ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图８３－１（０）个不同产地的洋槐蜜蛋白质的谱含有个蛋白质条带（图，？？￣￣￣￣？分子质量分别为８５ｋＤａ、７４ｋＤａ、６５．５ｋＤａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ、４５ｋＤａ、２３ｋＤａ、￣￣？？２０ｋＤａ，其中条带７４ｋＤａ、５８ｋＤａ巧５３ｋＤａ为主要的蛋白质条带。相比于其他产地，迁宁鞍山（泳道８）的蛋白质含量最高。由图３－ＤＤＳ－ＰＡＧＥ图１（）可知，锻树蜜蛋白质的Ｓ谱主要由４条蛋白质条带构成，￣７４旺￣￣？分子质量分别为）３、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ、＾５ｋＤａ５８ｋＤａ，其中条带的蛋白质含量最高，远高于其他条带。在蛋白质含量上，不同产地的锻树之间差异不显著。￣５９７ｋＤａ范围内（图３－龙眼蜜的蛋白质条带主要集中在４１（Ｅ）），主要由３条蛋白￣￣？￣、、ｋＤａ，质条带构成，它们的蛋白质分子质量分别为７４ｋＤａ６５．５ｋＤａ５８其中条带５８ｋＤａ的蛋白质含量最高。－３－不同产地的油菜蜜蛋白质的ＳＤＳＰＡＧＥ图谱主要由７条蛋白质条带构成（图１Ｆ￣￣？￣（）），其蛋白质分子量也基本相同，分别为７４ｋＤａ、６５．；５防ａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ、＜？￣？－￣￣＾５ｋＤａ、２３ｋＤａ和２０ｋＤａ，其中条带７４ｋＤａ、６５．５ｋＤａ、５８ｋＤａ和５３ｋＤａ为油菜蜜主要的蛋白质条带。不同产地的油菜蜜在蛋白质含量上略有差异，陕西产的样品略高于其他产地。－由图３Ｇ）可知ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱主要由１（，葵花蜜蛋白质的５条蛋白质条带构成，￣？￣￣￣￣心分子质量分别为８５成３、７４虹心６５．５比）３、５８凹）３、２７阳３，其中条带７４１￡吐１９ 第Ｈ章单巧种蜂蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究￣５８ｋＤａ的蛋白质含量最丰富，为葵花蜜的主要蛋白质条带。不同产地的葵花蜜的－￣￣ＰＡＧＥ图谱分析发￣ＳＤＳ）现，甘肃产的葵花蜜不含条带８５ｋＤａ、６５．５证３和２７吐３，－可能是因为含量非常低－，导致ＳＤＳＰＡＧＥ图谱不明显；其他产地的蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ图谱差异不显著。４个不同产地的拘－－杞蜜蛋白质的ＳＤＳＰＡＧＥ图谱含有５个蛋白质条带（图３１（Ｈ）），？？Ｄ？￣Ｄ￣￣分子质量分别为７４ｋＤａ、６５．５ｋａ、５８ｋＤａ、５３ｋａ、４５ｋＤａ７４ｋＤａ、，其中条带？Ｄａ￣￣６５．５ｋ、５８ｋＤａ和５３ｋＤａ为主要的蛋白质条带。相比么下，４个产地的构杞蜜蛋白质之间差异较小。￣综上所述．，本实验所测的２８个单花种蜂蜜的蛋白质分子质量主要集中在１４４９７ｋＤａ么间，同种类蜂蜜的蛋白质条带数基本相同，并且各蛋白质条带的分子质量也基本相同；尽管不同产地的同种类单花种蜂蜜蛋白质含量差异较大，但是其蛋白质种类差异不显著。ｋｙｇ２３ＴＭ！２３４５６ｋｕ！４５ＳｆｉＭ１２３＾Ｍ１２３４５６７８＿＾＾ｗ＊＊＾＊ｔＴｆ—？＇６６ｒＴ９７化巧，【地、？？的＾结一雜？一？巧ｗｔｔｍｍ＾Ｗ＾…沉＇巧，＿５ｊｒ＊＊？＇￣Ｗ３Ｓ．２７Ｓ；＿；’麵。、＾‘泌２０．２０例Ｗ静－供－－细＾巧４＇化．ｎＪ＊‘４＊，，，化＾１４４；、＇疫产１ＢＣＤＡ細５（！５８ｋｕ？！２３；５ＳｒｓｋｕＭ１２３４５３４５６７ｋｕｙ３１２４．■，＇，－＞，、－Ｉｑ、＊‘５Ｔ、＊沒■：９７￣巧辑侮彎醫峰’Ｐ琴巧》賴禱賴鮮》攝禱’ｉｎ獅御㈱ｆｔ婦㈱巧Ｉ轉和－：巧备，Ｉ：：１！侣霉：Ｉ；＇巧站；皆：：扣？〇＊－資；，辨！；节皆曇１３３ｂ；Ｉ，。一一２一：－；＇＇、‘：巧一；＇、‘、－－进辦’卻＇，＇撕細Ｉ２０：Ｉ、，－一量－■－■獄；扣ｇ；４４４．Ｈ．４苦咨暴賣壽藝］ＳＪ吉觀；声擧择！壽诚；进賢棄是转；Ｉ攝麵＾闻Ｉ啤霞非穀参簾纔竭義．醉Ｗ４ｆｌ画義ｇｉｌＩｌ雞馨賴嫉難麵誦證誦靡舉ＥＦＧＨＡ，（：娶花蜜Ｂ；荆条蜜，Ｃ：洋槐蜜，Ｄ：极树蜜，Ｅ：龙眼蜜，Ｆ：油菜蜜，Ｇ：葵花蜜，比构杞蜜，泳道Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ）图３－Ｄ－ＰＡＧＥ１不同地区的蜂蜜蛋白质的ＳＳ图谱３－ＰＡＣＥ．３．２不同花源蜡蜜蛋白质ＳＤＳ的比较分析由于同种类的单花种蜂蜜受地域差异影响不显著一，为了进步研究蜂蜜蛋白质之间的差异，本研究通过对不同花源的８种单花种蜂蜜蛋白质作了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果表２０ 西北大学硕±学位讼文明３－２），不同蜜源的８种蜂蜜蛋白质条带之间存在较大差异（图，说明不同种类的单花种蜂蜜的蛋白质组成存在差异。由图３－２可Ｗ看出－，麥花蜜的ＳＤＳＰＡＧＥ图谱与其他蜂蜜之间差异最显著，其蛋白￣￣￣５８５ｋＤａ、７４ｋＤａ、５８ｋＤａ、质组成比较丰富，含条主要蛋白质条带，分子质量分别为￣？－５３ｋＤａ、１７ｋＤａ，相比其他蜂蜜缺少１《蛋白质条带（６５．５ｋＤａ）；要花蜜的蛋白质条带￣ｋＤａ在其他７种量较高夢花蜜区别于其他蜂蜜的１７蜂蜜中不含，且含，有可能是－￣内标物。其他７种蜂蜜的ＳＤＳＰＡＧＥ图谱之间略有差异，主要蛋白质条带数约为２４２条、３条，其中葵花蜜，洋槐蜜锻树蜜和龙眼蜜各条，荆条蜜、油菜蜜和构杞蜜各４￣￣。妊）３和１＾条葵花蜜的主要蛋白质条带最少，仅为２条（７４５８〇３），相比于麥花蜜少￣８５？￣了３条主要条带（ｋＤａ、５３虹）３和１７ｋＤａ）；洋槐蜜和锻树蜜的主要蛋白质条带较？￣？￣为相似，分子质量分别为７４ｋＤａ、５８ｋＤａ和５３ｋＤａ，相比于巧眼蜜缺少条带６５．５ｋＤａ；油菜蜜、荆条蜜和构杞蜜的蛋白质条带十分相似，，主要由４条主要蛋白质条带构成分￣￣￣￣子质量分翊为７４ｋＤａ、６５．５ｋＤａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ，相比于麥花蜜少了２条主要条－￣８５ｋＤａ？？带（和１７ｋＤａ）。通过比较分析８种单花蜜的ＳＤＳＰＡＧＥ发现，条带７４ｋＤａ￣和５８虹）３是８种单花蜜共有的条带，但其蛋白质含量因花源不同存在显著差异，这说明采自不同花源的蜂蜜可能会含有相同种类的蛋白质，只是花源不同其蛋白质含量存在￣差异此外，相比于其他蜂蜜，龙眼蜜不含５４ｋＤａ条，皋花、；带蜜洋槐蜜和锻树蜜不￣含６５．５成３条带。总么不同花源蜂蜜的蛋白质条带之间存在较大差昇，说明不同种蜂蜜蛋白质的组成存在差异，主要原因可能是蜜蜂采自不同植物源的花蜜中的蛋白质组成存在差异。２１ 第Ｈ章单花种嗦蜜蛋白质的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究ｋｕＭＳ２３４扫扫７８；：技凉ｉ黎；｜梦！繁翁—＇我礙护．著裘纏難，謂絵＾｜｜｜麵權麵編慟携’－二轉Ｓ；＊＇＇－４５■■＾ｍｍｍ，：？．—ｖＪ３５ｍｍｍｔ．．■々－＇＜占、’＇：：ｉｎ醉謹；２０ｉｐｐｉｉ：ｉ；Ｋ讓孫３诗号呈前：＇＇”ｙ；三Ｖ：ｉ；蕭零基霉帛每讓結：？：辉扣龄；吉－量１４４米３謂３５！到豪＇＇＇＇、，諭（泳道１：麥花蜜；泳道２：油菜蜜；泳道３：洋槐蜜；泳道４：荆条蜜；泳道５；极树蜜；泳道６；龙眼蜜；泳道７；构杞蜜；泳道８：葵花蜜）图３－２不同单花种蜂蜜蛋白质的犯Ｓ－ＰＡ甜图谱３．４本章小结本文对产自中国不同地区的８种花源的２８个单花种蜂蜜进行了ＳＤＳ－ＰＡ畑分析，结果表明，产地不同的同花源蜂蜜蛋白质条带数基本相同，并且各蛋白质条带的分子质量也基本相同；尽管不同产地的蜂蜜蛋白质含量差异较大，但是其蛋白质组成差异不显著；不同花源蜂蜜的蛋白质条带之间存在较大差异，说明不同种类的单花种蜂蜜的蛋白质的组成存在差异，主要原因可能是蜜蜂采自不同植物源的花蜜中的蛋白质组成存在差？异，；８种蜜源的２８个蜂蜜样品的蛋白质条带主要集中在１４．４９７ｋＤａ之间其主要蛋白？？￣质条带数约为２５条带７４旺＞３和５８ｋＤａ８，，其中条是种单花蜜共有的条带但其蛋白质含量因花源不同存在显著差异一８些含量丰富的蛋白质，如麥；种单花种蜂蜜都有￣８５￣￣？花蜜有５条主要的蛋白质条带，其分子量依次为ｋＤａ、７４ｋＤａ、５８ｋＤａ、５３ｋＤａ？？￣？和１７ｋＤａ，荆条蜜有４条主要的蛋白质条带，其分子量依次为５８ｋＤａ、７４ｋＤａ、５３ｋＤａ和￣？￣６５．５ｋＤａ，洋槐蜜有３条主要的蛋白质条带，其分子量依次为７４ｋＤａ、５８ｋＤａ￣￣￣￣５３吐）３树蜜有３条主要的蛋白质条带０）和，其分子量依次为７４ｋＤａ、５８１３５３，锻和ｋＤａ眼蜜有３条主要的蛋白质条带？Ｄａ？？、６５ｋａｋａ，龙，其分子量依次为７４ｋ．５Ｄ和５８Ｄ，￣￣￣？０）油菜蜜有４条主要的蛋白质条带，其分子量依次为７４ｋＤａ、６５：．５ｋＤａ、５８１３和５３￣￣ｋＤａ，葵花蜜有４条主要的蛋白质条带，，其分子量依次为７４ｋＤａ和５８ｋＤａ构杞蜜有２２ 西北大学硕±学位论文￣￣￣￣４条主要的蛋白质条带，其分子量依次为７４ｋＤａ、６５．５ｋＤａ、５８１０）＆和５３凹）３；蛋￣－１７证＞３仅存在于安花蜜蛋白质的ＳＤＳＰＡＧＥ图谱中白质条带，为夢花蜜别于其他蜂蜜的特征蛋白质。■义２３ 第四章单花种蜂蜜蛋白质的巧光光谱研究第四章单花种蜂蜜蜜白质的费光光谱研究４．１引言一巧光光谱法是研究蛋白质分子构象的种有效的方法。它能提供激发光谱、发射光谱Ｗ及巧光强度等许多物理参数，这些参数从各角度反映了分子成键和结构情况。通过一这些参数的测定Ｊ，不但可＾做般的定量分析，还可＾＾ｌ推断蛋白质分子在各种环境下的。构象变化。同时，焚光光谱法还具有灵敏度高、选择性强、用样少和方法简便等优点ｓｆｇ因此。，巧光光谱法在蛋白质分子构象测定中得到越来越广泛的应用在蛋白质分子中的色氨酸（Ｔｒｐ）、酪氨酸（Ｔｙｒ）和苯丙氨酸（Ｐｈｅ）因其侧链生色基团不同而有不同的巧光激发和发射光谱，其中Ｔｉｐ的焚光强度最大，而Ｐｈｅ的巧光强度则最弱。由于蛋白质通常在２８０ｎｍ或２９５ｎｍ的激发光的激发下会产生巧光，因此蛋白质的內源ＰＷ７Ｔ］巧光主要是由ｒｐ和Ｔｙｒ残基形成的。本文利用焚光光谱分析了８种单巧种蜂蜜的蛋白结构差异，为蜂蜜花源鉴别及渗假提供依据。４．２实验材料与方法４．２．１材料与试剂８２８、山西、种花源的个单花种蜂蜜样晶分别采自陕西、河南、河北、江宁、四川－宁夏、内蒙古、浙江、广西、新疆、黒龙江和湖北的不同地方，见表２１。二－本章所用试剂：磯酸二氨钢、磯酸氨钢、牛血清蛋白、考马斯亮蓝Ｇ２５０、％％乙醇和８５％磯酸。４．２．２仪器与设备－试验中所用实验仪器与设备见表４１。２４ 西北大学硕±学位论文表４－１仪器名称、型号和生产厂家名称型号生产厂家电子分析天平ＢＳＡ－ＣＷ北京赛多利斯科学仪器有限公司紫外巧见分光光度计ＵＶ７５－１ＧＤ上海分析仪器总厂高速台式离也机ＴＧＬ１６Ｇ上海安亭科学仪器广超声波清洗器Ｋ－Ｑ１００Ｂ昆山市超声仪器有限公司冷冻干燥机ＦＤ－１北京博医康技术公司多功能读板机ＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００ｒｏ瑞ｉＴＥＣＡＮ公司ｐ４．２．３实验方法４．２．３．１蜂蜜粗蛋白质的制备称取２０ｇ各种单花种蜂蜜样品，并溶于２０ｍＬ蒸馈水中，混匀，５０００ｒ／ｍｉｎ离也１０分钟，收集上清液；然后将所有蜂蜜样品置于截留分子量为５０００ｋＤａ的透析袋中透’析－４－２０Ｃ冷３次，除去蜂蜜中的小分子物质；透析结束后收集透析液并置于盘子中，’冻２４小化并真空干燥－，将得到蛋白质粉末置于２０Ｃ保存备用。一称取定量干燥后的各种蜂蜜蛋白质粉末．，溶在１０ｍＬ的磯酸缓冲液（ｐＨ７５）中，待充分溶解后离也。，收集上清液采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，将各蜂蜜蛋白质‘的浓度定量为０．５ｍ／ｍｌ，再经０．４５ｍ滤，置于４Ｃ冰箱。ｇＭ膜过滤中保存备用．，脚４．２．３．２蜂蜜蛋白质的巧光光谱分析：：采用费光分光光度法对纯化得到的蜂蜜蛋白质进行扫描，实验条件为激发波长￣２８０皿１，发射波长：２９０４５０ｍｎ，５０ｍｍＰＢＳＨ７．５、蛋白质浓度为０．５ｍ／ｍｌ、溫度（ｐ）ｇ°为２５Ｃ。４．３结果与分析４．３．１不同产地的８种单花种蜂蜜蛋白质焚光光谱的比较分祈对产地不同的同花源蜂蜜的蛋白质英光光谱图分析发现－（图４１）白质含量相，在蛋同的情况下，产地不同的同花源蜂蜜呈现出不同的吸收特征。不同产地的专花蜜蛋白质的褒光光谱图如图４－１（Ａ），经分析发现，山西临县（Ｚ１）、山西五台山（Ｚ２）、河南灵宝（Ｚ３）、河北赵县（Ｚ４）、陕西佳县（Ｚ６）和陕西大蒜（Ｚ７）６个产地的巧花蜜蛋白质的最大吸收峰都在３２７ｍｎ处，其巧光吸收强弱依次为佳县、大窺、之５ 第四章单花种蜂蜜蛋白质的巧光光谱研究临县、五台山、赵县及灵宝临县的巧光吸收最强，高于其他５，而灵宝：其中个产地的癸光强度最弱６，、，略低于赵县；对个产地的蛋白质巧光光谱比较分析发现佳县大窺和临县的荣光强度较接近，灵宝和赵县的巧光强度相当，五台山的蛋白质巧光强度居二者之间。陕西延川（Ｚ５）的麥花蜜蛋白质的最大吸收峰在３２４ｎｍ处，并且其巧光强度远低于其他几个产地。陕西吴堡（Ｚ８）的麥花蜜蛋白质巧光最大吸收峰在３２１ｒｕｎ处，其萊光强度仅商于陕西延川。上述结果表明，实验所测的８个产地的参花蜜蛋白质的英￣光最大吸收峰在３２１３２７ｎｍ么间，这个波段主要反映色氨酸和酪氨酸的巧光吸收特征，蛋白质最大吸收峰的波长差异能反映出蛋白质结构上的差异。此外，不同产地亭花蜜的癸光吸收强度差异显著，可能由于蛋白质外部结构上含有色氨酸残基和酪氨酸残基的数量存在差异，但，送说明产地不同的麥花蜜蛋白质虽然在组成上差异较小其蛋白质结构上存在差异。由图可知，荆条蜜蛋白质的最大吸收峰分别在３２２和３２７ｎｍ处，其中迁宁（Ｊ１）的蛋白质最大吸收峰在３２７ｎｍ处，其蛋白质巧光吸收强于河南和山西（山西的吸收强度略高于河南）；而河南（Ｊ２）和山西（Ｊ３）的蛋白质最大吸收峰在３２２ｎｍ处，相一比于迁宁，蓝移了５ｎｍ。总之，荆条蜜的蛋白质结构因产地不同存在定差异。４－不同产地的洋槐蜜蛋白质的巧光光谱图如图１０。由图可知，洋槐蜜蛋白质的最（￣大吸收峰在３２０３２６ｎｍ范围内，其中迂宁鞍山（Ｃ３）的蛋白质最大发射波长为３２６ｎｍ，且其巧光吸收强度最强，島于陕西（Ｃｌ）和河南（Ｃ２）；陕西和河南的洋槐蜜蛋白质的巧光强度较接近，其最大的发射波长分别为３２４ｎｍ和３２２ｍｎ。总之，陕西和河南的油一定差异菜蜜的蛋白质结构较为相似，与迂宁的洋槐蜜蛋白质存在，其原因可能是产地差异的影响。－ｌＤ）对２个产地的锻树蜜蛋白质的炎光光谱图（图４分析发现，它们的蛋白质的（）焚光最大吸收峰在３２８ｎｍ处，其中黑龙江（Ｄ１）的炎光强度略高于吉林（Ｄ２），总的。来说，根树蜜蛋白质结构上差异不显著由龙眼蜜蛋白质的炎光光谱图４－３２８ｎｍ１（巧可知，巧眼蜜的蛋白质最大吸收峰在附近，其中广西（Ｌ３）的蛋白质巧光强度与四川（Ｕ）和湖北（Ｌ２）相当（广西的略高于其他２个产地），说明产地差异对龙眼蜜巧光光谱影确较小，龙眼蜜蛋白质在结构上差异不显著。－由图４ｌ（Ｆ）可知，构杞蜜蛋白质的巧光光谱图十分相似，其最大吸收峰都在３２８ｎｍ处，，，蒙光强度相当说明不同产地的构杞蜜蛋白质在结构上差异较小其可能的原因是２６ 西北大学硕±学位论文样品采集的范围较小，导致蛋白质差异也较小。－葵花蜜蛋白质的巧光光谱如图４１巧，不同产地的葵花蜜蛋白质的最大巧光吸收峰（均在３２８ｎｍ处，但是其炎光强度差异较大，其中新疆（Ｋ３）最强，内蒙古（Ｋ２）次之，浙江（Ｋ１）最弱。Ｗ上结果说明，葵花蜜的蛋白质差异受产地影响较大。－由图４１（巧可知，３个产地的油菜蜜蛋白质焚光最大吸收峰在３２２和３２８ｒｎｎ处，其中陕西（Ｙ３）的蛋白质最大吸收峰在３２８ｎｍ处且英光吸收强度较强，与四川的英光强度相当；四川（Ｙ１）和湖北（Ｙ２）的最大吸收峰均在３２２ｎｍ左右，其中四川的吸收强度略强于湖北。Ｗ上结果说明，３个产地的油菜蜜蛋白质都呈现酪氨酸和色氨酸的吸收特征，且巧光强度受产地差异影响较小。Ｗ上结果表明，８种花源的２８个单花种蜂蜜蛋白质的癸光最大吸收峰主要在３２０－３２８ｎｍ之间，最大相差８ｒｎｎ，主要属于色氨酸和酪氨酸的波段范围；其中锻树蜜、构杞蜜和龙眼蜜的蛋白质受产地差异影响较小，其可能原因是采蜜的区域范围较小，导致它们在蛋白质结构上差异不显著，而其他５种蜂蜜的蛋白质因产地而存在不同程度的差异。巧 第四章单花种蜂蜜蚕白质的巧光光谱研究Ｚ：１山西临直－６２０００００Ｊ：Ｚ２１江宁鞍山＾：山西五台山Ｚ。：河南辉直３河南灵宝．１６００００Ｚ４河北赵县ｄ６ＷＫＷＪ．＼化山西平定—ｓ；ｓＩ＼＼＇＇■■－．＂Ｉ１＾■＊Ｉ０ＩＩ■０！？ＴＩＩＩ■ＩＩＩ，，，３２０３４０３６０３８０４００４２０３２〇３４０３６０３Ｂ０４００４２０波长／ｎｍ波校油ｍＡＢ－１０００００－ｎ７５０００＊Ｄ：＝〇ｌ黒龙江八Ｓ？《？，ａ８００００－Ｃ２：河南卢氏６００００－ｍ？吉林■Ｃ３ａｒ＼：江宁按山忌＼＼／＼／ｆ曼６００。。．／＼＼＼魯４ＳＯＯＯ．Ｄｉｖ＼＾－Ｊ４００００－３００００争爲＇２００００－＾ＳＯＣＫＳ－——Ｊ０Ｌ－Ｌ，ｒ〇３２０３４０３６０３８０４００４２０３２０３４０３６０３Ｂ０４００波长／ｎｍ渡松／ｍｎＣＤ台００００１５００００＊０３ＬＩ：四川灵山Ｇｈ宁巧中宁县－Ｌ２；广东茂名６００００．Ｇ２：宁夏巧４０）ＣＫＫＬ３；陕西桂平Ｇ３：宁《新堡ｄＷ§ｆ胃Ｗ／０４０００。－；／Ｉ＾＾Ｉ３２０３４０織３８０４００３＾３４０３６０３８０４００４２０談长／ｎｍ淡长／ａｍＥＦ１２００００＊Ｋ３－１０００００■Ｙ／ＸＫｈ浙江ｌ：四川内江ｗｏｏａａ．／Ｋ２００－：內蒙古８００＾＼Ｙ２：湖北荆州＼口誦Ｙ３：陕西汉中誦。：Ｉａｏｏｏｏ．／Ｉ旷。００．户取４００００．＾赏２０００Ｓ．：驗課。’．３２０３４０３６０３８０４００４２０３２０＾４０３６０３８０４００４２０被长化ｍ热长／ｍｎＧＨ＝＝＝＝＝＝＝＝（Ａ巧花蜜，Ｂ荆条蜜，Ｃ洋槐蜜，Ｄ根树蜜，Ｅ龙眼蜜，Ｆ拘杞蜜，Ｇ葵花蜜，Ｈ油菜蜜）图４－１８种单花种蜂蜜蛋白质的巧光光谱图４．３．２不同花源蜂蜜蛋白质巧光光谱的比较分析一些同种类的蜂蜜受产地差异的影响不显著一由于，为了进步研究蜂蜜蛋白质英光２８ 西北大学硕壬学位论文光谱之间的差异，本研究对不同花源的８种单花种蜂蜜蛋白质作了巧光光谱分析。结果８－２）表明，不同花源的种单花种蜂蜜的蛋白质巧光光谱图存在较大差异（图４，说明不同花源的蜂蜜蛋白质在结构上也存在差异。对８种蜂蜜蛋白质炎光光谱分析表明，在蛋白质含量相同的情况下，不同花源的蜂－蜜表现出不同的吸收特征（图４２。锻树蜜（Ｄ）、构杞蜜（Ｇ）、葵花蜜（Ｋ）和龙眼蜜）（Ｋ）的蛋白质最大吸收峰均在３２８ｎｍ（均值）处，它们蛋白质的巧光强度差异显著，３其中葵花蜜的巧光吸收最强远高于其他种蜂蜜，锻树蜜和构杞蜜的吸收强度相当，龙眼蜜的最弱３２６ｎｍ（均，相比于极树蜜、、；安花蜜的蛋白质最大吸收峰在值）处构杞蜜葵花蜜和龙眼蜜，仅蓝移了２ｎｍ，但麥花蜜的巧光远高于其他７种单花种，其原因可能ＰＳＩ是由于萃花蜜较髙的Ｈ，导致麥花蜜蛋白质在中性环境下更容易发焚光（Ｃ）、ｐ；洋槐蜜荆条蜜（Ｊ）和油菜蜜（Ｙ）的蛋白质最大吸收峰在３２４ｎｍ（均值）处，它们蛋白质的巧光强度存在明显差异，其中油菜蜜最强，洋槐蜜次之，荆条蜜最弱。总之，本研究所测的８种单花种蜂蜜蛋白质的最大巧光吸收峰分别在３２４ｎｍ、３２６ｎｍ和３２８ｎｍ处，主要为酪氨酸和色氨酸的巧光吸收波段，不同花源的蜂蜜之间差异不显著；麥花蜜的焚光强度远高于其他单花蜜，说明专花蜜蛋白质外部结构暴露出更多的色氨酸和酪氨酸残基，而龙眼蜜的蒙光强度最弱，说明龙眼蜜蛋白质的色氨酸和酪氨酸残基大多包埋在蛋白质的内部结构中，尽管娶花蜜和龙眼蜜蛋白质都表现出色氨酸和酪氨酸的吸收特征峰，但是其结构存在显著差异。；其他几种单花种蜂蜜的蛋白质的萊光强度存在不同程度的差异０－１４０００１．＾Ｃ：洋槐蜜－１２００００Ｄ：锻树蜜Ｇ：构杞蜜－３１０００００＼／ＩＳ：００００６００００－Ｙ：Ｓ％Ｓ４：００００瞧Ｑ，，－■，■？，Ｉ３２０３４０３６０３８０４００波长／ｎｍ图４－２不同花源的单花种蜂蜜蛋白质的焚光光谱图２９ 第四章单花种蜂蜜蛋白质的巧光光谱研究４．４本章小结本文对产自中国不同地区的８种花源的２８个单花种蜂蜜蛋白质进行了蒙光光谱分析，结果表明，产地不同的同花源蜂蜜都表现出色氨酸和酪氨酸的巧光吸收峰，但是其巧光强度之间存在显著差异，说明其蛋白质结构上存在差异；不同花源的蜂蜜的最大吸。收峰之间差异较小，但其蛋白质的巧光强度差异较大，表明其蛋白质结构上差异显著３０ 西北大学硕±学位论文第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究５．１引言氨基酸是蛋白质的基本组成单位，食品中氨基酸的种类和含量是衡量其营养质量高一。１％低的项重要指标蜂蜜中的氨基酸的含量约占蜂蜜总量的，其中脯氨酸是蜂蜜中？氨基酸的主要組成部分，其含量在５０８５％的之间。此外，蜂蜜中的氨基酸还有２０余种，如天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸和亮氨酸等。由于蜜源植物是蜂蜜中氨基酸的４￡’＾主要提供者。，因此蜂蜜中氨基酸组成的差异可用于鉴别蜂蜜来源一般将氨基酸自动分析仪专用于氨基酸的分析测定国内外，然而其价格昂贵且仅能。用于分析氨基酸，很大程度上限制了氨基酸分析技术的广泛应用相比之下，高效液相色谱法操作简单、分析时间较短且样品衍生后可直接进样，此外还具有分离度高、选择性好等优点，已广泛应用于氨基酸的分析测定本文采用反相高效液相色谱法测定了中国产的８种单花种蜂蜜中的游离氨基酸和蛋。白质氨基酸组成，并比较分析了氨基酸组成与蜂蜜来源之间的关系５．２实验材料与方法５．２．１材料与试剂８种花源的２８个单花种蜂蜜样品分别采自陕西、山西、河南、河北、江宁、四川、－宁夏、内蒙古、浙江、广西、新疆、黑龙江和湖北的不同地方，见表２１。本章所用实验试荆：浓盐酸（优级纯）、苯酶（分析纯）、氨氧化钢、１８种标准氨基、ｅｒｓ公－酸（ｗａｔｅｒｓ公司）磯酸盐缓冲溶液ｗａｔ司、棚酸盛缓冲液（Ｗａｔｅｒｓ公司）、６氨基（）－Ｎ－哲基親巧醜亚氨基甲酸酷哇嘛基（ＡＱＣ）（Ｗａｔｅｒｓ公司）、乙膳（色谱级）和屈臣氏蒸谐水。（当地超市）５．２．２仪器与设备５－。试验中所用实验仪器与设备见表１３１ 第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究－表５１仪器名称、型号和生产广家名称型号生产厂家电子分析天平ＢＳＡ－ＣＷ北京赛多利斯科学仪器有限公司高速台式离也、机ＴＧＬ１６Ｇ上海安亭科学仪器厂－超声波清洗器ＫＱ１００Ｂ昆山市超声仪器有限公司－冷冻干燥机ＦＤ１北京博医康技术公司Ｈ－台式ｐ计Ｄｅｌｔａ３２０上海梅特勒托利多仪器有限公司高效液相色谱仪Ｕ－３０００Ｔｈｅｒｍｏ巧ｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司氨基酸分析柱Ｗａｔｅｒｓ公司５．２．３实验方法５．２．３．１溶液的配制，衍生试剂：由２Ｂ瓶中吸取１ｍＬＡｃｃＱＦｌｕｏｒ（ＡＱＣ）稀释剂并放掉，Ｗ清洗微量，，ｌｍＬｃｃＦｌｕｏｒｃｃＦｈｉｏｒ衍生移液管：吸取ＡＱ稀释剂放入装有ＡＱ剂粉末的２Ａ瓶中，加盖密封，旋祸震荡１０秒钟；在加热装置上加热２Ａ瓶，直至ＡｃｃＱ刊ｕｏｒ衍生剂粉末全部溶解，加热时间不超过１０ｍｉｎ。１８种标准氨基酸混合溶液：将氨基酸标准液配制成浓度２．５ｍｍｏｌ／Ｌ的溶液，按照１／２、１／１０、１／２０、１／５０和１／１００依次稀释。流动相的配制；流动相Ａ－；醋酸盐憐酸盐缓冲液，由Ｗａｔｅｒｓ公司生产，用屈臣氏蒸饱水按１；１０稀释。流动相Ｂ；乙腊ＨＰＬＣ级。（）流动相Ｃ：屈臣氏蒸馈水。５．２．３．２１８种标准氨基酸的衍生方法与色谱分析条件ｘ（１）氨基酸的衍生方法：取２０Ｌ的１８种标准ＡＡ混合液放入６５０ｍｍ样品管ｍ中，再加入６０ｌＬ棚酸缓冲液（Ｂｕｆｅｒ）到水解样品中，祸旋混合；待混合均匀，在上述＾ｃ，样品管中加入２０叫＾ＡｃＱＦｌｕｏｒ衍生试剂，立即祸旋混合数秒钟，放置Ｉｍｉｎ。然后将°一只微量样品瓶中Ｃ的加热样品管中的反应物转移到，加盖密封，在５５装置中加热１０ｍｉｎ。’（２）色谱分析条件：色谱柱为Ｗａｔｅｒｓ公司的氨基酸分析乾柱温：巧Ｃ；ＤＡＤ３２ 西北大学硕±学位论文检测波长为２４８ｎｍ流速－：ＩｍＬ／ｍｉｎ进样量；１０咕流动相Ａ；醋酸盐；；；磯酸盐缓冲Ｂ－：乙Ｃ；屈臣氏蒸溜水。洗脱：５２。撤流动相膊；流动相梯度如表５－２Ｗａｔｅ表ｒｓＡｃｃＱＴａｇ洗脱梯度表ＨｍｅＦｌｏｗＲａｔｅ％Ａ％Ｂ％Ｃ０１．０１０００００．５１．０９９１０１８．０１．０％５０１９．０１．０９１９０巧．５１．０８３１７０扣．０１．００６０４０３ｔ０１．０１００００６５．０１．００６０４０１００．００．００６０４０５２．３．３蜂蜜样品处理Ｍｗｔｌ游离氨基酸测定的样品预处理：分别称取２ｇ蜂蜜样品，并将其溶于２５ｍＬ蒸溜水中，混匀；使用化２５＾ｍｌ的滤膜过去，收集滤液，置于４＾备用。蜂蜜粗蛋白质的制备：称取５ｇ各种单花蜜样品，并溶于５ｍｌ蒸馈水中，混匀，５０００ｒ／ｍｉｎ离也１０分钟，收集上清液；然后将所有蜂蜜样品置于截留分子量为５０００ｋＤａ的透析袋中透析３－４次，除去蜂蜜中的小分子物质透析结束后收集透析液并置于盘子；‘－－－２０Ｃ冷２４２０Ｃ。中，冻小时后真空干热将得到蛋白质粉末置于保存备用５．２．３．４蜂蜜蛋白质的水解和衍生（１）蛋白质的水解一定量样品准确称取，精确到０．０００１ｇ，将称好的样品放入水解管内，然后加６ｍｏｌ／Ｌ￣？盐酸１０１５ｍＬ，加入新蒸馈的苯齡３４滴域者加入含苯酪１％的６ｍｏｌ／Ｌ盐職，将水解管接到真空累上抽２￣ｍｎｍｎ左右３ｉ，再巧氮气除氧５ｉ，马上封好水解管，放入干燥箱°？￣内于１１２１１６Ｃ水解２０２４小化水解结束后取出水解管，冷却至室温，用１２ｍｏｌ／Ｌ－氨氧化钢调ｐＨ８１０，定容至２５ｍＬ，保存备用。（２）样品衍生３３ 第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究蜂蜜样品的衍生方法与色谱分析条件同氨基酸标准液。５．３结果与分析５．３．１方法学考察５．３丄１线性范围及检测限分别吸取５．２．３．１节中配制的ＡＡ标准溶液，按照５．２．３．２的方法分别进样检测。检－－测结果如图５１和表５３所示（其中Ｙ：平均峰面积，义ＡＡ的保留时间（ｍｉｎ）），各？种氨基酸的检出限均在０．１２２０．３２４阳ｎｏｌ化之间。’紛巧．：巧：Ｖ：＾．．化§薛ｉ＇＇墨！＇＇約授《幻１，窜，＇＊，；｜＊１Ｉ；ＩＩＩＩＩ＇■ＴＨ／＼／４＾—＊嘴。ｒ＞）１ｆｃ巧＆巧投巧比《幻巧巧巧巧巧东巧＝＝丝氨酸＝＝＝色谱峰；１天冬氨酸（Ａｓｐ）；２（Ｓｅｒ）；３谷氨酸（Ｇｌｕ）；４甘氯酸（Ｇｌｙ）；５组氨酸＝＊＝＝＝（Ｈ）ｉａ）＝ｉｓ；６精氨酸（Ａｇ）；７苏氨酸（Ｔｈｒ）；８丙氨酸（Ａｌ；９脯氨酸（Ｐｒｏ）；１０半脫氨酸＝＝＝＝＝（Ｃｙｓ）；１１酪氨酸（Ｔｙｒ）；１２鄉氨酸（Ｖａｌ）；１３蛋氨酸（Ｍｅｔ）；１４赖氨酸（Ｌｙｓ）；１５异＝＝＝亮氨酸ｉ）１６）１７Ｔｉ）１８ｈｅ）（ｌｅ；亮氯酸（Ｌｅｕ；色氨酸（ｐ；苯丙氨酸（Ｐ图５－１１８种标准ＡＡ的色谱图３４ 西北乂学硕±学化论文表５－３巧种标准ＡＡ线性回归方稽序号ＡＡ保留时间／ｍｉｎ回归方程回巧系数＝－１Ａｓｐ１４．５８Ｙ１５．５８７Ｘ０．０２Ｉ１０．９９９１＝－２Ｓｅｒ１６．０１４Ｙ２３．０３２Ｘ０．２７９２０．９９９２山＝３Ｇ１６．９１Ｙ１５．４１８Ｘ＋０．０７７７０．９９８９＝４Ｇ－ｌ１８．２５８Ｙ２６．０４４Ｘ０．１２８８０ｙ．９９９２＝－５Ｈｉｓ１８．７８２Ｙ２２．２１２Ｘ０．２９４７０．９９９５６Ａ２＝－ｒ１．２０８Ｙ２２．４５３Ｘ０．３７５１０９９９３ｇ，＝－７Ｔｈｒ２１．４０４Ｙ２４．２８０Ｘ０Ｍ７３０．９９９２８Ａ－ｌａＴｌｆｌ９Ｙ＾ｌ．８１２Ｘ０．（ｎ７９０．９９９１＝－９Ｐｒｏ２３？始紋．１６４Ｙ２１０．００５６０．９９９１Ｙ＝２０－１０Ｃｓ２５．５３１Ｘ８３９ｙ．９１８１０．９９８１＝１１Ｔ２６９４８Ｙ２１－ｒ．７２２Ｘ０．１６１８０９９９５ｙ．．＝－１２Ｖａｌ２７．８６５Ｙ２３．４８４Ｘ０Ｊ７６７０．９９９１＝－１３Ｍｅｔ２８．５７Ｙ２８Ｓ３５Ｘ０Ｊ６６２０９９．９４４＝０７１Ｌｙｓ３０．Ｙ２６．４７４Ｘ懒５２５０．９９％＝－１５ｌｉｅ３１．７４１Ｙ４４．６２７Ｘ０，７５５６０．９９９１６＝１Ｌｅｕ３１．９２５Ｙ６２．巧７Ｘ＾２８４００．９９９５＝－１７Ｔ３２．１５８Ｙ３２．０２８Ｘａ〇９１０１ｉｐ０．９９９２＝－１８Ｐｈｅ３．３０２Ｙ３７．９４１Ｘ０．２７３００．９９９３５．３．１．２稳定性实验一取同样品，分别在不同时间（Ｏｈ、２ｈ、４ｈ、６ｈ、８ｈ、１０ｈ）检测，分析得到的色谱峰的面积和相对保留肿间．８＾．５％，结果显示各元素的ＲＳＤ在１之间，表明供试样品溶液较稳定。５．３丄３重现性实验一按照５．２．３．２的方法分别平行测定同样品５次，分析得到的色谱峰的面积和相对保留时间．５＾．７％，结果显示其民ＳＤ在１之间，表明此方法具有很好的重现性。５．３．２单花种蜂蜜中游离氨基酸的组成－８种花源的２８个单花种蜂蜜样品的游离氨基酸组成测定结果显示（表５４），实验所测单花种蜂蜜中的游离氨基酸数量多且种类齐全，有的蜂蜜中含１８种氨基酸；蜂蜜？ｍ么间中游离氨基酸的总含量在５．２８３１７．６３４／，平均含量为１０．５％ｍ／ｇｇｇｇ；所有样品３５ 第五章单花种蜂蜜的氨基酸纪成研究－中脯氨酸的含量最髙．６２，约占游离氨基酸总量的４１６７．９１％，平均占４９．１４％；除脯氨、酸外，丙氨酸、丝氨酸色氨酸、甘氨酸、酪氨酸、精氨酸Ｗ及苏氨酸在蜂蜜中也普遍、存在且含量较为丰富，而组氨酸半脫氨酸、蛋氨酸、赖氨酸和亮氨酸的含量较低，并一些蜂蜜中不含且。５．３．２．１产地不同的同花源蜂蜜中游离氨基酸组成的比较分析由表５－４可知，产地不同的同花源蜂蜜在游离氨基酸姐成上存在显著差异，说明产地差异对蜂蜜游离氨基酸的组成影响较大。不同产地的麥花蜜中游离氨基酸组成差异最大，８个产地的游离氨基酸的种类在？１０１７种之间，其中样品７的游离氨基酸种类最多，含１７种，其次是样品Ｚ５、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ６、Ｚ１和Ｚ８（分别为１６、１５、１５、１５、１３和１２种），样品Ｚ２含有的游离氨基酸最少，仅有１０种。对８个产地的氨基酸种类分析发现，丝氨酸、甘氨酸、精氨酸、脯氨酸和酪氨酸为麥花蜜共有氨基酸，而所有麥花蜜样品中均不含组氨酸；此外，样晶Ｚ１不含额氨酸和赖氨酸，样品Ｚ２不含异亮氨酸和苯丙氨酸，样品Ｚ８不含丙氨酸，其５－４他妾花蜜样品所含游离氨基酸种类见表，Ｗ上结果说明麥花蜜的游离氨基酸的种类。８受产地差异的影响较大娶花蜜中游离氨基酸的平均含量约为．８３８ｍｇ／ｇ，产地不同其含量略有差异，样品Ｚ３中游离氨基酸的含量最高，为１３．４９８ｍｇ／ｇ，其次是样品Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６、Ｚ８、Ｚ１和巧（分别为９３２１ｍｇ／ｇ、８．７６８ｍｇ／ｇ、８．６１５ｍｇ／ｇ、８．巧６ｍｇ／ｇ、８．０４４ｍｇ／ｇ和７．８２７ｍｇ／ｇ），样品Ｚ２的含量最低，约为６．２９４ｍｇ／ｇ；其中样品Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５和Ｚ６中的游离氨基酸不仅种类多，而且含量也高，而样品Ｚ２的游离氨基酸种类最少且含量最低Ｚ７的游离氨基酸种类最多，但其含量仅高于样品Ｚ２。上结果说明，产，样品地不同的安花蜜中游离氨基酸的种类差异显著，但其含量差异较小。５－４￣荆条蜜的游离氨基酸组成如表所示，其氨基酸种类在１５１６种之间，其中样品Ｊ１和Ｊ２當１５种，样品Ｊ３含１６种；对３产地游离氨基酸种类的分析发现，蛋氨酸在３产地荆条蜜中均不含，样品Ｊ３含亮氨酸且不含组氨酸，仅样品Ｊ２不含半腕氨酸。荆条蜜游离氨基酸平均含量约为１０．４１４ｍｇ／ｇ，样品２的含量最高，为１１．１９３ｍｇ／ｇ，略高于样品Ｊ３（１０．９３ｍｇ／），样品Ｊ１的含量最低，为９．０９７ｍ／；从含量上看，产地不同的ｇｇｇ。荆条蜜之间差异较小，受产地差异影巧不显著Ｗ上结果说明，产地不同的荆条蜜中的游离氨基酸在种类和含量上差异不显著。５－４可知由表，洋槐蜜中的游离氨基酸组成最丰富，其中样品Ｃ２含有的氨基酸达１８Ｃ１）Ｃ１种，样品３仅不含种氨基酸（蛋氨酸，样品中的氨基酸最少，仅为１５种，３６ 西北大学硕±学位论文不含半脫氨酸、异亮氨酸和亮氨酸。３个产地的洋槐蜜中的游离氨基酸平均含量为１０．４ｍ／Ｃ２的含量最高，１１．４４３ｍ／Ｃ１（１０．１３１ｍ／）Ｃ３ｇｇ，样品为ｇｇ，略高于样品ｇｇ，样品的含量最低，为９．６２８ｍｇ／ｇ；从含量上看，产地不同的荆条蜜之间差异较小，受产地差异影响不显著。总之，产地不同的洋槐蜜中的游离氨基酸在种类和含量上差异不显著。５＾４所示极树蜜中游离氨基酸的组成如表，样品Ｄ１样品Ｄ２中游离氨基酸种类分别为一二１６种和１４种，存在定差异；除了者均不含组氨酸外，样品Ｄ１还不含异亮氨酸，样品Ｄ２不含苏氨酸、半脫氨酸和蛋氨酸。极树蜜中的游离氨基酸平均含量为６．０７２ｍ／，ｇｇ６６ｍ／）８３ｍ／）。样品１５（．８ｇｇ的含量高于样品Ｄ２（５．２ｇｇＷ上结果说明，极树蜜的游离氨基酸的种类和含量因产地不同存在一定程度差异。对龙眼蜜的游离氨基酸的组成分析发现－）３（表５４，其游离氨基酸的组成丰富，个样品均含有１７种氨基酸，样品Ｌ１、Ｌ２和Ｌ３分别不含组氨酸、蛋氨酸和半化氨酸且这三种氨基酸在３个样品中的含量较低，送说明龙眼蜜的氨基酸种类受产地差异影响较小。样品ＬＫＬ２和Ｌ３的游离氨基酸的平均含量为１３．１４５ｍｇ／ｇ，其含量分雜为１３．３７１ｍｇ／ｇ、１３．２６６ｍｇ／ｇ和１２．７％ｍｇ／ｇ，Ｈ者之间差异不显著。总之，龙眼蜜的氨基酸组成受产地差异影响较小。－由表５４可Ｗ看出，３个构杞蜜样品（Ｇ１、Ｇ２和Ｇ３）中的游离氨基酸种类分别为１５、１６和１７种，其中３个样品均不含有赖氨酸，此外样品Ｇ２不含半脱気酸，样品Ｇ１不含组氨酸和蛋氨酸。样品Ｇ１、Ｇ２和说的游离氨基酸的平均含量为１１．２２２ｍｇ／ｇ，其含量分别为１０．８８２ｍｇ／ｇ、１１．３５８ｍｇ／ｇ和ｎ．４２７ｍｇ／ｇ，Ｈ者之间差异不显著。上结果说明构杞蜜受产地差异影响小。葵花蜜中游离氨基酸的组成如表５￣４所示，样厢Ｋ１、Ｋ２和Ｋ３中游离氨基酸种类分均为１７种，分别不含半脫氨酸、组氨酸和蛋氨酸。葵花蜜中的游离氨基酸平均含量为１７．１４８ｍｇ／ｇ，样品Ｋ１的含量为１７．６３４ｍｇ／ｇ，略高于样品Ｋ３（１７．２６３ｍｇ／ｇ），样品Ｋ２的含量最低，为１６．５４７ｍｇ／ｇ，Ｈ者之间的差异不显著。总之，葵花蜜的氨基酸组成受产地差异影响较小。－对油菜蜜的游离氨基酸的组成分析发现（表５４），样品Ｙ１、Ｙ２和Ｙ３中游离氨基酸种类分别为１５、１６和１５种，其中３个样品均不含有亮氨酸，仅样品Ｙ３含天冬氨酸，但其不含半腕氨酸和蛋氨酸，此外样品Ｙ１不含异亮氨酸。不同产地的油菜蜜中的游离氨基酸差异较大，其中样品Ｙ２的含量最高．１０１ｍ／Ｙ１９．４５６ｍ／，为１０ｇｇ，样品次之，为ｇｇ，样品Ｙ３最低，约为７．２６２ｍｇ／ｇ。Ｗ上结果说明，产地不同的油菜蜜在氨基酸种类上差３７ 第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究异较小，但其氨基酸含量差异显著。３８ 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第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究５．３．２．２不同花源蜂蜜中游离氨基酸组成的比较分析５－５不同花源的蜂蜜样品中的游离氨基酸组成如表所示，在洋槐蜜、龙眼蜜和葵花蜜中均检测到１８种氨基酸，其他５种蜂蜜也仅有１种氨基酸未检测到，其中孝花蜜和极树蜜仅有组氨酸未检测出，荆条蜜、构杞蜜和油菜蜜分别未检测到蛋氨酸、赖氨酸和。亮氨酸，迭说明植物源不同，蜂蜜中的游离氨基酸差异不显著虽然蜂蜜的氨基酸种类差异不显著，但是其含量之间存在较大差异。８种蜂蜜中的６￣游离氨基酸总含量在．０７２１７．１４８／之间ｍｇｇ，其中葵花蜜的氨基酸总含量最高，达１７．１４８ｍｇ／ｇ，远高于其他蜂蜜，而锻树蜜的氨基酸总含量最低，仅为６．０７２ｍｇ／ｇ，其他６种蜂蜜的氨基酸总含量高低依次为龙眼蜜、构杞蜜、荆条蜜、洋槐蜜、油菜蜜和麥花蜜，其氨違酸分别为１３．１４５ｍｇ／ｇ、１１．２２２ｍｇ／ｇ、１０．４１４ｍｇ／ｇ、１０．４ｍｇ／ｇ、８．９４ｍｇ／ｇ和８．８３８ｍｇ／ｇ。除了游离氨基酸总含量上的差异外，不同植物来源的蜂蜜在某些氨基酸含量上也存在明显差异，如娶花蜜和极树蜜不含组氨酸，荆条蜜不含蛋氨酸，构杞蜜不含赖氨酸，油菜蜜不含亮氨酸；此外，油菜蜜的天冬氨酸和色氨酸的含量非常低，远低于其他蜂蜜。Ｗ上结果表明，不同花源蜂蜜中的游离氨基酸在种类上差异较小，但其含量差异显著，这些差异可作为蜂蜜植物来源鉴别的参考依据。４２ 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第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究５．３．３单花种蜂蜜蛋白质的氨基酸组成一由５．３．２节可知，８种花源的２８个蜂蜜中的游离氨基酸组成存在定差异，其中某些氨基酸可作为蜂蜜特征氨基酸一，可作为蜂蜜来源鉴别的参考依据。为了进步研究蜂。蜜蛋白质的差异，本文对２８个蜂蜜样品的蛋白质氨基酸组成进行了测定８８５－６对种花源的２个蜂蜜样品的蛋白质氨基酸组成测定结果分析发现（表），所测蜂蜜蛋白质的氨基酸种类差异不显著一，然而些蜂蜜不含色氨酸，其原因可能是由于蛋白质酸解导致色氨酸大量破坏，使某些蜂蜜蛋白质中色氨酸未被检测出。尽管蜂蜜蛋白质的氨基酸种类差异不显著，但是其含量因产地不同存在明显差异，说明蜂蜜蛋白质在结构上存在一定差异。５．３．３．１不同产地的同花源蜂蜜蛋白质氨基酸组成的比较分析对产地不同的同种蜂蜜氨基酸组成比较分析发现，夢花蜜和锻树蜜的蛋白质氨基酸组成差异最显著一，而其他６种蜂蜜蛋白质的氨基酸组成仅部分氨基酸在含量上存在差异。麥花蜜蛋白质的天冬氨酸、谷氨酸、半脫氨酸和赖氨酸的含量因产地不同存在显著差异。其中样品Ｚ５的天冬氨基酸和谷氨酸含量高于其他样品，但其半脫氨酸含量最低；样品Ｚ４的赖氨酸的含量最高，但其谷氨酸的含量最低３的半，；样品Ｚ脫氨酸含量最高而其赖氨酸含量最低；其他样品的蛋白质氨基酸含量差异不显著。［＾１上结果表明，样品一Ｚ３、Ｚ４和Ｚ５在蛋白质氨基酸组成上存在定差异。锻树蜜蛋白质的氨基酸组成差异最显著，样品Ｄ１和样品Ｄ２在丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸和蛋氨酸含量存在差异，这说明锻树蜜蛋白质的氨基酸组成存在显著差异。其他６种蜂蜜（荆条蜜、洋槐蜜、龙眼蜜、构杞蜜、葵花蜜和油菜蜜）蛋白质氨基酸主要表现为谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、半脫氨酸、蛋氨酸、赖氨酸Ｗ及苯丙氨酸７种氨基酸含量的差异，其中谷氨酸含量在荆条蜜、龙眼蜜、葵花蜜和油菜蜜中差异显著，而半脫氨酸（洋槐蜜和龙眼蜜）、蛋氨酸（构杞蜜和葵花蜜）、赖氨酸）和苯丙氨酸（洋槐蜜和油菜蜜）分别（荆条蜜和油菜蜜在某２种蜂蜜中差异显著；组氨酸和脯氨酸仅体现在葵花蜜和构杞蜜中。４４ 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第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究５．３．３．２不同花源的蜂蜜蛋白质氨基酸组成的比较分析对不同花源的蜂蜜蛋白质氨基酸组成分析发现，蜂蜜蛋白质的氨基酸组分受植物来－源的影响小，但各种氨基酸的含量存在显著差异（表５７）。其中谷氨酸和色氨酸含量受植物来源影响最大，锻树蜜蛋白质中的谷氨酸含量最高（占蛋白质总量的２７．３４％），远高于其他蜂蜜；此外，色氨酸的含量差异显著，可能是由于蛋白质酸解过程中可能对色氨酸造成了不同程度的破坏、丝氨酸、丙氨酸、，导致色氨酸含量的差异显著；天冬氨酸脯氨酸化及半脱氨酸的含量受植物来源的影响较大，其中般树蜜蛋白质中的天冬氨酸、脯氨酸和半脫氨酸含量最低，葵花蜜蛋白质中的丝氨酸和丙氨酸含量最低，丙氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和脯氨酸分别在巧花蜜、洋槐蜜、龙眼蜜和构杞蜜蛋白质中含量最高；甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸随植物来源不同差异较小。此外，不同花源蜂蜜蛋白质中的酪氨酸和缴氨酸含量相当，说。明这两种氨基酸含量不受蜂蜜植物来源影响Ｗ上结果说明，不同花源的蜂蜜蛋白质氨基酸的组分差异不显著，但其含量之间存在较大差异。４８ 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第五章单花种蜂蜜的氨基酸组成研究５．４本章小结本文所测８种单花种蜂蜜中的游离氨基酸数量多且种类齐全，有的样品中含有１８￣５１７．６３４ｍ／种游离氨基酸．２８３之间，平均含量为；蜂蜜中游离氨基酸的总含量在ｇｇ－１０．５巧ｍ／４１．６２６７．９１％；所有样品中脯氨酸的含量最高，ｇｇ，约占游离氨基酸总量的平均为４９．１４％；除脯氨酸外，丙氨酸、丝氨酸、色氨酸、甘氨酸、酪氨酸、精氨酸Ｗ及苏氨酸在蜂蜜中也普遍存在且含量较为丰富，而组氨酸、半腕氨酸、蛋氨酸、赖氨酸一些蜂蜜中不含和亮氨酸的含量较低，甚至。此外，不同产地的同花源蜂蜜中游离氨基酸组成存在较大差异，表明蜂蜜的游离氨基酸组成受产地差异的影响大；不同花源的蜂蜜中游离氨基酸的种类差异不显著，但是其含量之间存在较大差异。另外，本文对８种花源的２８个单花种蜂蜜蛋白质的氨基酸组成进行了测定。结果表明，蜂蜜蛋白质氨基酸的组分差异不显著，但其含量之间存在较大差异。５０ 西北大学硕±学位论文总结１．结论本课题Ｗ中国产的８种不同花源的单花种蜂蜜为研究对象，研究了不同花源蜂蜜蛋白质的含量－、ＳＤＳＰＡＧＥ图谱和巧光光谱Ｗ及蜂蜜中游离氨基酸和蛋白质氨基酸组成，得到下结论：３９８±￣（１）本文所测蜂蜜的蛋白质含量在．３１１７．８９１８３９．１０±ｌｌ．：１９ｍｇ／ｋｇ之间，平均值为％１．６０ｍｇ／ｋｇ左右，其中龙眼蜜的蛋白质含量最高，为１６５０．９１ｍｇ／ｋｇ，洋槐蜜的蛋白质含量最低．／ｋ，为５４３６５ｍ地区的蜜源植物沁蜜情况、气候和王壤等ｇｇ；由于不同的不同和不同蜜源植物的花粉或花蜜所含蛋白质不同，导致蜂蜜的蛋白质含量不仅随着地域差异发生变化，而且还受蜜源植物差异的影响。？￣（２）实验所测蜂蜜的蛋白质分子质量主要集中在１４．４９７ｋＤａ之间，其中条带７４）３￣ａ是８１＾和５８ｋＤ种单花种蜂蜜共有的条带。同种类蜂蜜的蛋白质条带数基本相同，并且各蛋白质条带的分子质量也基本相同；尽管不同产地的蜂蜜蛋白质含量差异较大，但是其蛋白质组成差异不显著。不同花源蜂蜜的蛋白质条带之间存在较大差异，如夢花￣蜜在１７ｋＤａ处呈现特有谱带，该蛋白质可作为麥花蜜区别于其他蜂蜜的特征蛋白质。（３）本研究所测的８种蜂蜜蛋白质的最大英光吸收峰分别在３２４ｎｍ、３２６ｎｍ和３２８ｎｍ化主要为酪氨酸和色氨酸的巧光吸收波段，不同花源的蜂蜜之间差异不显著，但其炎光强度之间存在显著差异，其中麥花蜜的焚光强度远高于其他单花种蜂蜜，表明巧花蜜蛋白质的外部结构暴露出更多的色氨酸和酪氨酸残基，而龙眼蜜的茨光强度最弱，表明龙眼蜜蛋白质的色氨酸和酪氨酸残基大多包埋在蛋白质的内部结构中，尽管娶花蜜和龙眼蜜蛋白质都表现出色氨酸和酪氨酸的吸收特征峰，但它们的结构存在显著差异。（４）所测蜂蜜样品中的游离氨基酸数量多且种类齐全中１８种游离氨，有的样品含￣６３４ｍ基酸；蜂蜜中游离氨基酸的总含量在５．２８３１７．／之间，平均含量为１０．５９５ｍ／ｇｇｇｇ；￣所有样品中脯氨酸的含量最高．６２６７．９１％４９．１４％，约占游离氨基酸总量的４１，平均为；、丝、除脯氨酸外，丙氨酸氨酸色氨酸、甘氨酸、酪氨酸、精氨酸Ｗ及苏氨酸在蜂蜜中也普遍存在且含量较为丰富，而组氨酸、半腕氨酸、蛋氨酸、赖氨酸和亮賓酸的含量较一些蜂蜜中不含低，甚至。此外，不同产地的同花源蜂蜜中游离氨基酸组成存在较大差５１ ＾异，表明蜂蜜的游离氨基酸组成受产地差异的影响大；不同花源的蜂蜜中游离氨基酸的种类差异不显著，但是其含量之间存在较大差异。另外，对蜂蜜蛋白质的氨基酸组成分。析发现，蜂蜜蛋白质氨基酸的组分差异不显著，但其含量之间存在较大差异２．工作展望－本研究虽然对不同花源的单花种蜂蜜的蛋白质含量、蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ、蛋白质焚光光谱Ｗ及蜂蜜中游离氨基酸和蛋白质氨基酸的组分进行了研究，但是由于时间和条件一的限制。，仍有许多内容需要进步深入系统的研究（１－）本研究对蜂蜜蛋白质的ＳＤＳＰＡＧＥ分析发现，有些蜂蜜存在某些自己特有的蛋白质，对送些恃征蛋白质还需要进行分离、纯化和鉴定。（２）本研究只针对产地和花源不同的单花种蜂蜜的蛋白质和氨基酸进行了研究，但是蜂蜜蛋白质还受到气候条件和±壤等因素的影响，还需要对该些影响因素进行研究。５２ 西北大学硕±学位论文参考文献［１］徐景耀．蜂蜜［Ｍ］．北京：北京农业科技出版社，１９９５［２］董捷．蜂蜜蜂王浆加工技术［Ｍ］．北京：金盾出版社，２００４３ＧＢ１４９６３—２０１１２０［］食品安全国家标准蜂蜜脚北京中华人民共和国卫生部１１，，［４ＡｎｋｌａｍＥ．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆ化ｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓ１：〇ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ化ｅｅｏｒａｈｉｃａｌａｎｄｂｏｔａｎｉｃａｌ］ｇｇｐｏｒｉｉｎｆ－ｏｈｏｎｅＪｏｏｄＣｈｅｍｇｙ．Ｆｉｓｔｒｙ１９９８６３４：５４９５６２［］，，（）口］ＫｕｅｃｕｅｋＭ．，ＫｏｌａｙｌｉＫａｒａｏｇｌｕＳ．，ｅｔａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｈｏｎｅｙｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｙｐｅｓｆｒｏｍＡｎａｔｏｌｉａＪ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００７［］ｙ，，－１００２：５２６５３４（）６ＴｅｗａｒｉＪ．ＩｒａｄａａｒａＪ．ｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｍｕｌｔｉｌｅｆｌｏｒａｌｈｏｎｅｓｕｓｉｎ［］，ｙｊＱｐｙｇｆｏｕｒｉｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｆｒａｒｅｄｍｉｃｒｏａｔｅ打ｕａｔｅｄｔｏｔａｌ巧ｆｌｅｃｔａｎｃｅｓｐｅｒｔｒｏｓｃｏｐｙ？Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ内Ａｒｉｃｕ－ｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２００４５２１１：３２３７３２４３ｇ，，（），［７］ＤｉＧｉｒｏｌａｍｏＦ．，ＤＡｍａｔｏＡ．，ＲｉｇｈｅｔｉＰ．ＧＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔｈｅ幻ｏｒａｌｏｒｉｇｉｎｏｆｈｏｎｅｙｖｉａｉｌｓｒｎｍ＾ｙ２－ｐｒｏｔｅｏｍｃ１：ｏｏ机．ＪｏｕａｌｏｆＰｒｏｔｅｏｉｃ２０１２：％８８３６９３，，）［８］ＫｅｖｉｎＷ．Ｓｗａｌｌｏｗ．，ＮｉｃｈｏｌａｓＨ．Ｌｏｗ．Ａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓｉｎｈ－ｈｏｎｅｕｓｉｎｉｇｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈＪ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄｙｇｐｇｐｙ［］ｇｏｏｄＣｈｅｍ－Ｆｉｓｔｒ１９９０３８９：１８２８１８３２ｙ，，（）ｒｅａＣｌｅｎｔｃａｏｎａｎｄ９Ｃｏｄｌｉ．ＲＭｉｌｉｔａｏＪ．Ｓ．Ｃｌ细Ｍ．巴ｅｔａｌ．Ｈｏｎｅｈａｒａｃｔｅｒｉｚｔｉ［］，，，ｙａｄｕ－ｌｔｅｒａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏ打ｂｙｐａｔｅｒｎｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎａｐｐｌｉｅｄｏｎＨＰＡＥＣＰＡＤｐｒｏ巧ｌｅｓ．１．ＨｏｎｅｙｆｌｏｒａｌｓｅｃｉｅｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎＪ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ，２００３ｐ［］ｇｙ，５－１ｌｌ：３２３４３２４２（）＂０ＣｏｄｅｘＡｌｉｍｅｎｔＣｏｍｍｉｓｓｉｏ打．Ｒｅｖｉｓｅｄｃｏｄｅｘｓｔａｎｄａｒｄｆｏｒｈｏｎｅ．Ｃｏｄｅｘｓｔａｎｄａｒｄ２００１］ｙ，，１２－１９８ＬＲｏｍｅ：ＦＡＯａｎｄＷＨＯ．－－Ａ１１ＣａｖｉａＭ．Ｍ．ＦｅｍａｎｄｅｚＭｕｉｎｏＭ．Ａ．ＧｏｍｅｚｌｏｎｓｏＥ．ｅｔａｌ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆ［］，，，ｆｒｕｃｔｏｓｅｍｉｄｌｕｃｏｓｅｉｎｈｏｎｅｏｖｅｒｏｎｅｅａｒ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｎｄｕｃｅｄｒａｎｕｌａｔｉｏｎＪ．Ｆｏｏｄｇｙｙｇ［］Ｃｈｅｍ－ｉｓｔｒ２００２７８２：１５７１６１ｙ，，（）ＯｊｅｄａｄｅＲｏｄｒｉｇｕｅｚＱ，ＳｕｌｂａｒａｎｄｅＦｅｒｒｅｒＢ．，ＦｅｒｒｅｒＡ．，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙｒｏｄｕｃｅｄ－ｉｎＶｅｎｅｚｕｅｌａ闲－ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００４８４４：４９９５０２ｐｙ，，（）［巧曹带陈：Ｅ军．蜂产品深加工技术［Ｍ］．北京：中国捏工业出版化２０１１５３ 参考文献１４ＪｕｓｚｃｚａｋＬ．ＳｏｃｈａＲ．Ｒｏ＾ｎｏｗｓｋｉＪ．ｅｔａｌ．Ｐｈｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｏｅｒｔｉｅｓａｎｄｕａｌｉｔ［］，，，ｙｐｐｑｙ－ａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｈｅｒｂｈｏｎｅｓＪ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００９１１３２：５３８５４２ｐｙ［］ｙ，，（）ｅａＪａｍｏ＊ｗｅｅｎｗａＯ。５Ｃｈｉｒｉｆ．ＺｉａＭＣ．ＭｏｔｔｏＡ．Ｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｔｅｒａｃｔｉｖｉｔａｎｄ／ｉ］，，ｙｍｏｉｓｔｕｒｅｉｎｈｏｎｅｙ：ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌａｓｐｅｃｔｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏＡｒｇｅｎｔｉｎｅｈｏｎｅｙｓＪ．Ｊｏｕｒｎａｌ［］－ｏｆＦｏｏｄＥｎｉｎｅｅｒｉｎ２００６７２３２８７２９２ｇｇ，，（），［１６］郭夏丽罗丽萍冷婷婷等？７种不同蜜源蜂蜜的化学组成及抗氧化性Ｊ．天然产，，，［］２０－物研究与开发１０４：６６５６７０，，ｒｅｚ－１７ＡｌｖａｓｕａｒｅｚＪ．Ｍ．ＴｕｌｉａｎｉＳ．ＤｉａｚＤｅｔａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｃａａｃｉｔ［］，ｐ，？ｐｙｏｆｓｅｖｅｒａｌｍｏｎｏｆｌｏｒａｌＣｕｂａｎｈｏｎｅｙｓａｎｄ化ｅｉｒｃｏｒｒｅｌａｔｉｏ打ｗｉｔｈｃｏｌｏｒ，ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔｎｄｈｅｒｍｉｃａｏｏｄａｎｄｏｌｏ－ａｏｔｃｈｅｌｃｏｍｏｕｎｄｓ？ＦＣｈｅｍｉｃａｌＴｏｘｉｃ２０１０４８：２４９０２４９９ｐ阴ｇｙ，，［１８］ＫａＳｋｏｎｉｅｎ台Ｖ．ＶｅｎｓｋｕｔｏｎｉｓＰ？氏？Ｆｌｏｒａｌｍａｒｋｅｒｓｉｎｈｏｎｅｏｆｖａｒｉｏｕｓｂｏｔａｎｉｃａｌａｎｄ，ｙｅｏｇｒａｐｈｉｃｏｒｉｇｉｎｓ：ａｒｅｖｉｅｗＪ．ＣｏｍｒｅｈｅｎｓｉｖｅＲｅｖｉｅｗｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＦｏｏｄｇ［］ｐＳａｆｅ－ｔ２０１０９６：６２０６３４ｙ，，（）１９ＰｙｒｚｎｓｋａＫ．ＢｉｅｓａａＭ．Ａｎａｌｓｉｓｏｆｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄｓａｎｄ打ａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｈｏｎｅＪ．ＴｒＡＣ［］ｙ，ｇｙｐｙ［］Ｔｒｅｎｄｓ－ｉｎＡｎａｌｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒ２００９２８７：８９３９０２ｙｙ，，（）－Ｍｓａｅｒｅｅａｏｍｏｕｎｄｓａｎｄｃｃｃｄ口０ＪａｓｉｃｋａｉｉｋＬＰｏｌｉｗｏｄａＡ．ＤＡＭ．ｔｌ．ＰｈｅｎｏｌｉｃＣＡｂｓｉｓｉＡｉ］，，，ｐａｓＰｏｔｅｎｔｉａｌＭａｒｋｅｒｓｆｂｒｔｈｅＦｌｏｒａｌＯｒｉｉｎｏｆＴｗｏＰｏｌｉ池ＵｎｉｆｌｏｒａｌＨｏｎｓＪ．Ｆｏｏｄｇ巧［］Ｃｈｅｍ－ｉｓｔｒ２０１２１３１４：１１４９１１５６ｙ，，（）［２ＨａＷｂＨ．Ｍ．ＡｌＭｅｂａｌｉＦ．Ｔ．ＫａｍａｌＨ．ｅｔａｌ．ＰｈｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＵ，ｑ，，ｙｒｏｅｅｓ－ｐｐｒｔｉｏｆｈｏ打ｅｙｓｆｒｏｍａｒｉｄｒｅｇｉｏｎｓＪ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２０１４１５３：３５４３［］ｙ，，２２ＨｅｒｍｏｓｉｎＬＣｈｉｃｏｎ艮．Ｍ．ＤｏｌｏｒｅｓＣａｂｅｚｕｄｏＭ．Ｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｏｓｉｔｉｏｎａｎｄ［］，，ｐｂｏａｃａｏｏｄ－ｔｎｉｌｏｒｉｉｎｏｆｈｏｎｅ．ＦＣｈｅｍｉｓｔｒ２００３８３：２６３２６８ｇｙ机ｙ，，口）［２３］ＨｕｉｄｏｂｒｏＪ．Ｒ，ＲｅａＭ．Ｅ．，ＢｒａｎｑｕｉｕｈｏｄｅＡｎｄｒａｄｅＲＣ，，ｅｔａｌ．Ｅｎｚｙｍｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎ－ｇｌｙｃｅｒｏｌｉｈｏｎ巧…？ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ１９９３４１４：５５７５巧ｇｙ，，（）［２叫章彬吿程春生，胡福良．蜂蜜中几种常见酶的研究进展化蜜蜂杂志，２００７，２８（巧：－１１１３ＶａｎｈＲＥｍｍｅｒｔｚＳａｖａ－ａｎｅｎＬ．Ａ，ｅＱＰ．ｅｔａｌ．ＭｉｎｅｒａｌａｎａｌｓｉｓｏｆｍｏｎｏｆｌｏｒａｌＮｅｗ，口引，ｇ，ｙ－Ｚｅａｌａｎｄｈｏｎ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２０１１１２８ｌ：２３６２４０巧阴ｙ，，（）ｅｒｒａｂ－？ｅｃａｍａｌｅｓｅｚＭｒｅｅａ．ｏｎｒｉｂｕｉｏｎｕｄｏｆ６ＴＡ民Ａ．ＲＧｏｎｚａｌｉｔＭ．Ｌ．ｔｌＣｔｔ化ｔｈｅｓｔ口］，，，ｙａｖｏｃａｄｏｈｏｎｅｓｂｔｈｅｉｒｍｉｎｅｒａｌｃｏｎｔｅｎｔｓｕｓｉｎｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｃｏｕｌｅｄｌａｓｍａｏｔｉｃａｌｙｙｇｙｐｐｐ５４ 西北大学硕±学位论文ｍ－ｅｉｓｓｉｏｎｓｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２００５９２２３０５３０９ｐ］，（），，口７ＣｈａｋｉｒＡ．ＲｏｍａｎｅＡ．ＳａｒｂａｉａｎｎｉＮ．ｅｔａｌ．Ｍａｏｒａｎｄｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｔｅｓ］，，ｇ，ｊｙｐｏｆｍｏｒｏｃｃａｎｈｏｎｅｙｓ［Ｊ］．ＡｕｓｔｒａＨａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｓｉｃ＆ＡｐｐｌｉｅｄＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０＂，５４－：２２３２３１（）口別ＰｉｓａｎｉＰｒｏｔａｎｏＱ，ＲｉｃｃｏｂｏｎｏＦ．Ｍｉｎｏｒａｎｄ仕ａｃｅｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｈｏｎｅｙｔｙｐ的ｒｏｄｕｃｅｄｍ－Ｋ６０ｐ虹ＳｉｅｎａＣｏｕｎｔｙＩｔａｌＪ．ＦｏｏｄＣｈｅｉｓｔｒ２００８１０７４：１５５３（ｙ）［］ｙ，，（）２９巧玉奎赵静－ＭＳ测定不同种类蜂蜜中的微量元素和重金属［］陈兰珍，等．应用ＩＣＰ，，－．分析科学学报０１１２７４：５３０５３２机，２，（）口０］ＹｏｕＪｉａｎｇＹ，Ｓｉｎｇａｎｕｓｏｎｇ民．，巧ａｌ．ＰｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄｓａｎｄａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎＡｕｓｔｒａｌｉａｎｅｕｃａｌｔｕｓｈｏｎｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒｆｌｏｒａｌａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ口．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００４ｙｐｙｐ］ｙ，，８６２－：１６９１７７（）－３王国庆．ＭＳ分［Ｕ孙雨安，等基于顶空固相微萃取ＧＣ，孙敏青，析不同蜂蜜的挥发性－成分机．河南师范大学学报（自然科学版２０１３４１５：７５８０），（，）－有志－ＭＳ分析口斗粟谢丽薪王强等．４种新疆单花蜜挥发性成分的ＳＰＭＥＧＣＪ．食，［］－品科学２０１０３１２４：２９３２９９，，（）［３３］袁玉伟，张志恒，叶雪珠，等．蜂蜜渗假盤别技术的研究进展与对策建议阴．食品－科学０３１９：３１８３２２，２〇１，（）３４杨寒化２０１０年蜂蜜市场回顾和２０１１年市场预额岐对策町蜜蜂杂志２０１１４：［］，，（）８－１０－３晓彥姚铁祭蜂蜜袍粉学硏究进展化中国农学通化２００９２５７：７１２［引宋，，（）口６］ＤａｖｉｅｓＡ．Ｍ．Ｃ．Ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏ打ｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄａｎａｌｙｓｉｓ化ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｏａｆ－ｒｈｉｃａｌｏｒｉｉｎｏｈｏｎｅＪｅｃｈｎｏｇｇｐｙ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＴｌｏ１９７６１１５：５１５５２３ｇ［］ｇｙ，，（）口７ＧｉｌｂｅｒｔＪ．ＳｈｅｈａｒｄＭ．Ｊ．ＷａｌｌｗｏｒｋＭ．Ａ？约ａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｏｒａｈｉｃａｌ］，ｐ，，ｇｇｐｏｒｉｎｏｓｍｕｖａｒｉａｅｎａｏｃｒｏｍａｔｏｒｒｅｅｍｉｎｏｇｉｆｈｏｎｅｙｂｌｔｉｔａｌｓｉｓｆａｓｈａｈｉｃｄａｔａｏｎｔｈｅｉｆｒａｙｙｇｇｐａｃ－ｉｄｃｏｎｔｅｎｔ？ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｉｃｕｌｔｕｒａｌ民ｅｓｅａｒｃｈ１９８１２０２：１２５１３５机ｐ，，（）口Ｐ６ｒｅｚＡｒｕｉｌｌｕｅＣ．ＨｅｒｒｅｒａＭａｒｔｅａｃｈｅＡ．Ａｎａｌｉｓｉｓｄｅａｍｉｎｏａｃｉｄｏｓｒｏｔｅｉｎｉｃｏｓｅｎｍｉｅｌｅｓ引ｑ，ｐｄｅ－ＬｏｓＭｏｎｅｒｏｓＥｓａｎａ？Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉａ１９８７２４８３：６７７１ｇ（ｐ）阴＾，＾）口可ＰｉｒｉｎｉＡ．ＣｏｎｔｅＬ．Ｓ．Ｆｒａｎｃｉｏｓｏ０？Ｃａｉｌｌａｒａｓｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｒｅｅ，，ｐｙｇｇｐａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｈｏｎｅｙａｓａｍｅａｎｓｏｆｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｅｒｅｎｔｂｏｔａｎｉｃａｌｓｏｕｒｃｅｓＪ］．［Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｌｕｔｉ－ＨｉＲｅｓｏｏｎＣｈｒｏｍａｔｏｒａｈｙ１９９２１５：１６５１７０班ｇｐ，，口）５５ 参考文献－４白质电泳实验技术Ｍ．北京科学出版化１９９９：１２３１２４［巧郭尧君蛋［］４ＭａｒｓｈａｌｌＴ．ＷｉｌｌｉａｍｓＫ．ＭＥ１说ｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓｏｆｈｏｎｅ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｒａｃｅｒｏｔｅｉｎｓ［。，ｐｙｐｆｒｏｍｃｏｍｐｌｅｘｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｔｒｉｘｂｙｓ＂ｖｅｒｓｔａｉｎｉｎｇ口］．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８７，－１６７２：３０１３０３（）４２邓建军焦霞杨海霞．Ｊ．［］，，，等利用聚丙帰酌胺凝胶电泳技术分析蜂蜜蛋白质行为［］２０－１２３３１４１８８１９１食品科学：，，（）４３ＷｏｎＳ．Ｒ．ＬｅｅＤ．Ｋｏ义ｆＬｅｔａｌ．Ｈｏｎｅｍａｏｒｒｏｔｅｉｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓ［］，，ｙｊｐａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ化ａｄｕｌｔｅｒａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２００８，４－１１０：９５２９５６（）［４４］ＶｏｌｄｆｉｃｈＭ，ＲａｊｃｈｌＡ．，Ｃｉ泳ＯＶ＆Ｈ．，巧ａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｏｒｅｉｇｎｅｎｚｙｍｅａｄｄ泌ｏｎｉｎｔｏｔｈｅ－ａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄｈｏｎｅＪ．ＣｚｅｃｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ２００９２７：２８０２８２ｙ［］，，［４５］李军生，黄位明，张嘉猜，等．淀粉酶在真假蜂蜜中的区别机．食品与发酵工业，２００６３２－１：７５７８，（）［４６］国占宝，赵亚周，胡耀凡，等．不同因素对３种蜂蜜中淀粉酶活性的影响内．中国蜂业２０６－１０１１２：４２４４，，（）４．不同蜂蜜中淀粉酶值稳定性的研究［Ｊ．蜜蜂杂志［巧玄红专，莫新迎，麻建军，等］，２００８２８－１１：８１０），（－４８鲍会梅．真假蜂蜜理化指标的分析机．食品科技２０１０３５４：２８４２８８［］，，（）［４９］ＢａｒｏｎｉＭ．Ｖ．，ＣｈｉａｂｒａｎｄｏＧＡ．，ＣｏｓｔａＣ．，ｅｔａｌ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔｈｅ幻ｏｒａｌｏｒｉｇｉｎ０ｆｈｏｎｅｙ－ｅｃｕｅｓｏｕｒｎａｏｆｂｙＳＤＳＰＡＧＥｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｈｎｉｑＪ．ＪｌＡｇｒｉｃｕｌｔｖｉｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ［］，２００２５０６－（）：１３６２１３６７，口０］ＷｏｎＳ．Ｒ．，ＬｉＣ．Ｙ．，ＫｉｍＪ．Ｗ．，ｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙｍａｊｏｒｒｏｔｅ－ｉｎａｎｄｉｌｉｃａｔｉｏｎｏｏｄＣｈｅｍｉｒ１３４：Ｂ３８ｐｔｓａｐｐ［Ｊ］．Ｆｓｔｙ２００９，１（１３３４，）５２０１０２０１１年２０１１４：［Ｕ杨寒化年蜂蜜市场回顾和市场预测及对策町蜜蜂杂志，（），８－１０５２闻玲玲．Ｊ．２００５［］，杨秀芬蜂蜜的化学组成及其药理作用［］特种经济动植物，，２－：４０４２（）－－ａｒ－ｅｅｒｉａｎａｃｉｖｔｉｅｓａｎｄｌＭａｍＭ，ＡｌＭＡａｅｎｏｌｉｃｓｆ．ＡｌＨａｂｏｒｉｂＭ．Ａｎｔｉｏｘｉｄｔｔｉｔｏｔｌｈｏ口引Ａｙ，ｐ－ｄｉｆｅｒｅｎｔｔｅｓｏｆｈｏｎｅｙＪ．ＮｕｔｒｉｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ２００２２２：１０４１１０４７ｙｐ［］，，巧）５４周娟．麥花蜜理化指标及抗氧化活性研究Ｄ．西安：西北大学２０１３［］［］，５６ 西北大学硕±学位论文口引Ｂｒａｄ净ｏｒｄＭ．Ｍ．Ａｒａｐｉｄａｎｄｓｅｎｓ泌ｖｅｍｅ出ｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｇｒａｍｑｕａｎｔｉｔｉ的－ｒｏｔｅｉｎｕｔｉｚｎｅｒｎｃｉｌｅｏｆｒｉｎ－ｉｎａｌｉｉｅｍｓｏｆｌｉｉ化ｉｏｔｅｄｅｂｎｄｉｎＪ．ＡｓｓＢｏｃｈｉｔｒ１９７６ｐｇｐｐｐｙｇ［］ｙｙ，，７２－－１２：２４８２５４（）［５巧王守业，徐小龙，刘清亮．炎光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用饥．化学进展，２０００－１３４２５７２６０：，（）［５７］尹燕霞向本琼佟丽，掌焚光光谱法在蛋白质研究中的应用机．实验技术与管理，２０－％１０２７：巧，口）５８胡苗苗．骄猴桃巧釉粗蛋白的加工性能及其纤维素合成酶类似蛋白的纯化、鉴定［］［Ｄ］．西安：西北大学，２０１３口９ＳａｃｋｍａｎＤ．Ｈ．ＭｏｏｒｅＳ．Ａｕｔｏｍａｔｉｃｒｅｃｏｒｄｉ打ａａｒａｔｕｓ仿ｒｕｓｅｉｎｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈ］ｐ，ｇｐｐｇｐｙｏｆ－ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒ１％８３０７：１１９０１１９３阴ｙ，，（）［６０］张国女许雪，张素艳蛋白质组分的分离与分析及其应用进展町分析化学，２００３，３－１５：６１１６１５（）６１苗化．．［］，杨涛，霍君生，等柱前衍生高效液相色谱法测定食物中賓基酸含量［Ｊ］分析２０００２８９－化学：１０９１１０９５，，（）［６２］吴光斌，陈发河．柱前衍生高效液相色谱法测定食品中的氨基酸含量［Ｊ］．仲惜农业２００６￣技术学院学报１９３：２６３０，，（）Ｆｕｒｓｏ－ｌｌａｃｋｒａｓｅｒａｅｌｒａｉｓｌｏｆｆｒｅｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｉｚａｉｏｎｍｅｈｏｄｔ．ＰＬ．Ｇｔ．ｔａ．ＡａｏｕｒＰｔｔｔｓ仪］ｐ，，，ｐｐｆｏｒｔｈｅｈｉｇｈｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｄｅｔｅｍｉｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎａｉｏｎｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃｍａｔｅｒｉａｌｓＪ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｒａ．Ａ１９９０［］ｇｐｈｙ，，４９９－１９：５５７５６０（）６４Ｌ－］ｉｕｈＪ．ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｂＰｒｅｃｏｈｍｍｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏ凸ｗｉｔｈ６ａｍｉｎｏ山ｎｏｌｙ［ｙｑ－－－ｔｕ１Ｎｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｏｍｉｄｙｌｃａｒｂａｍａｅａｎｄｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈｕ－ｌｔｒｏｖｉｏｌｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｒａｈ６７０ｌ；６３ｅＪＪｏｕｔｏ．Ａ１９９４５９［］，（ｇｐｙ，）一６５赵媛媛王红－张华山．柱前衍生［］，等反相高效液相色谱分离和测定氨基酸用Ｎ，，－Ａ－２０００－疑基號巧醜亚胺蔡艺酸醋作衍生试剂阴？分析科学学报１６３：１８８１９１，，（）６６Ｐ妊ｅｚＲ．ＩｌｅｓｉａｓＭ．Ｔ．ＰｕｅｏＥ．巧ａｌ．ＡｍｉｎｏＡｃｉｄＣｏｍｏｓ地ｏｎａｎｄＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ［］ｇ，ｙ５ｐＣａｐａｃｉｔｙｏｆＳｐａｎｉｓｈＨｏｎｅｙｓ［Ｊ］，ＪｏｘｉｍａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，－５５２：３６０３６５（）巧７］ＣｏｔｅＪ．Ｒ，Ｃａｓａｂｉａｎｃａ吐，ＧｉｒｏｕｄＢ．，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙａｍｉｎｏａｃｉｄｐｒｏ巧ｌｅｓ５７ 参考文献－ｕｕｓｉｎｇｈｉｇｈｐｒｅｓｓｕｒｅ巧ｑｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ化ｃｏｎｔｒｏｌａｕｔｈｅｎｔｉｃｉｔ．Ａｎａｌｔｉｃａｌａｎｄｙｙ口］ｙａｎａｃａｅｍ－Ｂ：ｉｏｌｙｔｉｌＣｈｉｓｔｒｙ２００４３７８５１３４２１３，，（）５８ 西北大学硕±学位论文攻读硕±学位期间取得的科研成果周厚报邓建军．．，胡苗苗丰凡，曹巧基于蛋白质差异鉴别蜂蜜真巧的研究进展阴食，，－品与发酵工业２０１３３９倒：３７４１，，５９ 致谢一本论文从选题到完成，每步都是在导师曹巧教授的悉也指导下完成的。恩师渊博的学识，严谨的治学态度，忘我的工作精神，诲人不倦的高尚师德对我影响深远。没有！曹老师的无私付出就没有我现在所得，在此向恩师表示深切的谢意与祝福本论文的完成也离不开邓建军老师的悉也指导，谢谢您在实验中给予我的鼓励和帮助一！同化也深深感谢高慧老师、程妮老师和王毕妮老师直Ｗ来对我在学习和生活中的关也和帮助。感谢明苗苗、贾琪和王锦梅师巧在我实验中的指点和帮助，感谢赵静、王萌、孙政和贺琼师妹对我论文的支持和帮助，感谢４２７实验室全体同学的关也和帮助，感谢宿舍室友的关也和帮助！感谢我的家人在我求学生涯中付出的一切，谢谢你们给了我不断奋斗进取的无穷动力。最后，要特别感谢在百忙之中审阅我的论文和参加我的论文答辩的各位专家和教授。谢谢你们！胡