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- 2022-06-16 12:42:50 发布
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巧古学化论义．生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成花机理的巧步巧究．’‘心．、－Ｖ：ｒ＇■？－．Ｉ；：．．．－－ｗ■？．■．＇■．．＇．．＇？‘？■，＿．．■‘Ｖ■：．＇＇．？■－．－灣＾窜给人社：－；．．．．．．．Ｉ＇ｊ叫４長；－．．＇．…．可节ｔ鮮爲席Ａ＃二〇—六年六月
分类号Ｓ６６７．２密级公开ＵＤＣ６３５硕±学位论文生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成花机理的巧步研究邱宏业学科专业果树学指导老师朱建华（研究员）潘介春（副教授）论文答辩日期２０１６年５月１９日学位授予日期２０１６年６月３０日答辩委员会丰席何新华教授
广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研巧所取得的研究成果。除已特别加标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研巧工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即；学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。ｄ不保密。＂＂（请在上相应方框内打Ｖ）论文作者签名：參务业曰期：＞八诗ＭＳＰ寺指导教师签名：泰止日期ａ。／非ｆ日绛马作者联系电话：电子邮箱
生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成花机理的初步研究摘要热带生态型龙眼品种四季蜜具有一年多次开花结果特性，应用春季修剪结合外施生长调节剂可调控四季蜜龙眼夏季集中成花，然而其生理及分子调控机理的研究较少。为此本试验首先探讨四季蜜龙眼夏季成花调控过程中可溶性糖、淀粉、－、游离氨基酸Ｗ及异戊婦基腺嚷吟的６２－Ｉｓｏｅｎｅｎｌｅｎｏｓｉｎｅ可溶性蛋白（ｐｔｙ）ａｄ（ＩＰＡ）］、嘲噪Ｚｃｅｔｉｃａｃｉｄ（ＩＡＡ）］、脱ｃｉｓｉｃａｃｉｄ（ＡＢＡ）］、ｌ酸［虹ｄｏｌｙｌａ落酸［Ａｂｓ赤霉素［Ｇｉｂｒｅｌｌｉｃａｃｉｄ（ＧＡ）］的变化其次通过同源克隆获得四季蜜龙眼重要开花基因化０Ｗ货？／Ｍ７ｚｏｃｒｙｓＴ（Ｆｒ），并分析其表达模式和功能，Ｗ期从生理和分子生物学水平上巧步探明生长调节剤调控四季蜜龙眼夏季成花的机理。本研究将为四季蜜龙眼的花期调控和产期调节提供理论指导。主要研巧结果如下：（。四季蜜龙眼结果母枝单元末次梢叶片浅绿色、芽尚未伸长生长时，向叶面喷布１２６．９ｍｇ／Ｌ乙帰利＋５００ｍｇ／Ｌ多效睡海合液，７ｄ后喷布１：２６．９ｍｇ／Ｌ己赌利＋２５０ｍｇ／Ｌ多效睡混合液，能促进四季蜜龙眼夏季集中成化成花巧率为１００％，成花枝率为９８．４％。（２）多效睡和艺婦利处理增加叶片ＩＰＡ、ＡＢＡ的含量，降低了叶片中ＧＡ的含量。高水平的ＩＰＡ、低水平的ＧＡ＾及较高水平的ＩＡＡ、ＡＢＡ有助于四季（蜜龙眼花芽分化。（３）多效嗤和乙帰利处理増加了树体内ＩＰＡ／ＩＡＡ的比值，叶片中较髙ＩＰＡ／ＩＡＡ比值可Ｗ抑制树体的营养生长，有效地促进花芽分化。（４）四季蜜龙眼成花过程中较髙含量的碳水化合物有利于成花，叶片中Ｃ／Ｎ比值高促进花芽分化。（５）本试验克隆获得了两个四季蜜龙眼ＦＴ同源基因ｃＤＮＡ全长，分别命名为Ｄ巧７７和公分析表明公化７７和０巧Ｔ２开放阅读框（ＯＲＦ）都为５２５ｂｐ，各编码１７４个氨基酸，两者所编码的蛋白质存在２４个氨基酸残基的差异。饼Ｆ７７和饼仍７同其它物种的ｉＴ同源基因髙度保守，并且在蛋白质空间结构化及结构。域上高度相似，推测它们的功能相似１
根据实时巧光定量结果推测：叶片中。／Ｆ７７和公化Ｔ２在ＰＰ３３３和立婦利诱导四季蜜龙眼成花转变的过程中可能起较大作用，且公的表达量显著上升，推测饼Ｆ７７与成花紧密相关－Ｄ１ＦＴ１。同时成功构建了过量表达载体ＰＢＩ１２１和Ｉ２－ＰＢ１１Ｄ１ＦＴ２，利用农杆菌介导的花粉管导入法转化拟南芥，收获ＴＯ代种子，为今后基因功能验证及进一（＾步探明生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成花的分子机制打下了一定的基础。：四季蜜龙眼关键词；成花机理；内源激素；Ｆｒ基因；表达分析；载体构建ＩＩ
ＰｒｅｌｉｍｉｎａｒＳｔｕｄｏｎｔｈｅＦｌｏｗｅｒｉｎＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｏｎａｎｙｙｇｇｃｖ．ＳｉｉｍｉＦｌｏｗｅｒｉｎｉｎＳｕｍｍｅｒＲｅｕｌａ化ｄｗｉｔｈＧｒｏｗｔｈｊｇｇＲｅｕｌａｔｏｒｓｇＡＢＳＴＲＡＣＴＬｏｎｇａｎｃｖ．Ｓｉｉｍｉｉｓ泣ｔｒｏｉｃａｌｅｃｏｌｏ呂ｉｃａｌｔｅｏｆｌｏｎａｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｗｉｔｈｊｐｙｐｇｇｍｕｌｔｉｐｌｅｆｌｏｗｅｒｉｎｇａｎｎｕａｌｌｙ．Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇｐｅｒｉｏ过ｏｆｔｈｅｖａｒｉｅｔｙｃｏｕｌｄｂｅｔｉｍｅｄｉｎｓｕｍｍｅｒｓｅａｓｏｎｂｙｍｅａｎｓｏｆｓｒｉｎｒｕｎｉｎａｎｄｆｏｌｉａｒｓｒａｉｎｗｉｔｈｒｏｗｔｈｒｅｕｌａｔｏｒｓ．ｐｇｐｇｐｙｇｇｇ目ｕｔ，ｔｈｅｒｅｈａｖｅｂｅｅｎｆｅｗｒｅｐｏｒｔｓａｂｏｕｔｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｒｅｓｕｌｔｉｎｆｒｏｍｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｔｈｅｃｈａｎｅｏｆｓｏｌｕｂｌｅｓｕａｒｇｇｙ，ｇｇ，－ｓｔａｒｃｈｓｏｌｕｂｒｏｔｅｉｎｆｒ说ａｍｎｏａｃｉｄＮ６－ｅｎｅｎｌｅｎｏｓｎｅ、ｎｄｏｌａｃｅｃｌｅｉ（２Ｉｓｏｔ）ａｄｉＩｌｔｉ，，ｐ，ｐｙｙａｃｉｄ（ｌＡＡ）、Ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ（ＡＢＡ）、Ｇｉｂｒｅｌｌｉｃａｄｄ（ＧＡ）ｄｕｒｉｎｔｈｅｒｏｃｅｓｓｏｆｆｌｏｗｅｒｇｐｆｏｒｍａｔｉｏ打ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｂｅｓｉｄｅｓｔｈｅ化。ＷＥＷＭ７ｒ（ＦＤｏｆＩＳｉｉｍｉｔｈｅ，ｊ，ｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｌｏｗｅｒｉｎｇｇｅｎｅ，ｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｂｙｈｏｍｏｌｏｇｉｃａｌｃｌｏｎｉｎａｎｄｉｔｓｅｘｒｅｓｓｉｎｇｐｇｍｏｄｅｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｗｅｒｅａｎａｌｚｅｄｔｏｖｅｒｉｆｔｈｅｆｌｏｗｅｒｉｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｓｘｍｍｅｒｙｙｇｆｌｏｗｅｒｉｎｇｏｆｓｙｉｍｉｌｏｎｇａｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｒｏｗｔｈｉｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｂｙｍｅａｎｓｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗｉｌｌｒｏｖｉｄｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｔｈｅｏｒｉｃａｌｕｉｄｅｆｂｒｆｌｏｗｅｒｉｎｐｇｇｇａｎｄｈａｒｖｅｓｔｉｎｇｅｒｉｏｄｒｅｕｌａｔｉｎｏｆＳｉｉｍｉｌｏｎａｎ．Ｔｈｅｍａｉｎｉｒｅｓｕｌｔｓｏｆ化ｅｓｔｕｄｗｅｒｅｐｇｇｊｇｙａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｓ：ｇ（１）Ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｆｏｌｉａｒｓｐｒａｙｉｎｇｗｉ化１２６．９ｏｆｅｔｈｅｈｏ打＋５００ｍ／ＬｏｆｐｇＰＰ］＾ａｎｄｒｅｐｅａｔｉｎｇ７ｄａｓａｆｔｅｒｗｉｔｈ１２６．９ｍ／Ｌｏｆｅｔｈｅｈｏｎ＋巧０ｍ／ＬｏｆＰＰ巧３ｏｎｔｏｙｇｐｇＳｉｉｍｉｌｏｎａｎｔｒｅｅｓｗｈｅｎｔｈｅｉｒｌｅａｖｅｓｏｎｔｈｅｆｉｎａｌｓｈｏｏｔｓｏｆｆｉｒｕｉｔｉｎｂｒａｎｃｈｕｎｉｔｂｅｃａｍｅｌｉｇｈｔｊｇｇｇｒｅｅｎｉｎｃｏｌｏｕｒａｎｄｔｈｅｉｒｔｅｒｍｉｎａｌｂｕｄｓｄｉｄｎｏｔｇｅｒｍｉｎａｔｅｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅａｍａｓｓｉｎｇｆｌｏｗｅｒｉｎｇｏｆＳｉｉｍｉｌｏｎｇａｎｉｎｓｕｍｍｅｒ．Ｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ１００％ｏｆｌａｎｔｔｒｅａｔｅｄｆｌｏｗｅｒｅｄａｎｄ９８，４％ｏｆｊｐｓｈｏｏｔｓｏｎｗｈｉｃｈｃａｒｒｉｅｄｆｌｏｗｅｒａｎｉｃｌｅｓ．ｐ（２）ＰＰ巧３ａｎｄｅｔｈｅｐｈｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＩＰＡａｎｄＡＢＡ．Ｉｔｄｅｃｒｅａｓｅｄ化ｅＧＡｃｏｎｔｅｎｔｉｎｌｅａｖｅｓ．ＨｉｇｈｌｅｖｅｌｏｆＩＰＡａｎｄｌｏｗｌｅｖｅｌＧＡ，ｈｉｇｈｌｅｖｅｌｏｆｌＡＡａｎｄｉｍｒｏｖｅｄｔｈｅｆｌｏｗｅｒｂｕｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＡＢＡｐ．（３）ＴｒｅｅｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＰＰ巧３ａｎｄｅｔｈｅｐｈｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＩＰＡ／ＩＡＡｉｎｔｈｅ旭
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缩略词列表ＬｉｓｔｏｆＡｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎ英文缩写英文名称中文名称ＩＡＡＩｎｄｏｌｙｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ嘲噪己酸ＧＡＧｉｂｒｅｌｌｉｃａｃｉｄ赤霉素ＡＢＡＡｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ脱落酸－ＡＮ６（２－ＩｓｏｅｎｔｅｎＩＰｐｙｌ）ａｄｅｎｏｓｉｎｅ异戊婦基腺嚷吟巧３巧Ｐａｃａｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌ多效嗤ｂａｓｅＰａｉｒ碱基对ｐＢＡｍｐＡｍｐｉｃｉｌｌｉｎ氨节青霉素ｃＤＮＡＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙＤＮＡ互补脱氧核糖核酸宏ｄｄＨ２〇Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄａｎｔｄｅｉｏｎｉｚｅｄｗａｔｅｒ重蒸水ＤＥＰＣＤｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ焦磯酸二乙醋ＤＮＡＤｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ脱氧核糖核酸ｄＮＴＰＤｅｏｃｒｉｂｏｎｕｌｃｌｅｏｓｉｄｅｔｒｉｈｏｓｈａｔｅ脱氧核糖核昔Ｈ憐酸ｙｐｐＥｓｃｅｒｃｃｏｌ．ｃｏｌｉＥｈｉｈｉａｉ大脑杆菌ＫＡｃＫａｌｉｕｍａｃｅｔａｔｅ醋酸钟ＫｍＫａｎａｍｙｃｉｎ卡那霉素ＲｉｆＲｉｆａｍｉｃｉｎ利福平ｐ－ｂｅｒｔａｎ基ＬＢＬｕｒｉａｉｍｅｄｉｕｍＬＢ培养ＭＳＭｕｒａｓｈｉｅａｎｄｓｋｏｏｇｍｅｄｉｕｍＭＳ培养基ｇＯＤ值Ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ光密度值ＯＲＦＯｐｅｎＲｅａｄｉｎｇＦｒａｍｅ开放读码框ＰＣＲＰｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ聚合酶链式反应ｐＨＨｙｄｙｏｇｅｎｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ酸碱度，氨离子浓度ＰＶＰＰｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ聚乙婦化咯烧爾ＲＮａｓｅＡＲｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅＡ核糖核酸酶ＲｐｍＲｅｖｏｌｕｔｉｏｎｓｐ钉ｍｉｎｕｔｅ转／分钟－－ＴＡＢ扣ｓＮａＡｃ－ＥＤＴＡｂｕｆｅｒＴｒｉｓ乙酸－ＥＤＴＡ缓冲液－ｎａ－ＥＤＴＡ－－ＴＥＴｒｉｓｂｕｆｅｒＴｒｉｓｎａＥＤＴＡ缓冲液ＰＢＳＰｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ磯酸缓冲液Ｖ
目录一第章文献综述１１１１．研究背景１．２果树成花理论相关学说１１．２．１激素平衡学说２１．２．２Ｃ／Ｎ学说２１．２．３激素信号调节学说３１．２．４遗传基因控制植物成花学说３１Ｆｒ同４．３植物源基因研究１．３．１植物成花调控相关基因的研究进展４１．３．２ｉＴ基因研究８１．４外施己帰利和多效嗤在成花调控方面的研究９１．５热带生态型尤眼相关研究进展９１．６本研究的目的与意义１０１２第二章材料和方法２１１．田间试验设计及材料２２丄１试验地点及材料１２２丄２试验设计１２２丄３试验操作１２２．２田间试验调查项目１３２．３样品采集１３２４试验仪器与试１３．剂１２．４．试验主要仪器１３２．４．２试验试剂１３１２．５测定项目与方法４２１．５．四季蜜龙眼叶片内源激素的测定方法１４５２四季蜜龙２．．眼叶片营养物质的测定方法１５２．５．３数据分析方法１５２．６四季蜜龙眼同源基因的克隆、生物信息学分析及遗传转化１５ＶＩ
２．６．１菌株与质粒１５２．６．２总ＲＮＡ提取及ＤＮＡ的消化１６一２．６．３ｃＤＮＡ第条链合成１７２＾．６．４四季蜜龙眼ｉＴ同源基因的克隆１８２．６．５四季蜜龙眼／Ｔ同源基因的生物信息学分析２０＇２．６．６四季蜜龙眼巧同源基因表达分析２１２．６．７四季蜜巧眼沪了同源基因表法载体构建及遗传转化２２第Ｈ章结果分析％３如．１四季蜜龙眼夏季集中成花调控效果与分析３丄１春季修剪前后树体生长情况如３丄２成花调控效果２７３：．２叶片内源激素的变化分析２０３．２．１叶片中ＩＡＡ含量的变化巧３．２．２叶片中ＩＰＡ含量的变化３０３．２．３叶片中ＧＡ含量的变化３１３．２．４叶片中ＡＢＡ含量的变化３２３．２．５叶片中内源激素动态平衡的变化３３３３．３四季蜜龙眼叶片营养物质的分析５３．３．１叶片中可溶性总糖含量的变化３５３．３．２叶片中淀粉含量的变化３５３．３．３叶片中游离氨基酸含量的变化％３．３．４叶片中可溶性蛋白含量的变化３７３．４四季蜜龙眼ＦＴ同源基因克隆与生物信息学分析３８３．４．１总ＲＮＡ提取如３巧．４．２ｉＴ同源基因的克隆３．４．３同源基因的生物信息学分析４３３．４．４ＦＴ同源基因的系统进化分析４５３．５四季蜜龙眼ＦＴ同源基因的表达分析４７３．６四季蜜龙眼ＦＴ同源基因超表达载体的构建及遗传转化４７ＶＩＩ
３．６．１ｉＴ同源基因超表达载体的构建４７３．６．２同源基因超表达载体的遗传转化４９第四章讨论与全文总结５０４．１四季蜜龙眼成花调控效果调查分析５０４．２５０四季蜜龙眼叶片内源激素的变化及动态激素平衡分析４．３四季蜜龙眼叶片营养物质动态变化分析５２４、５３．４四季蜜龙眼ｆＴ同源基因的克隆生物信息学分析及遗传转化分析４．５四季蜜龙眼成花的机理研究及探讨５４４．６全文总结％第五章创新点与展望％５．１主要创新点５６５．２问题与展望５７致谢５８参考文献５９附录６９ＶＩＩＩ
广西大古単位论文生长调节制Ｗ化四春要龙化义奉成花柄法的巧步巧免第一章文献综述１．１研究背景’龙眼（公ｚｗｏｃｆｌ巧ｍｙ／ｏｗｇａ？Ｌｏｕｒ．）是我国南方的名贵水果，种质资源丰富，栽培历史悠久。目前我国主栽的龙眼品种多属于南亚热带生态型龙眼，需要冬季的低媪诱导才能成花（黄白辉，２００３）。长期Ｗ来，龙眼作为广西重要的南亚热。带果树，成花不稳定所导致的大小年结果是广大果农面临的主要生产问题此外，广西地区龙眼早、中、晚熟品种搭配比例不够合理（覃如日，２００４），龙眼采收期主要集中在７月中旬至８月中下旬，正造果价格低廉，常造成丰产年而不丰收。Ｗ上问题严重阻碍了龙眼经济效益的提高。四季蜜龙眼是广西农业科学院园艺研究所等单位引种选育的热带生态型龙眼新品种，并于２００８年通过广西农作物品种审定２０１１。委员会审定（朱建华等，）该品种对生境条件要求并不苛刻，与南亚热带一生态型龙眼相比不需要低温诱导就能完成成花转变，而且年可多次开花结果（２０１１）。由于在生长发育过程中零星成花，新梢、花、幼果及成熟朱建华等，一。果共同存在同株树上，不能形成规模生产广西农业科学院园艺研巧所多年来致为于四季蜜龙眼产期调控的研究，应用春季修剪结合外施生长调节剂调控实现四季蜜龙眼夏季集中成花、秋冬季果实成熟，形成了产期调节的栽培模式（朱建华等，２０１１），为解决龙眼品种结构不合理所造成的产期过于集中等难题提供了有效的办法和途径。本研究在广西农业科学院园艺研究所探索的四季蜜龙眼产期、，调节栽培模式基础上，从调控成花过程中营养物质内源激素的动态变化Ｗ及。开花基因ＦＴ入手，初步探讨四季蜜龙眼成花调控机制１２．果树成花理论相关学说一、成花转变是植物整个生命周期中关键阶段之，具体分为四个阶段：诱导花序原基的形成、花的发端和雌雄蕊器官的形态建成。植物适时的成花转变决定（Ｍ２００２），生殖生长的成败ｏｕｒａｄｏｖｅｔａｌ．。植物由营养芽转为花芽最后发育成，一花器官维形，这，这过程称作花芽分化，标志着植物由营养生长转为生殖生长１
广西大单硕古学位论义生长巧节制巧控四李巧龙眼ＪＣ李成花机理巧巧步研典一转变需要在一定外界因素（如光照、温度）和内在因子（如年龄、ＧＡ含量）的诱导下启动。果树的坐果率和经济价值直接受到花芽的数量和质量的影响，因此了解成花调控的机理，对确保四季蜜龙眼顺利通过花芽分化，保证成花率、花穗质量及人工调控开花、促进结果都有十分重要的指导意义。１．２１．激素平衡学说植物内激素平衡调控假说，Ｌｕｃｋｗｉｌｌ，首次提出时用来解释苹果的花芽分化等一（１９７０）认为各种内源激素在时间和空间上相互作用促使花芽分化，并非单的激素调控的。曹尚银等（２０００）和李秉真等（２０００）分别研巧苹果和梨树花芽（ｔ分化过程的内源激素的变化，较髙水平的细胞分裂素Ｃｏｋｉｎｉｎ，结果表明ｙ，ＣＴＫ）和ＡＢＡ促进叶芽进入花诱导，，进而促进花芽分化而ＧＡ和ＩＡＡ的含量低可Ｗ延缓花芽分化。黄弟维等（１９９６）研究结果表明，较髙水平的ＩＰＡ有利的龙眼花芽分化，高水平的ＩＰＡ有助于银杏花芽分化。侯学巧等（１９８７）认为ＡＢＡ对窺枝花芽分化的有两方面的作用，即抑制植株的营养生长和可能引起ＣＴＫ的累１）ＴＫ可能积，进而促进蒜枝花芽孕育ａ等（１９９认为Ｃ是通过促进芽细胞有；Ｍ丝分裂来实现对花芽分化的促进作用。研巧发现调控果树花芽分化还与各激素间的动态平衡密切相关，如ＧＡ／ＣＴＫ、ＣＴＫ／ＩＡＡ、ＡＢＡ／ＧＡ、ＣＴＫ／ＡＢＡ、ＡＢＡ／ＩＡＡ等（曹尚银等，２００１苏明华等，１９９８）。Ｌａｖｅｅ等（１９８７）认为ＩＡＡ在对葡萄；发育过程中有重要作用，外施生长调节物质打破了植体内部原有的激素平衡，促使植物体由营养生长进入生殖生长阶段。研究发现喷施ＰＰ３３３可Ｗ降低ＧＡ的含量，１９９４Ｌａｖｅｅｅｔａｌ．ｌ％。而且具有促进花芽分化和增加花量的效果，（许建楷等，；，７）然而，成花诱导是激素动态变化的过程，在成花的不同阶段对激素的平衡有不同的要求一。由于该假说未能考虑果树的阶段发育问题，因而有待进步完善。１．２．２Ｃ／Ｎ学说Ｃ／Ｎ假说被Ｋｌｅｂｓ等最初提出时认为Ｃ／Ｎ比值高，植物就会开花。研巧普遍一认为，花芽分化是启动了系列大量消耗碳素营养的生物过程，碳水化合物（如一些研究学者认为可溶性糖、还原糖、淀粉）的大量积累有利于花芽分化，只。一要Ｃ／Ｎ比值增加，，花芽分化过程就可Ｗ顺利进行（王广鹏等２００９），但另２
广巧天古学従论义主长巧节制巧Ｉ巧四去＃义巧义争戍花机巧巧巧步研巧些较为进步的研巧观点将笼统的碳水化合物进行细化分类，他们认为淀粉作为能量的存贬物质，并没有生理活性，在花芽分化过程中分解为糖，提供花芽分化所需营养物质和能量。在花芽孕育的过程中，可溶性总糖作为花芽分化的营养基础，被呼吸作用直接消耗，为花芽分化提供所需的营养物质和能量（樊卫国等，２００３；张刀萍等，２００４；路苹２００３）。陈清西等（２００４）研究ＫＣ１０３诱导龙眼花芽分化过程中营养物质的变化，结果证明此过程中可溶性总糖的含量升高，淀粉含量则逐渐下降，二者变化趋势较为缓慢，认为较高水平的淀粉和可溶性总糖有利于花芽形成。武萍萍（２００７）认为碳水化合物未积累到最髙，杨桃成花新梢上就已经进入花芽的形态分化。罗羽浦等（２００８）认为淀粉含量对无花果花芽分化的作用不大。可见，淀粉的存在与果树花芽形成无直接对应关系。综上所述，碳水化合物的累积与花芽分化有密切关系，但不能直接决定成花与否。１．２．３激素信号调节学说植物激素的信号转导即：信号感受、信号传导和信号响应。植物激素与飽细胞中的激素受体（即特异性地识别激素并能与激素高度结合的蛋白质）相结合。受体感知激素信号后，粘附斑被激活，使得信号经传递网络传导，最终引起相关基因的表达，通过基因表达产物的作用引起最终的生理生化的变化（潘瑞识，２００８）。Ｌａｖｅｅ等（１９８９）认为激素是花芽分化的信使，提出激素信号调节花芽一发端假说。Ｂａｎｅ地等（１９９８）对该假说做了进步归纳：果树的芽体从生理分ｇ一个不可逆的发育过程化转为形态分化是，花诱导和花熟状态需要植物内源激素。的瞬时变化进行调控另外，Ｒｍａｉｒｅｚ等（２０００）的研究认为果实输出激素信号（如ＡＢＡ、ＩＡＡ、ＧＡ、ＣＴＫ）也可能参与花芽诱导，各种物理和化学调控措施均可Ｗ不同程度的调控运输到营养芽中的激素信号，通过抑制营养生长促进芽体进入花诱导阶段。该假说适用于常绿果树且仅限于正在发育果实的种子，不包括营养生长旺盛的枝梢尖端输出的激素信号。１．２．４适传基因控制植物成花学说植物生长发育的过程，不仅仅与激素间的平衡相关，遗传物质也起着决定性的作用。通过遗传物质感知不同的环境因子，解除阻遏启动表达，进而调控花诱３
广西大学硕古掌位论文生长巧节巧巧按四李宙义化义李成花机理的巧步巧免导进入花熟状态，２００８，促进成花（郝敬虹李智理，２０１１）。当碳水化合物积；Ｎ化合物积累到一一定水平，内源激素达到定的平衡累和含，激素与组蛋白相结合，促进ＤＮＡ转录成ＲＮＡ，成花基因被激活开始大量表达，蛋白合成増加，一最后导致花序原基出现过程是花芽分化的关键，标志着营养生长转向生殖，这生长。成花基因解除阻遏在时间和空间上有序的表达进而引发花芽分化，解释了生理上总核酸逐渐增加，ＲＮＡ含量增加，引起ＲＮＡ／ＤＮＡ比值和蛋白质／ＲＮＡ比值的増加的现象（杨焊，２０００；文棒荣，１９９５；黄辉白等，１９９１）。遗传基因控制植物成花己被很多研究证实（刘春玲等，２００１），但是激素信号与开花基因间的诱导联系需要进一步深入研究。１．３植物／Ｔ同源基因研究１．３．１植物成花调控相关基因的研究进展成花调控过程是开花植物的生命周期中的一个关键时期，也是花发育分子遗传学的研究热点，发现。Ｗ模式植物材料拟南芥、金鱼草、矮牵牛做了很多研究多个与开花相关的基因，主要由经典的光周期途径、年龄途径、赤霉素途径、春化途径、自主途径和新研究发现的相关途径中众多基因构成了复杂的成花诱导网一－络个相当复杂的调控网络如图１１，。多条调控途径中的众多基因形成所示植物的开花时间调控是通过基因网络整合内在发育和外在环境的信号来实现。光周期途径和春化途径响应外界环境信号尤其是光照和低温的变化，而自主途径和赤霉素途径受激素、遗传物质与植物自身的发育状况所调控（曾群等２００６Ｓｉｍｓｏｎ，；ｐｅｔａｌ．，２００２；Ｍｏｕｒａｄｏｖｅｔａｌ．，２０００；Ａｒａｋｉｅｔａｌ．，２００１；Ｃｅｒｄａｎｅｔａｌ．，２００３；Ｓｅａｒｌｅ巧ａｌ．，２００４；ＨｅａｎｄＡｍａｓｉｎｏ，２００５；Ｋｏｍｅｄａｅｔａｌ．，２００４；ＭｏｏｎａｎｄＬｅｅ，２００５）。这些调控途径通过一些关键的整合因子如：Ｆ７＼Ｚ尼４Ｖ一ＯＦ货？邸戶欠做说ＣＷＯＦＣＣＷ細ｉｉＳ７（ＷＣｉ）形成了的个复杂的基因调控网络（Ｍｏｏｎｅｔａｌ．２００３ＣｏｒｂｅｓｉｅｒａｎｄＣｏ叩ｌａｎｄ２００５ＭｏｕｒａｄｏＶａｎｄＣｒｅｍｅｒ２００２）。；，；，，随着研究的深入，又陆续发现了常温途径、年龄途径调控植物成花（Ｙａｍａｕｃｈｉｇｅｔａｌ．２０１２６ｅｔａ１．２０１２ＫｕｍａｒｅｔａｌＰｏｓｌ．２０３Ｚｈｏｕｅｔａｌ．２０１３），研究还发，；，；；，，现外界环境胁迫包括干旱胁迫、±壤盐胁迫等都会影响植物的开花时间（Ｌｅｅ４
广西大学硕古聲位论文生长调节制巧拉四孚巧义眼史李成花机理的巧步研究一ｅｔａｌ．２００７Ｒｕｅｔａｌ．２０１１）。这些研究进；步丰富了植物的成花调控途径。Ｗ，ｙ，，既相互独立上所有成花调控途径揭示了调控开花的分子机理，又相互联系，最一（－后形成个复杂的基因调控网络实现对植物开花时间的精密调控图１２）。—：？：Ａ：；。；／巧巧液巧ｒ；巧，巧ｓＡｉ々一？—Ｍ此魄ｉｌｉｉｉ堯帮總猫睹班占＾心Ｈ丫Ｌ髮ｓ：＂ｒ；ｆｐ每输＇誦唯就。地雄明－图１１外在和内在信号对开花的影响。外在刺激信号（光周期和温度）Ｗ及内在自身状况［植物年龄和赤霉素（ＧＡ）］都调控ＫＴ基因的表达最终影响ＦＴ蛋白从叶片中的输出（Ｓｏｎｇｅｔａｌ．，２０１３）－Ｉｔｍａ化Ｆｉｉｔｅｒｎｒｎｘ化ｕｇ．１１ｎ化ｇｒａｏｎｏｆｅｘｔｅｒｎａｌａｎｄｉｎａｌｓｉｇｎａｌｓｆｂｒｆｌｏｗｅｉｇ．Ｅｌ巧ｉｍｌｉ（ｈｏｅｒｉｏｄｐｐａｎｄｋｍｅｒａｔｕｒｅ）ａｎｄｉ打ｔｅｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｌａｎｔａｅａｎｄａｍｏｕｎｔｏｆ化ｂｅｒｅｌｌｉｃａｃｉｄ（ＧＡ＾ｃｏｎｖｅｒｅｐ［ｐｇｇｇｉｎ化ｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ护Ｔｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｌ；ｈｅａｌｌａｆｅｃｔ只Ｔｒｏｔｅｉｎｏｕｔｐ山ｆｒｏｍ化ｅｌｅａｖｅｓ．戶Ｔｇｐｙｐｐｒｏｆｉｔ！ｍｏｖｅｓ化化ｅｓｈｏｏｔａｅｘａｎｄｉｎｄｕｃｅｓ打ｏｗｅｒｉｎｐｇ５
广西大単项古单位论义生长巧节巧调拉四李巧义化义李成花机理的扬步研巧－—＊－ｌ＾ｅｎｓｔｅｍ！＊ｉ？咳＾ｆ＼．到？＾－．？ａ；ｌ，＊＞．、了７ｐ＾ＯＡｐｇ＾ｉｗｇｙ＆份翁ｊ｜ｊ——Ｊ§Ｐｆ？ｏ？ｊ＆ｓ？＊ｉ？ｄ５ａＫＮ？＾，ｆ｜，－＜ｓ＾简每重＊？＼Ｊ？＿／ｌ—－？ｉｔｒａｉ—＼Ｊ＆－够沙＼又ＩＩ，嚇－？－鑛叩＇．腸ｊ宁￣－－－＞＿ｊｉ祗咏纔；＇；ｆ１ｖ＾，＇—．ｗ＇．？．，．？，…，＇，＂．＇，．，．＂＂＇，，＂．，＇；，齡＿＿ｉＬ＿Ｗ＾；，Ａ＊ｉＬｅａｆ图＾２植物各开花途径构成的调控网络（ＳｒｉｋａｎｔｈａｎｄＳｃｈｍｉｄ，２０Ｕ）－Ｆ１Ｉｉｇ．２ｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｔｉｍｅａｔｈｗａｓｇｐｙ春化途径能够响应环境低湿（ＳｉｍｐｓｏｎａｎｄＤｅａｎ，２００２；Ｍｏｕｒａｄｏｖｅｔａｌ．，２０００），是指低温能够抑制ＦＺ０Ｗ￡ｉ？／Ｍ？ＺＯＣＣ／ＳＣ（ＦＺＣ）的转录进而促进植物成花的过程。Ｓｈｅｌｄｏｎ等（１９９９，２０００）研巧发现ＦＺＣ对开花具有抑制作用，是春化途径中一个关键基因和枢纽，主要响应冬季低温信号。研巧表明ＦＺＣ需依靠一个开花抑制因子巧？／Ｇ／ＺＭ（ｆｉ？／）的正调控而维持在高的转录水平进而抑巧一制植物开花（ＧｅｒａＩｄｏ／．２００９。？／Ｗａ，）缺失ＦＺＣ和任何个都会造成植物提早开花一／７７Ｆ￡ｉ。在春化作用中还有个关键因子是ＫＥ化Ｖ心：／Ｚ４７ＹＣＷ／；ＶＳ左ｉＶ５（Ｆ／Ｗ），需要整个冬季的低温诱导，阿Ｗ才会表达（Ｓｕｎｇｅｔａｌ．，２００４），进而抑制化Ｃ的表达。另外两个重要的化Ｃ调控因子Ｆ左化Ｖ心／Ｚ４７７ＣＷ７（Ｆ化Ｗ）和Ｆ制Ｍ４Ｚ／Ｚ４７７ＣＷ２（ｒａｉＶ２），共同维持化Ｃ的抑制状态（Ｇｅｎｄａｌｌｅｔａｌ．，２００１；Ｌｅｖｅｔ址２００２）。因此／Ｗ，，可总结为持续低温诱导Ｆ的表达解除了对化Ｃｙ，的抑制作用，而ＦｉＷ／和Ｆ化Ｖ２参与维持ＦＺＣ的抑制状态，诱导成花。／化Ｃ是一－ｉ个ＭＡＤＳｂｏｘ转录调控因子，直接抑制Ｔ和＆９Ｃ７的表达（Ｈｅｐｗｏｒｔｈｅｔａｌ．，２００２；Ｍｉｃｈａｅｌｓｅｔａｌ．２００５；Ｓｅａｒｌｅｅｔａｌ．，２００６）。然而春化作用降低了化Ｃ的表，６
广西大古＊值论义生长巧｜节畑巧拉四＃＃义化夏争义花妨巧巧妨步巧义迭进而促进Ｗ的表达一，Ｆｒ编码个小的蛋白，可Ｗ叶片转移至茎尖分生组织，然后和转录因子化０Ｗ巧？７Ｍ７ＺＯＣＷＯＣＦ公）结合，进而激活ＷＣ７、诚ｆ／７７扔７Ｚ（巧化）、乂故ｒ乂Ｌ４ｉＣ４ｆ／）和地脚怎以拍［５（孤巧）的转录，最终导致植物从营养生长向生殖生长的转变（Ｔａｋａｄａｅｔａｌ．２００３Ａｎｅｔａｌ．２００４Ｃｏｒｂｅｓｉｅｒｅｔａｌ．，；；，，？－幻２００７Ａｂｅ別ａｌ．２００５ＴｅｅｒＢａｍｎｏｌｋｅｉａｌ．２００５Ｗｉｅ巧ａｌ．２００５Ｄｉｎｅｔａｌ．；；；；，ｐ，ｇｇ，ｇ，２０一１５）。研巧发现春化作用是通过个保守的负责催化组蛋白Ｈ３第２７位赖氨酸的甲基化修饰（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）的Ｐｏｌｙｃｏｍｂ机制（ＰＲＣ２）来完成对化Ｃ基因的表观沉默（Ｃｏｕｓｔｈａｍｅｔａｌ．２（ｎ２）。，一Ｓｕａｒｅｚ－Ｌｏｅｚ２００Ｗｐ等认为（１）在光周期途径中，Ｃ６ＷｉＳ７］４（Ｃ０）是个关一键基因－ｆｍ，编码个ｚｉｎｃｇｅｒ（ＺＦ）蛋白，是Ｗ的转录激活因子，表达量受生一物钟调控，，在天之内呈节律性变化活性在下午时达到最高，在晚上逐渐降低；在长日照处理条件下，ＣＯ基因促进拟南芥开花；而短日照条件下）Ａ南芥开花时间作用不明显（Ｓａｍａｃｈ幻ａｌ．，２０００；Ｊａｎｇｅｔａｌ，２００８；Ｐｕｔｅｒｉｌｌｅｔａｌ．，１９９５；Ｋｏｂａｙａｓｈｉｅｔａｌ．，１９９９）。在赤霉素途径中，ＧＡ在草本植物成花过程中起着关键的作用，它可促使植物在非诱导条件下完成花诱导进而促进花芽分化。尽管在植物中鉴定了许多不同种类的赤霉素的结构变异体，但只有少数具有生物学活性，如内源赤霉素激活分子主要是ＧＡ１和ＧＡ４（Ｍｕｔａｓａｅｔａｌ．２００９）。妓变拟南芥，培养的日照条件（如由短日照条件换为长日照），ＧＡ１和ＧＡ４的积累量明显増ｃａｌｅａｌ．。ｓｓｏｎ２００６加，进而促进拟南芥开花（Ｇｏｔ２００１）Ｅｒｉｋ）研，等（究发现ＧＡ４能够直接激活ＩＦＦ的转录进而促进成花。自主途径是指有堅植物生长发育至一定阶段的时候，即使不经过外界环境条件的诱导，也可与某些开花抑制基因的产生招抗作用，进而促进植物开花。Ｍａｃｋｎｉｇｈｔ等（２００２）研究证明自主途径是由抑制化Ｃ的表达来促进植物开花。常温途径主要涉及到化ＯＷＥＡＣＶＧＬＯＣＵＳ＜ＭｉＦＬＭ）巧ＰＨＹＴＯＣＨＲＯＭＥＩＮＴＥＲＡＣＴＩＮＧＦＡＣＴＯＲ４ｉＰＩＦ４）热爾控（化沾ｅｔａｌ．，２０１３；Ｋｕｍａｒｅｔａｌ．，２０１２），最终通过调控成花整合因子ＦＴ来调控植物成花。年龄途径主要涉及到关键因子ｍｉＲＮＡｌ％和ｍｉＲＮＡ１７２，ｍｉＲＮＡｌ５６的含量降低直接减弱表达，使得植物对春化作用敏感，低温解除了对抑制因子化Ｃ的抑制作用（Ｙａｍａｕｃｈｉｅｔａｌ．２０１２；Ｚｈｏｕｅｔａｌ．２０１３），ｇ，，最终通过调控成花整合因子（如Ｆ７＼化＞ＣＡ来调控植物的发育过程。７
广巧大単项古単位论文生长巧，抑巧Ｉ控四车安义化ＪＣ李成花机理的巧步巧巧１．３．２／Ｔ基因研究Ｆｒ基因编码的氨基酸序列属于磯脂醜己醇胺结合蛋白基因家族，具有显著的高度保守的ＰＥＢＰ结构域，它和ＲＡＦ激酶抑制剂蛋白（ＲＫＩＰｓ）高度相似Ｋ一（Ｋｏｌｍａｓｈｉａｎｄａａ１９９９ＫａｒｄａｉｌｓｋａｎｄＳｈｕｋｌａ１９９９）。ＦＴ基因编码个可ｙｙ；ｙ，，Ｗ从叶片经过初皮部运输至顶端分生组织的移动的ＦＴ蛋白，从而诱导其下游相关开花基因的表达，进而促进植物完成花芽分化。而这个可移动ＦＴ蛋白正是几一直探究的开花素（Ｗｉｅｅｔａｌ．２００５Ｈｕａｎｅｔａｌ．２００６Ａｂｅｅｔ十年来科学家们ｇｇ，；ｇ，；ａｌ．，２００５；ＣｏｒｂｅｓｉｅｒａｎｄＶｉｎｃｅｎｔ，２００７）。植物？Ｆｒ同源基因的超表达可Ｗ抑制植，进而使植物提早开花：物的营养生长、促进营养芽进入花芽分化，如把杨树的开花基因戶巧７７和巧Ｆ７７分别转入杨树自身，Ｗ野生型植株作为对照，发现对一５￣Ｈ照植株开花般需要１０年，而转基因植株在ｓｕｅｔａｌ．几个月内就可Ｗ开花（，２００６；Ｂｏｈｌｅｎｉｕｓｅｔａｌ．，２００６）。将巧橘的Ｃ巧Ｔ基因导入欧洲梨，转基因欧洲梨开花时间显著提早（Ｍａｔｓｕｄａｅｔａｌ．，２００９）；将苹果两个Ｆｒ同源基因Ｍ；扔７和Ｍ她Ｔ２分别转入模式植物拟南芥，转基因拟南芥均提早开花（Ｋｏｔｏｄａｅｔａｌ．，２０１０）。综上所述，Ｆｒ同源基因在植物成花调控过程中起着至关重要的作用。Ｆｒ基因作为成花调控网络中的整合因子，扮演着重要的角色，外在信号（光周期、温度）和内在信号（年龄、赤霉素）的调控都汇聚于Ｆｒ基因，即Ｆｒ基因处在光周期途径、春化途径、常温途径、赤霉素途径等多条调控途、年龄途径ｔ１ｉＴ径的交叉点上，护ｒ基因的表达最终导致植物成花（Ｓｏｎｅａｌ．２０３。基因ｇ，）在叶片中受到许多具有染色质重组功能的基因和转录因子调控。在光周期途径中，Ｆｒ基因的表达受上游ＣＯ基因的正调控，由光诱导的ＣＯ基因可直接转■．．基因，从而促进成花（Ｋｏｏｍｎｅｅｆｅｔａｌ１９１Ｂｏｈｌｅｎｉｕｓｅｔａｌ２００６录激活，９；，；一一Ｏｎｏｕｃｈｉｅｔａｌ．２０００ＡｎａｎｄＲｏｕｓｓｏｔ２００４）。然个调控ｆｒ，；而基因不是唯，基因的基因，研究发现六个属于ｅｗ乂Ｐ２家族的ｍｉＲ１７２靴基因心＾、７Ｚ￡（ＳＭＥ）、和两个属于化４Ｆ家族的含有ＡＰ２结构域的基西ＴＥＭＰＪｉＡＷＬＬＯｊ（ＴＥＭｊ）和ＴＥＭＰＲＡＷＬＬ０２（Ｔ￡Ｍ２）也能调控ＦＴ基西的表达（Ｋｅｔａｌ２００６ＭａｔｈｉｅｕａｎｄＹａｎｔ２００９Ｙａｎｔｅｔａｌ．２０１０）。Ｃａｓｔｉｌｌｅｏｉｍ．；；，，，ｊ等（２００８）通过Ｃｈｉｐ实验证明ｒ扮Ｗ和没Ｉ促直接结合在Ｆｒ基因调控区域进而直接抑制Ｆｒ基因的表达。除了心皆／游基因外，化Ｃ基因也直接调控Ｆｒ基因８
ｊＭＯＴ古学ｔｆｃ论文生长巧节舶巧讼四李＃龙化义李试广西大ｊ■花祇巧巧巧步巧巧的表达（战ｌｌｉｗｅｌｌｅｔａｌ．，２００６）。在常温途径中，研究发现戶パｍＸ：邱＾ＯＭ￡胃及化４Ｃ７ＷＧ城ＣＴＯｉＷ（戶巧Ｖ）能够激活护７基因的表达进而促进成花（Ｋｕｍａｒｅｔａｌ．２０１２）。，１．４外施乙婦利和多效挫在成花调控方面的研究乙婦利是一种农用低毒植物生长调节剂，随着遗传学和分子生物学的发展，使得更多的乙締信号組分和调控机制被发现和阐明。乙婦广泛地参与了调节植物一生长、发育及应对环境胁迫等系列生物学过程，如促进根和茎的横向生长；抑制茎纵向生长；影响花芽分化和花穗生长发育；促进果实成熟；抑制内源ＩＡＡ的合成，抑制枝梢的营养生长，但乙締浓度过高则会引起叶片脱落和细胞衰老死一，主要通过抑制内源ＧＡ的合成亡。ＰＰ３３３是种植物生长抑制剂，物细胞，使植。分裂和伸长减缓，使新梢的营养生长受到抑制，促进生殖生长ＰＰ３３３的主要生理效应有：参与光合作用产物的分配的调节过程，提高植株的成花率、坐果率。ＰＰ３３３和乙婦利混合使用可明显促进花芽分化。乙婦利、ＰＰ３３３在园艺植物（如藻萝、花并、蔬菜）上得到了广泛应用。己帰利、ＰＰ３３３在促进南亚热带龙眼（马玉玲等，２００１，２００；潘学文等｜；陈香玲，２００５；于萍，２００８）花芽分化、提高雌雄花比例和座果率上有显著效窠，并且对龙眼控冬梢和防冲梢有较好的效果。应用乙締利和多效睡配合物理调控对热带生态型龙眼进行产期调控（彭坚等，２００５；朱芳德等，２００３；钟兴耀，２００４；黄凤珠等，２００９；陈殿余，２００９；俞征瑶等，２００９；房始丰等，２０１１；徐文坚，２０１１；朱建华等，２０Ｕ；李永红等，２０１３），取得很好的效果。四季蜜龙眼在该栽培模式下，夏季集中成花率髙，秋冬季采收，改变了它在自然条件下的生长发育规律，实现了调节产期。１．５热带生态型龙眼相关研究进展在生理生化相关指标研巧方面，俞征瑶（２００９）研巧四季花龙眼在自然成花和ＰＰ３３３处理下花芽分化期内源激素的变化情况，认为ＡＢＡ和ＺＲｓ含量高会导。致良好的花芽分化，同时显示出ＰＰ３３３与ＧＡ的良好措抗效应李永红（２０１３）等采用ＰＰ３３３处理四季花龙眼冬梢结果母枝顶芽，发现花芽分化过程中顶花芽ＧＡ９
广巧大単硕古単化论义生长■调节制调逆四孚巧义眼王孚成花机理的巧步研突一和ＩＡＡ含量总体均呈下降趋势，但在花序抽穗期含量升高；ＺＲ含量直保持快速增加（２０１０）研究四季花龙眼花芽分化期；ＡＢＡ含量呈波浪式升高。蔡中芳营养动态的变化：，，结果表明较高浓度的碳水化合物含量可促进花芽分化可溶性总糖与花芽分化成正相关，，过氧化物酶（ＰＯＤ）活性均高于嫩叶含量并在成花期有明显的变化规律。在成花相关基因研究方面，王晓航（２０１０）克隆了四季蜜龙眼ＳＡＭ基因的上调表达－大部分序列ＳＡＭ在花芽中。官磊（２００８）采用半定量ＲＴＰＣＲ，发现＂＂技术检测四季蜜龙眼花序分化及冲梢过程中ＺＺｉｙ基因的表达量，发现ＬＬＦＦ＂＂１在花序分化过程有逐渐升高的趋势，在冲梢过程中仅有微弱表达３）。孟珊（２０Ｗ四季蜜龙眼幼叶和叶芽为材料克隆王护ｒ同源基因盾动子序列，得到长度为１２２７ｂｐ的后动子序列；对开花相关途径涉及的关键基因抓甲、７７化和ＦＺＣ进行克隆，转录组测序发现，Ｈ个抑制基因在嫁接新梢中表达有不同程度下降。郑丽霞（２００４）克隆了四季蜜龙眼ＦＺＯ／ＬＦｒ同源基因ｃＤＮＡ片段。Ｊｉａ（２０１４）Ｗ四季蜜龙眼和立冬本龙眼的嫩梢为材料进行转录组测序，筛选出１００多个与开花相关，（心并无表达差异的基因并对其表达量进行分析发现１护７，筑９，两个龙＾眼样本中的７７化７的基因序列及编码区相同，但巧基因并没有被检测到。综上所述，，热带生态型龙眼成花机制的研究较多，但是关于同源基因的研究甚少而且生理与分子研究相结合的研究鲜有报道。１．６本硏究的目的与意义应用春季修剪结合外施生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季集中成花、秋冬季收，获果实，延长了龙眼鲜果供应期减轻了市场压力和提高经济效益。然而关于调控四季蜜龙眼夏季集中成花的生理及分子调控机理的研究还较少，导致我们的认，不利于该技术的更深入研究识还局限在表面上。为此本试验拟在前期产期调节栽培技术研巧的基础上一，进步探讨生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成花过程中可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白、游离氨基酸Ｗ及ＩＰＡ、ＩＡＡ、ＡＢＡ、ＧＡ的变化与成花之间的关系；同时克隆四季蜜龙眼重要开花基因Ｆｒ一，分析其在生长调节剂处理前后的表达量的变化，进步分析其功能，Ｗ期从生理和分子生物学水平上初步探明生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成１０
广西大単项古单位论义生权ｗ节制？巧四季？龙化义春成花机巧巧勒步研巧花的机理，为四季蜜龙眼的花期人工调控和产期调节提供理论指导，为制定四季蜜龙眼产期调节栽培技术措施提供参考。．苗；１１
广巧大学巧古学化论文生长调节制巧拉四李要义化义李成花机理的奶步研究第二章材料和方法２．１田间试验设计及材料２．１．１试验地点及材料本试验于２０１４年２月至２０１４年１１月在广西农业科学院里建科研基地四季一蜜龙眼试验园进行，选取生长健壮、长势基本致的１０株树作供试材料。供试ｘ植株种植时间为２０１０年３月，株行距为２．５ｍ４ｍ。２．１．２试验设计采用单因素随机区组设计，单株小区，２个处理水平，重复５次。具体处理如下：一处理：叶面喷布５００ｍｇ／ＬＰＰ３３３和１２６．９ｍｇ／Ｌ艺帰利的混合液，７ｄ后叶面喷布２５０ｍｇ／ＬＰＰ３３３和１２６．９ｍｇ／Ｌ乙帰利的混合液。处理二：叶面喷清水（对照）。石婦利水剂产自上海彭浦化工厂，有效成分含量为４０％。多效嗤粉剂产自上海悦联化工有限公司，有效成分含量为１５％。２．．１３试验操作一２０１４年３月１４日，对所供试植株年生枝进行短截修剪促发早夏梢，修剪后枝基部至剪口所留长度约１５ｃｍ。？２０１４年４月１１日１０ｃｍ时进行疏芽定梢截枝留１条２条梢。，夏梢抽生约，每个短在枝梢生长过程中除去侧芽，不再分枝。连续生长两次夏梢后，处理植株于５月２８日在第２次夏梢叶片呈浅绿色且芽未伸长生长时向树冠外围叶面喷布浓度为５００ｍｇ／ＬＰＰ３Ｕ和１２６．９ｍｇ／Ｌ乙稀利的混合液；７ｄ后（６月４日）喷布浓度为２５０ｍｇ／ＬＰＰ３３３和１２６．９ｍｇ／Ｌ乙稀利的混合液；Ｗ均匀雾状喷至外围叶面刚滴液为度。对照植株同时喷清水。１２
广西大古単化论文生长讲节制巧度四争妻义化义李成花机巧的斯步巧巧２．２田间试验调查项目修剪前后对株高、冠幅、复叶数、剪曰数量、剪曰直径进行调查。结果母枝单元老熟后对结果母枝单元数量、长度和复叶数进行调查。处理后在树冠中上部的东、南、西、北４个方向各选长势相近的１０个枝条，担牌标记，观测顶芽萌动时间、花序原基出现时间、花穗生长期和花期。并于花期（７月１４日）测量花穗长度、花穗宽度，调查成花枝率和成花株率。＝Ｘ％成花株率（成花株数／处理株数）１００＝成花枝率（成花枝梢数／枝梢总数）Ｘ１００％２．３样品采集叶片采集：上午１０时左右从供试植株选取无病虫的梢，采集从顶部往下第￣２张￣３３。２张小叶张复叶的第２、张小叶每个枝条采１张，每株每次取１５张左右叶片。一采样日期：第次喷布ＰＰ３３３和艺婦利的混合液前（５月２８日）采样１次（０ｄ），处理后Ｉｄ、５ｄ、８ｄ、１２ｄ、１６ｄ、２０ｄ、２５ｄ各采样１化，共采样９’次－８０Ｃ冰。。所取叶片用液氮速冻后放入箱备用２．４试验仪器与试剂２．４．１试验主要仪器Ｌ－ｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ？４８０实时巧光定量ＰＣＲ仪、ＢｉｏｍｅｔｒａＴ１９６ＰＣＲ仪、ＢｉｏＲａｄ－电泳仪、ＤＹ１２型电泳槽、凝胶成像系统、髙速冷冻离也机、髙压灭菌锅、超微量紫外分光光度计、移液枪、超纯水制备系统、恒温水浴锅、摇床、超低温冰箱、无茜操作平台、通风栖、祸旋仪、制冰机、植物生长气候培养箱。２．４．２试验试剂液氮、８５％甲醇、去离子水配ＰＢＳ缓冲液（氯化钢、憐酸氨二钢、磯酸二ｘＴＭ氨钟）、核酸染料ＳＹＢ民⑥ＰｒｅｍｉｘＥＴａｑＴＭ、ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔ１３
广巧大単硕古単位论文生长巧节制巧按巧孚巧义眼夏李成花机理的妨步研免？Ｗｉ化ＤＮＡＥｒａｓｅｒ试剂盒、ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｔｎ１ｓｔＳｔａｎｄＤＮＡＳｎ化ｅｓｉｓＫｉｔｇｐｙ试剂盒、￡＾了３、？化１１＾＼了３、？化１１如８了入民］＾１＆父？化１１１山酶、城（２１酶９酶９酶、－ｆｌＩｎｉｓｉｏｎ连接酶、ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ、ＲＮａｓｅＩｎｈ化ｉｔｏｒ、民ｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＤＮａｓｅｌ及ＲＮａｓｅｆｒｅｅ姐２０剂购自ＴａＫａＲａ公司；ＴＡＥ、ＴＥ、ＤＥＰＣ、氨节青霉素（Ａｍｐ）、ｆ－利福平（Ｒｉ）、卡那霉素（Ｋａｎ）、ＸＧａｌ、质粒提取试剂盒及胶回收试剂盒购自生工生物工程（上海）有限公司；超快新型植物ＲＮＡ提取试剂盒（ＱｕｉｃｋＲＮＡＩｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ）为北京华越萍生物科技有限公司生产；其他的试剂均为国产分析纯。２．５测定项目与方法２．５．１四季蜜龙眼叶片内源激素的测定方法ＡＢＡ、ＩＡＡ、ＧＡ、ＩＰＡ含量测定采用植物激素酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），具体步骤如下：（１）ＰＢＳ缓冲液的配制：Ａ液：称取３．１２Ｎａ吐Ｐ０４．２出０溶于５０ｍｌ蒸溜水，完全溶解后，再加离ｇ子水定容至１００ｍｌ，常温短期保存，备用。Ｂ液；称取１６．０５ｇＮａ２ＨＰ０４．１２Ｈ２０溶于５０ｍｌ蒸溜水，完全溶解后，再加离子水定容至１００ｍｌ，常温短期保存，备用。将３８ｍｌＡ液和６２ｍｌＢ液充分混合，调閒至７．０。（２）样品的提取：称取Ｉｇ新鲜四季蜜龙眼叶片，加液氮磨成粉末状，１ｍｉｎ°一后加３ｍｌＰＢＳ和１ｍｌ８５％甲醇，并转入试管中，摇匀后放置在４Ｃ冰箱中。°４ｍ离也、Ｃ下提取３ｈ，４０００ｒｐ２０ｍｉｎ，取上清液。（３）样品测定：具体操作参照广东海洋大学吴慧英（２０１０）硕±论文《狮头鶴催乳素基因的克隆，：、表达及其生理活性的初步观察》所述步骤改良的地方为：１）样品的浓度梯度ＧＡ浓度分别为９０ｐｍｏｌ／Ｌ，６０ｐｍｏｌ／Ｌ，３０ｐｍｏｌ／Ｌ，１５ｐｍｏｌ／Ｌ，７．５ｐｍｏｌ／ＬＡＢＡ浓度分别为１５０ｕ／ＬｌＯＯｕ／Ｌ５０ｕ／Ｌ２５ｕ／Ｌ，１２．５ｕ／Ｌｇ，ｇ，ｇ，ｇｇｌＡＡ浓度分别为２４ｐｍｏｌ／Ｌ，１６ｐｍｏｌ／Ｌ，８ｐｍｏｌ／Ｌ，４ｐｍｏｌ／Ｌ，２ｐｍｏｌ／ＬＩＰＡ浓度分别为３０ｐｍｏｌ／Ｌ，２０ｐｍｏｌ／Ｌ，１０ｍｏｌ／Ｌ，５ｐｍｏＶＬ，２．５ｍｏｌ／Ｌｐｐ２）加样：标准曲线设定化、空白孔、待测样品孔，单孔重复３次（空白对照１４
广苗大古単位论文生长识节射巧巧四＃妻义化无李戍花机３里的巧步巧免不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）。在酶标包被板上待测样品孔中先加。样品稀释液４０山，然后再加待测样品１０山（样品最终稀释度为５倍）加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁和底部，轻晃混匀。３）温育：封板膜仅使用１次，！＾免交叉污染。４）配液：将３０倍浓缩洗涂液（有结晶析出）先在水浴锅中加温助溶，再加蒸馈水稀释。①一一５）洗板：标准曲线孔加洗緣液时，从低浓度边向高浓度进加，并且一边倾斜酶标板要向高浓度的。③第１次加入洗涂液后，静置３０ｓｅｃ后，甩掉、。拍干，防止各孔的交叉反应２．５．２四季蜜龙眼叶片营养物质的测定方法营养物质测定方法的具体操作步骤参考《植物生理学实验指导》的测定方法（张志良，２００９）：可溶性总糖的测定方法：蔥丽比色法淀粉的测定方法：蔥丽比色法游离氮基酸的测定方法：葫Ｈ醜法－可溶性蛋白的测定方法：考马斯亮蓝Ｇ２５０染色法２．５．３数据分析方法所得数据采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行Ｔ检验；Ｅｘｃｅｌ２００７求其均值，标准差，并作图。２６四／Ｔ．季蜜龙眼同源基因的克隆、生物信息学分析及遗传转化２．６．１菌株与质粒扮＇（ｃＡｅｎｃ舶ａｃｏ／０ＤＨ５ａ大肠杆菌感受态为北京全式金生物技术有限公司生产；农杆菌菌株ＥＨＡ１０５购于生工生物工程（上海）有限公司；植物双元表达载－－８Ｔ购于ＴａＫａＲａ生物公司体阳Ｉ１２１ＧＦＰ为本实验室保存；克隆载体ＰＭＤ１。１５
广巧大単巧古学位论文生长巧节制巧控四李巧龙眼义卒成花机理的巧步研究２．６．２总ＲＮＡ提取及ＤＮＡ的消化采用改良的华越洋公司ＲＮＡ提取试剂盒ＱｕｉｃｋＲＮＡｉｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ提取四季蜜龙眼叶片总ＲＮＡ，具体操作步骤见其说明书，主要改良操作如下：（１）将室温１２０００ｒｐｍ，离也１０ｍｉｎ改为室温１２７００ｒｐｍ，离也１０ｍｉｎ。２ＲＮＡ、（）收集时将洗脱液的体积改为７０山；将１２０００ｇ室温，离屯１ｍｉｎｒ、改为１２７００ｐｍ，离屯２ｍｉｎ。（３）在加入去蛋白液和氯仿之后，操作改为在振荡器上振荡２ｍｉｎ混匀。此时溶液呈均匀的乳浊状（振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来）。用１．５％的琼脂糖凝胶电泳检测所提取ＲＮＡ的完整性，用超微量紫外分光光度计检测所提取ＲＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０纯度值和浓度。采用Ｔａｋａｒａ公司的ＤＮＡ酶ＤＮａｓｅＩ处理所提取的总ＲＮＡ样品中残留的ＤＮＡ。总ＲＮＡ中的ＤＮＡ的消化：（１）混合液的配制试剂用量ＴｏｔａｌＲＮＡ６０ｕｌｌＯｘＤＮａｓｅｌＢｕ瓶ｒ１０山ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＤＮａｓｅｌ４ｕｌＲＮａｓｅＩｎｈ化ｉｔｏｒ１山ＤＥＰＣＭｒｅａｔｅｄＷａｔｅｒ２５ｕｌ°（２）３７Ｃ反应１ｈ。（３）ＤＮａｓｅｌ酶的失活（苯献／氯仿抽提法）加入等体积的氯仿／异戊醇（２４，，；１）振荡泡匀。室温１２０００ｒｐｍ离也５ｍｉｎ取上清液。°－（４）加入１０ｕｌ３Ｍ醋酸钢和２５０山冷乙醇，混匀后８０Ｃ放置２０ｍｉｎ。°、（Ｃ＇５）４，１２０００ｒｍ离ｍｉｎ。ｐｌＬ１０，弃上清液°（６、）加入７０％冷石醇洗净，４Ｃ，１２０００ｒｍ离屯５ｍｉｎ，弃上清液。ｐ（７）干燥沉淀。（８）用适量ＤＥＰＣ水溶解后，电泳检测。（９）取２ｕｌＲＮＡ用核酸蛋白分析仪检测其浓度。１６
广西天古弟位论义生长曲Ｉ卞巧＂泣巧＃妻义化乂？成花机巧巧々步巧巧２一．６．３ｃＤＮＡ第条链合成经检测合格的ＲＮＡ样品Ｗｏｌｉｇｏｄ（Ｔ１８）为引物，经Ｔａｋａｒａ公司反转录试Ｔ？？剂盒ａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＩＩ１ｓｔＳｔａｎｄＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ和ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔＷｉｔｈｇＤＮＡＥｒａｓｅｒ反转录成ｃＤＮＡ为后续工作所用。？（１）由宝生物（大连）公司ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＩＩ１ｓｔＳｔａｎｄＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ试剂盒，用于基因克隆，具体操作步骤如下：１）在Ｍｉｃｒｏｔｕｂｅ中配制下列混合液：试剂用量Ｏｌｉｏ肝Ｐｒｉｍｅｒ１ｕＬｇｄＮＴＰＭｉｘｔｕｒｅ１ｕＬ模板ＲＮＡ＜５ｕｇＲＮａｓｅ－ＦｒｅｅｄＨｓＯｕ化ｐ１０ｕｌ’２）ＰＣＲ仪６５Ｃ保温５ｍｉｎ后，冰上迅速冷却。３）在上述Ｍｉｃｒｏｔｕｂｅ管中配制下列反转录液：试剂用量上述变性后反应液１０山ＲＮａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ０．５山ＳｘＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＩＩＢｕｆｆｅｒ４ｕｌＰｒｉｍｅＳｃｒｉｔＩＩＲＴａｓｅ１山ｐＲＮａｓｅｆｒｅｅｄＨｓＯｕｐ化２０山４）缓慢混匀。５）在ＰＣＲ仪上按下列条件进行反转录反应：反应温度反应时间°４２Ｃ６０ｍｉｎ（反转录反应）°９５Ｃ５ｍｉｎ（反转录酶失活反应）’６）冰上冷却后－，ｃＤＮＡ２０Ｃ保存。？（２）采用宝生物（大连）公司ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔＷｉｔｈｇＤＮＡＥｒａｓｅｒ试剂盒，具体操作步骤如下：１７
广西大単硕古单巧论文生长调节制调拽四李巧龙眼义孚成花机理巧巧步研典１）去除基因组ＤＮＡ反应试剂用量ＳｘｇＤＮＡＥｒａｓｅｒＢｕｆｆｅｒ２ｕｌｇＤＮＡＥｒａｓｅｒ１ｕｌＴｏｔａｌＲＮＡ＜１ｕｇ（４ｕｌ）ＲＮａｓｅＦｒｅｅｄＨ２〇ｕｐ化１０ｕＬ冰上配制混合液。’Ｃ保温２）ＰＣＲ仪４２２ｍｉｎ（或室温反应３０ｍｉｎ）。３）配制下列反转录液：试剂用量步骤１的反应液１０ｕｌ？ＰｔＴｒｉｍｅＳｃｒｉｐＲＥｎｚｙｍｅＭｉｘ１ｕｌＲＴＰｒｉｍｅｒＭｉｘ（最后加）１ｕｌ５ｘＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＢｕｆｆｅｒ４ｕｌＲＮａｓｅＦｒｅｅｄ也Ｏ４山冰上操作，轻柔混匀。４）在ＰＣＲ仪上按下列条件进行反转录反应：反应温度反应时间°３７Ｃ１５ｍｉｎ（反转录反应）°８５Ｃ５ｓｅｃ（反转录酶失活反应）°５－，ｃＤＮＡ２０）冰上冷却后于Ｃ保存。２４四Ｔ同源基因的克隆．６．季蜜龙眼／（１）引物根据ＮＣＢＩ数据库公布的其它龙眼品种Ｆｒ同源基因序列，通过Ｐｒｉｍｅｒｓ软件设计包含完整开放阅读框（ＯＲＦ）的特异引物，引物由上海英潍捷基贸易有限公司（Ｉｎｖｉｔｏｒｇｅｎ）合成，弓Ｉ物名称和序列如下：１８
广西大古单位论义生长ｔａ卞畑１Ｂ芭四＃＃义化ＪＣ牟成巧机理巧々？巧巧引物名称引物序列ＦＴ－１ＦＣＡＡＣＣＡＡＣＡＡＴＡＴＴＴＣＡＣＣＴＧＡＡＦＴ－１ＲＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＡＡＣＡＴＡＧＡＧＡＧＡＧＦＴ２－ＦＣＴＴＧＡＡＴＡＴＴＴＴＴＧＴＴＴＡＡＣＡＣＴＡＣＦＴ２－ＲＴＴＡＴＡＣＧＧＡＴＴＴＴＧＣＴＡＧＡＴＡＧＴＴＡ（２）ＰＣＲ反应体系试剂每２５ｕｌ反应体系的体积ＥｘＴａＢｕｆｅｒ２．５山ｑｃＤＮＡ１山Ｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒ１ｕｌＲｅｖｅｒｓｅｒｉｍｅｒ１ｕｌｐｄＮＴＰ０．５山ＥｘＴａ酶０．１６山ｑＲＮａｓｅｆｒｅｅ組２〇１８．８４ｕｌ°’°°ＰＣＲ反应程序参数为９５Ｃ，３ｍｉｎ；９５Ｃ，４０ｓｅｃ；５５．５Ｃ，４０ｓｅｃ；７２Ｃ，°Ｃ°２ｍｉｎ３５Ｃ停止。；个循环，７２延伸１０ｍｉｎ，１０保存（３）琼脂糖凝胶成像心取５山ＰＣ艮产物在１．５％的琼脂糖胶上进行电用检测，若有目的条带，进行胶回收。（４）目的基因的回收目的基因的回收利用生工生物工程（上海）有限公司ＳａｎＰｒｅｐ柱式ＤＮＡ胶回收试剂盒，详细操作步骤见说明书。（５）目的基因的连接及克隆目的基因的连接：试剂用量ＳｏｌｕｔｉｏｎＩ５ｕｌＰＭＤ－１８１山ＰＣＲ－４产物ｕｌ°Ｃ过１６夜连接。１９
广苗大洋硕古単位论文生长巧节制巧拽四李巧义眼无孚成花机理的巧步研突目的基因克隆：１）将连接产物１０山全部加入至５０山的大肠杆菌ＤＨ５ａ感受态细胞中。冰一浴３０ｍｉｎ，不断振荡（每隔５ｍｉｎ轻弹次）。°２）４２Ｃ热激５０ｓｅｃ。￣３）迅速转移至冰浴中４５ｍｉｎ。°４）加入５００山ＬＢ培养基，３７Ｃ摇床２００ｒ／ｍｉｎ振荡培养２ｈ。５）将菌液１００ｕｌ加入到ＬＢ固体培养基平板（含Ａｍｐ）上，用己灭菌的涂’布棒涂布均匀，于３７Ｃ过夜培养。（６）摇菌５ｍ、１）准备灭菌的１．ｌ离屯管若干，分别编号。２）向５０ｍｌ的ＬＢ培养基中加入５０ｕｌＡｍ，混匀。ｐ３）吸取８００山ＬＢ培养基，置于离也管中。４皿上、）用枪头挑取培养单个、大、圆润菌斑加入离屯管中。°５）摇床３７Ｃ，２００ｒ／ｍｉｎ振荡５ｈ。６）菌液ＰＣ民检测试剂每２５ｕｌ体系用量菌液模板２山Ｆｏｒｗａｒｄｒｉｍｅｒ１ｕｌｐＲｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒ１ｕｌＰｒｅｍｉｘＴａｑ１２．５ｕｌＲＮａｓｅｆｒｅｅ細２〇８．５ｕｌ°°Ｃ°ＰＣＲ反应程序参数为９５，５ｍｉｎ９５Ｉ：Ｃ２Ｃ，，４０ｓｅｃ５５．５，４０ｓｅｃ７；；；°°１ｍｉｎ；７２Ｃ延伸６ｍｉｎ；３０个循环，１０Ｃ停止保存。７）琼脂糖凝胶电泳检测，初步检测正确的菌液将取２００ｕｌ于灭茜的离必管中，封口膜密封，委托生工生物工程（上海）有限公司测序。测序正确的菌°液加等体积６０％甘油于－８０Ｃ冰箱保存。２．６．５四季蜜龙眼Ｆｒ同源基因的生物信息学分析通过ＮＣＢＩ，检索获得的两个四季蜜龙眼Ｆｒ同源基因的同源性，利用２０
广西乂掌项＊＃化论义生长巧卞巧巧巧四季妻义取无＃成花枫宙巧巧步巧义ＢｉｏＸＭ２．６预测基因所编码蛋白，利用ＥｘＰａＳｙ提供的在线Ｐｒｏｔｐａｒａｍ软件一（ｈｔ：／／ｗｅｂ．ｅｘａｓｙ．ｏｒｇ／ｒｏｔａｒａｍｙ）对蛋白的级结构理化特性进行分析，利用ｐｐｐｐＥｘＰａＳ－－ｙ供的在线Ｓ０ＰＭＡ程序（ｈｔｔ：／／ｎｓａｂｉｌ．ｉｂｃ．ｆｒ／ｃｉｂｉｎ／ＮＰＳＡ／提ｐｐｐｐｇｎｐｓａｓｅｒｖｅｒ．ｈｔｍｌ）进行蛋白二级结构预测分析，利用ＳＭＡＲＴ＿（ｈｔ－ｐ：／／ｓｍａｒｔ．ｅｍｂｌｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ）预测蛋白Ｈ级结构，另外利用ＭＥＧＡ４．１软件构建多物种ＦＴ同源基因系统进化树。２．６．６四季蜜龙眼／Ｔ同源基因表达分析巧光定量ＰＣＲ所用仪器为ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ？４８０实时巧光定量ＰＣＲ化核酸染ＴＭ验操作步骤参照其说解为ＳＹＢＲ⑥ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ，具体试明书。根据克隆测序获得的四季蜜龙眼ｉＴ同源基因ｃＤＮＡ序列，用Ｐｒｉｍｅ巧软件设计定量特异引物，由生工生物工程（上海）有限公司合成。被已经证明在各个组织及条件下稳定表达的龙眼邸ｌａ基因作为内参基因（Ｈｅｌｌｅｒｅｔａｌ．，２０１４）。巧光定量ＰＣＲ引物为：引物名称引物序列Ｄ－１ＦＴ１ＦＡＧＴＧＡＣＣＣＡＡＣＣＣＴＧＡＧＡＧＡＤ１－ＲＡＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＴＴ１ＦＴＤ－１ＦＴ２ＦＧＣＴＡＣＡＣＴＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＴＧＧＡ０肌２－民ＡＴＡＧＴＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＧＧＴＴＧＤＬＥＦ－ＩａＦＧＡＴＧＡＴＴＣＣＣＡＣＣＡＡＧＣＣＣＡＴＤＬＥＦ－ｌａ反ＧＧＧＴＣＧＴＴＣＴＴＣＴＣＡＡＣＡＣＴＣＴＲＴ－ＰＣＲ反应体系为：试剂每２０山体系用量ｃＤＮＡ２山Ｆｏｒｗａｒｄｒｉｍｅｒ０．５ｕｌｐＲｅｖｅｒｓｅｒｉｍｅｒ０．５ｕｌｐ？ＳＹＢ民⑥ＰｒｅｍｉｘＥＸＴａ１０ｕｌｑＲＮａｓｅｆｒｅｅｄＨ２〇７ｕｌ２１
广巧大単硕女羊租论文生长巧节制巧按四李誓义眼Ｘ李成花机理的巧步研究２．６．７四季蜜龙眼／Ｔ同源基因表达载体构建发遗传转化在本试验中，超表达载体ＰＢＩ１２１被巧来进行基因的功能分析，ＰＢＩ１２１质粒２－图谱如图１。用ＩＢＩ１２１质粒所示酶切Ｐ，根据试剂盒提供的在线引物设计：／／ｂｉｏｉｎｆｏｃｏｎｔｅｃｈｃｏｍ／ｉｎ扣ｓｏｎ／程序（ｈｔｐ．ｌ．ｉ）设计引物，ＰＣ艮扩增带终止密码子的０ＲＦ序列－，通过ＩｎＦｕｓｉｏｎ？ＨＤＣｌｏｎｉｎｇＫｉｔ将目标基因插入１１２１超表达载体阳ＣａＭＶ３５Ｓ－启动子之后。构建的重组表达载体分别命名为：ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ１和－－－ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ２。采用液氮冻融法将构建的载体ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ１和ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ２分别转化到农杆菌ＥＨＡ１０５中（Ｈｏｌｓｔｅｒｓｅｔａｌ．，１９７８）。最后通过花粉管导入法将目标基因转入拟南芥中，具体步骤如下：ｎｏｂｅｌ＊ｃｏｍ１＾么１４＞：／／１＞＾声：挪銳片＊〇〇？１ｄｉａｌ拟４Ｕ巧Ｉ？诚別㈱傲》！Ｉ、＼／偏（１３２０巧＼＼／／３紛ＰＪ，…隣Ｍ１２８２９ＨＩ８巧（）嗎杉；＾（）－ｔｅＰ施。Ｉ？８巧）斗覇／締灣圍ｐ翁ｒ１４７５８ｂＩｐ巫！…阔Ｉ严Ａｖａｌ（？３６８＞瓜巧１玄巧＾齡减二。柳）畫聲Ａ＊。９０３２０！（巧〇＾＼魏Ｍａｉｍｓ？）＾｜＼＼１投ｓ斗１／ｗＲｉＣ。ｉｐ）＼＾接＇Ｍ７９０６ｌ３４４６Ｃ｝Ｉ＼Ｉ＼＼＼Ａｖａ（）１Ｖ＼＼ｊＫａｊｗ１１０５１４００５Ｉ＼（）Ｉ＼＼＼１柳）４９９７＼＾（）ＩＩＡｖａｌｉＳｍ）ＩＴｒｔＡ＼２－图１ＰＢＩ１２１质粒图谱（引自：诺贝尔学术资源网）Ｆ－ｗｏｒｋ）ｉ．２１ＴｈｅｌａｓｍｉｄａｔｌａｓｏｆＰＢＩ１２（ｅＡｄｉ民ｓｏｕｒｃｅｓＮｅｇ１Ｆｒｏｍ：Ｎｏｂｌｃａｅｍｃｅｔｐ２２
广巧文＾ａ５＾＾古＃ｔｆｃ论义生长巧节泡巧巧巧争妻义化ｊｃ＃成花化理巧扬步巧巧（１）根虹－Ｆｕｓｉｏｎ？ＨＤＣｌｏｎｉｎＫ据ｇｉｔ说明书提供的在线引物设计软件设计引物，ＰＣＲ扩增获得四季蜜巧眼ＦＴ同源基因ＯＲＦ序列全长，带终止密码子。引物生工生物工程（上海）有限公司合成，名称和序列如下；引物名称引物序列（下划线序列为载体重组序列）－ＺＤＷＴｌＦＣＡＣＧＧＧＧＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＴＣＴＡＧＡＡＡＴＡＧＡＧＡＴＣＣＴＺＤＵＴ－１ＲＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＴＣＴＡＧＡＴＴＡＴＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＣＡＣＣＡＧＡＺＤ－１ＦＴ２ＦＣＡＣＧＧＧＧＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＴＡＧＧＧＡＴＣＣＴＺＤＬＦ。－民ＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＴＣＴＡＧＡＴＴＡＴＣＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＧＧＡＷ２．６．４ＰＣＲ中保存的测序正确的含有目的基因的阳性菌液作为模板，反应体系和反应程序如下；试剂每２５山体系用量菌液模板５ｕｌＦｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒ１ｕｌＲｅｖｅｒｓｅｒｉｍｅｒ１ｕｌｐＰｒｅｍｉｅＳＴＡＲＭａｘＰｒｅｍｉｘ１２．５ｕｌＲＮａｓｅｆｒｅｅｄＨｉＯ５．５ｕｌ。ＰＣ艮反应程序参数为％Ｃ，５ｍｈｉ；９８ｒ，１０ｓｅｃ；５５ｒ，５ｓｅｃ；７２。１０ｓｅｃ；３０个循环；７２Ｃ延伸６ｍｉｍ１（ＴＣ停止保存。琼脂糖凝胶电泳检测，胶回收目的基因ＰＣＲ产物。（２）况ａｌ酶切ｐＢＩ１２１质粒酶切反应体系：ｐＢＩ１２１质粒７５ｉＬ［ｘＭｌＯＢｕｆｆｅｒ１０Ｘｂａｌ５ｉＬ＾０．１％ＢＳＡ１０ｉＬ＾Ｔｏｔａｌ１００ｘＬ＼３７ｒ恒温水浴过夜连接。（３）酶切产物的回收：２３
广巧大集硕古半化论文生长巧节巧巧锭四李巧义眼义李成花机理的巧步研究°－１）１００山的连接产物介入等体积的异丙醇（预冷）８０Ｃ放置Ｉｈ。，ｒ＇、２０２）１３０００ｐｍ离巳ｍｉｎ，弃上清液。）己醇洗涂１次１、ｍｉｎ。３加入３００ｕｌ７０％的冷３０００ｒｍ离屯ｌＯ，；ｐ吸干乙醇４）加入２５山ＲＮａｓｅｆｒｅｅ姐２〇溶解沉淀。５）产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳检测，若有ＰＢＩ１２１的大片段条带，则回收成功。－（４）Ｉｎ扣ｓｉｏｎ酶连接；义６ａＩ酶切ｐＢＩ１２１质粒３［ｘＬＩ－ｆｕｎｓｉｏｎ２ｉＬ［胶回收的５目的基因咕Ｔｏｔａｌ１０［ｉＬ°反应参数：５０Ｃ在ＰＣ艮仪温育３０ｍｉｎ，冰浴５ｍｉｎ，向１０ｕｌ连接产物中加°－Ｃ１０山ＲＮａｓｅｆｒｅｅｄ此０２０保存。连接产物的转化的方法同２．６．４。但是筛选转化子的抗生素用Ｋａｎ替代Ａｍｐ。－采用菌液ＰＣＲ方法对过夜培养的菌液进行检测，所用两对引物分别为ＮｐｔＩｌｆ和－－－－－ＮｔＩｌｒＷ及特异引物ＺＤＦ、ＺＤ１ＦＴ１民ＺＤ１ＦＴ２Ｆ、ＺＤ１ＦＴ２Ｒ。ｐ１ＦＴ１和对ＰＣ民检测呈阳性的菌液扩繁提取质粒ＤＮＡ，质粒的提取采用生工生物工程（上海）有限公司Ｓａｎｐｒｅ柱式质粒ＤＮＡ小量抽提试剂盒，详细操作步骤见ｐ’说明书－Ｃ冰箱。检测呈阳性的菌液加等体巧６０％甘油保存于８０，短期保存可把’菌液存放在４Ｃ冰箱里。（５）超表达载体向农杆菌ＥＨＡ１０５的转化（冻融法），具体步骤如下：－１２０－１）分别吸取１０的纯化质粒口８１１１？了１和ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ２入到２０，加０山的感受态ＥＨＡ１０５里面，冰浴３０ｍｉｎ。°２）液氮速冻２ｍｉｎ后，立即置于３７Ｃ水浴５ｍｉｎ。°３、ｒｍ、２Ｃ）向离屯管中加入８００叫ＹＥＰ液体培养基（不含抗生素），２５０ｐ８预表达５ｈ。４）将１００叫菌液均匀涂布在含利福平２５ｍｇ／Ｌ和Ｋａｎ１００ｍｇ／Ｌ的ＹＥＰ固’体培养基里，２８Ｃ培养２ｄ，即可见菌落。－ＢＩ－５）含Ｐ１２１Ｄ１ＦＴ１和阳Ｉ１２１Ｄ１ＦＴ２质粒的农杆菌采用ＰＣ艮鉴定。所用２４
广巧大＊项古単位论义生长用巧贵Ｊ用拉四？妻义化ＪＬ？成花化理的初步巧巧－－两对引物分别为－、１Ｒ和ＤＩＦＴ２－－ｒ、Ｎ－ｆ。Ｄ１ＦＴ１ＦＤ１ＦＴＲ、Ｄ１ＦＴ２ＦＷ及Ｎｐｔｌｌｐｔｌｌ°－Ｃ将检测正确的农杆菌菌落培养物与灭菌的如％的甘油充分混合均匀后，７０保存，下次用之前需激活。（６）农杆菌介导的花粉管导入法转拟南芥具体步骤如下：１）将生长２个月左右的含有花荀的化南芥进行干旱处理，即在侵染前期。少镜水，表现为有轻微的萎焉，在侵染前摘除已开放的花朵２）将茜液和含有相同抗生素的５０ｍｌ：ＹＥＰ液体培基按照２１００的比例混’匀，２００ｒｐｍ２８Ｃ培养到１６ｈ。６０００ｒｐｍ离也５ｍｉｎ，弃上清液，收集适量的菌体。３）配制５００ｍｌ的１／２ＭＳ＋５％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋ｌＯＯｕＩ／ＬＳｉｌｗｅｔＬ７７液体培养基重悬菌体作为侵染液。４）将花荀充分浸入浸染液中５０ｓｅｃ，然后暗培养Ｉｄ后，将其正放于正常光照下培养。一５）每隔１周侵染次，直至没有花巷。６）待果英发育完全，种子成熟后收获ＴＯ种子。２５
广巧大聲硕女單位论义生长调节制巧控四李巧义化夏李成花机理的巧步研究第Ｈ章结果分析３．１四季蜜龙眼夏季集中成花调控效果与分析３．１．１春季修剪前后树体生长情况３－春季修剪调查结果见表１，平均每株剪曰数３３．６个，平均剪曰直径１．１ｃｍ，修剪后树高比修剪前降低％．６％，冠幅减少３８．８％，复叶数减少７５％，可见春季修剪量较大。春季修剪有利于矮化树冠和减缓株间交叉，修剪前后树体状态如图－－－－３－－－－Ｂ所示Ｄ为二１Ａ、图３１疏芽定梢后如图３１Ｃ所示；图３１；剪口次梢老熟时树体状态。修剪后抽生由两次夏梢组成的结果母枝单元：平均每株有结果，调查结果如下１ｃｍ母枝单元４４．６条，平均长度７．９，平均每枝复叶数１８．３张，达到健壮结果母（２０１１宇等１９９９）。枝标准朱建华等，；黄富，可见四季蜜龙眼耐强修剪，重修剪后恢复生长较快。ｆｅＢｌＡＢ转下图２６
广西大学硕女単位论文生长调节制调按四争巧龙眼又李成花机理的巧步巧巧ＣＤ－图３１四季蜜龙眼田间各阶段生长情况观察注：Ａ：修剪前Ｂ：修剪后Ｃ：疏芽定梢Ｄ：剪口二次梢老熟３－１Ｏ巧ｉｆｅ巧打ｔｒｏｗｉｎｓｔａｅｓｏｆｔｒｅａｔｅｄｔｒｅｅｓｏｆＳｉｉｍｉｌｏｎａ打昏ｇｇｇｊｇＭｎｄＮｏｔｅ：Ａ巧ｅｆｂｒｅＳｐｒｉｎｇｐｒｕｎｎｉｎｇ；Ｂ：ＡｆｔｅｒＳｐｒｉ打ｇｒｕ打ｎｉｎ；Ｃ：Ｓｈｏｏｔｓ化ｍｎｉｎ；Ｄ：ａｔｕｒｅｄ２ｐｇｇｓｈｏｏｔｓ．３－表１四季蜜龙眼春季修剪前后调查结果＊Ｔ－ａｂｌｅ３１民ｅｓｕｌｔｓｏｆｕｖｅｉｅｅｒｉｒｕｉｓｒｙｂｅｆｏａｎｄａｆｔｓｒ打ｎｉｎｏｆＳｉｉｍ１〇打ａｎｐｇｐｇｊｇ￣￣＾剪品径剪商量Ｓ复＞数／ｃｍ／（个／株）ＣｒｏｗｎＰｌａｎｔｈｅｉｈｔＣｏｍｏｕｎｄｌｅａｆｎｕｍｂｅｒｇｐ比修萌比修煎修剪前前＾加ｉｎＣ山修剪前修剪后修剪前修剪后修剪剪前ｐｒｏｊｅｃｔ前这前进张４山ａｍｅｔｅｒｎｕｍ户ｂｅｒ／ｃｍ／ｃｍ／ｃｍ／ｃｍ＿（张／鼠枝）常减少／％／％／％枝）最大值１．９４４２９４．０１７８．２３９．３２４０．３１７７．５：２６．１５０．０１０．０８０．００．６２１７．２．７３８１最小值１８１１４．７７３．８１２１．９２８．９９．０２．０７７．８１２１６２１３３．６．９１：３．８３８８２２６３１６６２２６６２１６５４７５．０平巧值．．．．．．．３．１．２成花调控效果本试验中对照植株不成花，第２次夏梢老熟后继续新梢生长３）。（见附录处理植株在应用外源生长调节剂调控后，第２次夏梢进入花芽分化，逐渐形成花穗并开花（见附录３）。通过田间观察，将四季蜜龙眼成花调控处理后的成花过４￣程划分为个时期：（１）顶芽萌动时期（３ｄ７ｄ）：此时期顶芽由未萌动的叶芽状态逐渐伸长ｄ￣ｄ，由僵硬变软，丝状小叶伸展（２）花序原基出现期（８１２）；；＂＂丝状小叶肢间出现花序原基（又称为红点），逐渐生长为混合花芽；（３）２７
广西大単硕古単位论文生长巧节制调控四争巧义巧义李成花机理的巧步研免￣花穗生长期（１２ｄ２４ｄ）合花芽继续生长，丝状小叶逐渐脱落，花穗主、；混５：２后花穗中的小花陆续开放侧轴生长，花蕾形成；（４）花期。－３－２调控成花情况见表。从表３２可见对照植株不成花；处理植株成花株为１００％，，率成花枝率达９８．４％，处理姐和对照组之间差异极显著可见处理对成花影响很大；花穗平均长度为１９．４ｃｍ，宽度１７．６ｃｍ，花穗抽生整齐且发育良好（－见图３２），试验处理取得了较好的成花调控效果。－表３２成花情况调查（不同处理对四季蜜龙眼夏季成花的影响）Ｔａｂ３－２ＥｆｆｅｃｔｒｎｏｆｍｌｅｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｎｈｅｓｕｍｍｅｒｆｌｏｗｅｉｇＳｉｉｉｊ项目单位均值最大值最小值ＰｒｏｅｃｔｊＭＵｎｉｔＡｖｅｒａｅＭａｘｉｎｇ￣￣￣￣￣花穗长是ｃｍｉ９．４２７．５８．０Ｐａｎｉｃｌｅｌｅｎｔｈｇ花穗宽度ｃｍ１７７．３．６２４．０ＰａｎｃｉｌｅＷｉｃｋｈ处理成花株率＊＊ＴｒｅａｔｍｅｎｔＴｈｅｒａｔｅｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎ％１００．０１００．０１００．０ｇｔｒｅｅ成花枝率＊＊Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｇ％％．４１００．０９３．０ｂｒａｎｃｈ成花株率Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｇ％０００对照ｔｒｅｅＣＫ成花枝率Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｇ％０００ｉ打ＣＫ＊＊＊往：表示差异极显著；表示差异显著；不标往表示无显著差异（下同）。Ｎ＊＊＊＊ｏ化：Ｅｘｔｒｅｍｅｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａ打ｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ；Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒａｉｃｅ；Ｎｏｔｍａｒｋｅｄｓａｉｄ化ｅｉｅｗａｓｎｏｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＴｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ．ｇ（）２８
广巧大单硕古単位论义生长调节刺巧控四李巧义眼义李巧花机理的巧步研突隱图３－２处理后四季蜜龙眼成花效果Ｆ－２ｉ．３ＦｌｏｗｅｒｉｎｇｒｅｓｕｌｔｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｉｎＳｉｉｍｉｌｏｎａｎｇｊｇ３．２叶片内源激素的变化分析３．２．１叶片中ＩＡＡ含量的变化－经Ｔ检验二者方差整齐＞由图３３可知，，Ｓｉｇ值０．２３０．０５，说明在０．０５的湿著水平下，处理姐和对照纽无显著性差异。？理组叶片内处理ＯｄＩｄ，处ＩＡＡ含量与对照组的相差不大，处理后第３ｄ，￣处理组叶片ＩＡＡ含量略低于对照组。处理组０ｄ３ｄＩＡＡ含量较低，低于对照组；３ｄ？５Ａ的含量逐渐升￣ｄＩＡ高，５ｄ１２ｄＩＡＡ含量高于对照组，花序原基出现期一＜（８ｄ）出现个峰值，Ｓｉｇ值０．０４０．０５，与对照在数值上有显著差异；１６ｄ降至最低随后上升？￣。但处理组Ｏｄ３ｄ、８ｄ１２ｄ叶片中ＩＡＡ的含量明显下降，可能此时期小叶生长，导致ＩＡＡ的含量降低；也可能是ＰＰ３３３和乙婦利对ＩＡＡ具有抑制作用，而顶芽萌动期和花序原基出现期，１乂人的含量处于较高水平。所［＾说顶芽由生理分化转为花芽分化的过程中一，叶片中定程度的高ＩＡＡ含量有利于四季蜜龙眼花芽分化，花穗生长期和花期需要较高水平的ＩＡＡ。２９
广扭大単硕古学位论文生长巧节制调泣四李巧义化王李巧花机理的扬步研典４００舍ＣＫ］３－关触Ｉ５０＾３０Ｑ￣／２００－曼＾＾＜－１５０－１孤５０－．。ＪＪＪＩＩＩ｛ＪＯｄＩｄ３违５ｄＳｄ！２ｄ１６２０２５ｄｄｄ处理天数／＜ｉＤａｙｓａｆｔｅｒｐｒｏｃｅ＾ｉｎｇ－乙締利和ＰＰ图３３３３３处理对叶片嘲噪乙酸含量的影响－３ＣｈａｎＦｉ．３ｇｅｓｏｆＩＡＡｃｏｎｔｅｎｔｄｕｒｉｎｇｆｌｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｉｉｍｉＬｏｎａｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｊｇｅ化ｅｈｏ打ａｎｄＰＰ３３３ｐ３．ＩＰ．２２叶片中Ａ含量的变化－４可见经Ｔ检验二者方差整齐＜由图３，，Ｓｉｇ值０．０３０．０５，说明在０．０５的显著水平下，处理组和对照组有显著性差异。￣￣ｌｄ８ｄ，处理组叶片ＩＰＡ含量缓慢上升８ｄ１６ｄ处理，含量急剧增加，并达到峰值１７０ｎｇ／ｇ，Ｓｉｇ值０．０４＜０．０５，与对照组在数值上有显著差异，因此推测花芽分化需要较高水平的￣ＩＰＡ１６ｄ２５ｄＩＰＡ的含量下降对照姐的ＩＰＡ含量；；而￣２在３ｄ５ｄ均低于处理。说明ＰＰ３３３和乙婦利处理増加了ＩＰＡ的含量，叶片中较高水平的ＩＰＡ有利于花芽分化。３０
广西大単硕古学化论文生长巧节制巧控四李巧义眼Ｘ李成花机理巧巧步研凤＾泌日ＣＫ１巧扫－备处巧－１６０１４０？ｉｒ諸：＆如－￥４０－２０－０！Ｉ１［｛ｉＪｉＩＯｄ＾ｄ３＜１５ｄ８ｄ１．２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ化理天数／ｄＤ巧ｓａｆｔｅｒｒｏｃｅｓｓｉｎｇｐ３－４乙ＰＰ图婦利和３Ｗ对叶片异戊巧基腺嘿吟含量的变化的影响－ｓｏｆＩＰＡｃｅｒｒａ．４ＣｈａｎｇｅｉｉｉｍｉＬｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＦｉ３ｏｎｔｅｎｔｄｕｒｉｎｇｆｌｏｗｆｏｍｔｏｎｏｆＳｊｏｎａｎｇｇｅｔｈｅｈｏｎａｎｄＰＰ３３３ｐ３．２．３叶片中ＧＡ含量的变化－过程中处理组叶片ＧＡ的含量低于对照組由图３５，经Ｔ检可知，成花调控＜００５值０．０５．，验，二者方差整齐，Ｓｉｇ．０２８０，说明在的显著水平下处理组和对照组有显著性差异。在顶芽萌动时期处理组和对照组ＧＡ的含量分别由最高峰值２０２．６ｎｇ／ｇ和２１９．７ｎｇ／ｇ的高水平迅速下降，但处理组下降幅度较大，在第３ｄ出现谷值，Ｓｉｇ＜，．０．０１３０．０５理与对照在数值上有显著差异。随后处于较低水平的波动处值，处？理１２ｄＧＡ的含量略有上升。处理８ｄ口ｄ花序原基出，而对照组处于下降状态。，，推现，由生理分化转向花芽分化由此可见ＰＰｗ和己締利降低了ＧＡ含量。测在顶芽萌动期和花序原基出现期，叶片中低水平的ＧＡ利于花芽分化３１
广西大单项古単征论文生长巧节制巧投四李巧义化无孚成花机理的巧步研究２５０卡ＣＫ１巧泌－ＱＩ！ｒ１｝！＼ｉ！Ｏｄ圭立３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ圭６＜！２０ｄ２５ｄ处理天数／ｃｉＤａ３ａｆｔｅｒｒｏｃｅｓｓｉｎ＞ｐｇ图３－５乙婦利和ＰＰＧＡ３３３处理对叶片含量的影响－５Ｆｉ．３ＣｈａｎｅｓｏｆＧＡＣ０打化ｎｔｄｕｒｉ打打ｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｉｉｍｉＬｏｎａｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｇｇｊｇｅｔｈｅｐｈｏｎａｎｄＰＰ３３３３．２ＡＢＡ．４叶片中含量的变化由图－３６可知，处理组和对照组在成花调控过程中ＡＢＡ含量动态变化趋势一＞０较致。二者方差不整齐，Ｓｉ值０．１９２．０５显著水平经Ｔ检验ｇ，说明在化０５的下，处理组和对照组无显著性差异。由ＡＢＡ含量的变化趋势可看出￣ＡＢＡ，在处理０ｄ３ｄ处理组叶片含量下降到最低值８０￣．８ｎ／，在处理３ｄ８ｄ顶芽萌动时期到花序原基出现ｇｇ，处理组ＡＢＡ含量逐步上升高于对照一，并在８ｄ有个峰值，但与对照并无显著差异理１２；处ｄ？１６ｄ，处理组ＡＢＡ含量下降，可能是由于混合花芽小叶的生长影响了花芽分化；而后处理组ＡＢＡ含量大幅度上升，可能与间隔７ｄ喷药增加了ＡＢＡ的含量有关。说明顶芽萌动期和花序原基出现期，叶片中较高水平的ＡＢＡ含量能促进花芽分化，花穗生长期和花期也需要较高水平的ＡＢＡ含量。３２
广苗大学硕古単位论文生长巧节制调控四孕巧义眼玉李成花机理的巧步巧究２５０］备ＣＫ：．２旅—皆化巧。。－／ＣＳ＊＾５０－０ｔＥＪＩｉＩ！ＩＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ处理夭数／ｄＤａｙｓａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ３－６艺ＰＰＡＢＡ图締利和３３３处理对叶片含量的影响－ｉ円ｉ６ＣｈａｎＡＢＡｔｄｗＦ３ｅｓｏｆｃｏｎｔｅｎｔｄｕｒｎｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｉｍｉＬｏｎａｎｒｅａｔｅｉｔｈｉｇ，ｇｇｊｇｅｔｈｅｐｈｏｎａｎｄＰＰ３３３３．２．５叶片中内源激素动态平衡的变化３－７ＰＰ乙婦利处理促使叶片中ＩＰＡ／ＩＡＡ平衡发生变化的效果见图，（１）３３３与￣ＰＡＩＡＡ处理后３ｄ１６ｔ处理组叶片中Ｉ／比值高于对照组，此时期是花芽分化的￣化完成８ｄ１２ｄ期间花序原基出现，此时期重要时期，祿志着花芽分。处理ＰＰＩＰＭＡＡ比值显著增加，在处理１６ｄ上升到最大值而后下降。这说明３３３和艺婦利处理提高了。ＩＰＡ／ＩＡＡ的比值有利于花芽分化３３
广西大単硕古学位论义生长巧节制巧控巧李巧义眼正李成花机理的巧步研免１．２■＂■贼；。：．ＩＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄＤｉｙｓａｆｔｅｒｒｏｃＫｓｉｎｐｇ－己締利和ＰＰ图３７３３３处理对叶片ＩＰＡＩＡＡ值的影响／－ＡＦｉ．７ＣｈａｎｅｓｏｆＩＰＡ／ＩＡｄｕｒｉｎ打ｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｉｉｍｉＬｏｎａｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｅｔｈｅｈｏｎａｎｄｇ３ｇｇｏｆｊｇｐＰＰ３３３ＰＰ理促使叶片中－（２）３Ｕ与乙帰利处ＩＰＡ／ＡＢＡ平衡发生变化的效果见图３８，处理３￣ｄ２０ｄ，处理组的ＩＰＡ／ＡＢＡ比值总体高于对照组，说明ＰＰ３３３和己締利处理提高了ＩＰＡ／ＡＢＡ比值，表明较高的ＩＰＡ／ＡＢＡ比值有利于成花。？ＣＫ：■化理１．８］１．６Ｔ－１．４ｊ麵ｉｉｉｌｌｌｉｍＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ化理天穀［，ｄＤａｙｓａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｉｉ吕３－乙筛利和ＰＰ３图８巧处理对ＩＰＡＡＢＡ值的影响／Ｆ－Ａ良Ａ化ｉ．３８ＣｈａｎｅｓｏｆＩＰＡ／ｄｕｒｉｎｆｌｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｉｉｍｉＬｏｎａｎｔｒｅａ化ｄｗｉ化ｅｅｐｈｏｎｇｇｇｊｇａｎｄＰＰ３３３３４
广巧乂単硕古単化论文生长调节制调控四孕实义设玉孚成花机理的扬步研巧３．３四季蜜龙眼叶片营养物质的分析３．３．１叶片中可溶性总糖含量的变化－＞０从图３９可见，经Ｔ检验，二者方差整齐，Ｓｉｇ值化３２．０５，说明在０．０５￣的显著水平下。在处理５ｄ１２ｄ时，处理组的可溶性，处理和ＣＫ无显著性差异一个峰值＜，Ｓｉ值化０３０．０５，说明对糖含量明显高于对照，花芽分化过程中出现ｇ照与处理在第１ｄ在数值上有显著差异。说明花芽分化需要大量的可溶性糖。处２０￣５理１６ｄ时，可溶性糖含量达到最低点；处理ｄ２ｄ溶性糖含量又有所提高，而对照的变化较平缓，说明顶芽萌动期和花序原基出现期需要叶片中大量的可溶性总糖为其提供碳源和营养，进而诱导花芽分化：花穗生长期消耗了大量的可溶性总糖。４０备ＣＫ旨］３５－务处王里句｜顔；畔。－Ｔ墨Ｉ键旨－１０５－—＊Ｅ。０１ＩＩＩＩ！ＴＩ１ＩＯｄＩｄ３ｄ５ｄＳｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ处理天数ｄＤａｙｓａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ３－９乙ＰＰ图締利和３３３处理对叶片可溶性总糖含量的影响－ｒｎｗｒｍｏＬａｎｒｅａｄＦ．ｏｌｕｂｌｅｓｕａｒｃｏｎｔｅｎｔｄｕｉｆｌｏｅｒｆｏａｔｉｏｎｆＳｉｉｍｉｏｎｔｔｅｉｇ３９Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｇｇｊｇｗｅｅｈｏ打ｄＰＰｉ化ｔｈｐａｎ３３３３．３．２叶片中淀粉含量的变化－３１０，由图可见，处理组的淀粉含量在成花转变过程中先上升后下降之后逐渐趋于稳定的变化趋势，；而对照沮的淀粉含量下降后相对稳定变化幅度不大。３５
广西大柴硕古単位论文生长巧节制调沒四李餐义眼ｘ孚成花机理的巧步研究经Ｔ检验，二者方差整齐，Ｓｉｇ值化０７５＞０．０５，说明在化０５的显著水平下，处理组和对照组无显著性差异。一￣３ｄ，处理ｌｄ时对照组淀粉含量上升，出现个峰值，Ｓｉｇ值０．０１０．０５，ｄ在数值上差异极显著？说明处理组与对照组的在第１。而花序原基出现在８ｄ１２ｄ，说明顶芽萌动时期大量的淀粉的积累有利于花芽分化。此后淀粉含量下降，送种变化可能是花芽分化及花穗生长需要消耗大量的淀粉，用于呼吸消耗及构建生殖器官。５０Ｘ］．．－／＼＾３５１－＼ＩＩ＼－Ｍ１０＂、ＪＰ５—０＿ｉｉｉｊＩＩｉｉｉｉＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ处理天觀’ｄＤａｙｓａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｉｉ呂３－ＰＰ图１０乙締利和３３３处理对叶片淀粉含量的影响Ｆ－Ｌｉ．３１０ＣｈａｎｅｓｏｆＳｔａｒｃｈｃｏｎｔｅｎｔｄｕｒｉｎ円ｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｉｉｍｉｏｎｇａｎ化ｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｇｇｊｅ化ｅｈｏｎａｎｄＰＰ３３３ｐ３．．３３叶片中游离氨基酸含量的变化一一３－由图１１可见，处理组和对照组叶片中游离氨基酸含量在第次和最后次测定的结果（起点和终点）几乎相同，但中间变化不同。经Ｔ检验，处理组和对照组无显著性差异。３６
广巧大单硕古単位论文生长调节制调控四李巧义眼无李成花机理的巧步研兜ＭＯＯ－Ａ￣ＣＫ－２００户ａ１化理３。。—Ｐ尴言她岩－４００ｍＩ煙８２００－巧扫广ｉ０！Ｉｉｉ１＼ｉ０过３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ／ｄａｓｆｔｉｎ处理天数Ｄｙａｅｒｒｏｃｅｓｓｇｐ－乙帰利和ＰＰ处理对叶片游离氨基酸含量的影响图３１１３３３－ＬｒｅＦｉ．３１１Ｃｈａｎｅｓｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｄｕｒｉｎｆｌｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏ打ｏｆＳｉｉｍｉｏｎａ打ｔａｔｅｄｇ吕ｇｊｇｗ細ｅ化ｅｐｈｏｎａ打ｄＰＰ巧３义３．４叶片中可溶性蛋白含量的变化？－３ｄ可组的由图３１２可见理Ｏｄ，处理组和对照，处溶性蛋白含量缓慢下降变化相差无几。经Ｔ检验二者方差整齐，Ｓｉｇ值０．１８５＞０．０５，说明在０．０５的显著水平下。，处理组和对照组无显著性差异￣７２５ｄ．８处理８ｄ，处理组的可溶性蛋白的含量大幅度提高，达到最大值Ｓ，处理组和对照组在处理５ｄｍｇ／ｇ，且明显高于对照，ｉｇ值０．０２＜０．０５有显著差。，说明可溶异，此后趋于平稳。随后花序原基出现可溶性蛋白的含量迅速降低一种重要的能量物质直接或间接参与了分化过程性蛋白的含量在成花期作为。综合游离氨基酸和可溶性蛋白（含Ｎ化合物）含量测定结果来分析可知，，在本试验的处理条件下，处理组中游离氨基酸含量与对照的差异不明显但两者３１（花芽分化差异显著．３．３．３．２碳水化，结合和测定的叶片中的可溶性糖与淀粉合物，，可见在花）含量的变化来分析处理组的碳水化合物含量明显高于对照纽芽分化过程中，处理组的叶片中Ｃ／Ｎ比值高，有利于四季蜜龙眼的花芽分化。３７
广巧大学硕古单位论文生长巧节制巧性四爭巧龙眼Ｘ孚成花机理的初步巧究撕］．￡７０－ｐ＾■口°。。３０－Ｓ■强ＯＴ４－？品２０－§厅－里１０－Ｉ０Ｈ［！Ｉｒ｝ＩＩＩＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄＪ２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄ处理天數／ｄＤａｙｓａｆｔｅｒｐ脚ｃｅｓｓｉａｇ３－１２己締利和ＰＰ图３３３处理对叶片可溶性蛋白质含量的影响－１２Ｃｈａｔｏｉｔｄｉｎｅｓｏｆｓｏ山ｂｌｅｒｏ１ｉｒｉ打ｆｌｏｗｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｉｉｍｉＬｏｎａｎｔｒｅａｔｅｄＦ．３呂：ｅｎｃｏｎｕｇｊｇｇｐｗｅａｉ化ｔｈｅｐｈｏｎｎｄＰＰ３３３３．４四季蜜龙眼厂ｒ同源基因克隆与生物信息学分析３．４１ＲＮＡ．总提取采用改良华越洋试剂含提取四季蜜龙眼叶片中的总ＲＮＡ，并对ＲＮＡ中ＤＮＡ５－进行消化，然后在１．％的琼脂糖凝胶电泳上进行检测，如图３１３所示。通过琼脂糖凝胶电泳检测所提取的总ＲＮＡ质量较好，结果显示１８Ｓ和２８Ｓ条带清晰ＤＮＡ￣。ＤＮＡ条带主１０００４００明亮，无残留条带改良试剂盒法的ｃ要分布在ｂｐｂｐ之间，分布范围广，并且浓度高，ＲＮＡ和逆转录得到的ｃＤＮＡ可进行后续实验。３８
广田大学硕古单位论文生长巧节制调控四孚巧义眼义李成巧机理巧巧步研免ＭＭ…。。ｂｐＷａｍ＾ＢｍＡＢＭ麵ｂｐｃ３－ＲＮＡ图１３琼脂糖电泳图注：Ａ：改良ＲＮＡ试剂盒法；Ｂ：去除ＤＮＡ后的ＲＮＡ；Ｃ：所得ｃＤＮＡ电泳图＊Ｆ３－ｍａ１ｒｏｓｅｅ１ＲＮＡＮＡｉＢ：ＤＮＡｉ．３Ａａｌ６１６口１〇１〇化５１５ｏｆｏｔｅ：：Ｍｏｄｉｆｉｅｄｋｔｍｅｔｈｏｄｇｇ；ｇ口ｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＲＮＡＣ：ＥｌｅｃｔｒｏｏｒｅｓｉｓｏｆｃＤＮＡ；ｐｈ３．４．２／Ｔ同源基因的克隆采用同源克隆的方法，利用特异引物对混合ｃＤＮＡ模板进行ＰＣＲ扩增，经过琼脂糖凝胶电泳、胶回收、片段连接、转化大肠杆菌、菌液ＰＣＲ验证、阳性克隆去公司测序等步骤，成功获得两个四季蜜龙眼／Ｔ同源基因ｃＤＮＡ全长序列，分别为８９３ｂｐ和八３ｂｐ，命名为公／Ｆ７７和公ＷＴ２，并对两者的氨基酸序列与基－－７１４、１５）。７＞／Ｆ因序列进行比对（图３图３同源分析表明：Ｔ２开放阅，公／Ｆ和￡读框（ＯＲＦ）都为５２５ｂｐ，各编码１７４个氨基酸，公／Ｆ７７和公／Ｆ７７核昔酸同源性为９０％，两者所编码的蛋白质存在２４个氨基酸残基的差异。３９
广苗大单硕古単位轮文生衣巧节制巧泣四孚巧义化无李成花机理的扬步巧究将Ｎ畑Ｉ中找出的其它６个物种的Ｆｒ同源基因序列，与四季蜜龙眼的２个Ｆｒ基因序列一起，利用ＤＮＡＭＡＮ软件进行序列比对，分析其同源性。所得结果为－：８个序列的同源性为４６．６９％。图３１６中，绿色方块包含的基因序列同源５０％红色方块的同源性含７５％１００％。四季蜜性含，，而黑色区域的同源性级别为龙眼的３个Ｆｒ基因序列的ＯＲＦ长度与其它Ｆｒ基因序列的ＯＲＦ长度均相似，５２５ｂ，都编码了７４长度为ｐ左右１个左右的氨基酸。ＤＬｍＭＳＪｍＲＤＰ巳＆ＶＧ扶ＶＩＧＤＶＬＤＰＦＸＲＳ王ＳＬＳ王ＳＹＨＮＩＵＵ：巧ＮＧＹＥＬＫＰＳＱＴＶＮＱＰＲＶＤＩＧＧＤＤＬＤＬＦＸ２ＭＰＲＤＲＤＰＬＷＧＲＶ王ＧＤＶＬＤＰｒｒＫＳ３：ＳＬＳＶＳｙＮＮＲＥ玉ＮＮＧＣＥＬＫＰＳＱ王ＶＮＱＰＲＶＮＩＧＧＤＤ巳ＤＬＢＴｌｆ＾ＴＦＹＴＬＶＭＶＤＰＤ＆ＰＳＰＳＤＰＴＬＲＥＹＬＥＷ巳ＶＸＤ王ＰＡＴＴＧＡｌ：ＦＧＱＥＡＶＳＹＥＳＰＲＰＴＹＧＩＨＲＦＶＤ巳Ｆ１２＆ＴＣＹＸ：ＬＶＭＶＤＰＯＡＰＳＰＳＥＰＳＬＲ￡ＹＬＨＷＩ＊ＶＸＤ王Ｐ＆ｒｒ岛ＰＴＦＧＱＥＷＳＹＥＳＰＲＦＴＭＧ王ＨＲＦＶ＇＊Ｆ＆ＧｆｌＧＴＶＮ＆ＰＧＷＲ〇Ｅ？ＤＬＦＩｌＦＶＸ＾Ｋ＾ｆＥＫＸ＾ＤＥ＆ＥＩＹＮ＾ＧＳＰＶ＆ＡＶＹＦＮＣＧＲＥＩ！５ＧＧ５ＲＲＤＬＦＸ２ＦＶＬＦＱＱＰＳＲＱＴＭＹＡＰＧＷＲＱＮＦＮＸＫＤＦＡＥＬＹＮＬＧＳＰＶＡＡＶＹＦＨＣＱＲＥＳＧＳＧＧＲＲＲ３－４７７公巧Ｔ图１四季蜜戈眼公／Ｆ与２蛋白质氨基酸残基序列比对－ｍＦ．３１ＡｉｔｏｆｔｅｉｎｏａｃｉｄｕｅｎｃｅｏｆｉｍＬ￡）Ｆｒ７凸妒７２ｉｇ４ｌｇｎｍｅｎｈａ巧ｑＳｉｉｏｎａｎ／ａｎｄｊｇ４０
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广西大学硕古単位论文生长巧节巧调控四孚实义眼无李成花机理的巧步研免ａＴ紅琴谭党茲ｘｆｉＴ譯ｄ錦Ｇ巧馨５１０宅巧電ｈＴＣＴＳＴｄｓＴＣＩ爱了墨ＴＴ品ＣＩ０茲益ｔｉ＾ＧＧＧＣｉｃＴＣＣＧ５１０｜｜［ＩＣＩＣＣ£ＣｇＩＴＣＧ５１１ｃＧＣＴＳＣ＾ＧＴＣＴＳＣｌｌＯｉ＾｜｜ｐ［ｄＧＣＣＧＣＣＧＴＣｌ磊ＣｌＴＣｌＣＩｉｃ器泣ＣＧＣ為ＧＧＣ＆ＣＴＣＣＳ６７１｜ｊＪＩ［ｅＧＣＣＧＣＧＧ：￡ＴＩＸＣ１＆Ｃ５ＣＩ玉ｓＧＡＧＧｉａＯｉ＾ＧＩＣｔＧＣＧ５４２｜｜ｇＩｉｆ祭ＣｊＣＧＣＧＧＴＣＸｌｇＴｌＴ惡Ｔ互ｉＣ蟲ＧＧ５ｅａＧ１：：ｌ：ｇＧ６０３滅，９ｑ｜｜ｊ｜｜ｇｇＣｉｔＡ了ＡＡＣＣＡ了ＴＧＩ了Ｇｒｉ了ＧＴ：：ｔＴ為Ｔ５ａＡＡ了Ａ５９１ｇ［Ｉ［ｈ細：ｇＣＡ抑Ｃ：城ＣＴＴｏｃＧＧＳＧｌＥＪ或茲樹帝Ｓｃｒｔ始５７１ＣｏｎｓＱＣｃｇｃｇｔｃｔａｃ仁ｔｃａａｃ仁Ｑｃｃａｇａｇｇ马这ｇａｇｔｇｇｃｔｃｃｇ＊这蟲ＳＧ蟲Ｘａ５２７！ｉｂ泻１０援＆奚■■．５２７ｃＧＴＧ控禹Ｃ马Ｇ吗Ｇ禹Ｘａ．？．５２Ｓ｜！！ｄＧＣ担ＧＣ為ｇ呂ＧＧＴＣＴ盈ＣＣＣＣＴＳＧＣＴ＾＾ＣＧＡ了油ＴＣＣＣＧ占Ｔ７玉１！｜玄ＧＪｉＴＧＧ：！！：５７己ｅＧＡＧＧ＆占ＳｆｉｌｌＴＴＪｉａ了ＥＣＴＴＣＣＩ磊［＾ｆ２了２０５名ＧＧＡＣＧ盈玉Ｓ４Ａ日了ＣＣＴＣｒ＾ｊｉ占了Ｇ＆王ＴＧＡ白了ＣＴ了６４３［＾ｇＣ１：ＴＳＧ召另了１：Ｇ禹ＣＣＴＴ百了ＧＳＳＧ曰ＧＳＴＣＳ占占Ｃ再ＴＣＣＣ６３１＇虹巧了扫担否ＣＧｉｑ马！占Ｇ．．．ＴＣ了ｔ｜占ＴＧＡＴ马ＳＴ曰ＴＣＴＴ，６曰８ＣｏｎｓｇｔｇｇｓａｇｇａｇａａｇｓＣａｓａ这３－７）图１６四季蜜龙眼Ｚ）／Ｆ７与Ｚ／Ｆｒ２基因序列与其它物种的同源性比对ａ：桃（ＥＵＷ９３０２）；ｂ：苹果（ＡＢ１６１１１２）；ｃ：向日葵ＧＵ％５５７３）；ｄ：水稻（ＡＢ０５２９４４）；ｅ；拟南芥（ＡＢ４６５５％）；ｆ：謀枝（ＪＮ２１４３５０）；ｇ：龙眼（０王／７７）；ｈ：龙眼（乃Ｉｆ巧）Ｆ－ｎｍｅｎＴｈｉｌｉｆｈｅｓｏｆＳｉｉｉ￡）／ｉＴ７Ｄ／ｉＴ２ｌ．３１６ＡｇｔｏｔｅｓｅｕｅｎｃｊｍＬｏ打ａｎｅｎｅｓａｎｉｏｍｏｏｓｇｑｇ，呂＾ｇｆｒｏｍｏｔｈｅｒｓｐｅｃｉｅｓＭＡＢ１１１ａＰｒｕｎｕｓｉＥＵ９３９３０２ｂａｌｕｓｘｄｏｍｅｓｉｃａ６１２ｃＨｅｌｉａｎｈｕｓ：ｐｅｒｓｃａ：ｔ（；：ｔａｎｎｕｕｓ（）；）仿７‘’（ＧＵ９８５５７３）；ｄ：之幻幻机幻（ＡＢ０５２９４４；ｅ：如口６／此／？地Ａ幻／／ｅ／７ＡＢ４６５５％；ｆ：ＺｚＹｃＡ／ｃ／ｎｗｍｓｗ）（）（ＪＮ２１４３５０）；ｇ：Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎ｛ＤＬＦＴ１）＼ｈ：Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎ｛ＤＬＦＴ２）３．４．３／Ｔ同源基因的生物信息学分析＊ａＳａ利用ＥｘＦｙ提供的在线Ｐｒｏ巧ｒａｍ软件（ｈｔｔ：／／ｗｅｂ．ｅｘｐａ巧．ｏｒ／ｒｏａｒａｍｙ）ｐｇｐ巧进行氨基酸数目、分子量、理论等电点、脂肪族氨基酸指数和蛋白质疏水性等分３－。ａｎｄａｖｅｒａｅｏｆｈｄｒｏａｔｈｉｃｉ析，结果如表３所示两个蛋白序列的Ｇｒｇｙｐｔｙ（ＧＲＡＶＹ）均为负值，说明四季蜜龙眼的公／Ｆ７７与Ｚ）／Ｆｒ２蛋白均为亲水蛋白。４３
广苗大単硕古单位论文生长巧节制巧按四李巧义化义李成花机理巧巧步研突表－３７２３四季蜜公／所和公作Ｔ基因的理化性质分析－－公Ｔａｂｌｅ３３Ｔｈｅｈｙｓｉｃｃｈｅｍｉｃａｌａ打ａｌｙｓｉｓｏｆＺ）／Ｆ７７ａｎｄ／护７２呂ｅｎｅｓｏｆＳｉｉｍｉＬｏｎａｎｐｊｇＯＲＦ编码ｍｍ分テ＊原テ脂肋族蛋曰质ｓ论等不稳ｓ名称（Ｄａ）总数指数疏水性电点指数氨基酸数目ＴｏｔａｌＧｒａｎｄＧｅｎｅＭｏｌｅｃｕｌａｒｎｕｍｂｅｒＡｌｉｐｈａｔｉｃＩｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃＩｎｓｔａｂｉｌｉｔｙＮｕｍｂｅｒｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒｆｏｒｍｕｌａａｖｅｒａｅｏｆｇｎａｍｅｗｅｉｇｈｔｏｆｉｎｄｅｘｐｏｉｎｔｉｎｄｅｘａｍｉｎｏａｃｉｄｓｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃｉｔｙａｔｏｍｓＮ－ＤｌＦＴｌＣｓ６射１３４７２４９Ｏ２５９Ｓ１９５１０．９２７２６７７．８２０．４０１８．８１４４．２２１７４ＤＩＦＴ２Ｃ８Ｎ１１２－４５３６６６Ｈ〇〇Ｓ９５８４２７２７．７０．．７３５３．１５１７４ｉ３４２２４６２６通过ＥｘＰａＳｙ提供的在线ＳＯＰＭＡ程序对四季蜜龙眼Ｆｒ同源基因编码的蛋白进行二级结构分析－－，得出蛋白质的二级结构主要有ａ螺旋，Ｐ折叠，转角，延伸链和无规则卷曲－。两个Ｗ蛋白二级结构主要Ｗ丰富的折叠（饼仍７，２８．１６％Ｐ；￡）Ｚ）巧Ｔ２巧Ｔ２，２７．５９％）和无规则卷曲（公／Ｆ７７，３９．６６％，４７．１３％；）两种形式存在－，其次是ａ螺旋（Ｄ化７７，１９．５４％公化Ｔ２，１４．３７％）。；ｒｔ－利用ＳＭＡＲＴ网站：ｈｔｐ：／／ｓｍａ．ｅｍＷｈｅｉｄｅ化ｅｒｇ．ｄｅ／预测的蛋白Ｓ级结构女口下：ＵＵ＞Ｘ乂》＆ＵＩ、】Ｖ２＞ＩｂＵ…ＩＩＩＩ１ＩＩＩＩＩＩＩ１ＩＩＩＩ１ＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩＩｊＩ１ＩＩ＇ｄｓｕｔｆｒ＊ｉｎｉｎｔｔｂｄｊＳｐｅｃｉｆｉｃｈｉｔｓ‘也心…躲＇。…气…蕾聲苗恤…也芯，‘车ｙ—＾…——…颗Ｎｏｎ－ｓｅｃｃ化ｐｉｆｉｎｗ化９心。ＷＩＰＥＢＴＰ￡ＢＰ４ｃｔｏｒｃｈ＾＿ＰＥｔＰＴｉｃｎｏｉＭＳＳｕｐｅｒｆａｎｉｌｉｅｓＰＥＢＰｓｕｆａｍｉｌｐｅｒｙ＿＾＿－Ｄ图３１７／Ｆ７７蛋白保守域分析Ｆ－７Ｔｉｇ．３１ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｎｓｅｒｖｅｄｄｏｍａｉｎｏｆＤｌＦｌ＊巧０］〇１５７５０１巧巧０１７ＩＩ１，１ａＩＩＩ＼ＩＩＩ１ＩｉＩＩＩＩＩＩｉｉｉｉｉｉｉｌｉｉｉｉｌＱｕｅｒｙｗｑ＊：ｕ＇：ｉ尸ｑｔ，ｂｉｎｄｉｎ：＊ｉ？，＊ＳｐｅｃｉｆｉｃｈｉｔｓＮｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｕｍ化，ｈｉｔｓｗＰＥＷ做Ｐ＞ｌ￡ＢＰＪ？ｔ？ｒｃ？：＿ｈＰＭｌｔ巧７－Ｓｕｅｒｆａｎｉｌ－ｐｌｅｓＰＰｓｉｌｙ■：；：ＥＢ；：：：，ｕｐｅｒｆａｍ：；；：＞；ｙ．；；；；—＇图３－１８￡ＷＴ２蛋白保守域分析－ｏｎ化ｒｖｅｄｍａｎ＾Ｆｉｇ．３１８Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｄｏｉｏｆ公／／７２４４
广笛大净巧ｇ古学位论文生长巧节制巧化巧争ｇ龙化义采义花机巧巧巧步巧究－－＾３１８）：２分别对它们的氨基酸序列进行ＢＬＡＳＴ，可１＾１发现（图３１７，图一７７与￡＞ＬＦｒ２所含的结构域位置不致个蛋白均含７个结构域，而公ＺＦ，推测这－ｅｕｋ是两个蛋白的功能可能有差异。其中ＰＥＢＰ特殊结构域，属于ＰＥＢＰ家族，一并且结构域出现的位置有微小差异。植物ＰＥＢＰ家族基因编码的蛋白含有单且高度保守的ＰＥＢＰ结构域，该结构域占基因编码序列的８０％，ＰＥＢＰ基因家族分＇－－－Ｈ个亚家族－Ｌｉｋｅ、Ｌｉｋｅ和ＴＦＬｌＬｉｋｅ，Ｆｒ了放属于ＦＴＬｉｋｅ亚家为ＦＴＭＦＴ和－３－１７／族。由图、图３１８可Ｗ看出公巧７７与公ＦＨ基因含有ＰＥＢＰ结构域，属于－ＦＴＬｉｋｅ蛋白亚家族。３．４．４／Ｔ同源基因的系统进化分析将得到的公巧７７与公巧Ｔ２基因开放闽读框通过ＤＮＡｍａｎ软件翻译成氨基酸序列，再将所得的氨基酸序列与ＮＣＢＩ上所公布的其它植物的基酸序列进斤同源比对。利用ＭＥＧＡ４．１软件构建多种植物押同源基因编码蛋白的系统进－化树，结果如图３１９所示：在本进化树中四季蜜龙眼ｉＴ同源基因首先和无患子科的蒜枝（ＪＮ２１４３５０、ＪＮ２１４３５１）和龙眼（ＫＦ８８１０１２．１、ＫＦ８８１０１１．１、ＫＦ８８１０１０．１）一。。巧７７基８８１０１０．１）聚在起，关系最近因所编码的氨基酸序列与龙眼（ＫＦ所一致编码的氨基酸序列完全；凸皆巧基因所编码的氨基酸序列与龙眼一凸巧７７基因所编码的氨基酸序列（ＫＦ８８１０１２．１）所编码的氨基酸序列完全致；与菊枝（ＪＮ２１４３５０）、（ＪＮ２１４３５１）所编码的氨基酸序列分别相差２４个、２１个；公巧Ｔ２基因所编码的氨基酸序列与菊枝（ＪＮ２１４３５０）、（ＪＮ２１４３５１）所编码的＞／巧７和公巧Ｔ２与拟南芥氨基酸序列分别相差１５个、６个。￡（双子叶植物）亲缘关系较近。另外，葫芦科（印度南瓜、南瓜、，而与水稻（单子叶植物）较远、黄瓜），醬薇科（苹果沙梨、梅花、桃），菊科（窝宦、向日葵、菊花），杨一柳科（欧洲白杨、意大利杂交杨、美洲黑松）等不同科植物分别集中聚为类。从Ｗ上可看出Ｆｒ基因在双子叶植物和单子叶植物间、不同的科属植物间及同种物种中存着分化，说明重要的开花基因ＦＴ在植物的进化中有所保守的同时也在不断的进化。４５
广扭大単硕古単位论文生长巧节制巧巧四李巧义化义李成花机理的巧步研究卵ＤｉｍｏｃａｒｐａｓｌｏｎｇｍｉｊｙｉＦｌＴ｝Ｉ６４Ｉ化况妨泌柳如说邸８８ｉ０１２．ｒ１？巧（）９３ｍＪＩＤｍｏｃａｉ／＾？ａ！？ｉＫＦ８８Ｉ０１ｌｐ？ｇ（Ｌ）７２ｉＭｃｈｉｃＭｍｍＩｉｓ？８２Ｉ王化／？如读靴ｓｂ（ＪＮ２Ｈ３如）Ｄｉｍｃｏｆｕｓｈｎｐｇａｎ（ＰＵＪｌ）Ｉ—＾ｕｉ〇ｉ。切汾￡。似站？幻巧（ＫＦ８８．巧＾１則０１）？伪？记城Ａ饼放斯ＪＣ所扣Ｗ如前（ＡＢ５４巧３７＞巧）Ｉ９８ｌＩＭｋｍｔｈｕｓａｍｉｍ０１１辦巧巧＿＿１（）巧Ｃｕｃｙｒ＆輪嫌的施２ＤＱ巧５２奶｛）ＩＩＡ８３巧说ｂ扣扣Ｖ胜！５巧（Ｏｉｃｗ如沁跳城：始的ＥＦ４６２２—－３７１２（）ＩＩ舶！历〇的说Ｉ饰放做２（ＤＱ８６５＾＾ＧｏｓｓｈｉｎｍｔｒｓｕｔｕｍＨＭ６３１９７２）ｙｐ（ＩＩＯＧＵ１４３０访化。护资巧。（５）３Ｉ１０￣巧带山ｌｉｓ化洗ｙ／ａ（ＤＱ３８巧巧２８）Ｉ戶巧化￡１６Ｕ０９／＊ｉｓ？ｇｉｉ２（ＡＢ）巳４Ｉ１１００ＰｏｕＡＹｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｓ＾５１５１５２ｐ（）１目济Ｇ饥從仿！ｃ／汝１／ｒＥＵ巧：３５０巧（Ｉｍ－ｂｍａｇｇＱｌｄｔｕｆｂｍＨｌ６４４３４（Ｑ）Ｉ１１００ＨＭ邱诚励ｏｓｒ沾ＩＯ㈱巧ｇ郎（）ＶｈｉｓｖｉｍｅｍＧＵｉ３３６２９日日ｆ（）Ｉ＾—■ＩｏｒｎｏｅａｎＥＶｍｍｐｉＫ）ｉｃａｚｒ巧ｉｉ／ｃ。ＡＢ４５７６２０（）ＩＡ城旭Ｘ威识阴Ｉ城抵。（ＡＢ１６１１１巧Ｉ＾—４８Ｉ巧伽。ＡＢ５２４５８７７ｉ￡ｓ（）巧巧７６ＩＰｒｕｍｉｓｍｕｍｅ（ＡＭ＾４３９７９）＆＾３ＥＰｒｉｍｕｓｉｃａＥＵ９３９３０２３日ｐ（）ＩＩｎ巧ｚ５巧巧度／切｛ＡＢ巧１巧５）６２Ｍｔｋｃ＾ｕｓＸｄｏｍｅｓａＡＢ４５８５０４（）Ｉ巧ＩＭａｌｍｘｄｏｍｅｓｔｉｃａＧＱ４６５７５５）｛＾■Ｆｋ／ｏｍ＾ｊｃ齡ｅ巧诉／／口（ＧＱ８４７８２４）众沾７说妍Ｉ化始獄ｊ！／ｗ（ＧＵ２２３２Ｕ）Ｉ＾？抑山ｉ巧饰減ＫＱｌ？巧巧）（Ｇ批／，！台说獻（ＡＢ５５０１２。＾＇。林敝ＣＯ巧ＥＳ／如發２。１］巧６４？化＿（１）口。２。４日５姐化。ＡＢ０５２９４４）（Ｉ巧知。Ｖ５ＨＭ４４Ｓ９１２峨献（）ＩＩＣ沁？１＇泌。成誦做＆ｎｒ化ＥＵ３８０１３／《）ＩＩ抒诚。巧ｆ输Ｓｏｗｍ／ｕｓＧＱ８８４９８７｛）Ｉ５０Ｃ沾ｍＷ２ｓＡｍＡＢ０２７４５６（）型＂＇戸。雌加５化卿饰。巧Ｕ４狐说巧化３３王纽：化Ｃ幻放幻（ＡＢ６０２３２＿２）Ｉ－＊玄ＵＳ航ｍ燃政前Ｕ併ＡＢ５６巧２（１）ＩＩ巧孤说站５３８８２！巧（ＨＱ巧ＩＩ３３〇／賴：姑巧Ｕ９８４３０６）进１＇—。等虹出的町日。料巧［６３ｂｄＡｒａｈｌＭ４６５５８６ｉｏｓｉｓａＡＢｐ（）Ｉ１’２９左！／巧冶况ｃｗ幻及２＆？Ｈ＜巧！（５台６７）图３－１９植物Ｆｒ同源基因编码蛋白氨基酸序列系统进化树Ｆ－１Ｔｉ．３９ｈｅｈｌｏｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ护ｒｈｏｍｏｌｏｏｕｓｅｎｅｓｂａｓｅｄｏｎ化ｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｕｅｎｃｅｇｐｙｇｇｇｑ４６
广巧大単硕古学位论文生长巧节制巧拉四孚巧义眼王孚成花机理的巧步研兜３．５四季蜜龙眼／Ｔ同源基因的表达分析采用实时焚光定量ＰＣ民分析饼Ｆ７７和公化Ｔ２在生长调节剂处理后不同时期成熟叶片中的表达情况：在处理前８山即四季蜜龙眼花芽分化关键，结果表明期，０／Ｆ７７在生长调节剂处理成熟叶片中表达量变化不明显，然而在１２ｄ后，即花器官发育和开花期，公巧Ｔ７在生长调节剂处理叶片中的表达量明显提高（图－）３２０Ａ。公的表达量随着生长调节剂处理时间的延长，其表达量总体呈显－Ｂ著升高的趋势（图３２０）。．２０１７巧下＂－１６Ｉ｜ｉ丄１＂．ＶｎＸ＇■＇ＭＩｔ１２．，ｇ式４Ａ化－ｓ旨－］－■８ｌＡ占’弓．２．６暑內王＼＼ｉＡ１１１ＩＬｒ＿Ｊ［．ＵＩＪｕ」」丄ＪＵＤ園１Ｊ。ｐｑ３ＪＵ曰ＵＵＬ。ＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄＯｄＩｄ３ｄ５ｄ８ｄ１２ｄ１６ｄ２０ｄ２５ｄＡＢ图３－２０ＲＴ－ＰＣ民检测／Ｔ的表达情况分析ｑ注：Ａ：饼的表达情况分析Ｂ：Ｄ／Ｆ７２的表达情况分析３－２０－Ｆｉｇ．民ｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏ打ｌｅｖｅｌｓｏｆ庐Ｔｇｅ打ｅａｓｓａｙｅｄｗｉｔｈ民ＴｑＰＣ民．－Ｎｏ化民ｅ）ｅｄＲＴＰＣ民．Ｂ：民ｌｉｖｅｅｘｒｅｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ左／扔？７ｅｎｅａｓｓａｗｉｔｈｅｌａｔｉｖｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ：ａｔｐ巧ｇｙｑｐｖｅＦＴｌｔｎｔｗ－ａｓｓａｅｄＲＴＰＣＲｌｅｌｓｏｆＤｌｇｙｉｔｈｑ．＾３．６四季蜜龙眼厂；同源基因超表达载体的构建及遠传转化３．６．１／Ｔ同源基因超表达载体的构建－用况幻Ｉ酶切阳１１２１质粒，通过ＩｎＦｕｓｉｏｎ愈ＨＤＣｌｏｎｉｎｇＫｉｔ（Ｔａｋａｒａ，日本）将公／巧７和Ｄ１１２１ａＭＶ３５Ｓ１ＦＴ２含终止密码子的ＯＲＦ分别插入阳超表达载体Ｃ＇－－Ｄ启动子之后，构建的重组表达载体分别命名为ｐＢｉｍＤｌＦＴｌ和ｐＢＩ１２１ｌＦＴ２。－－用通用引物和特异引物对可能含有正义的ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ１和ＰＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ２单菌落４７
广西大単硕古洋位论文生长调节制巧控四李誓义眼义李成花机理的初步研免小的预测目的片段－进行ＰＣＲ检测，获得了６００ｂｐ大（图３２１），说明目的基因己经插入超表这载体ＰＢＩ１２１质粒中，表达载体构建成功。采用冻顯法将携有目的基因质粒导入农杆菌ＥＨＡ１０５中，将转化的农杆菌进行培养，挑取单菌落于离°屯、Ｌ２００管中．８ｍ，８Ｃ、ｒｍ，向离也管中加入０的ＹＥＰ液体培养基于２ｐ条件３－２ＰＣＲ检测１），下进行摇苗培养，挑取单菌落进行（图都获得预测大小目的片段，结合生工生物工程（上海）有限公司对所送菌液所反馈的测序结果分析，表明表达载体己经转化农杆菌中。Ｍ１２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５ＭＷ１—１——Ｍｌ——－图３２１凸巧７７和。／ｉＴ２基因表达载体构建Ｆ－２１Ｅｘｒｅｓｓ打ｖｅｃｒｎｎ戶７７ｉｇ．３ｐｉｏｔｏｃｏｓｔｒｕｃｔｉｏｏｆＩＶａｎｄ公／戶Ｔ２ｇｅｎｅｓ２ＢＩ１２１－ＤＦＴｌＢＩ１－Ｄ（ＭＤＬ２０００１：前幻ＩＢＵ２１和３；ｌ２１ｌＦＴ２！；酶切质粒产物回收；ｐ和ｐｐ４－－：ＢＩ２Ｄ，７；ＢＩ１２ｉＤＦＴ载体质粒；、５、６ｐ１１ｌＦＴｌ农杆菌茜液检测（引物Ｎｐｔｌｌ）、８、９ｐｌｌ－ＺＤＦＴＩ－ＦＺＤＦＴＩ－艮）１０１１１２：Ｉ１２１ＤＦＴ２农杆菌菌液检测（引物Ｉ、Ｉ，、、ｐＢｌ农杆菌菌液检＇－－－额（引物ＮｔｌＯ；１３、１４、１５：ＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ２农杆菌茜液检测（引物ＺＤｉｎＳＦ、ＺＤ１ＦＴ２Ｒ）ＵｐＰ（Ｍ：ＤＬ２０００；１：ＡｍｐＫｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｐＢＩ１２１；２ａｎｄ３：民ｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｆ－－ＢＩ－ｍ１２１ＤＦＴｌＢＩ１２１ＤｌＦＴｌａｎｄＢＩ１２１ＤｌＦＴ２ｖｅｃｔｏｒｌａｓｉｄ４、５ａｎｄ６：ｌｓｉｔｉｖｅｄ；ｏｏｎ巧ｏｆｐｐｐｐｐｒｏｂａｃｅｒ－ＡｇｔｉｕｍｆｒｏｍＮｔＩＩ７＞８ａｎｄ９：日１１２１ＤｌＦＴｌｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｏｆ幻ｃ／ｅｎｗｗ行ｏｍｐ；ｐｐ．ＺＤＦＴＩ－ＦＺＤＦＴ－１２目Ｉ－ＩａｎｄＩＩ艮１０、１１ａｎｄ１２１Ｄ１ＦＴ２ｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓ幻ｃｆｍｗｗｆｒｏｍ：；ｐｐＵ－Ｚ２－ＮＩ１３、１４、１５：ＢＩ１２１ＤｌＦＴ２ｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｆｒｏｍＤ１ＦＴＦａｎｄｐ；ｐｐＺＤＴ２－民１Ｆ４８
广西大學硕古単位论文主长巧节制调控四李蜜龙目良义李成花机理巧初步巧免３．６．２／Ｔ同源基因超表达载体的遗传转化采用农杆菌介导的花粉管导入法侵染拟南芥花序２￣，重复３次，将被侵染过，１／２ＭＳ培养液，的拟南芥置于光照培养箱中培养期间适时焼水和。在侵染后，表示植株生长情况良好，植株较为健壮、叶片鲜绿。最后收集种子并在含有抗生素的培养基上筛选转基因植株，获得了ＴＯ代转公／Ｆ７７和Ｄ／Ｆ７７基因拟南芥（图３－２２）。圍圍，图３－２２转基因拟南芥的筛选Ｆ－ｉ．３２２Ｓｃｒｅｅｎｉｎｏｆｔｒａｎｓｅｎｉｃ心幻Ｖｓｋｇｇｇ扣ｔｏｐ４９
广？制调按四李巧义眼无李成花机理的祇步巧免西大洋硕古华位论文生长巧巧第四章讨论与全文总结４．１四季蜜龙眼成花调控效果调查分析１２．９在结果母枝单元末次梢叶片浅绿色，６、芽尚未伸长生长时向叶面喷布浓度为Ｌ乙Ｉ＋５００ＬＰ７１２６／／．９ｍ／Ｌ己＋２５０ｍＬＰＰｍｇ蹄矛ＪｍｇＰｒｏ的混合祗ｄ后喷布ｇ帰利ｇ／ｗ一的混合液促进夏季成化克服了自然状态下成花时间不致，、成花枝率低的问题，收到理想的成花效果，且花穗生长正常说明应用春季修剪结合外施ＰＰｗ与乙婦利调控夏季集中成花效果显著。四季蜜龙眼在没有修剪、没有喷布生长调节剂的＾，２０１１），而在本试验中，情况下，部分枝条可＾在年四季零星成花（朱建华等＾，对照植株不能成花，说明四季蜜龙眼虽具有年多次成花的特性但在修剪打破，某些时段不能成花植物体内源激素的平衡且不进行人为调控时。４．２四季蜜龙眼叶片内源激素的变化及动态激素平衡分析，内源激素的变化及各激素间的动态平衡影响着核酸和营养物质的代谢，从而调控植物的成花过程（Ｘｉｏｎｅｔａｌ２００３）。ｇ，一对于ＩＡＡ在果树成花过程的作用观点不，通常认为高浓度的ＩＡＡ可Ｗ诱。导内源石蹄的合成，高浓度的己稀抑制营养生长本试验Ｗ短截修剪配合喷施两次不同剂量的ＰＰｗ和乙稀利处理四季蜜龙眼，研究结果显示ＰＰ３３３和乙蹄利处理对叶片中ＩＡＡ具有抑制作用，这与俞征瑶（２００９）、陈殿余（２００９）和陈香玲２００５一（），花芽萌动期低水平的的研究结果致；但在本试验中ＩＡＡ有利于成一一花，花序原基出现期需要定程度的高水平ＩＡＡ，即叶片中定程度的高ＩＡＡＩＡＡ含量利于花芽形成，这与陈香玲和陈殿余的低水平促进成花的研究结果有所不同。另外，樊卫国等（２００３）认为，较低水平的ＩＡＡ含量对刺梨花芽分化有利，２９９６）上，；在苹果（曹尚银等０００李天红等，１的研究表明生理分化期；高水平的ＩＡＡ可Ｗ延缓花芽分化，但程华等（２０１３）等认为板栗冬梢花芽分化一需要定浓度的ＩＡＡ，。本试验中高水平的ＩＡＡ有利于花穗生长发育这与俞征＂＂瑶等（２００９）的雄蕊和雌蕊器官建成需要较高的ＩＡＡ含量结果相似。喷施乙婦利、ＰＰ３Ｕ对龙眼叶片中的ＩＡＡ影响不尽相同，可能与试验处理不同、采样５０
广巧大単项古＊化论义生长巧节細用巧四养餐义化Ｊｔ■去化花化巧的斯步巧变时期的差异有关。ＩＰＡ属于细胞分裂素类，研究证实凡能促进成花的因素均可引起细施分裂素增多（黄迪辉等，１９９２）。黄弟维等（１９９６）认为高含量的巧Ａ有利于龙眼花芽分化，在银杏和苹果上也有相似的研巧结果。本试验研巧结果显示，ＰＰ３３３和乙婦利处理増加了ＩＰＡ含量，叶片中较高水平ＩＰＡ有利于花芽分化，这与多数研一究结果致。吴定尧等（２０００）利用环割促进龙眼成花，提高了花序原基出现之前ＩＰＡ和ＡＢＡ含量，降低了ＧＡ含量，证实ＩＰＡ的含量高有助于成花转变。ＡＢＡ对成花有双重作用：诱导休眠和与ＧＡ措抗，促进细胞分裂素、碳水化合物（淀粉、糖）的积累，从而促进成花（曾驛，１９９２）。本试验研巧结果显示，ＰＰ３３３和乙痛利处理増加了叶片中ＡＢＡ含量，这与俞征瑶（２００９）的研究一结果致。叶片中较高水平的ＡＢＡ含量能促进花芽分化，花序原基出现和花穗生长需要较高的ＡＢＡ含量。俞征瑶（２００９）认为，ＰＰ３３３増加了四季花龙眼叶片。中ＡＢＡ含量，ＡＢＡ的含量高利于成花而陈殿余（２００９）认为ＡＢＡ不是影响四季蜜巧眼集中成花的主要因素；ＡＢＡ抑制营养生长的同时引起ＣＴＫ的累积，一定浓度的ＡＢＡ利于花芽分化（侯学巧等，１９８７，２０１３，；程华等；黄弟维等１９９６）。李永红等（２０１３）和吴定尧等（２０００）认为ＡＢＡ含量高有利于龙眼的花芽分化。本试验的结果与多数在證枝、龙眼上的研究结果相似，即较高水平的ＡＢＡ促进龙眼花芽分化。一般认为ＧＡ是植物成花的抑制剂（侯学巧，１９８７）。本试验结果表明ＰＰ３３３和乙締利降低了叶片成花过程中的ＧＡ含量，叶片中低水平的ＧＡ利于花芽分化，一００９这与陈殿余和俞征瑶等的研究结果致。马书荣等（２）认为，板栗花芽期需要髙浓度ＧＡ。ＧＡ３有利于板栗花芽打破休眠，且花序原基分化期与花簇原基分一化期均需维持定含量的ＧＡ（季志平等，２００７；程华等，２０１３）。但曹尚银等在苹果上的研究表明髙水平ＧＡ延缓花芽分化；吴定尧等（２０００）认为低含量的ＧＡ有利于龙眼花芽分化；李永红等（２０１３）等采用ＰＰ３３３处理四季花龙眼冬梢结果母枝顶芽，发现在花芽分化过程中，花芽中ＧＡ和ＩＡＡ含量均下降；由此可见，不同植物花芽分化需要的ＧＡ含量不同。但在龙眼上，较为认可的是低水５１
广西大学巧古学位论文生长巧节制巧控四李巧龙化义李成花机理的巧步研筑平的ＧＡ促进龙眼花芽分化。ＰＰ，在调节内源激素（ＩＰＡ、３３３和石婦利调控四季蜜龙眼夏季成花效果明显ＩＡＡ、ＧＡ、ＡＢＡ）变化的同时影响内源激素动态平衡。本试验研究结果表明，处理増加了ＩＰＡ／ＡＢＡ比值和波动性，花芽分化过程中叶片较高ＩＰＡ／ＩＡＡ比值可Ｗ抑制树体的营养生长，有效地进入花诱导时期进而促进花芽分化。另外，Ｃｈｅｎ等（２０１３）认为叶面喷施ＰＰ３３３和石婦利提高妃子笑蒜枝树体内源ＺＭＡＡ比值，从而促进花芽分化，提高成化率；陆贵锋（２００５）认为ＡＢＡ／ＧＡ比值的增加有利于龙眼的成花诱导。４．３四季蜜龙眼叶片营养物质动态变化分析植物成花诱导期间可溶性糖、淀粉等碳水化合物含量增加有利于花芽分化（２００３）。淀粉作为能量的存胆物质，在花芽分化过程中分解为糖后樊卫国等，供花芽分化利用、还原糖等碳水化合物在分化过程为呼吸作用和花芽。可溶性糖（，２００３，２００４）。分化提供所需的能量与营养物质路苹；张万萍等本试验中ＰＰ己稀利处理四季蜜巧眼叶片中可溶性蛋白含量和游离氨基酸含量趋势一３Ｕ与致，处理提高了花芽分化过程中可溶性蛋白含量，与陈殿余对四季蜜龙眼进行轻＋一剪配合喷施己婦利ＰＰ３Ｕ处理提高了可溶性蛋白质含量结果致。蔡中芳（２０１０）研巧四季花龙眼花芽分化期营养动态变化，得出较高浓度的碳水化合物含量可促进成花的结论，。可溶性蛋白的大量积累是成花转变的重要物质基础直接或间接参与了分化过程。在本试验中，游离氨基酸含量在下降到最低点附近时可溶性蛋白含量达到最大值，说明游离氨基酸的消耗要早于可溶性蛋白。花序原基出现需要叶片中大量，进而诱导花芽分化的可溶性总糖为其提供碳源和营养；顶芽萌动时期大量淀粉的积累有利于花芽分化。综合碳水化合物和含Ｎ化合物的含量测定结果来分析，本试验的处理条件下，处理组的Ｃ／Ｎ比值高，有利于花芽分化。这与陈清西等（２００４）用ＫＣ１０３诱导龙眼成花Ｗ及沈方科等（２０１３）在四季蜜祀反季节花芽一致分化期间淀粉、可溶性糖含量较高促进成花的研究结果。花芽分化完成之后，碳水化合物含量下降，这种变化可能是形态分化和生殖生长需要消耗大量的淀粉５２
广西乂学巧ｄｂ■学征论义生长节贵春ｇ义化义春义花机巧巧巧步研巧Ｊ１Ｈ您四和可溶性糖，为物质合成所需能量和碳源。４．４四季蜜龙眼／Ｔ同源基因的克隆、生物信息学分析及遗传转化分析四季蜜龙眼植物组织中酪类化合物、多糖ｓｅ、次级代谢产物、ＲＮａ等的含量较高，造成提取高质量的ＲＮＡ较为困难。针对此问题，对四季蜜龙眼叶片ＲＮＡ提取方法进行了适当的改进优化，改进优化后的方法所提取的ＲＮＡ纯度高、条带清晰、完整性巧，ＯＤ２６０／２８０值为１．９０左右６０／２３０值为２．１，ＯＤ２左右，而且稳定性较好，可满足后续分子生物学的研究。由于ｉＴ同源基因在植物成花调控中起着整合因子的作用，即多个成花调控途径都汇聚于此，使得巧甚因的分离克隆Ｗ及功能研究发展迅速。近年来对／Ｔ基因研究更加深入，不同物种的Ｆ７基因如：大豆（胡瑞波，２００９）、蓄薇科植、物（左阳，２０１０）桑树（李四军，２０１３）、苹果（Ｋｏｔｏｄａ幻ａｌ．２０１０）、窺，Ｄｉｎｅｔａｌ２０１５）葡Ｃａｍｏｎａｅａｌ、ｖｅ枝（．ｒｔ．２００７）ｔａｌ．２０１２）等都ｇ，萄（薇萝（Ｌ，，＂相继成功克隆。但有关龙眼ＦＴ基因的研究较少，只有Ｈｅｌｌｅｒ（２０１４）克隆出Ｂｉｅｗ＂Ｋｅｗ龙眼的３个Ｆ？甚因。本试验克隆的四季蜜龙眼公巧７７和公巧Ｔ２基因的ｃＤＮＡ编码区与Ｇｅｎｅｂａｎｋ数据库中的龙眼Ｆｒ基因ＫＦ８８１０１０．１与ＫＦ８８１０１２．１有９９％的同源性。分析表明，０／Ｆ７７与Ｄ巧Ｔ２开放阅读框（ＯＲＦ）都为５２５ｂｐ，各编码１７４个氨基酸，公巧７７与公巧Ｔ２核巧酸离度同源，同源性达９０％，两者的氨基酸序列存在２４个氨基酸二级。残基的差异，但是两个基因的结构和Ｈ级结构相似由此推测编码两者蛋白的基因公／巧７与在功能上有所保守的同时，也在向不同的方向进化。ＦＴ－不同物种间位于第７０和７４位的ＤＰ－Ｄ－Ｘ－Ｐ基序，第％位的组氨酸残基，第１１５８位的Ｇ－Ｘ－Ｈ－Ｒ基序具有湿著的序列同源性区域与１１（李四军，２０１３；Ｂａｎｆｉｅｉｄｅｔａｌ．２０００）。ＦＴ基因，，本试验获得的编码的蛋白质含有上述的高度保守区域结构由此推断四季蜜龙眼Ｆｒ同源基因和其它物种ＦＴ同源基因髙度保守，并且在蛋白质空间结构Ｗ及结构域上高度相似，推测不同物种的／Ｔ同源基因功能具有相似性。￣理０￣测定处理０ｄ２５ｄ。／巧７和公巧Ｔ２在叶片中的表达量变化ｄ８，表明处５３
广苗大羊巧女学化论义生长巧节制巧控四李巧义眼义李成花机理的巧步研究ｄＺ）／Ｆ７７的表达量具有波动性，总体呈上升趋势；而￡＞化Ｔ２随着处理时间的增加，其表达量持续显著上升，在处理８ｄ时四季蜜龙眼己经出现花序原基。在处理１２ｄ时二者表达量湿著下降，这可能是７ｄ后喷布ＰＰｗ和己席利的混合液处理造成８￣的。而后在四季蜜巧眼花器官的发育及开花阶段（ｄ２５ｄ），Ｚ）化７７和饼Ｆ：口的表达量显著増加，分别在２０ｄ、２５ｄ初花期这到最高点。通过Ｗ上结果推测Ｚ）化Ｔ／和在ＰＰ３３３和石婦利诱导四季蜜龙眼成花转变的过程中可能起着较大作用，且０／Ｆ巧与成花关系紧密相关，两个基因的功能也可能有所不同。为了进一步探索０７７ｒ２ＰＰ己帰利诱导四季蜜龙眼成花转变／Ｆ和饼Ｆ在３３３和过程中的作用）巧Ｔ２的超表达载体，我们构建了。／Ｆ２７和￡，并成功转入了拟南一芥中一，为今后进步的研究打下定基础。４．５四季蜜龙眼成花的机理硏究及探讨在本试验研究中发现一，较高的巧乂、ＡＢＡ含量，低水平的０乂，＾＾＾及定程度的高ＩＡＡ含量有助于四季蜜龙眼花芽分化。在花芽分化过程中，淀粉的累积有利于促进成花（黄弟维，１９９６；吴定尧等，２０００）。淀粉本身无生理活性，但在花芽分化过程中可水解为糖，提供花芽分化所需营养。较髙水平的淀粉和可溶性糖有利于花芽分化已被证实（樊卫国等，２００３；张万萍等，２００４；陈清西，２００４）。本试验中，花芽分化前期可溶性蛋白、淀粉和可溶性糖含量増加，说明花芽分化需要较高水平的碳水化合物提供碳源及所需能量。ＰＰ乙稀利处理￣３３３和５ｄ８ｄ，可溶性蛋白含量増加而游离氨基酸含量有较大的下降，可能是游离氨基酸转化为可溶性蛋白，导致可溶性蛋白含量的提高；也１６后可溶性糖和淀可能是在此期间需要的含Ｎ化合物消耗较大。在处理，粉含量増加，而可溶性蛋白和游离氨基酸含量的变化趋于平稳，说明花穗生长期，。和花期有机物质开始累积，氮代谢减弱为果实发育提供物质基础糖类不仅是果树生长过程中常见胆藏碳水化合物，为植物成花提供所需的营养物质，也是许多基因表达的重要调节因子，。在常绿果树的研巧中发现可溶性总糖和果糖等碳水化合物的积累促进植物进入形态分化，受体感知激素信号后激活信号，将该信号在植物体中的激素传递网络传递，最后引起基因表达。如谎糖可Ｗ促进０９、巧弔、巧心、Ｇ傳突变体成化表明庶糖能够绕过ＦＷ、化Ｃ对开５４
广巧大＾＆３＾±＊位论义生长巧节巧巧芭四义眼王养成花机理巧巧步巧巧花的抑制，激活生物钟调控相关基因Ｇ／、ＦＣ４、Ｃ０，最终导致生理生化的变化。０、Ｅ内源激素ＧＡ通过激活开花调节因子，如化巧花序Ｗ及花顶端分生组织中的表达促进开花。在草本植物中，ＧＡ还可直接激活Ｃ０的帮基因巧而独立地诱导开花（Ｈｉｓａｍａｔｓｕｅｔａｌ．２００８）。ＬＡＡ参与调控花分生组织起始Ｗ及花器，一些基因还参与植物开花时间的调控官的发育，受ＩＡＡ调控表达的（Ｓｈｉｍａｄａｅｔａｌ．，２００５）。外源喷施ＡＢＡ増强Ｆｉｒ的转录水平，ＡＢＡ可能通过促进抑制因子化Ｃ的转录来抑制开花。另外，ＡＢＡ作为开花的抑制因子可能通过ＧＡ信号的抑制因子公化Ｌ４蛋白起作用（Ａｃｈａｒｄｅｔａｌ．２００６）。上研，究结果表明植物成花调控的机一制是多种生理效应相互作用，是个极其复杂的生理分化和形态分化的过程。Ｊｉａ（２０１４）四季蜜龙眼和立冬本龙眼的嫩梢为材料进行转录组测序，筛选出１００多个与开花相关的基因并对其表达量进行分析，发现ＺｉＴ，乂Ｐ７，说Ｘ：ｉ＾并无表达差异，两个龙眼样本中的巧化／的基因序列及编码区相同，但是ｉ７？因并没有被检测到。虽然龙眼成花机制的研究较多，但是关于巧伺源基因的研巧甚少，本研巧发现公巧７７和饼Ｆｒ２在ＰＰ３３３和艺婦利诱导四季蜜龙眼成花转变的过程中可能起着关键作用，且凸／ＦＴ２与成花紧密相关，同时构建了公巧７７和一一的超表达载体，为今后进步的研究打下定基础。应用春季修剪和叶面喷布ＰＰ３３３与乙締利促进四季蜜巧眼夏季成花，主要由于飞，打破了树体内源激素的平衡、营养物质及Ｆ７＾因的表达变化，从而缩短了营养生长时间，较早地进入生殖发育阶段。由分析结果可Ｗ看出，营养物质的变化、内源激素和激素之间动态平衡的变化幅度较大的时期多数出现在处理后的３ｄ￣１６ｄ，说明这个时期是花芽分化过程的关键时期。高水平的ＩＰＡ和ＡＢＡ含量提￣／ｄ高了淀粉的含量，有利于促进成花；公Ｆ７７和公／／Ｔ２在处理后３８ｄ（顶芽萌动期和花序原基出现期）相对表达量较顶芽未萌动时有明湿增加，此阶段ＡＢＡ、ＩＡＡ￣￣ｄ、。含量上升，ＧＡ含量在处理３５ｄ上升在处理５ｄ８ｄ又略有降低Ｄ／Ｆ７７和Ｄ／ｍ在￣１６ｄ２５ｄ花生长期相对表达量商，此阶段ＡＢＡ、ＩＡＡＧＡ含量上升，含量相对稳定。由此推测，ＩＡＡ和ＧＡ可能对ｉＴ同源基因起正调控的作用。四季蜜龙眼成花调控除其生长特性外，还受到营养物质、光照、水分、温度等外界环境的影响。但是外界环境、内源激素、营养物质的变化与重要开花基因一间的联系，有待进步的研巧。５５
广西大单项古单化论文生长巧节荆巧按四李巧龙眼夏李成花机理的巧步研兜４．６全文总结一（１）四季蜜龙眼是个耐强修剪的品种，修剪后树体恢复较快。在结果母、１２６．９ｍ／Ｌ５００ｍ／Ｌ枝单元末次梢叶片浅绿色顶芽尚未萌发时，向叶面喷布ｇ己稀利＋ｇＰＰ３３３海合液，７ｄ后喷布１２６．９ｍｇ／Ｌ乙締利＋２５０ｍｇ／ＬＰＰ３３３混合液，能促进四季蜜龙眼夏季集中成花。（２）ＰＰ３３３与己帰利增加了树体内ＩＰＡ和ＡＢＡ的含量，降低了ＧＡ的含量；四季蜜龙眼花芽分化需要叶片中高水平的ＩＰＡ、低水平的ＧＡＷ及较高水平的ＡＢＡ、ＩＡＡ。（３）ＰＰ３Ｕ和石帰利处理增加了树体内ＩＰＡ／ＩＡＡ的比值，花芽分化过程叶片中较高ＩＰＡ７ＩＡＡ比值可Ｗ抑制树体的营养生长，有效地进入花诱导时期进而促进花芽分化。（４）四季蜜龙眼成花过程中可溶性糖和淀粉的大量积累有利于花芽分化，叶片中Ｃ／Ｎ比值高有助于花芽分化。（５）本试验克隆获得了四季蜜龙眼公／Ｆ７７和饼Ｆ７２基因的ｃＤＮＡ全长，分析表明，饼仍７和Ｄ／Ｆ：口开放阅读框（ＯＲＦ）都为５２５ｂｐ，各编码１７４个氨基酸，两者所编码的蛋白质存在２４个氨基酸残基的差异。四季蜜龙眼同源基因和其它物种Ｆｒ同源基因高度保守，并且在蛋白质空间结构义Ｌ及结构域上高度相似。根据实时巧光定量结果推测：〇化７７和。／Ｆ７７在ＰＰ３３３和乙稀利诱导四季蜜龙眼成花转变的过程中可能起较大的作用，且〇巧Ｔ２与成花紧密相关。构建了－－重组表达载体ＢＩ１２１Ｄ１ＦＴ１和ＢＩ１２１Ｄ／Ｆｒ２，并收获ＴＯ代拟南芥种子，为今Ｐｐ后功能验证奠定了基础。（６）碳水化合物、内源激素及激素间的动态平衡不仅直接影响四季蜜龙眼的成花过程，而且还可能是Ｆｒ基因表达的重要调节因子。第五章创新点与展望５．１主要创新点（１）首次从四季蜜龙眼成熟叶片中克隆出２个Ｆｒ基因（ＯＷ７７、公巧Ｔ２），并５６
广巧大単巧古净Ｉ化论义生长巧巧制用度四春妻义化ＪＣ车成花机巧的巧步巧３Ｓ对基因的序列特征、进化关系和表达特性进行了分析。（２）从生理层面和分子层面相结合巧步阐明生长调节剂调控四季蜜龙眼夏成花调控的机制。５．２问题与展望本研究初步探讨了生长调节剂调控四季蜜龙眼夏季成花的机理，但是处理后四季蜜龙眼内源激素、可洛性糖、淀粉化及可溶性蛋白变化与Ｄ巧Ｔ７和公巧Ｔ２一表法之间的联系有待深入研巧，公巧７７；巧；另外和ＤＷ的作用还有待进步研究。本试验虽已成功构建了公／Ｆ７７和公巧Ｔ２超表达载体并转入拟南芥中得到ＴＯ代种一子，。，但由于时间所限，还未能观察到其性状这也是后续工作的部分鞭５７
广巧大単巧古单位论义生长调节制调沒四李巧义化无李成花机理的初步巧突致谢寒暑Ｈ易、，尚未好好感受，研究生时光就即将结束。在此谨向所有关屯和帮助过我的老师、同学和亲友们致Ｗ诚挈的谢意和最美好的祝福！首先向我的导师朱建华研究员、潘介春副教授表示深深的感激和敬意！本文、是在导师的悉屯指导下完成的，从选题、研究方案设计、田间试验处理到论文写、血给予指导作，导师倾注了大量的財间与屯。Ｈ年来两位导师不仅时时督促我学习，还在生活上的给予帮助、关也。导师的敬业精神、严谨的治学态度、不怕苦的精神＞１＾１及宽厚的长者风范都是我学习的榜样，他们的谭淳教导使我受益终生。同时，感谢广西大学农学院杨美纯老师对本论文写作的指导与修改意见。在论文、完成之际！，谨向恩师表示最衷屯的感谢感谢广西大学何新华、欧世金、薛进军、唐志鹏、罗聪、黄桂香、黄永禄等老师在试验Ｗ及生活中的帮助。感谢广西农业科学院园艺研究所龙眼窺枝课题组彭宏祥老师，黄凤珠老师，李鸿莉一、徐宁、秦献泉、陆贵锋及李冬波师兄师姐们给予的关怀，在此并致Ｗ诚挈的谢意！感谢下峰师兄的启发与指导、；感谢张树伟师姐胡颖师姐在试验上的指导和无私的帮助，特别幸运地遇到了送么优秀的师兄师姐，你们是我学习的榜样。感谢果树学的同学旦帅男、张奕、田珊珊、郑颖颖、陈千付、高兴；感谢我的好朋友们，谢谢这Ｈ年成长的路上有你们的陪伴。特别感谢我的父母这些年的照顾、支持和理解；家人永远是我坚强后盾。邱宏业二〇—六年六月５８
广巧大単项古単位论文生长巧节制巧没四孚妻义巧义争成花机巧巧巧步研免参考文献山蔡中荒四季花龙眼花芽分化期营养动态变化的研巧［Ｄ］．兰州巧肃农业大学，２０１０．一．ＧＡ和ＰＰ３３３口］曹尚银，汤卒，张俊昌对苹果花芽形态建成及其内源激素比例变化的－影响阴．果树学报２００１１８６３１３３１６，，，（）：口］曹尚银，张俊昌，魏立华．苹果花芽孕育过程中内源激素的变化机．果树科学，２０００，１７４－（）：２４４２４８．４陈殿余．石狭、储良龙眼反季节成花及四季蜜龙眼集中成花技术研究［Ｄ］．南宁：广西［］大学，２００９．［５陈清西李松刚．ＫＣ１０３诱导龙眼成花及其叶片碳水化合物与蛋白质的变化Ｊ．福建］，［］农林大学学报２００４－：自然科学版３３２：１８２１８５．：，，（）；、％ｙ６陈香玲．己締利对戈眼成花的生理生化作用研究［Ｄ］．南宁：广西大学．２００５．［］［７］陈娜娜．葡萄ＳｎＲＫ２基因家族的全基因姐整定、表达分析及ＷＳｎＲＫ２．２基因的功能３验证．：．２０１．［Ｄ］南京南京农业大学程华．［８］，李琳玲袁红慧等内源激素含量变化与板栗花芽分化关系研究［化北方园艺，，，２０－１３（２２）：５９．安例下峰蟲枝化ＯＷ郎ｚＭＪｉｏｃｗｒ（巧０同源基因的克隆及巧能研究网．南宁广西大学．２０１２．［１０］了峰，彭宏祥，何新华，等．竊枝化Ｉ０ＣＷｒ（ｆＤ同源基因ｃＤＮＡ全长克－隆及其表达机．果树学报２０１２２９ｌ：７５８０．，，（）［川獎卫国，刘国琴度华明，掌刺梨花芽分化期芽中内源激素和碳、氛营养的含量动态２００３２０－１：４０４３．町果树学化，（）１２房始丰，房远林，李文育，等．四季蜜龙眼反季节高效综合调控生产技术研究与应用阴，［］福建农业科学２０－１１３：３８４０．，，１３官磊．龙眼ＬＥＡＦＹ基因克隆与功能研巧［Ｄ］．福州：福建农林大学２００８．，［］１４郝敬虹齐红岩间妮等．园艺作物花芽分化的研巧进展Ｊ．农业［］，，，［］科技与装备，－２００８１：７９．，（）１５侯学巧梁立峰，季作梁，等．窺枝花芽分化期内源ＡＢＡ的变化动态阴．园艺学报［］，，－＞１１５的４２：１２１６．，（）５９
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广巧大掌巧女学位论文生长巧节制巧按四李巧义化义李成花机巧巧巧步研免６－ＨＲｓｓｏｔＣＳｕ缸ｅｚＬ６Ｐ〇／？Ｃ彷Ｖ５Ｔ４ｉＶＳａｔｓｉｔｈｈｌｏｅｍ化ｌｔ［巧Ａｎ，ｏｕ，ｐｅｚ，ｅｆｃｎｅｒｅｕａｅａｐｇｓｓｔｅｍｉｃｓｉｎａｌｔｈａｔｉｎｄｕｃｅｓｈｏｔｏｅｒｉｏｄｉｃｆｌｏｗｅｒｉｎｏｆＡｒａｂｉｄｏｓｉｓＪ．Ｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｙｇｐｐｇｐ［］ｐ，５－２００４１３１：：％１３６２６．，６９ＡｒａｋｉＴ．Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｆｒｏｍｖｅｅｔａｔｉｖｅ化ｒｅｒｏｄｕｃｔｉｖｅｈａｓｅＪ．Ｃｕｒｒｅ打ｔＯｉｎｉｏｎｉｎＰｌａｎｔ［］ｇｐｐ［］ｐＢ－ｉｏｌｏ２００１４：６３６８．ｇｙ，，〇ＢａｎｆｉｅｌｄＭＪａｎｄＢｒａｄＲ．ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＡｎｔｉｒｒｈｉｎｕｍｃｅｎｔｒｏｒａｄｉａｌｉｓｒｏｔｅｉｎ（ＣＥＮ）ｌ７］，ｙｐｓｕｅｓｔｓａｒｏｌｅａｓａｋｉｎａｓｅｒｅｕｌａｔｏｒＪ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏ２０００２９７；１２．ｇｇｇ［］ｇｙ，，？ａｎｅｒｔｈＦ．Ｃａｎ巧ｕｌａｔｏｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｍｅ打ｔｂｅｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ［ＵＢｇｇｙｇｐｔｈｒｏｕｈｔｈｅｓｔｕｄｏｆＥｎｄｏｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＪ，ＡｃｔａＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅｇｙｇ，［］－１９９８４６３＾７７８．，７２Ｂｏｈ－ｅａｌｅｎｉｕｓＨＨｕａｎＣｈａｒｂｏｎｎｅｌＣａｍａａＬｔｌ．ＣＯＩＦＴｒｅｕｌａｔｏｒｍｏｄｕｌｅｃｏｎｔｒｏｌｓ［］，ｇＴ，ｐ，ｇｙｔｉｍｉｎｏｆ幻ｏｗｅｒｉ打ａｎｄｓｅａｓｏｎａｌｒｏｗｔｈｃｅｓｓａｔｉｏ打ｉｎｔｒｅｅｓ［Ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，ｇｇｇ］－３１２５７７６：１０４０１０４３．（）７３Ｃ－ａｒｍｏｎａＭａｒｉａ化３６，ＣａｌｏｎｅＭｒｉａｍａｎｄＭａｒｔｉｎｅｚＺａａｔｅｒＪｏｓｅＭｉｕｅｌ．ＴｈｅＦＴ／ＴＦＬｌ［］ｊｙｐｇｅｎｅ－ｆａｍｉｌｉｎｒａｅｖｉｎｅ．Ｐｌａｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏ２００７６３：的７６５０．ｇｙ，，ｇｐ口］ｇｙ７４ＣａｓｔｉｌｌｅｏＣａｎｄＰｅｌａｚＳ．ＴｈｅＢａｌａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＣＯＮＳＴＡＮＳａｎｄＴＥＭＰＲＡＮＩＬＬＯ［］ｊＡｃｔｉｖｉｔｉ的Ｏｅｔｅｍｉｉｎｅｓ■ＰＴＥｘｐｒｅ巧ｉｏｎ化ＴｒｉｇｇｅｒＦｌｏｗｅｒｉｎｇ？ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｌｏ，２００８，［＂ｇｙ８－１：１３３８１３４３．７５Ｃｅｒ舶ｎＰＤａｎｄＣｈｏｒＲｅｕｌａｔｉｏｎｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｔｉｍｅｂｌｉｈｔｕａｌｉｔｙＪ．Ｎａｔｕｒｅ２００３［］ｙＬｇｇ，，ｙｇｑ［］４２３－巧８１８８５．ＣｏｒｂｅｓｉｅｒＬＣｏｕｌａｎｄ〇？Ｐｈｏｔｏｅｒｉｏｄｉｃｆｌｏｗｅｒｉｎｏｆ切ｏｓｂｉｎｔｅｒａｔｉｎｅｎｅｔｉｃ１７句，ｐｐｇｐ，ｇｇｇａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈｅｓ化ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｌｏｒａｌｓｔｉｍｕｌｕｓ口］？巧ａｎｔＣｅｌｌＥｎｖ－ｉｒｏｎ２００５２８：５４６６．，，７Ｃ－ｏｒｂｅｓｉｅｒ！＞，ＶｉｎｃｅｎｔＣＪａｎＳｅｆ幻／．ＦＴｒｏｔｅｉｎｍｏｖｅｍｅｎｔｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ化ｌｏｎｄｉｓｔａｎｃｅ１７］，ｇ，ｐｇｓ－ｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｆｌｏｒａｌｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆ如幻Ｗ血ｗｗ？Ｓｃｉｅ打ｃｅ，２００７，３１６：１０３０１０３３．／机［７刮Ｃｏｕｓｔｈａｍ乂ＬｉＰ，ＳｔｒａｎｇｅＡ，ｅｆ〇／？ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｏｌｙｃｏｍｂＳｉｌｅｎｃｉｎｇＵｎｄｅｒ－ｌｉｅｓＮａｔｕｒａｌＶａｒｉａｔｉｏｎｉｎＶｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ…．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１２，３３７：５８４５８７．７９Ｅｒｉｋ巧ｏｎＳ，目她ｌｅ打ｉｕｓＨ，ＭｏｒｉｔｚＴｅｆ幻／？ＧＡ４ｉｓ化ｅａｃｔｉｖｅ化ｂｅｒｅｌｌｉｎｉｎ化ｅｒｅｕｌａｔｉｏｎ［］，ｇｇｏｆＬＥＡＦＹｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｆｌｏｒａｌｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］，ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００６，－１８：２１７２２１８１．拍
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广巧大単硕古学位论文生长巧节制巧控四李史龙眼Ｘ孚成花机理的巧步研究１０５ＭａｃｋｎｉｈｔＲＤｒＭＬａｕｒｉｅ民ｅｆａ／．Ｆｕ打ｃｔｉｏｎａｌｉｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｔｈｅａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ，ｕｏｕｘ，，ｓ［］ｇｇ？ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆ化ｅ口ｆｌｏｎｌｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｃｅｌｌ，２００２，１４４－（）：８７７８８５．１０６ＭａｔｈｉｅｕＪＹａｎｔＬＪ，ＭｔｉｒｄｔｅｒＦ，ｅ幻／？民５５１〇１ｆｆｌｏｉｂ化ｅｎｄＲｌ７２ｔａｒｅｔ／化１ｏｗｅｒｎ［］，巧ｇｙｇＳＭＺＪ．ＰＬｏＳ良ｉｏｌｏ２００９７：ｅｌ０００１４８．［］ｇｙ，，［１０７］ＭａｔｓｕｄａＮ，ＩｋｅｄａＫ，ＫｕｒｏｓａｋａＭ，別幻厶ＥａｒｌｙＦｌｏｗｅｒｉ打ｇＰｈｅ打ｏｔｙｐｅｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃ＊＇Ｐｅａｒｓ（ＰｒｕｓｃｏｍｍｕｎＬ）巨ｘｉｅｓｓｎＪＪａ．ｏｃＨｔｕｉａｙｉｓ．ｐｉｇ化ｅＧｅｎｅ．．ａｎＳ．ｏｒｔｉｃｕｌｌ［］ｐ２００９７８４－Ｓｃ：４１０４１６ｉｅｎｃｅ（）．，，［１０８］ＭｉｃｈａｅｌｓＳＤ，ＨｉｍｅｌｂｌａｕＥ，ＫｉｍＳＹ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｇｓｉｇｎａｌｓｉｎｒ－Ａｒａ－ａｎｎｕａｉｏｓｉｓＪＰｎＰ２００５１１４１５ｗｉｎｔｅｌｂｄｐ．ｌａｔｈｓｉｏｌｏ３７：９６．，，［］ｙｇｙ１０９Ｍｏｏ打ＪＬｅｅＨＫｉｍＭｅｔａｌ．Ａｎａｌｓｉｓｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎａｔｈｗａｙｉｎｔｅｒａｔｏｒｓｉｎ，，，ｇ［］ｙｇｐ－２９９ＡｒａｂｉｄｏｓｉｓＪＰｎｅＰｈ．ｐ．ｌａｔＣｌｌｙｓｉｏｌｏ２００５４６：２９２，，［］ｇｙ１１０ＪＳｕｈＳＳＬｅｅＨｅｔｌＭＡＤ－ｖＭｏｏｎａｌＴｈｅＳＯＣＳｂｏｘｅｎｅｉｎｔｅｒａｔｅｓｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄ，，，［］ｇｇｅｒｅ－ｉ打ｓｌｓｆｆｌｒｉｉＪＴｈＰｌｌ２００３６１３３．呂ｉｂｂｌｌｉｇ打ａｏｒｏｗｅｎ打幻．ｅａ打ｔＪｏｕｒｎａ３５：６２ｇ，，［］１１１ＭｏｕｒａｄｏｖＡａ打ｄＴｈｏｍａｓＭ民．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏ打ｏｆｄｗａｒｆｉｓｍａｎｄｆｌｏｒａｌｉｎｄｕｃｔｉｏ打ｗｉｔｈａ［］ｎＪＮａｔｕｒｅ－ｒａｅｒｅｅｎ１１ｒｅｖｏｌｕｔｉｏ打ｍｕｔａｔｉｏ．２０００４６：８４７８５０．ｇ，，ｐｇ［］［１１２］ＭｏｕｒａｄｏｖＡ，ＣｒｅｍｅｒＦ，ＣｏｕｐｌａｎｄＧ．Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｇｔｉｍｅ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉ打ｇｐａ化ｗａｙａｂａＰｎＣ２００２１－ｓａｓｓ：１１ｉｓｆｏｒｄｉｖｅｒｓｉｔＪ．ｌａｔｅｌｌ４ＳＩ１Ｓ３０．ｙ，，［］Ｍｕｔ－１１３ａｓａＧ扫ｔｅｎｓ巨ａｎｄＨｅｄｄｅｎＰ．Ｇ化ｂｅｒｅｌｌｉｎａｓａｆａｃｔｏｒｉｎ円ｏｒａｌＫｕｌａｔｏｒｎｅｔｗｏｒｋｓ［ｇｇｙ］ＪｕｒｎａｏｆＥｘｅｒｅＢ２００９－：１１９．Ｊｏｌｉｍｎｔａｌｏ化ｎ６０９７９８９．，，［］ｐｙ１１４ＯｎｏｕＩＰＣｃｈｉＨＩＭｅｒｉｌｌｅｕｘｅｔａｌ．Ｍｔｅ打ｅｉｆｌａｎｔｓｏｖｅ化ｘｒｅｓｓｉｎ，ｅｎｏ，，ｕａｓｓｏ［］ｇｇｐｐｇｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓｎｏｖｅｌｉｎｔｅｒａｃｔｉｏ打ｓａｍｏｎａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｆｌｏｗｅｒｉｎｔｉｍｅｅｎｅｓＪ．ｇｇｇ［］ＴｈｅＰａｎ１２－ｌｔＣｅｌｌ２０００：８８５９００．，，＊Ｗ幻／－１１５ＰｏｓｅＤＶｅｒｈａｅＬＯｔｔＦ．ＴｅｍｅｒａＵｉｒｅｄｅｅ打ｄｅｎｔｒｅ山ａｔｉｏｎｏｆｆｌｏｗｅｒｉｎｂ［，，，ｐｇｙ］ｇｐｇ化ＭｖａｒａｎＪ－ａｎｔａｏｎ．Ｎ１１４４１７．ｉｓｔｉｃｉｔｓａｔｕｒｅ２０３５０３：４ｇ，，［］１ＫＴ１６ＰｕｔｅｒｉｌｌＪ民ｏｂｓｏｎＦ幻／．ｈｅＣ饼Ｖ５７＞１／ＶＳｎ心幻６献ｒｔｅｓ，Ｌｅｅ，Ｗｅｏｆｏｍｏ［］，ｇｅ皆加ｐ円ｏｗｅｒｉｎｇａｎｄｅｎｃｏｄｅｓａｐｒｏ化ｉｎｓｈｏｗｉｎｇｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ化ｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ－Ｊ１８４７８５７．．Ｃｅｌｌ９９５８０，，：［］［１１７］ＲｍａｉｒｅｚＨ，技ｏｄｓｏｎＭ，ＶｅｍｏｙｅｎＭＮＪ，ＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓａｎｄｆｒｕｉｔｂｕｄＦｏｒｍａｔｅＡ巧ａＨｒｅｕｒａｅ２０００５１４２４－２４８ｉｏｎｉｎａｌｏｔｉｌｔ：５．ｐｐ，，，６６
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广西大単硕古単化化义生长调节制调控四孕巧义眼义孚成花机理的巧步研突ｔｉｉ１３０ＴａｋａｄａＳａｎｄＧｏｏＫ．ＴＥＲＭＩＮＡＬＦＬ０ＷＥＲ２ａｎＡｒａｂｄｏｓｓＨｏｍｏｌｏｏｆ［］＾ｐｇＨＥ了ＥＲＯＣＨＲＯＭＡＴＩＮＦ民ＯＴＥＩＮ！Ｃｏｕｎｔｅｍ：化化ｅＡｃｔｂ／ＢｌｉｏｎｆＦＬＯＷＥＲＩＮＧＬＯＣＵＳ，ｏｒＣ饼、旭ＴＸＷｎＶｒＴｓｕｅｓｏｆＬｅａｖｅｓＲｕＦｏｗｅｒｎＴＪ．Ｐａｎｂｙｉ化ｅａｓｃｕｌａｉｓ化ｅｌａｔｅｌｉｉｍｅｌｔｇｇ［］ｅ－Ｃｌｌ２００３１５２８５６２８６５．：，，１３ＴＳＭＳＯｈｔｏＭｅｔａ．ＩＰＰｈｏＰｈ化ｌａｋｅｄａｌｎｈ化ｉｔｏｒｒｏ化ｉｎｓ２Ａｂｌｏｃｋｔｉｌｅ，ａｎｏ，，ｓｏｆａｓａｎｄ［Ｕ－－ｓｕａｒｕｅｎｅｅｘｒｓ．ＰａｎＰ（１０）５６７５７４ｉｎｄｃ化ｌｅｇｅｓｓｉｏｎｉｎｌａｎｔｌｔｈｓｉｏｌｏ１９９４６：．ｇｐ，ｐ口］ｙｇｙ＾１Ｔｅｒ－Ｂｃ３２ｅａｍｎｏＨｅｒＩＳａｍａｃｈＡ．ＴｈｅｆｌｏｗｅｒｉｎｔｅｒａｔｏｒＦｒｒｅｕｉｎｌａｔｅｓ，ｇ［］ｐｇｇ巧？王丈ｃｕｍｕｎＩｎ－ａｎｄ如幻６ａｗＰｌ２００５１１２６７５．ａｃｌａｔｉｏ／成ｌｅｓａｎｔＣｅｌｌ７：２６６巧加，，１３３ＪａＴＭｅａ．Ｉ民ａｏｒｎｅＩｅｄｎｉＱＷｅｉＤＦｅ打Ｓｔｌｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅ山ｔＧｅｓｍｌｉｃａｔｉ，，，ｙ［］ｇｇｐＣｏｎｔｉｎｕｏｕｓＦｌｏｗｅｒｉｎｇｏｆＬｏｎｇａｎ（Ｚ）／ｗｏｃ幻幻巧Ｌ．）［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１４；９（１２）：ｅｌ１４５６８．［１３４］ＷｉｇｇｅＰＡ，ＫｉｍＭＣ，ＪａｅｇｅｒＫＥ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｓｐａｔｉａｌａｎｄ化ｍｐｏｒａｌ－ｉｎｆｏｒｉｏｎｄｕｒｉｎｆｌｏｒａｌｉｎｄｕｃｔｉｏ打ｉ打幻Ｊｃｉｅ打ｃｅ：１５９．ｍａｔ［］．Ｓ２００５３０９０５６１０ｇ，，１３５ＸｎＬＺｈｕＫ民ｕｕａｏｎｏｆａｈｏｓｎｉｏＪ．ｅｌｔｉｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｂｉｔｈｅｓｉｓＪ．ＰｌａｎｔＰｈｓｉｏｌｏ’ｇｙｙ，［］ｇ［］ｇｙ２００３－１３３（１）２９；３．：６，１３６ＣｈｅｎＴａｏＺＸｕＺｅｔａｌ．Ｅ瓶ｃｔｏｆＰａｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌｌｕｓＥ化ｈｏｎＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｎ［］式以义ｐ巧ＥｎＨＮ＇’ｄｏｇｅｎｏｕｓｏｒｍｏｎｅｓａｎｄＧａｒｂｏｎａｎｄｉｔｒｏｇｅｎｉｓｆｕｔｒｉｅｎｔｓｉｎＬｉｔｃｈｉＶａｒｉｅｔＦｅｉｚｂｄａｏｙｒ－ｉｃｕｌｕｒａｌＳｉ＆ｈｎｏｌｏ８［＂？ＡｔｃｅｎｃｅＴｅｃ２０１３１４（）：１１２５１１３１．ｇｇｙ，，ＹＡＲｍｅｎｔｂ－１３７ａｍａｕｃｈｉＡａｎｄｂｅＭ．ｅｕｌａｔｉｏ打ｏｆｒｅｒｏｄｕｃｔｉｖｅｄｅｖｅｌｏｃｏｄｉｎ［］ｇｇｐｐｙｎｏｎｇ民ＮＡｉｎ如幻６／加ｐ加：化ｆｌｏｗｅｒｏｒｎｏｔ１：０ｆｌｏｗｅｒ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，－．１２５：６９３７０４１３８ＹａｎｔＬＭａｔｈｉｅＪＤｉｎｈＴＴ／．Ｏｈ巧ｔｒａｔｉｏｎｏｆ化ｅｆｌｏｌｔｉｔｉｒａｌ，ｕ，，ｅｆ口ｒｃｒａｒａ打ｓｏｎａｎｄｆｌｏ［］ｄｅｖｅｒｉｄｉｉＡｌｏｐｍｅｎｔｉｎＡａｂｏｐｓｓｂｙｔｈｅｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｎｆａｃｔｏｒＰＥＴＡＬＡ２Ｊ．Ｔｈｅｐ［］Ｐ－ｌａｎｔｌ．Ｃｅｌ，２０１０，２２：２１５６２１７０ＭＷＸＭＡ－１３９ＺｈｏｕＣＺｈａｎＴａｎｅｔｌＢＤ．ｏｌｅｃｕｌａｒａｓｉｓｏｆｅｅｎｄｅｎｔ，ａｅ［］，ｇＱｇ，ｇｐＶ－ｅｒｎａｉ１３１１ｌｉｚａｔｉｏｎｉｎＣａｒｄａｍｎｅｆｌｅｘｕｏｓａＪ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２０３４０：０９７１００．，［］，６８
广西大學硕古单化推文生长巧Ｉ节巧巧巧四李巧义化夏争成花机巧巧巧步巧兜附录附录１常用溶液的配制１．ＬＢ培养基（比）：蛋白腺ｌＯｇ；酵母提取物５ｇ；氯化钥ｌＯｇ；ｐＨ７．０（配制固体ＬＢ培养基再’加入１５ｇ琼脂粉）；高压灭菌，４Ｃ保存。２：．ＹＥＰ培养基（１Ｌ）氯化钢５ｇ；酵母提取物ｌＯｇ；牛肉浸膏ｌＯｇ；ｐＨ７．０（配制固体ＹＥＰ培养’基再加入１５ｇ琼脂粉，调ｐＨ值为７．２）；商压灭菌，４Ｃ保存。３．抗生素的配制：’－－２％Ｘ－ｇａｌ：用二基甲骄胺溶解Ｘｇａｌ配制成的２０ｍｇ／ｍｌ的胆存液。避光２０Ｃ长期保存。２０％１？了０：称量２巧了０溶于８１１１１的蒸溜水中１〇１１１１０．２２１１１１１３，再定容至，‘－Ｃ长。滤器过滤除菌，２０期保存°－Ｃ长１００ｍｇ／ｍｌ的Ａｍｐ；溶于无茜蒸馈水，用用０．２２ｕｍ滤器过滤除茵，２０期保存。°／－２５ｍｇｍｌ的卡那霉素：用去离子水溶解定容，０．２２ｕｒｎ滤器过滤除菌，２０Ｃ长期保存（陈娜娜，２０１３）。２０一／ｍｌ利福平：常用浓度为ｍ用定量的甲醇和少许ＩＭＮａＯＨ充分溶解，ｇ；’－。再加适量的去离子水揽拌直至完全溶解，２０Ｃ长期保存６９
广酉大単硕女洋位论文生长调节制巧拉四李巧义眼无李成花机理巧巧歩■巧突附录２攻读硕±学位期间科研、学术活动及论文发表情况一．科研项目课题来源：广西自然科学基金（桂科自０７２８０７０）、现代农业产业技术体系广西创新团－－队建设专项资金（ｎｙｃｙｔｘｇｘｃｘｔｄ０３１２）、广西科学研究与技术开发计划项目（１３２４１０３）资助。二．学术活动－１１．中国东盟亚热带果蔬种质创新与利用国际学术研讨会．南宁２０１３年１月，１２２．第二届桂台农业发展与技术交流研讨会．桂林２０１４年月，３．２０１５蒸枝龙眼学术研讨会５年６月．广州之０１立―．学术论文１．邱宏业朱建华潘介春秦献泉徐宁．四季蜜龙眼产期调节技术和应用效果阴．，，，，６４５－中国南方果化２０１：１１９１２０．，。）２业．邱宏建华才［］冰浩介春朱松生秦献泉徐宁李鸿莉彭宏祥．四季蜜龙，朱，潘，，，，，眼果实生长发育动态及其数学模型研究．（己录用）７０
广西大単硕古単位论文生长巧节制巧按四李要义眼无李成花机理的巧步巧巧附录３田间试验观察１．处理组顶芽分化及花穗发育情况图版依次是调控Ｏｄ、Ｉｄ、３ｄ、５ｄ、８ｄ、１２ｄ、１６ｄ、２０ｄ、２５ｄ四季蜜龙眼顶芽分化及花穗发育情况幽纔齡麵欄纖麵厘７１
广西大単硕古单位论义生长调节制调拉巧孚巧义眼王李成巧化理的巧步巧巧２．对照组顶芽生长情况图版依次是调控Ｏｄ、Ｉｄ、３ｄ、８山口ｄ、１６ｔ２（Ｍ、２５ｄ四季蜜龙眼生长情况議誦關麵顯媛謹識麵７２
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