蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究 72页

~~ft~:87401~%:8740112032.ww~cpoc~1J-liJf5e~seirJ&~I¥J~trl1ttl&;lt~~J&~I¥JJl11t~#11Jf~~ill.$iWA~fir¥~JfiP·~~$~3fm~·~~~f$1JJfiJ~lVf~1Jrtu9="~~tlffij~tl:IfttJtt~~$m~1ft~~~-+~~1lLitXtil3tBM2015~5}I *A~-%~:~£~~~&~~.~~Aa~~~m~~.~ft*fi~~I1tJifi!!Xt~E8PX:*0~:>c!flB~*f~!J:1JoI»-a:r¥.JiJImf¥1f*1~7~.*it::t7f"*1fM~1m1""A~-~B~~~~-~rl~~~~~o~*~~~~~ili-~~-~1"-A~-~,:l:)JB:tl:.Y.:r:f~sjjtiff!1Ji:tt~~:Jl:~i~1o*A1E:i:~iR~U*%~~~1*~*ffi*A;?f(1§o~f}[itxf"F~~~r,1.1~aM=l"t""S"fFsJ=J->{,a*A~~7Mili~~r:p~~~~~~~~m~m~&~~~-~.~-~~~W~rP.J00%1f~~H11ftttJl!~i-&Jtft9}[fP14*o~-T~,fci!f1&1if#Jf01ijrw.Jo;;$:Ai"l~iliW~r:f~~~~~~~~*~~~Jtf¥1~$~$~~#-A~~-W~*ff~~.ey~*m~~,~~~~~~~¥m*U~~-*~&~Jtoc1*-lfitJctl:M-*J§E:il~Jlt~J!5£)liM!sl~x~~lji~;g{~aM:)o~fFsJ=J){a 摘要目的：研究建立蜜远志的质量控制标准；并探讨蜜远志与生远志在主成分上可能存在的差异。方法：以远志总皂苷含量、醇溶性浸出物以及外观性状综合评分为考察指标，采用正交试验对远志蜜炙炮制工艺进行优选，以加蜜量、焖润时间、炒制时间、炒4制温度作为考察因素，用L9(3)正交试验表安排试验。采用薄层色谱法（TLC）对蜜远志中的细叶远志皂苷和远志口山酮Ⅲ进行定性鉴别。采用高效液相色谱法（HPLC）测定蜜远志中细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ和3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量。并比较了蜜远志与生远志这三种成分的含量差异。采用薄层色谱法（TLC）对蜜远志与生远志的石油醚部位、乙醚部位及正丁醇进行了定性比较。结果：远志蜜炙最佳炮制工艺为：加炼蜜20%，焖润6h，炒制时间12min，炒制温度为60±5℃。验证试验结果显示优选的远志蜜炙工艺合理可行，重现性好，为蜜远志的炮制提供具体的工艺参数，为保证其质量提供技术依据。采用薄层色谱法可鉴别出蜜远志中细叶远志皂苷和远志口山酮Ⅲ，图谱清晰，薄层行为较好，可作为其定性鉴别的方法；采用HPLC测定蜜远志中细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ和3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量，该法准确可靠，重现性好，可作为蜜远志的质量控制方法。其中，细叶远志皂苷含量测定方法采用了《中国药典》2010年版“生远志”项下的方法；远志口山酮Ⅲ和3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法进行了改进，即采用依利特HypersilBDSC18(250mm×4.6mm,5µm)色谱柱；以乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱序列为0~30min(A为15%)，30~50min(A为15%~30%)，50~52min(A为30%~100%)，52~60min(A为100%），60~62min(A为100%~15%)，62~75min(A为15%)；流速：1.0mL/min；检测波长：320nm。从薄层鉴别结果可以看出，在365nm和日光下，蜜远志与生远志的正丁醇部位化学成分无明显差异。但是在石油醚部位及乙醚部位，两者差别较大，有些斑点加强，有些减弱，甚至消失。 结论：规范了蜜远志的炮炙工艺，优化了工艺参数，确保蜜远志质量稳定均一，为蜜远志的临床使用和生产提供科学的实验依据；建立了合理可行的蜜远志质量标准草案，其中，定性鉴别图谱清晰，薄层行为较好，三个指标性成分含量测定方法简便快捷，制定了合理的限度；建立的远志口山酮Ⅲ和3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法准确可靠，重现性好，且耐用性好。远志经蜜炙后，主成分的含量均略有降低，但无显著差异，而通过不同极性部位的薄层色谱行为比较，在弱极性部分两者还是存在差异的，而差异成分形成的原因及是否影响其药效还有待进一步研究。关键词：远志；蜜炙；方法改进；质量标准；成分差异 HoneyPolygalaqualitystandardandcomparativestudywithPolygalaSpeciality:PharmacologyoftraditionalChinesemedicalformulaeAuthor:ChenJing-jingTutor:LiAn-ping,NiYanAbstractObjective:TostudytheestablishmentofhoneyPolygalaqualitycontrolstandards;andtoexplorethedifferencesthatthehoneyPolygalaandrawPolygalamayexistonthemainingredient.Methods:Orthogonaltestwasemployedforthehoneypreferredprocessbytheindexesofthetotalonjisaponins,alcohol-solubleextractiveandappearancecompositescore.fourfactorsofaffectingthehoneyprocess,namelytheaddedamountofhoney,braisedembellishtemperaturetime,makingtime,makinginvestigation.TheL49(3)orthogonaltablewasusedtoarrangeexperiment.Usingthethin-layerchromatography(TLC)toidentifythetenuifolinandPolygalaxanthoneⅢ.Usingthehighperformanceliquidchromatography(HPLC)todeterminethetenuifolin,PolygalaxanthonesⅢand3,6"-twomustardacylsucrosecontent.AndcompareshoneyPolygalawithrawPolygalaonthesethreedifferentcomponents.Usingthethinlayerchromatography(TLC)tocomparehoneypolygalaandrawpolygalaontheareaofpetroleumether,ethyletherandn-butylalcohol.Results:Polygalahoneyroastoptimalprocessingtechnologyasfollows:20percentplusrefininghoney,stewRun6h,fryingtimeof12min,fryingtemperatureis60±5℃.ValidationtestresultsshowedthatTheoptimizationhoneyprocessingtechnologyofPolygalaisreasonableandreproducible,andcanprovidetheconcreteoptimizedparameters,andthetechnologybasisforhoneyprocessingtechnologyofPolygala.TherelevantspotsoftenuifolinandPolygalamouthxanthoneⅢweredetermined,andplateswereclear,andbehaviorswerebetter.andcanusedasaqualitative identificationmethod.tenuifolinandPolygalaxanthoneⅢand3,6"-acylsucrosecontentwasdeterminedbyHPLC,whichwassimple,accurate,re-liableandreproducible,canbeusedtocontrolthequalityofhoneyPolygalatenuifolia.Amongthem,tenuifolincontentwasdeterminedbythe"ChinesePharmacopoeia"2010versionof"rawPolygala"methodologies;PolygalamouthxanthoneⅢand3,6"-acylsucrosecontentdeterminationmetmethodisimproved:HPLCanalysiswasperformedonColumneliteODS-BP(250mm×4.6mm,5µm),acetonitrile-0.05%phosphategradientsystemwas0~30min(Ais15%),30~50min(Ais15%~30%),50~52min(Ais30%~100%),52~60min(Ais100%),60~62min(Ais100%~15%),62~75min(Ais15%),Flowrate:1.0mL/min;detectionwavelength:320nm.TheresultscanbeseenfromtheTLCat365nmandsunlight,thechemicalcompositionofpartsofn-butanolbetweenhoneyPolygalaandrawPolygalahasnosignificantdifference.Butinpartsofpetroleumetherandether,thedifferenceislarge,somespotsstrengthened，somewhatweakened,orevendisappeared.Conclusion:thehoneyprocessingtechnologyofPolygalawasSpecificated.Pro-cessparameterswereoptimizated.Toensureuniformqualityandstabilityoftheh-oneyPolygala.Andprovidedexperimentalevidenceofscienceforclinicaluseandproduction.AreasonableandfeasiblequalitystandardsofthehoneyPolygalawasestablished.Amongthem,TLCplateswereclear,andbehaviorbetter,themethodofthreeingredientscontengdeterminationissimpleandfast,anddevelopedareason-ablelimit.BuildingaPolygalaxanthoneⅢand3,6"-twomustardacylsucroseco-ntentdeterminationmeth-odisaccurategoodreproducibility,anddurability.AfterPolygalahoney-roasted,themaincomponentcontentareslightlylower,butnotsignificantlydifferent,butcomparedifferentpolaritybyTLC,thedifferencesstillexistinweaklypolarparts,thecauseofdifferencecomponentformedandtheaffectofitsefficacyremaintobefurtherstudied.Keywords:Radixpolygala;Processedwithhoney;Theimprovedmethod;Qualitystandard;Compositionaldifferences. 目录引言................................................................1第一部分远志蜜炙工艺的研究及炮制规范的建立...........................3试验一基于正交试验优选远志蜜炙工艺...................................31材料..............................................................31.1仪器..........................................................31.2试药..........................................................31.3药材..........................................................32方法与结果........................................................32.1远志总皂苷含量测定............................................32.2醇溶性浸出物含量测定..........................................72.3外观性状评分..................................................73正交试验优选蜜远志炮制工艺........................................73.1炼蜜..........................................................73.2因素水平的确定................................................73.3正交试验......................................................83.4验证试验......................................................94小结..............................................................95讨论.............................................................10试验二不同品牌蜂蜜对远志炮制质量的影响..............................111材料.............................................................111.1仪器.........................................................111.2试药.........................................................111.3药材.........................................................112方法与结果.......................................................112.1指标成分的测定...............................................112.2蜂蜜收集情况.................................................11 2.3蜂蜜项下检查.................................................112.4不同品牌蜂蜜对同一药材质量的影响.............................123讨论.............................................................13第二部分蜜远志质量标准的研究........................................14试验一蜜远志的薄层鉴别研究..........................................141仪器与试剂.......................................................141.1仪器.........................................................141.2试剂与试药...................................................141.3药材.........................................................142方法与结果.......................................................152.1远志口山酮的薄层鉴别..........................................152.2细叶远志皂苷的薄层鉴别.......................................163讨论.............................................................17试验二蜜远志的检查..................................................201材料.............................................................201.1仪器..........................................................201.2试剂与试药...................................................201.3药材.........................................................202方法与结果.......................................................202.1水分测定.....................................................202.2总灰分测定...................................................212.3重金属检查...................................................222.4砷盐检查.....................................................233讨论.............................................................24试验三蜜远志醇溶性浸出物及指标性成分含量测定........................251材料.............................................................251.1仪器.........................................................251.2试药.........................................................251.3药材.........................................................25 2试验方法与结果...................................................252.1醇溶性浸出物含量测定.........................................252.2细叶远志皂苷含量测定.........................................262.3远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量测定.....................313讨论.............................................................37蜜远志质量标准（草案）...............................................39第三部分蜜远志与生远志的成分差异研究................................421仪器与试药.......................................................421.1仪器.........................................................421.2试药.........................................................421.3药材........................................................422试验方法与结果...................................................432.1蜜远志与生远志的成分含量比较.................................432.1.1细叶远志皂苷的含量比较..................................432.1.2远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量比较.................442.1.3总皂苷含量比较...........................................452.1.4醇溶性浸出物含量比较.....................................452.2蜜远志与生远志不同部位薄层鉴别比较...........................462.2.1石油醚部位薄层鉴别.......................................462.2.2乙醚部位薄层鉴别.........................................472.2.3正丁醇部位薄层鉴别.......................................483讨论.............................................................49第五部分结语......................................................511本文结语.........................................................512创新点...........................................................513本研究的不足与展望...............................................51参考文献.............................................................53综述...............................................................55攻读学位期间发表文章情况.............................................61 致谢...............................................................62 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究引言远志为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld．或卵叶远志PolygalasibiricaL.的干燥根，主产于山西、陕西等地。本品始载于《神农本草经》，其味苦、辛。性微温，归心、肾、肺经，具有安神益智、祛痰开窍、消肿散痈等功效。临床上被广泛应用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚，咳痰不爽，[1]乳房肿痛。远志炮制品主要有蜜远志、甘草制远志、姜远志、炒远志、炒制远志[2]等，而蜜远志、甘草制远志是常用的炮制品。由于蜂蜜味甘性平，有甘缓益脾、[3]润肺止咳、矫味和消除毒副作用，故蜜远志又有异于其他炮制品的药效，据文献[4]报道蜜远志能极显著地延长小鼠睡眠时间（P<0.01）,其低剂量有明显的祛痰作用[5]，且可减少胃肠毒性和刺激性。《中国药典》2010版药典中在远志炮制项下只收载了生远志和远志的甘草制法（即制远志），而蜜炙远志无法定标准，仅收载于各地方炮制规范中[6-7]。目前山西多家企业（如山西天生制药、山西仁源堂药业、山西吕梁中药厂、山西德元堂药业、山西宝芝林药业、山西敬德堂药业等）生产的心脑康胶囊中均使用此炮制品，然而我省既未建立其炮制规范，更缺乏质量控制标准，这无疑会影响蜜远志原料及其产品的质量监控，制约其成品生产及应用。可见，制定良好的蜜炙工艺规范及建立相应质量控制标准已势在必行，这也是本课题开展的意义所在。目前，蜜远志收载于《江西中药材饮片炮制规范》（2008年版）、《河南省中药饮片炮制规范》（2005年版）、《浙江中药炮制规范》（2005年版）、《安徽中药饮片炮制规范》（2005年版）等中，经查阅，上述各地方炮制规范不统一，且均缺少详细的炮制工艺参数，为了保证其炮制品质量，其炮制工艺有待优化和规范，故本研究拟采用正交试验法考察蜜炙远志炮制过程中关键工艺参数，并优选出最佳炮制工艺，为蜜远志的炮制提供具体的工艺参数和技术要求，在此基础上，按饮片标准规范并参考《中国药典》“远志”项下要求，研究建立蜜远志的质量标准，填补我省无蜜远志炮制规范、无质量标准的空白，标准的建立必将为蜜远志原料及相应成品制剂的生产、销售及应用等提供科学依据。本课题拟从以下三个方面开展研究：1 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文1、远志蜜炙工艺的研究及炮制规范的建立2、蜜远志质量标准的研究3、蜜远志与生远志成分差异的对比研究2 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究第一部分远志蜜炙工艺的研究及炮制规范的建立由于蜜远志各地方炮制规范不统一，且没有详细的炮制工艺参数，蜜炙远志尚无统一标准，为保证其炮制品的质量，其炮制工艺有待优化和规范，本研究拟采用正交试验法考察远志蜜炙过程中关键工艺参数，并优选出最佳炮制工艺，为蜜远志的炮制提供具体的工艺参数和技术要求，为保证其质量提供技术依据。试验一基于正交试验优选远志蜜炙工艺1材料1.1仪器TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D型电子天平（德国赛多利斯）；BP211D型分析天平（德国赛多利斯）；炒锅；秒表；温度计。1.2试药远志皂苷元（中国药品生物制品检定所，批号：111572-200301，供含量测定用）；蜂蜜（批号：20140517，冠生园）；水为纯化水；其它香草醛、冰醋酸等试剂均为分析纯。1.3药材生远志饮片，购于河北省安国市药材市场，产地为山西，批号为20140414，经山西省中医药研究院倪艳教授鉴定为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld.的干燥根。2方法与结果2.1远志总皂苷含量测定[8-9]2.1.2对照品溶液的制备精密称取远志皂苷元对照品2.10mg，置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.21mg/ml。2.1.3标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6,0.8,1.0ml于6支15ml具塞试管中，80℃3 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文水浴挥尽溶剂，依次加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，振荡摇匀后，室温放置10min，于80℃水浴加热15min，取出放凉，加乙酸10ml，摇匀，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录ⅤA），在560nm处测吸光度。以远志皂苷元质量浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：2Y=3.3850X-0.0099,R＝0.9995；结果表明远志皂苷元在42～210ug/ml的浓度范围内与吸光度呈良好线性关系，结果见图1。图1远志皂苷元标准曲线图2.1.4供试品溶液制备2.1.4.1提取溶剂的选择取正交试验安排项下的炮制品粉末（过3号筛）约lg，精密称定，分别加甲醇、50%甲醇、70%甲醇、无水乙醇、50%乙醇、70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30min，放凉，再称定重量，用对应试剂补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取滤液0.1ml于具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“水浴挥尽溶剂”起，以相应的试剂为空白，依法测定吸光度，测定的吸光度代入标准曲线，计算出供试品溶液中总皂苷的含量，结果见表1。4 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究表1不同提取溶剂对总皂苷含量的影响提取溶剂总皂苷含量/%甲醇4.43350%甲醇3.84570%甲醇3.341无水乙醇4.27850%乙醇3.68170%乙醇3.269由表1可见，甲醇提取样品时总皂苷含量最高，故确定提取溶剂为甲醇。2.1.4.2提取方法的选择取正交试验安排项下的炮制品粉末（过3号筛）约lg，3份，精密称定，分别加甲醇50ml，称定重量，分别超声处理、回流提取、索氏提取1h，放凉，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取滤液0.1ml于具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“水浴挥尽溶剂”起，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，测定的吸光度代入标准曲线，计算出供试品溶液中总皂苷的含量，结果见表2。表2不同处理方式对总皂苷含量的影响处理方式总皂苷含量/%超声处理4.461回流提取4.104索氏提取4.197由表2可见，以超声处理样品时总皂苷含量最高，回流提取和索氏提取，总皂苷含量相近，且均低于超声处理，故确定提取方式为超声处理。2.1.4.3提取时间的确定取正交试验安排项下的炮制品粉末（过3号筛）约lg，4份，精密称定，分别加甲醇50ml，称定重量，分别超声处理30min、60min、90min，放凉，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取滤液0.1ml于具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“水浴挥尽溶剂”起，以相应的试剂为空白，依法测定吸5 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文光度，测定的吸光度代入标准曲线，计算出供试品溶液中总皂苷的含量，结果见表3。表3不同超声时间对总皂苷含量的影响超声时间/min总皂苷含量/%304.421604.455904.403由表3可见，超声处理时间对总皂苷含量影响不大，30min已提取完全，故选择超声处理30min。通过上述优化，确定供试品溶液制备方法为：取正交试验安排项下的各炮制品粉末（过3号筛）约lg，精密称定，加甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液备用。2.1.5精密度试验精密吸取对照品溶液0.4ml，共6份，分别置于具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“水浴挥尽溶剂”起，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，测定的吸光度代入标准曲线，结果吸光度值RSD为1.22%，说明该仪器精密度高。2.1.6稳定性试验精密吸取供试品溶液0.1ml于试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“水浴挥尽溶剂”起，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，测定的吸光度代入标准曲线，结果吸光度值的RSD为1.67%，说明样品溶液在2h内稳定。2.1.7重复性试验精密称取同一正交试验下药材粉末1g，精密称定，共6份，按“2.1.3”项下方法处理，于560nm波长处测定吸光度，吸光度值的RSD为2.40%，说明该方法重复性好。2.1.8加样回收率试验精密称取蜜远志粉末0.5g，精密称定，共6份，分别加入远志皂苷元对照品溶液，按“2.1.3”项下方法处理，于560nm波长处测定吸光度值。以远志总皂苷的含量，计算加样回收率，回收率分别为98.78%、99.31%、97.58%、101.22%、98.63%、100.33%。平均回收率为99.31%，RSD=1.31%，说明该方法回收率较高。2.1.9总皂苷含量测定6 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究精密吸取上述滤液0.1ml于试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“水浴挥尽溶剂”起，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，测定的吸光度代入标准曲线，计算出供试品溶液中总皂苷的含量。2.2醇溶性浸出物含量测定按照中国药典2010版一部附录XA醇溶性浸出物（热浸法）测定。2.3外观性状评分分别将外观色泽、手感、气味进行评分，其评分标准见表4。表4外观性状评分分值1分3分5分色泽红棕色棕黄色深黄色手感黏手略黏手不黏手气味有焦味略有焦味无焦味[10]综合评分标准以综合加权评分的方法对各炮制品进行评价，由于总皂苷、醇溶性浸出物是关键性指标，故将远志总皂苷、醇溶性浸出物的加权系数均为0.35，外观性状加权系数定为0.3，即外观性状、远志总皂苷以及醇溶性浸出物最高分分别定为30分、35分、35分，各评价指标加权处理如下：外观性状评分=性状得分×30/9个样品中最高分；远志总皂苷评分=远志总皂苷含量×35/9个样品中远志总皂苷最高含量；醇溶性浸出物评分=浸出物含量×35/9个样品中浸出物最高含量。综合评分=外观性状评分+远志总皂苷评分+醇溶性浸出物评分[11]3正交试验优选蜜远志炮制工艺3.1炼蜜取蜂蜜适量，加1/3倍量水，缓缓加热至116℃，出现浅黄色有光泽的翻腾的均匀细气泡，手捻有粘性，两手分开无白丝出现时为止，立即倒出，滤去上浮泡沫及杂质，放凉备用。炼蜜含水量应在14%～16%，还原糖含量应不低于80.0％。3.2因素水平的确定根据药典[12]及地方炮制规范[6-7]，用蜜量在20%~25%之间，又根据前期试验，加蜜量低于20%，蜂蜜难以完全均匀涂布，加蜜量高于30%，加蜜量太多，不能完全吸尽。故选择加蜜量20%、25%及30%进行考察。现版药典蜜炙炮制规范中使用的文火，及前期试验考察，温度太高，蜜炙过程中，炮制品易炒焦，故温度不宜太高。同时7 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文参考文献[12]，确定了焖润时间及炒制时间。3.3正交试验以远志总皂苷含量、醇溶性浸出物以及外观性状综合评分为指标，综合考察影响炮制工艺的主要因素，即加蜜量(%)、焖润时间（h）、炒制时间(min)、炒制温度℃4(锅底温度)，选取正交表L9（3）安排正交试验，所选因素与水平见表5；正交试验结果见表6；综合评分方差分析见表7。表5正交设计因素与水平水平A加蜜量/%B焖润时间/hC炒制时间/minD炒制温度/℃120546022568803307121004表6L9（3)正交试验安排及结果序ABCD总皂苷醇浸出物外观性状综合评分号/%/%/分111114.50137.3712.093.575212224.03137.6212.591.435313334.68740.1211.596.184421234.22937.7110.087.222522314.59437.5513.096.732623124.25037.4213.094.051731324.19439.6611.090.952832134.48040.5310.592.685933214.24739.3610.589.935K193.7390.5893.4493.41K292.6793.6289.5392.15K391.1993.3994.6292.03R12.543.035.091.38表7综合评分方差分析方差来源离均平方和自由度F比结果（P）A9.76822.762P>0.05B17.13824.847P>0.05C42.594212.046P>0.05D3.53621.000P>0.05误差3.5428 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究以远志总皂苷、外观性状及醇浸出物综合评分为指标，由表中的直观分析显示，各因素对远志蜜炙工艺影响程度主次为C>B>A>D；方差分析结果显示，四个因素在选择的水平内均无显著性差异，综合分析，以A1B2C3D1组合为佳，即取远志段适量，加炼蜜20%，焖润6h，炒制温度(60±5)℃，炒制时间12min。3.4验证试验以优选的最佳工艺A1B2C3D1，平行重复三次试验，结果见表8，所得的炮制品见图2。表8验证试验结果序号总皂苷/%醇浸出物/%外观性状/分综合评分RSD/%14.63740.05713.097.81724.29239.37014.096.7570.5534.40840.10213.597.200结果：远志总皂苷含量平均值为4.446%，醇浸出物含量平均值为39.843%，外观性状平均得分为13.5分，综合评分均值为97.258，RSD值为0.55%，表明优选的工艺合理、可行。图2蜜远志饮片4小结本实验釆用正交试验，以远志总皂苷含量、醇溶性浸出物及外观性状综合评分为考察指标，考察了加蜜量、焖润时间、炒制温度、炒制时间4个因素，用正交设计表，采用方差分析法，确定具体的工艺参数，得到了远志蜜炙的最佳炮制工艺：待锅温度上升至60℃，投药后，待温度重新上升至60℃开始计时，炒制12分钟，期间要时时翻炒。并能够加以验证，为蜜远志的炮制工艺提供了指导依据。目前，9 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文中药材炮制工艺大多缺乏科学合理的技术参数，使实际操作缺少适合的标准，对炮制工艺中的主要影响因素进行考察，能够有利于实际应用，为蜜远志炮制规范的建立提供科学的理论依据。5讨论5.1优化工艺参数其评价指标的选择是至关重要的。本研究选取了远志标志性成分，即远志皂苷，同时综合了醇溶性浸出物含量和外观性状，采用加权评分的方式对远志蜜炙工艺进行优化研究，既考虑了内在质量，又综合了外观性状，更加全面的评价远志蜜炙工艺的可靠性，可以比较客观的反映各个因素的关系及因素水平对蜜炙远志质量的影响。通过验证实验表明所优选的工艺合理可行。5.2中国药典2010版一部附录ⅡD蜜炙法通则中，蜜炙时，先将炼蜜加适量沸水稀释，本试验考察了加水量，最终确定1/3倍量水较为适宜，易于拌匀、焖润且炮制品最佳。常规蜜炙法仅说明了加蜜量，没有其他参数，本试验通过研究还确定了焖润时间、炒制温度以及炒制时间，为蜜远志的质量保证提供更加全面的技术依据。5.3在远志总皂苷测定方法中，对提取溶剂进行了比较，分别考察了甲醇、50%甲醇、70%甲醇，发现以甲醇提取样品时总皂苷含量最高，故确定提取溶剂为甲醇，同时，还对提取方法和提取时间进行了考察，最终确定以甲醇为提取溶媒，超声处理30min。10 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究试验二不同品牌蜂蜜对远志炮制质量的影响试验一已经确定远志蜜炙炮制工艺，并对其进行了试验验证，炮制方法合理可行，故本节主要是在此炮制工艺的基础上，对不同品牌蜂蜜进行考察。1材料1.1仪器TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D型电子天平（德国赛多利斯）；BP211D型分析天平（德国赛多利斯）；炒锅；秒表；温度计。1.2试药远志皂苷元（中国药品生物制品检定所，批号：111572-200301，供含量测定用）；水为纯化水；其它香草醛、冰醋酸等试剂均为分析纯。1.3药材生远志饮片，购于河北省安国市药材市场，产地为山西，批号为140401，经山西省中医药研究院倪艳教授鉴定为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld.的干燥根。2方法与结果2.1指标成分的测定远志总皂苷、醇溶性浸出物及外观性状见“试验一”2.2蜂蜜收集情况，具体信息见表9。表9蜂蜜收集情况名称批号来源冠生园20140517美特好超市周氏养蜂农20140401美特好超市宏生园20140424美特好超市百花牌20140312美特好超市[13]2.3蜂蜜质量检验2.3.1相对密度本品如有结晶析出，可置于不超过60℃的水浴中，待结晶全部融化后，搅匀，冷至25℃，照相对密度测定法（中国药典2010年版一部附录HA)项下的韦氏比重11 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文秤法测定，相对密度应在1.349以上。结果见表10。2.3.2酸度取本品10g，加新沸过的冷水50ml，混匀，加酚酞指示液2滴与氢氧化钠滴定液（0.lmol/L)4mI，应显粉红色，10秒钟内不消失。结果见表10。2.3.3淀粉和糊精取本品2g，加水10ml，加热煮沸，放冷，加碘试液1滴，不得显蓝色、绿色或红褐色。结果见表10。2.3.45-羟甲基糠醛取本品约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加水约25ml溶解，加15%亚铁氰化钾溶液及30%醋酸锌溶液各0.5ml，加水至刻度（必要时加乙醇1滴消除泡沫），摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液各5ml，分别置于甲、乙两个具塞试管中，甲管加水5.0ml，乙管加新制的0.2%亚硫酸氢钠溶液5.0ml作空白，混匀，照紫外-可见分光光度法(附录VA)，在284nm和336nm的波长处测定吸光度，且二者吸光度差不得大于0.34。结果见表10。表10蜂蜜检查结果名称检查相对密度酸度淀粉和糊精5-羟甲基糠醛冠生园1.415粉红黄色0.18周氏养蜂农1.417浅粉黄色0.22宏生园1.425粉红浅黄0.27百花牌1.412浅粉黄色0.1912 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究2.4不同品牌蜂蜜对同一药材质量的影响，结果见表11。表11不同品牌蜂蜜对同一药材的影响蜂蜜批号总皂苷/%醇浸出物/%外观性状/分201405173.55342.8113.0201404013.60840.2913.5201404243.57139.3814201403123.30940.7214RSD(%)3.883.562.123讨论由上表不同品牌蜂蜜对同一药材质量影响的测定结果，可以看出，各项指标性成分的RSD均小于5，即不同品牌蜂蜜对蜜远志质量影响不大，故远志蜜炙时，对蜂蜜品牌的选择没有太严格的要求。13 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文第二部分蜜远志质量标准的研究质量标准是药材质量控制的重要手段，为保证本品安全、有效和质量可控，参照《中国药典》2010版一部和其他地方炮制规范中有关规定，并结合相关文献研究和前期试验基础上，对蜜远志进行了全面的研究。采用TLC法对蜜远志中的细叶远志皂苷及口山酮Ⅲ进行了薄层鉴别，运用HPLC对蜜远志中的细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖进行含量测定，建立蜜远志的质量标准，为其质量控制提供了科学依据。试验一蜜远志的薄层鉴别研究[1]参照《中国药典》2010版一部“远志”项下的[鉴别]项，主要对蜜远志中细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ进行薄层鉴别研究。1仪器与试剂1.1仪器KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D型电子天平（德国赛多利斯）；BP211D型分析天平（德国赛多利斯）；DFT-200C型粉碎机（上海比朗仪器有限公司）；DZKW-4型电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；DFT-200C型粉碎机（上海比朗仪器有限公司）；薄层层析硅胶G（化学纯青岛海洋化工有限公司）1.2试剂与试药细叶远志皂苷对照品（中国食品药品检定研究所，批号：111849-201303）；远志口山酮Ⅲ（中国食品药品检定研究所，批号：111850-201203）；甲醇（分析纯北京化工厂，批号：20130327）；盐酸（成都市科龙化工试剂厂，批号：20130703）；氢氧化钠（天津市顶福化工总厂，批号：080311）；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。1.3药材蜜远志饮片，部分购于河北省安国药材市场，部分由仁和医药有限公司、山西徳元堂药业提供以及自制，产地为山西、陕西，经山西省中医药研究院倪艳教授鉴定均为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld.的干燥根。14 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究共收集了10个批次试验用药材，样品具体信息见表12。表1210批蜜远志样品信息编号品名产地生产批号来源收集时间备注1蜜远志山西130608援康药业2013.11饮片2蜜远志山西121208援康药业2013.11饮片3蜜远志山西YP131102安国药材市场2014.2饮片4蜜远志陕西A14030101山西德元堂药业2014.5饮片5蜜远志陕西A14030201山西德元堂药业2014.5饮片6蜜远志陕西A14030301山西德元堂药业2014.5饮片蜜远志山西Y140401北京同仁堂2014.77饮片8蜜远志山西Y140801亳州市远光中药厂2014.7自制9蜜远志山西Y140901亳州市远光中药厂2014.7自制10蜜远志山西Y140201仁和医药有限公司2014.7自制2方法与结果2.1远志口山酮的薄层鉴别取本品粉末0.5g，加70%甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取远志口山酮Ⅲ对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2µl，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点,结果见图3。15 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文1234567891011图3远志口山酮薄层鉴别色谱图青岛海洋G板1-10供试品溶液11远志口山酮Ⅲ对照品2.2细叶远志皂苷的薄层鉴别取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率400W，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置圆底烧瓶中，蒸干，残渣加10%氢氧化钠溶液50ml，加热回流2小时，放冷，用盐酸调节pH值为4～5，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取溶液5ml，蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取细叶远志皂苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液5µl和对照品溶液10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（6:3:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图4。16 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究1234567891011图4细叶远志皂苷薄层鉴别色谱图5%香草醛硫酸乙醇1-10供试品溶液11细叶远志皂苷对照品3讨论3.1远志口山酮Ⅲ薄层鉴别时，首先使用自制硅胶G板，但供试品斑点分离度差，影响结果判断（见图5），为此，对展开剂的比例及不同规格的层析板进行了比较研究，结果表明，展开剂比例的调整对改善层析效果影响较小，而层析板的规格是主要影响因素，预制板的层析效果优于自制板（见图3），分析原因，可能是自制板比较厚，不均匀，导致分离度差，故在进行该成分的薄层鉴别时，尽量选取规范厂家生产的预制板。17 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文12345图5自制硅胶G板1、2、3、4供试品溶液5远志口山酮Ⅲ对照品1234567891011图6默克G板1-10供试品溶液11远志口山酮Ⅲ对照品3.2在对细叶远志皂苷进行薄层鉴别时，同样先采用药典方法，但结果不理想，其层析斑点很不清晰（见图7），在此基础上，对点样量进行调整，结果仍不理想，最后通过调整显色剂，由原来的10%硫酸乙醇溶液改为5%香草醛硫酸乙醇溶液，结18 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究果薄层行为较好。1234567891011图7细叶远志皂苷薄层鉴别色谱图10%硫酸乙醇1-10供试品溶液11细叶远志皂苷对照品19 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文试验二蜜远志的检查参照远志、制远志以及其他蜜炙炮制品项下的检查项目，确定了蜜远志的检查项目。本试验对蜜远志的水分、总灰分的含量进行测定，并在此基础上确定最高限量，同时，对其重金属、砷盐进行检查。1材料1.1仪器BP211D型分析天平（德国赛多利斯）；DFT-200C型粉碎机（上海比朗仪器有限公司）；GZX-DH-Ⅱ电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；坩埚；扁型称量瓶1.2试剂与试药磷酸二氢钠（天津市申泰化学试剂有限公司，批号：20140724）；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。1.3药材样品收集情况，见试验一“1.3”项下的表12。2方法与结果2.1水分测定按照《中国药典》2010年版一部水分测定法（附录IXH第一法）测定。取蜜远志粉末各2g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶，厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在105℃烘箱中干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30min，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量(％)。结果见表13。根据10批蜜远志水分测定结果（5.93～10.83%），最高值上调10%作为下限，再结合药典中“远志”项下“水分”限度值（不得过12.0%），制订蜜远志水分的限度为不得过12.0%。20 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究表13水分测定结果称量瓶+样干燥5h称量再干1h称量编号样品重/g水分含量/%品重/g瓶+样品重/g瓶+样品重/g12.0002222.4098322.2648222.264217.2822.0012825.5486825.3980525.397997.5332.0007622.2116222.0071222.0055410.3042.0006025.3023425.1260725.125298.8552.0003425.5492525.4345925.433435.7962.0003520.3023820.1560820.154137.1472.0006225.0393424.8920724.891497.3982.0019225.4316025.2754925.272857.9392.0008222.1410321.9300621.9281410.60102.0010020.4227820.2074920.2060710.832.2总灰分测定参照《中国药典》2010年版一部附录IXK法测定，结果见表14。取过2号筛的蜜炙远志饮片粉末各3g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(精确到0.01g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(％)。根据10批蜜远志总灰分测定结果（2.61～4.45%），再结合药典中“远志”项下“总灰分”指标值（不得过6.0%），制订蜜远志总灰分的限度为不得过6.0%。21 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文表14总灰分测定结果第1次坩第2次坩样品取样第1次称第2次称总灰平均编号埚/g埚/g量/g重/g重/g分/%值1-133.808133.80803.033233.908233.90813.301-235.021635.02183.001935.122235.12213.343.322-135.831735.83193.007235.948735.94843.872-234.872834.87263.002134.988734.98883.873.873-134.433834.43423.001734.519534.51952.843-235.116735.11673.007635.203235.20302.872.864-135.275735.27583.017435.370635.37063.144-234.645934.64583.009434.741434.74153.183.165-136.231636.23183.018536.314836.31502.765-235.512335.51253.001235.596435.59622.792.776-133.869833.86993.009533.952733.95292.766-234.210934.21083.004634.294434.29432.782.777-133.708333.70813.000733.786033.78552.587-235.117835.11793.002035.197235.19722.642.618-135.540835.54103.001335.673835.67344.418-234.908634.90873.001135.043335.04344.494.459-136.701236.70173.000636.779236.77972.609-235.552135.55223.008735.631335.63132.632.6110-134.287034.28733.001634.370434.37042.7710-236.104836.10483.001436.189536.18942.822.792.3重金属检查按照中国药典2010版一部附录ⅨE重金属检查法第二法进行检查。标准铅溶液每1ml相当于10µɡ的Pb。供试品溶液的制备取本品1g，精密称定，照炽灼残渣检查法操作，取炽灼残渣项下的残渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴锅上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至酚酞指示液显中性，再醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml，微热溶解后，滤过，滤液移置纳氏色管中，加水稀释成25ml。另取配制供试品溶液的试剂，置蒸发皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲（PH3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏色管中，加标准铅溶液1ml，再用水稀释成25ml，依法检查。结果10个批次蜜远志样品重金属均未超出10ppm，暂不将此项收入质量标准正文。结果见表15。22 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究表15重金属检测结果编号取样量/g结果11.0002小于百万分之十21.0017小于百万分之十31.0015小于百万分之十41.0014小于百万分之十51.0010小于百万分之十61.0025小于百万分之十71.0013小于百万分之十81.0029小于百万分之十91.0015小于百万分之十101.0012小于百万分之十2.4砷盐检查按照中国药典2010年版一部附录IXF砷盐检查法（第一法）进行检查。标准砷溶液每1ml相当于1µɡ的As。取本品1g，精密称定，照照炽灼残渣检查法操作，取炽灼残渣项下的残渣，加盐酸5ml，转移置测砷盐器中的A瓶中，加水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚酚5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，依法测定。标准砷斑的制备精密量取标准砷溶液2ml，置置测砷盐器中的A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，照供试品砷斑的制备自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。结果10批样品生成的砷斑均浅于标准砷斑，即样品的砷盐含量均未过2ppm，暂不将砷盐的限度列入该检查项下。结果见图8及表16。图8砷盐检测结果23 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文表16砷盐检测结果编号取样量/g结果11.00121.03小于百万分之二21.00131.04小于百万分之二31.00171.03小于百万分之二41.00141.02小于百万分之二51.00181.02小于百万分之二61.00191.03小于百万分之二71.00191.02小于百万分之二81.00131.04小于百万分之二91.00171.02小于百万分之二101.00111.01小于百万分之二3讨论含水量是评价中药饮片质量的重要指标之一[14]。含水量过大，不仅在贮存保管过程中易发霉虫蛀，使有效成分降解，且在配方使用时相对减小实际用量，影响其治疗效果。而蜜远志再加之蜂蜜等营养物质，更易发霉。同时湿度也是影响远志饮片质量的主要因素，其影响主要表现在性状、指标成分含量的变化[15]。故蜜远志不仅要控制自身含水量，同时还应注意贮存条件，蜜远志炮制品应密封包装，置通风干燥处，防潮，防蛀，才能保证其质量。24 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究试验三蜜远志醇溶性浸出物及指标性成分含量测定参照远志、制远志以及其他蜜炙炮制品项下的浸出物，对蜜远志醇溶性浸出物含量进行测定，在此基础上确定最低限量。远志的主要成分是远志皂苷类、远志口山酮类，现版中国药典中远志项下其含量测定指标确定为细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖，故蜜远志的含量测定指标也拟选定这三种成分。1材料1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪；岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；依利特HypersilBDSC18(4.6×250mm,5µm)；WondaCractODS-2(4.6×250mm,5µm)；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SE202F型电子天平(奥豪斯仪器有限公司)；BP211D型分析天平（德国赛多利斯）；DZKW-4型电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；DFT-200C型粉碎机（上海比朗仪器有限公司）1.2试药细叶远志皂苷对照品由中国食品药品检定研究所提供（供含量测定用，批号：111849-201303）；远志口山酮Ⅲ由中国食品药品检定研究所提供（供含量测定用，批号：111850-201203）；3,6"-二芥子酰基蔗糖由中国食品药品检定研究所提供（供含量测定用，批号：111848-201303）；无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140910）；甲醇（分析纯北京化工厂，批号：20130327）；盐酸（成都市科龙化工试剂厂，批号：20130703）；氢氧化钠（天津市顶福化工总厂，批号：080311）1.3药材样品详细信息见,试验一“1.3”表12。2试验方法与结果2.1醇溶性浸出物含量测定根据远志主要成分的性质以及中国药典2010年版一部“远志”项下浸出物测定方法，对蜜远志样品进行浸出物的测定。按照《中国药典》2010年版一部（附录XA）中浸出物测定法项下的热浸法测定，具体测定方法如下：取本品粉末2g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加70%乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接冷凝回流管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放25 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水不足减失的重量，摇匀，用干燥过滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量。10批次蜜远志醇溶性浸出物测定结果见表17，其测定结果在36.75～52.59%范围内。为了合理确定蜜远志醇溶性浸出物的含量限度，对同批远志蜜炙前后含量进行了比较，结果见“第三部分表39”，发现远志蜜炙后其浸出物含量略高于生远志，四批提高的幅度在1.32%～3.32%范围，鉴于其提高幅度不大，故蜜远志醇溶性浸出物含量仍参考中国药典2010年版一部“远志”药材项下醇溶性浸出物的限度，暂确定为不得少于30.0%。表17醇溶性浸出物测定结果样品重蒸发皿恒重干燥3h后蒸发浸出物含量编号/g/g皿+浸出物/g/%12.0006440.6026940.9976539.4822.0001243.2424743.6467140.4232.0004443.3030543.7617245.8642.0001434.6626535.1019043.9252.0001743.2458843.7063546.0462.0007349.2107049.7125650.1772.0008540.2835040.8096052.5982.0004031.5546331.9827942.8192.0006845.4415245.8743643.27102.0005341.0105141.3781336.752.2细叶远志皂苷含量测定2.2.1色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05%磷酸溶液（70:30）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按细叶远志皂苷峰计算应不低于3000。2.2.2对照品溶液的制备取细叶远志皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，即26 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究得。2.2.3供试品溶液的制备2.2.3.1供试品溶液处理方法考察取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定三份，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，第一份超声处理1小时，第二份加热回流1h，第三份索氏提取1h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置圆底烧瓶中，蒸干，残渣加10%氢氧化钠溶液50ml，加热回流2小时，放冷，用盐酸调节pH值为4～5，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，备用。按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表18。表18不同提取方法对细叶远志皂苷含量的影响处理方法细叶远志皂苷含量/%超声1h2.359回流1h2.019索氏提取1h2.043由表18可见，加热回流1h和索式提取1h，细叶远志皂苷含量相近，均低于超声处理1h的结果，因而选择超声处理方法，可能是皂苷受热不稳定。2.2.3.2超声处理时间考察表19超声处理时间对细叶远志皂苷含量的影响超声时间/h细叶远志皂苷/%12.3191.52.32222.308由表19可见，所设定的超声时间对皂苷几乎无影响，超声1h，细叶远志皂苷可提取完全，故选择超声处理1h。2.2.3.3供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置圆底烧瓶中，蒸干，残渣加10%氢氧27 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文化钠溶液50ml，加热回流2小时，放冷，用盐酸调节pH值为4～5，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.2.4线性关系的考察精密吸取细叶远志皂苷对照品溶液1µl，2µl，5µl，10µl，15µl，20µl，分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品的进样量(µg)为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程，结果见表20，结果表明细叶远志皂苷在-10.267～5.34µg.mL之间呈较好的线性关系。表20细叶远志皂苷线性范围-1对照品名称回归方程r线性范围/µg.mL细叶远志皂苷Y=3.6094X-0.05350.99990.267～5.342.2.5精密度试验精密吸取对照品溶液10µl，按上述色谱条件重复进样6次，测定细叶远志皂苷峰面积值，结果见表21，细叶远志皂苷峰面积平均值为9.216，RSD=1.42%（n=6)。表21细叶远志皂苷精密度试验结果序号123456平均值RSD/%细叶远志皂苷9.2059.1479.4049.3079.0249.2089.2161.422.2.6稳定性试验取8号供试品溶液，分别于0，2，4，8，10小时进样l0µl，测得细叶远志皂苷含量，结果见表22。细叶远志皂苷平均值为3.105%，RSD=2.65%，表明供试品溶液至少在10小时内稳定。表22稳定性试验结果时间/h0246810平均值RSD/%细叶远志皂苷3.0093.1493.0483.0943.0893.2433.1052.652.2.7重复性试验取8号样品共6份，每份1g，精密称定，按照供试品制备方法制备各供试品溶液，测得细叶远志皂苷平均含量，结果细叶远志皂苷含量平均值为3.084%，RSD=2.28%（n=6），表明本方法重复性好，结果见表23。28 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究表23重复性试验结果序号123456平均值RSD/%细叶远志皂苷3.0723.0643.1043.0373.0143.2133.0842.282.2.8加样回收率试验取已知含量的8号样品共6份，每份称取0.5g，精密称定，分别精密加入细叶远志皂苷对照品溶液，按照供试品的制备方法制备，依法测定回收率，结果细叶远志皂苷平均回收率为99.31%，RSD为1.14%，回收率在98%～101%之间，表明本方法回收率良好，结果见表24。表24细叶远志皂苷加样回收试验结果编取样量样品中含量对照品回收量回收率平均RSD/%号/g/mg/mg/mg值10.4994015.4013.27528.5699.1320.5402516.6613.27529.7298.3530.5042515.5513.27528.5798.0899.311.1440.6211419.1613.27532.3699.4750.5027915.5113.27528.95101.2660.5041515.5513.27528.7799.582.2.9系统耐用性实验本实验考察了实验条件的耐用性，在相同的实验条件下采用不同的仪器，对相同的样品（北京同仁堂医药有限公司Y140401）进行了分析。安捷伦液相色谱仪：色谱柱：依利特HypersilBDSC18(4.6×250mm,5µm)；进样量：10µL；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（70:30）；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm。岛津液相色谱仪：色谱柱：WondaCractODS-2(4.6×250mm,5µm)；进样量：10µL；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（70:30）；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm。结果显示两个仪器的测量结果基本无差别，细叶远志皂苷分别为2.503%，2.512%，说明该方法有较好的耐用性。2.2.10样品含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,按上述色谱条件测定，以外标一点法计算样品中的细叶远志皂苷的含量，十批样品测定结果，见表25，色谱图9～11。其测定结果在2.038～3.124%范围之间，均在2.0%以上，且同批生品与炮制品29 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文比较结果表明，虽炮制品中细叶远志皂苷的含量均有所下降，但变化不明显（见第三部分表36测定结果），故参考中国药典2010年版一部远志及制远志的含量测定限度,暂定蜜远志中细叶远志皂苷的含量不得少于2.0%。表25细叶远志皂苷含量测定结果编号取样量/g细叶远志皂苷含量/%11.000572.69221.000652.03831.000102.94141.000672.33251.001502.31261.003412.37971.000532.55481.000103.01491.000402.630101.000523.124远志皂苷含测#16[modifiedbyDELL]UV_VIS_160.0mAUWVL:210nm40.0MinAr=1.00020.0min-5.00.02.04.06.08.010.013.0图9细叶远志皂苷空白图谱远志皂苷含测#6[modifiedbyDELL]B3UV_VIS_160.0mAUWVL:210nm40.0MinAr=1.0001-9.20720.0min-5.00.02.04.06.08.010.013.0图10细叶远志皂苷对照品图谱30 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究远志皂苷含测#8[modifiedbyDELL]C6UV_VIS_160.0mAUWVL:210nm40.0MinAr=1.00020.01-9.087min-5.00.02.04.06.08.010.013.0图11细叶远志皂苷样品图谱2.3远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量测定远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量测定时，首先采用药典方法测定远志口山酮Ⅲ的含量，以乙腈-0.05%磷酸溶液(18:82)为流动相，发现远志口山酮Ⅲ峰是个肩峰，经纯度检测，结果发现包含有其他成分。故本研究在药典方法的基础上，对流动相进行了一系列调整。2.3.1色谱条件及系统适用性试验色谱柱：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：0～30min(A为15%)，30～50min(A为15%～30%)，50～52min(A为30%～100%)，52～60min(A为100%），60～62min(A为100%～15%)，62～75min(A为15%)；检测波长为320nm，进样量10µl。2.3.2对照品溶液的制备取远志口山酮Ⅲ对照品适量、3,6"-二芥子酰基蔗糖对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含远志口山酮Ⅲ0.02mg、含3,6’-二芥子酰基蔗糖0.2mg的混合溶液，即得。[1]2.3.3供试品溶液的制备2.3.3.1供试品溶液处理方法的考察取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定三份，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，称定重量，第一份加热回流1.5小时，第二份加热回流2小时，第三份加热回流2.5小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，备用，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，结果见表26。31 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文表26回流提取时间对远志口山酮Ⅲ和3,6’-二芥子酰基蔗糖含量影响处理时间/h远志口山酮Ⅲ含量/%3,6’-二芥子酰基蔗糖含量/%1.5h0.0430.5782h0.0400.5612.5h0.0440.559RSD%4.911.84由表26结果可见，回流提取时间对远志口山酮Ⅲ及3,6"-二芥子酰基蔗糖含量几乎无影响，故选取提取时间1.5h。2.3.4线性关系的考察精密吸取远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖对照品溶液1µl，2µl，5µl，10µl，15µl，20µl，分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品的进样量(µg)为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程，结果见表27，结果表明远志口山酮Ⅲ在0.029～0.58µg/mL之间呈较好的线性关系；3,6"-二芥子酰基蔗糖在0.168～3.36µg/mL之间呈较好的线性关系。表27远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖线性范围对照品名称回归方程r线性范围µg/mL远志口山酮ⅢY=18262X+0.25940.99910.029～0.583,6"-二芥子酰基Y=28155X+2.13360.99920.168～3.36蔗糖2.3.5精密度试验精密吸取对照品溶液10µl，按上述色谱条件重复进样6次，测定远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖峰面积值，结果见表28，远志口山酮Ⅲ峰面积平均值为3.298，RSD=1.90%（n=6）；3,6"-二芥子酰基蔗糖峰面积平均值为53.055，RSD=1.86%（n=6）。表28远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖精密度试验序号123456平均值RSD/%远志口山酮Ⅲ3.3043.2963.2903.2923.3063.2973.2981.903,6"-二芥子53.07552.96852.97353.02353.23053.06153.0551.86酰基蔗糖2.3.6稳定性试验取9号供试品溶液，分别于0，2，4，8，10小时进样l0µl，测得远志32 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量，结果见表29。远志口山酮Ⅲ平均值为0.066%，RSD=0.89%；3,6"-二芥子酰基蔗糖平均值为0.564%，RSD=0.42%，表明供试品溶液至少在10小时内稳定。表29稳定性试验结果时间/h0246810平均值RSD/%远志口山酮Ⅲ0.0670.0670.0660.0660.0650.0660.0660.893,6"-二芥子0.5610.5630.5650.5610.5660.5670.5640.42酰基蔗糖2.3.7重复性试验取9号样品各6份，按照供试品制备方法制备各供试品溶液，测得远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖平均含量，结果远志口山酮Ⅲ含量平均值为0.066%，RSD=1.59%（n=6），3,6"-二芥子酰基蔗糖含量平均值为0.563%，RSD=0.87%(n=6)，表明本方法重复性好，结果见表30。表30重复性试验结果序号123456平均值RSD/%远志口山酮Ⅲ0.0670.0670.0640.0660.0660.0660.0661.593,6"-二芥子0.5610.5630.5730.5600.5650.5610.5630.87酰基蔗糖2.3.8加样回收率试验取已知含量的9号样品各6份，称取0.5g，精密称定，分别精密加入远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖对照品溶液，按照供试品的制备方法制备，依法测定回收率，远志口山酮Ⅲ回收率在94%～101%之间，3,6"-二芥子酰基蔗糖回收率在97%～100%之间，表明本方法回收率良好，结果见表31、32。表31远志口山酮Ⅲ加样回收试验结果编取样量样品中含量对照品回收量回收率平均值RSD/%号/g/mg/mg/mg10.500150.32960.320.63394.6620.500260.32970.320.64799.1430.502460.33110.320.654100.7798.382.4640.500440.32980.320.64498.0750.500130.32960.320.63996.7560.500780.33000.320.653100.9033 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文表323,6"-二芥子酰基蔗糖加样回收试验结果编取样量样品中含量对照品回收量回收率平均值RSD(%)号/g/mg/mg/mg10.500152.8202.805.60799.5220.500262.8212.805.57498.3330.502462.8332.805.61199.2298.951.3640.500442.8222.805.55497.5850.500132.8202.805.654101.2160.500782.8242.805.56397.812.3.9系统耐用性实验本实验考察了实验条件的耐用性，在相同的实验条件下采用不同的仪器，对同批样品（亳州市远光中药厂Y140901）进行了分析。安捷伦液相色谱仪：色谱柱：依利特HypersilBDSC18(4.6×250mm,5µm)；进样量：10µl；流动相见“2.3.1”；流速：1.0mL/min；检测波长：320nm。岛津液相色谱仪：色谱柱：WondaCractODS-2(4.6×250mm,5µm)；进样量：10µl；流动相见“2.3.1”；流速：1.0mL/min；检测波长：320nm。结果显示两个仪器的测量结果基本无差别，远志口山酮Ⅲ含量分别为0.063%和0.067%，3,6"-二芥子酰基蔗糖含量分别为0.546%和0.561%，说明该方法有较好的耐用性。2.3.10样品含量测定取本品粉末1g，精密称定，分别按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液。精密吸取对照品和供试品溶液各10µl，分别采用改进前后两种方法进行测定，结果见表33、表34。远志口山酮Ⅲ对照品、供试品及纯度检测图谱见图12、图13。10批蜜远志样品远志口山酮Ⅲ实测值在0.034%～0.063%之间，同批生远志改进方法的测定结果约为药典方法测定结果的1/3（现版药典规定3,6"-二芥子酰基蔗糖含量不得少于0.15%），经比较，炮制品比生品又略有下降（见第三部分表37测定结果），故暂定远志口山酮Ⅲ的含量不得少于0.03%。10批蜜远志样品3,6"-二芥子酰基蔗糖测定结果在0.237%～0.648%范围之间，改进方法后同批样品中3,6"-二芥子酰基蔗糖含量与药典方法相当（见表24），而炮制品含量较生品略有下降(见表37)，10批蜜远志样品中该成分的实测结果除2号34 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究样品为0.237%，其余样品含量均在0.30%以上，鉴于此，参考药典所收载“制远志”中该成分限度[18]，暂定3,6"-二芥子酰基蔗糖的含量不得少于0.30%。表33远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量测定结果（改进方法）序号取样量/g远志口山酮Ⅲ/%3,6"-二芥子酰基蔗糖/%11.000630.0560.50021.000130.0540.23731.000780.0580.30141.000390.0400.36351.000850.0430.41761.000640.0500.51371.000500.0340.45581.000530.0630.36891.000840.0610.563101.000480.0630.648表34远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量测定结果（药典方法）序号取样量/g远志口山酮Ⅲ/%3,6"-二芥子酰基蔗糖/%11.000630.1730.52221.000130.1260.24231.000780.1650.33241.000390.1920.39551.000430.2070.42661.001020.1750.55971.000500.1120.46981.000530.1800.36991.000840.1510.565101.000480.1700.66635 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文ABC图12远志口山酮Ⅲ对照品、供试品及纯度检测图谱(改进方法)A.远志口山酮Ⅲ对照品；B.供试品；C.远志口山酮Ⅲ纯度检测36 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究ABC图13远志口山酮Ⅲ对照品、供试品及纯度检测图谱（药典方法）A.远志口山酮Ⅲ对照品；B.供试品；C.远志口山酮Ⅲ纯度检测3讨论3.1在采用药典方法进行远志口山酮Ⅲ含量测定时，发现口山酮Ⅲ峰是个肩峰，经纯度检测包含着其他成分，见图13，故在药典方法基础上，首先对流动相比例进行37 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文了调整，分别考察了乙腈-0.05%磷酸14:86；15:85；16:84以及17:83等不同比例的等度洗脱，但分离效果均不甚理想，后采用梯度洗脱，虽测定时间有所延长，但出峰纯度明显提高，见图12。改进方法不仅适宜于远志蜜炙品种,也适宜于生远志,经两种方法的对比研究发现，同批远志改进方法的测定结果约为药典方法测定结果的1/3，见表33和表34，可见现版药典方法的远志口山酮Ⅲ含量测定结果偏高，所定限度也高（现版药典规定远志口山酮Ⅲ含量不得少于0.15%）,故再版药典时其含量测定方法有待改进，远志口山酮Ⅲ含量限度也有待调整。3.2改进方法后同批样品中3,6"-二芥子酰基蔗糖含量与药典方法相当（见表33和表34），同时，做了系统的方法学考察，结果表明方法准确可靠，重现性好，且耐用性好。38 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究蜜远志质量标准（草案）蜜远志MiyuanzhiPOLYGALAERADIXPRAEPARATACUMMELLE本品为远志的炮制加工品。【制法】取远志段，照蜜炙法(中国药典2010版一部附录ⅡD)炒至不粘手。每100kg远志，用炼蜜20kg。【性状】本品呈圆柱形，略弯曲，长约3～5cm，直径0.3～0.8cm。表面深黄色至棕色，折断面黄白色，略有黏性，气微，味甘、微辛，嚼之有刺喉感。【鉴别】（1）取本品粉末0.5g，加70%甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取远志口山酮Ⅲ对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2µl，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（2）取细叶远志皂苷〔含量测定〕项下的供试品溶液5ml，蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5µl和〔含量测定〕项下的对照品溶液10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（6:3:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】水分不得过12.0%（中国药典2010版一部附录ⅨH第一法）。总灰分不得过6.0%（中国药典2010版一部附录ⅨK）。【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（中国药典2010版一部附录ⅩA）项下的热浸法测定，用70%乙醇作溶剂，不得少于30.0%。【含量测定】细叶远志皂苷高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录Ⅵ39 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文D）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05%磷酸溶液（70:30）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按细叶远志皂苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取细叶远志皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率400W，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置圆底烧瓶中，蒸干，残渣加10%氢氧化钠溶液50ml，加热回流2小时，放冷，用盐酸调节pH值为4～5，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含细叶远志皂苷（C36H56O12），不得少于2.0%。远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录ⅥD）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为320nm。理论板数按3,6"-二芥子酰基蔗糖峰计算应不低于3000。时间（分钟）流动相A(%)流动相B(%)0～30158530～5015→3085→7050～5230→10070→052～60100060～62100→150→8562～751585对照品溶液的制备取远志口山酮Ⅲ对照品、3，6"-二芥子酰基蔗糖对照品适量，40 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究精密称定，加甲醇制成每lml含远志口山酮Ⅲ0.02mg、含3,6"-二芥子酰基蔗糖0.2mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含远志口山酮Ⅲ（C25H28O15）不得少于0.03%，含3,6"-二芥子酰基蔗糖（C36H46O17）不得少于0.30%。【性味与归经】苦、辛，温。归心、肾、肺经。【功能与主治】安神益智，祛痰，消肿。用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚，咳痰不爽，疮疡肿毒，乳房肿痛。【用法与用量】3～10g。【贮藏】置通风干燥处，防潮，防蛀。41 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文第三部分蜜远志与生远志的成分差异研究远志中主要含有皂苷类、[16-18]口山酮类、糖酯类和脂肪油类等。HPLC及TLC作为常用的化学研究方法因其简便易行而被广泛采用，文献报道远志蜜炙后会达到增效减毒的作用，故本部分实验采用HPLC的方法，从远志主要成分的含量上进行比较；同时采用TLC的方法，从多个不同部位对生远志和蜜远志的化学成分进行比较，以期找到异同点，进而为蜜炙解毒增效提供依据。1仪器与试药1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪(Agilent)；KQ3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BP211D型电子天平(德国赛多利斯)；BP211D型分析天平(德国赛多利斯)；DZKW-4型电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；GZX-DH-Ⅱ电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；DFT-200C型粉碎机(上海比郎仪器有限公司)；薄层层析硅胶G（化学纯青岛海洋化工有限公司）1.2试药细叶远志皂苷对照品（供含量测定用，批号：111849-201303）、远志口山酮Ⅲ对照品（供含量测定用，批号111850-201203）、3,6"-二芥子酰基蔗糖（供含量测定用，批号：111848-201303）、远志皂苷元（供含量测定用，批号：111572-200301）均购置于中国食品药品检定研究所；无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140910）；甲醇（分析纯北京化工厂，批号：20130327）；盐酸（成都市科龙化工试剂厂，批号：20130703）；氢氧化钠（天津市顶福化工总厂，批号：080311）；水为纯化水；其它香草醛、冰醋酸等试剂均为分析纯。1.3药材样品收集情况，具体信息见表35。42 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究表35样品收集情况编号品名产地生产批号来源收集时间14生远志山西140401北京同仁堂2014.718生远志山西140801亳州市远光中药厂2014.722生远志山西140201仁和医药有限公司2014.725生远志山西140501仁和医药有限公司2014.72试验方法与结果2.1蜜远志与生远志的成分含量比较2.1.1细叶远志皂苷的含量测定2.1.1.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05%磷酸溶液（70:30）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按细叶远志皂苷峰计算应不低于3000。2.1.1.2对照品溶液的制备取细叶远志皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，即得。2.1.1.3供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置于圆底烧瓶中，蒸干，残渣加10%氢氧化钠溶液50ml溶解，水浴回流2小时，放冷，用盐酸调节pH值为4～5，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，回收正丁醇溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.1.1.4生远志与蜜远志细叶远志皂苷含量比较，结果见表36。43 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文表36蜜远志与生远志细叶远志皂苷含量比较编号细叶远志皂苷/%生品炮制品（1）炮制品（2）142.7812.6972.554*183.0922.630223.4413.124252.3852.180注：*表示炮制品来自企业，对应14号生品。2.1.2远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖2.1.2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：0～30min(A为15%)，30～50min(A为15%～30%)，50～52min(A为30%～100%)，52～60min(A为100%），60～62min(A为100%～15%)，62～75min(A为15%)；检测波长为320nm，进样量10µl。2.1.2.2对照品溶液的制备取远志口山酮Ⅲ对照品、3,6"--二芥子酰基蔗糖对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含远志口山酮Ⅲ0.02mg、含3,6"-二芥子酰基蔗糖0.2mg的混合溶液，即为对照品溶液。2.1.2.3供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）lg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.1.2.4生远志与蜜远志的远志口山酮Ⅲ和3,6"-二芥子酰基蔗糖含量测定，结果如下表37。44 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究表37蜜远志与生远志中远志口山酮Ⅲ及3,6"-二芥子酰基蔗糖含量比较编号远志口山酮Ⅲ/%3,6"-二芥子酰基蔗糖/%生品炮制品生品炮制品140.0650.0630.5290.368180.0720.0610.6610.546220.0840.0630.8580.648250.0620.0540.4880.3552.1.3总皂苷含量比较2.1.3.1总皂苷含量测定取本品粉末（过3号筛）lg，精密称定，加甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放凉，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液0.1ml于试管中，80℃水浴挥尽溶剂，依次加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，室温放置10min，于80℃水浴加热15min，取出放凉，加乙酸10ml，摇匀，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录ⅤA），于560nm处测吸光度。代入标曲：Y=3.3850X-0.00992.1.3.2总皂苷测定结果，见表38。表38蜜远志与生远志总皂苷含量比较编号总皂苷含量/%生品炮制品（1）炮制品（2）144.1573.5534.001185.1724.703225.5794.662255.1855.1202.1.4醇溶性浸出物含量测定，具体方法见“第二部分试验二”，结果见表39。45 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文表39蜜远志与生远志醇溶性浸出物含量比较编号醇溶性浸出物含量/%生远志炮制品1439.4942.811841.4943.272233.8636.752545.2946.61[8]2.2蜜远志与生远志不同部位薄层鉴别比较2.2.1石油醚部位薄层鉴别取本品粉末（过二号筛）1g，加石油醚(30~60℃)40ml，水浴回流2次，每次1h，取出，合并滤液，药渣备用。石油醚液水浴蒸干，残渣加石油醚2ml溶解，即得石油醚部位供试品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（7:2:0.3）为展开剂，展开，展距10cm,取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外（365nm）下检视，结果见图14、图15。46 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究CBA1234567812345678图14石油醚部位365nm图15石油醚部位日光1-4是生远志，5-8是对应的蜜远志结果：由上图14可以看出，置紫外光灯（365nm）下检视，蜜远志与生远志所含成分种类上没有变化，但斑点强弱有变化，其中A、B斑点减弱，C斑点加强；喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，在日光灯下，蜜远志比生远志斑点依然是减弱。2.2.2乙醚部位薄层鉴别石油醚提取后的药渣挥干，置锥形瓶中，加95%乙醇50ml，水浴回流2次，每次1h，趁热滤过，合并滤液，滤液浓缩至一定体积后加3倍量乙醚使沉淀，放置过夜，倾出上清液，沉淀用少量乙醚洗涤数次，合并乙醚液，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml溶解，即得乙醚部位供试品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（7:2:0.3）为展开剂，展开，展距10cm,取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365nm）下检视,结果见图16、图17。47 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文1234567812345678图16乙醚部位365nm图17乙醚部位日光1-4是生远志，5-8是对应的蜜远志结果：在紫外光灯365nm下，蜜炙后，斑点减弱，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，在日光灯下，生远志比蜜远志多一个红色斑点。2.2.3正丁醇部位薄层鉴别取本品粉末（过二号筛）1g，加水50ml,水浴回流2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至一定体积，用正丁醇萃取3次，每次50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板，以三氯甲烷－甲醇－水（4:3:1.5）下层溶液为展开剂，展开，展距10cm,取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外（365nm）下检视,结果见图18、图19。48 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究1234567812345678图18正丁醇部位365nm图19正丁醇部位日光1-4是生远志，5-8是对应的蜜远志结果：在紫外灯365nm和日光灯下，生远志与蜜远志的薄层色谱斑点无明显差异。3讨论[19]关于远志炮制前后化学成分变化的研究报道有很多。房敏峰等采用HPLC法测[20]定各炮制品远志皂苷元的含量，表明蜜远志中的远志皂苷元含量最低。田徽采用薄层扫描法对其水煎液皂苷元含量进行测定发现，蜜远志水煎液中皂苷元含量显著[21]低于生远志水煎液中皂苷元含量；林敬开等采用HPLC法对各炮制品中的远志酸和远志皂苷元含量进行比较发现，蜜远志的远志酸与远志皂苷的含量均低于生远志。[21]官仕杰等研究结果表明，蜜远志水提取液中总皂含量最低。上述研究结果与本实验结果相吻合，无论是细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ还是总皂苷含量，蜜炙后，含量[23][24]均有所降低，但变化不明显。李希、王光志等以醇溶性浸出物为指标，对不同方法炮制的远志质量进行了比较，结果发现蜜远志醇溶性浸出物含量大于生远志，其结果与本实验结果也相吻合。从薄层鉴别结果可以看出，在365nm和日光下，蜜远志与生远志的正丁醇部位化学成分无明显差异。但是在石油醚部位及乙醚部位，两者差别较大，有些斑点加强，有些减弱，甚至消失。说明远志中极性较低成分（如挥发油类、脂肪油等）在[25]蜜炙后发生了变化。有文献报道远志挥发油类成分主要含有酮类、酸类、胺类、49 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文[26]有机酸及烷烃等，其中含量较高的甲苯与咽喉粘膜刺激作用有关。不饱和脂肪酸[27][27]是远志脂肪油类主要成分，具有降血脂、抗动脉粥样硬化作用。远志蜜炙后能达到增效减毒的效果，可能与挥发油类和不饱和脂肪酸类成分含量变化有关，其具体成分变化还需要进一步的研究。50 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究第五部分结语现行版药典中只收载了生远志及制远志的质量标准，而蜜炙远志没有统一的质量标准，仅收载于各地方炮制规范中[6-7]。前期试验发现，现版药典远志项下所收载[1]的“远志口山酮Ⅲ”含量测定方法存在不足。故本实验主要从上述几个方面进行研究，确定远志蜜炙的最佳工艺及蜜远志地方标准，为蜜远志的质量保证和临床使用提供依据。1本文结语1.1采用正交设计，以总皂苷含量、醇溶性浸出物及外观性状综合评分为指标，对加蜜量、焖润时间、炒制温度、炒制时间进行考察，最终确定为远志段适量，加炼蜜20%，焖润6h，炒制温度60℃，炒制时间12min。1.2质量标准研究中采用薄层色谱法（TLC）对蜜远志中的细叶远志皂苷及远志口山酮Ⅲ进行定性鉴别，结果所得斑点清晰，分离度好，能够较好地鉴别出二者成分；采用高效液相色谱法（HPLC）测定蜜远志中的细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ及3,6"-二芥子酰基蔗糖的含量。经方法学考察，方法准确可靠，重现性好，简便可行，所建立的质量标准可作为蜜远志的质量控制方法。对药典中远志口山酮Ⅲ含量测定的进行改进，最终确定了本文中方法，其出峰纯度明显提高，再版药典时其含量测定方法有待改进，其限度有待调整。1.3远志蜜炙后，成分有所变化，皂苷含量有所下降，醇溶性浸出物含量升高，挥发油类和不饱和脂肪酸类成分含量发生变化，这些变化可能与远志蜜炙后增效减毒有关。2创新点2.1本研究对远志蜜炙工艺优选时，采用加权评分的方式对远志蜜炙工艺进行优化研究，既考虑了内在质量，又综合了外观性状，更加全面的评价远志蜜炙工艺的可靠性，可以比较客观的反映各个因素的关系及因素水平对蜜炙远志质量的影响。2.2本研究远志口山酮Ⅲ药典方法进行了改进，方法精密度好，回收率高。2.3首次制定蜜远志山西省地方标准。3本研究的不足与展望51 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文3.1蜜远志与生远志的不同部位的定性鉴别比较，发现不同部位成分有所差异，而差异成分究竟为何种物质?有待进一步深入研究。3.2蜜远志与生远志成分比较时，只是使用常规的检测手段，不能较全面的对成分变化进行检测。二维红外光谱作为一种新的方法和手段开始应用于炮制品的研究中。该法具有快速、准确等优点,同时还能鉴别药材炮制后结构变化规律，故我们可以借助二维红外光谱对远志炮制前后的化学成分进行进一步的研究。52 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究参考文献[1]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京:化学工业出版社,2010:146.[2]万德光,陈林,刘友平,等.远志炮制沿革考[J].中药材,2005,28(3):233-235.[3]韩俊俊,鲁贤昌.浅谈中药的蜜炙工艺[J].浙江中医药大学学报.2010,34(6):924-925.[4]郭娟.远志炮制品增效减毒对比实验研究[D].四川.成都中医药大学.2004.[5]郭娟,王建.生远志及炮制品对小鼠止咳化痰作用[J].中药药理与临床,2003,19(4):29.[6]《河南省中药饮片炮制规范》.河南人民出版社,2005:67-68.[7]《浙江省中药炮制规范》.浙江科学技术出版社,2005:51.[8]董敏.远志蜜炙前后化学成分对比研究[D].四川.成都中医药大学.2007.[9]夏厚林,董敏,盛燕,等.远志蜜炙前后化学成分的对比研究[J].时珍国医国药,2006,9(17):1620-1621.[10]周倩,张泰,石典花,等.正交试验优选甘草最佳蜜炙工艺[J].中成药,2010,3(32):447-450.[11]王光志.远志资源与品质评价[D].四川.成都中医药大学.2006.[12]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京:化学工业出版社,2010:1269.[13]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京:化学工业出版社,2010:337.[14]王建升,杨辉,刘俊玲.中药饮片的水分含量和贮存养护[J].中医药信息,2009,26(1):35-36.[15]王启林,房敏峰,吴洋,等.远志炮制品的稳定性影响因素考察[J].中成药,2011,33(3):486-488.[16]姜勇,屠鹏飞.远志研究进展[J].中草药,2001,32(8):759-961.[17]王玉萍,杨峻山,张聿梅,等.远志的化学成分研究[J].中草药,2005,36(9):1291-1293.[18]李萍,闫明,李平亚.远志化学成分的分离与鉴别[J].中国药物化学杂志,2005,15(1):35-38.[19]房敏峰,付志玲,滕红梅,等.HPLC评价远志种质资源及炮制品的质量[J].中国中药杂志,2009,34(1):50-53.[20]田徽.生远志的胃肠毒性物质基础及蜜炙减毒部位机理研究[D].四川.成都中医药大学.2006.53 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文[21]林敬开,闫小平,官仕杰,等.远志不同炮制品皂苷类成分含量的比较[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(11):89-91.[22]官仕杰,闫小平,林开敬,等.远志不同炮制品的急性毒性比较研究[J].中国中西医结合杂志,2012,3(32):398-401.[23]李希.远志不同炮制工艺比较[J].四川中医.2002,20(3):19-20.[24]王光志,万德光,刘友平.不同炮制方法对远志质量的影响[J].中成药,2009,31(2):252-255.[25]李萍.卢丹.刘金平.等.远志挥发油成分的GC-MS分析[J].特产研究,2003,(4):43-45.[26]王启林.房敏峰.付志玲远志不同部位脂溶性成分的GC-MS分析[C].中华中医药学会第十届中药鉴定学术会议论文集.461-464.[27]孙晓飞.时素琴.杨国红.远志脂肪油成分分析[J].中药材,2010,23(1):35-37.54 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究综述蜜远志与其他炮制品对比研究进展远志为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld．或卵叶远志PolygalasibiricaL.的干燥根。本品始载于《神农本草经》，其味苦、辛。性微温，归心、肾、肺经，具有安神益智、祛痰开窍、消肿散痈功效。临床上被广泛应用于心肾不[1].交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚，咳痰不爽，乳房肿痛。远志炮制品主要有蜜远志、甘草制远志、姜远志、炒远志、炒制远志，而蜜远志、甘草制远志是[2]常用的炮制品。由于蜂蜜味甘性平，有甘缓益脾、润肺止咳、矫味和消除毒副作[3]用，故蜜远志又有优于其他炮制品的药效。现将蜜远志近年来在炮制工艺及与其他炮制品在化学成分和药理活性方面的比较作一综述。以便为其进一步的开发利用提供依据。1化学成分比较1.1含量方面[7]房敏峰等采用HPLC法测定各炮制品远志皂苷元的含量。其中，生远志皂苷元含量为0.49%、制远志皂苷元含量为0.35％、蜜远志中皂苷元含量为0.24%，由上述结果可以看出远志经炮制后皂苷元含量明显下降，且蜜制（51.02%）下降幅度大于甘草制（20.57%）。[8][9]董敏、夏厚林等的研究结果则与上述结果相反。以远志皂苷元为对照品，采用香草醛-高氯酸显色法于560nm波长处测定远志蜜炙前后总皂苷的含量，结果：生远志中的总皂苷含量分别为2.090%和2.096%，蜜远志中的总皂苷含量分别为2.208%和2.207%，对远志蜜炙前后70%乙醇浸出物的含量进行了比较发现，蜜远志的浸出物[10]高于生远志的浸出物。夏厚林等对远志蜜炙前后HPLC指纹图谱的差异进行了研究。结果：生远志和蜜远志化学成分HPLC指纹图谱的相似度大于0.9，远志蜜炙前后化学成分的种类基本相同，没有显著变化，只是不同成分之间的组成比例发生了变化。[8]董敏又对二者的水煎液、粗总皂苷以及正丁醇部位的HPLC指纹图谱进行了对比研究，结果也印证了上述结论。[11]田徽采用薄层扫描法，测定生远志与蜜远志水煎液的皂苷元含量。结果表明：55 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文生远志水煎液中皂苷元含量显著高于蜜远志水煎液中皂苷元含量(P<0.01)。采用HPLC法，对比了二者的指纹图谱，生远志与蜜远志水煎液的HPLC指纹图谱相似度小于0.95，出峰位置基本相同，但峰形高低具有一定差异，与夏厚林的结论基本吻合。[12]李希以远志的浸出物量为指标，对不同炮制品进行了试验比较研究，结果表明，蜜远志>远志>炒远志>制远志>炒制远志，与董敏、夏厚林结果基本吻合，均是蜜远志浸出物含量高于生远志。[13]林敬开等采用HPLC法，对各炮制品的远志酸和远志皂苷元含量进行测定，结果：远志酸含量和远志皂苷元含量，均为制远志>生远志>蜜远志，即蜜远志的远志酸含量与远志皂苷的含量均低于生远志与制远志。[4]王光志等的研究结果与林敬开的结果亦有出入。以醇浸出物含量和远志酸含量为指标，结果浸出物含量上：蜜远志>酒制远志>甘草制远志>生远志>姜汁炙远志>炒远志，而远志酸含量：酒制远志>甘草制远志>蜜远志>生远志>姜汁炙远志>炒远志，且不同从分析炮制方法对其均具有显著性影响。[14]官仕杰等测定了生远志及两种炮制品的60%乙醇提取液及水提液的总皂苷含量，结果：制远志醇提液>生远志醇提液>蜜远志醇提液>制远志水提液>生远志水提液>蜜远志水提液，有上述结果可以看出，蜜远志水提取液中总皂含量最低。[15]王雪洁等采用1H-NMR和UPLC的植物代谢组学技术对生远志及两种炮制品进行代谢组学研究，结果：生远志与蜜远志、甘草制远志化学成分明显不同；三者中部分氨基酸、有机酸及糖类等的量变化较大；与生远志相比，蜜远志中总皂苷量几乎，不变，甘草制远志则有所上升；糖酯类化合物3,6-二芥子酰基糖酯在蜜远志中最低，其部分次级代谢产物的量也有所不同。1.2薄层鉴别比较[9]夏厚林采用薄层鉴别方法比较了生远志和蜜远志正丁醇部位化学成分的异[12][16]同，二者之间正丁醇部位色谱基本一致，李希李光巍对其进行薄层层析鉴别，[8]其结果显示其成分也是未明显变化。董敏对生远志和蜜远志进行TLC鉴定，结果说明了生远志和蜜远志的石油醚部位、粗总皂苷、皂苷元以及水煎液的化学成分基本相同，与上述三位研究者的结论相吻合，只是在乙醚部位略有区别：生远志比蜜远志多了一个无紫外吸收的成分。56 蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究2药理活性比较[17]郭娟采用氨水诱发咳嗽法和比色法比较了生远志及各炮制品水煎液对小鼠的镇咳和祛痰作用。结果表明：生远志及各炮制品均具有显著的镇咳作用；且蜜远志[9]低剂量有明显的祛痰作用，王光志研究结果与其相同，生远志与蜜远志呈现不同程度的镇咳、祛痰作用，蜜炙后止咳化痰作用增强，而甘草制远志作用仅有增强趋势。[18]王建等比较了生远志与蜜远志水提液LD50，结果表明远志生品的毒性较大，蜜炙品的毒性较小。[14]官仕杰等还比较了远志及两种炮制品的60%乙醇提取液及水体液对小鼠的急性毒性，制远志醇提取液中总皂苷含量最高，毒性最大；而蜜远志水提取液中总皂苷含量最低，毒性最低，且毒性大小与皂苷含量成正相关，其结果与王建的相吻合。[19]刘贤武等的研究表明蜜远志是通过增强大鼠胃粘膜ITF的表达（P<0.05）,并上调胃粘膜α-TGF基因表达,从而能降低粘膜损伤，减小胃肠毒性，生远志组、皂苷组对其无显著影响。[20]赵海平等比较了生远志、皂苷和蜜远志对大鼠胃组织中活性物质及酶活性的2+影响。结果表明抑制胃肠运动及损伤粘膜与胃组织中的PEG2含量与Ca-ATP酶活力呈2+负相关，与NO含量呈正相关；蜜远志组能够降低胃组织PEG2含量，但对Ca-ATP酶与2+NO无显著影响；生远志能显著降低胃组织Ca-ATP酶活力，且能显著增加胃组织中NO含量，与刘贤武的结论相吻合，即蜜远志能降低胃肠毒性。[21][22][11][23][24]郭娟王建田徽武云康卫东五位研究者对生远志及各炮制品的LD50、胃肠毒性、胃肠运动及镇静催眠等相关药效进行了多方面的对比研究。结果表明：生远志LD50最低，蜜远志LD50明显高于其他炮制品，故蜜远志毒性相对较低；生远志对小鼠胃排空及小肠推进的抑制作用显著大于蜜远志；各炮制品对胃肠运动、胃液分泌、胃蛋白酶活性均呈现抑制作用，但均不及生远志明显，且蜜远志的抑制作用最低；远志各炮制品均具有一定的镇静作用，均有统计学差异（P<0.05，P<0.01），[24][4]康卫东认为蜜远志和炙远志的镇静催眠作用有强于生远志的倾向。王光志结论与此不同，蜜远志与生远志相同剂量组对小鼠自发活动作用差异无统计学意义，入睡潜伏时间仅有缩短的趋势。[25]杨伟峰通过对大鼠胃肠电波、c-kit、SCFmRNA表达水平、SCF蛋白表达水平、57 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文胃肠组织形态及其细胞凋亡的研究，以此来阐明生远志、远志总皂苷及蜜远志对胃肠靶器官的毒副作用，结果表明蜜远志可能是通过调控胃肠Cajal间质细胞c-kit、SCFmRNA和蛋白的表达、促进胃肠协调运动的恢复、改善胃肠粘膜的屏障功能等多层次、多途径来实现其改善胃肠动力、减轻远志胃肠靶器官毒性的目的。[26]鲍荟竹等比较了生远志及其皂苷与蜜远志对家兔离体肠平滑肌运动的作用，结果表明，蜜远志对正常肠肌和氯化钡所致的离体肠肌兴奋性收缩也有抑制作用，抑制作用小，但生远志和皂苷对其具有显著抑制作用，且其抑制作用可能与乙酰胆碱、组胺竞争，阻断M1H1受体以及直接抑制肠肌兴奋有关。[27]刘贤武等比较远志蜜炙前后对胃黏膜微循环影响，结果表明降低黏膜损伤、改善胃黏膜微循环，提高胃黏膜抗损伤和修复能力与蜜远志能够增加胃黏膜血液流速，扩张毛细血管平滑肌，提高每秒血流量有关。3结语近年来，作为一种常用中药，大量文献报道了远志及其炮制品的相关研究，且对其进行了系统全面的比较研究，结合前期试验结果发现，远志蜜炙后，成分有所变化，皂苷含量有所下降，醇溶性浸出物含量升高。对于远志蜜炙后能增效减毒，很多研究者认为蜜远志与生远志化学成分的种类没有改变，只是各成分间的比例发生了变化，但这种比例间的变化还没有研究者作进一步的研究，是有毒性的这类皂苷含量降低，还是结构改变，转化为有效的、毒性较小的皂苷，有待进一步研究。结合文献及自己所做薄层鉴别结果发现,二者之间正丁醇部位色谱基本一致，但是在石油醚部位及乙醚部位，两者差别较大，有些斑点加强，有些减弱，甚至消失。说明挥发油及脂肪油类成分发生了变化。远志挥发油类成分主要含有酮类、酸类、[28][29]胺类、有机酸及烷烃等，其中含量较高的甲苯与咽喉粘膜刺激作用有关。不饱[30]和脂肪酸是远志脂肪油类主要成分，具有降血脂、抗动脉粥样硬化作用，与其消肿、降压的药理作用比较吻合。远志蜜炙后能达到增效减毒的效果，可能与挥发油类和不饱和脂肪酸类成分含量变化有关，其具体成分变化还需要进一步的研究。查阅很多文献及标准，均没有蜜远志的法定标准，仅收载于地方炮制规范[31-32]中，且炮制规范不统一，均缺少详细的炮制工艺参数，这无疑会影响对蜜远志原料及其产品的质量监控，制约成品生产及应用。可见，制定良好的蜜炙工艺规范及建立相应质量控制标准已势在必行。58 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蜜远志的质量控制及其与生远志的成分差异研究攻读学位期间发表文章情况姓名陈静静学号8740112032专业方剂学导师李安平研究方向中药制剂创新技术研究在校期间发表学术论文情况序作者题目刊物名称或论文集发表时间号名次1远志及其蜜炙品种中远志口山酮Ⅲ含量测定中国药房（已收录）2016.41方法的改进研究时珍国医国药2014.322复方中药制剂槐花甘枳丸的微乳薄层色谱研究参加编写出版的著作、教材、讲义序作者书名（书号）出版单位出版年月号名次参加科研课题申报或资料查阅序时间科研项目名称或查阅资料内容排名号备注：61 山西省中医药研究院2015届硕士学位论文致谢三年的研究生学习阶段即将结束，回顾这三年，感慨万千，感悟收获颇多。在这里首先感谢导师李安平教授三年来在生活中、学习上给予的无私帮助，提供了良好的发展平台和成长环境。谨在此向我的导师表示衷心的感谢和深深地敬意！真心希望老师在以后的生活中，身体健康，工作顺利，桃李满天下！特别感谢倪艳教授，倪艳教授自始至终对本课题的总体思路、课题进展以及试验过程中出现的具体难题给予的指导和大力的帮助。在倪老师的谆谆教诲和严格督促下，三年研究生学习收获颇丰！感谢郝旭亮教授、康永教授给予学习上的帮助和指导。实验室王瑞明老师、程玉钏老师、岳永花老师、郭丁丁老师、李媛媛老师、贺石麟师兄、刘聪师姐以及王相、刘晓霞等同学也给予了很多帮助。在此向他们表示由衷的谢意!感谢研究生部的各位老师给予的无私帮助和支持！感谢我的家人默默的帮助和鼓励！感谢所有曾经给予我关怀和帮助的老师和朋友们！62