GB-T 18932.2-2002 蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法 薄层色谱法 7页

ICS67.180.10X31中华人民共和国国家标准GB/T18932.2-2002蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法薄层色谱法Methodforthedeterminationofhighfructosestarchsyrupinhoney-Thin-layerchromatographicmethod2002一12一30发布2003一06一01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 GI3/T18932.2-2002月q舀GB/T18932-2002分为12个部分，本部分为第2部分。GB/T18932的本部分修改采用美国公职分析化学师协会(AOAC)官方方法979.22(蜂蜜中高果糖淀粉糖浆—薄层色谱测定法》(英文版)。本部分在技术内容上与该方法一致，但是考虑到我国标准本身的特点及汉语表达习惯，为使GB/T18932的本部分既与国际标准接轨，又适合我国国情，为此，对AOAC官方方法979.22的个别内容作了编辑性修改。本部分遵循GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》的编写规则。本部分的附录八是规范性附录，附录B是资料性附录。本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分负责起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本部分参加起草单位:国家蜂产品质量监督检验中心。本部分主要起草人:庞国芳、范春林、曹彦忠、张进杰、李学民、曾纪淡、李子健。本部分系首次发布的国家标准。 GB/T18932.2-2002蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法薄层色谱法范围GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的薄层色谱测定方法。本部分适用于各种蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的测定本部分在点样量为2uL时，其检出限为10%;在点样量为6kL时，其检出限可达5%02规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(neqISO3696:1987)3原理试样中的高分子糖，经活性炭一硅藻土柱的富集、浓缩，再用薄层色谱法分离、检测，经与掺有一定含量高果糖淀粉糖浆的纯蜂蜜比较，来判定蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的存在。试荆和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682-1992中规定的一级水。4.1无水乙醇。4.2正丁醇。4.3乙酸。4.4丙酮。4.5磷酸:优级纯。4.685%磷酸。4.7活性炭:DarcoG-60或相当者，100目。4.8硅藻土:Celite545助滤剂或相当者。4.9二苯胺盐酸盐(C.A.S.:537-67-7),4.10苯胺:重蒸馏。4.11乙醇溶液(7+93):移取35mL无水乙醇至500mL试剂瓶中，加人465m1水混匀。4.12乙醇溶液(1+3):移取125mL无水乙醇至500mL试剂瓶中，加人375m工水混匀。4.13乙醇溶液(1+1):移取250nil无水乙醇至500mL试剂瓶中.加人250mL水混匀。4.14薄层展开剂:正丁醇+乙酸+水(2+1+1),4.15显色剂:称取1.0g二苯胺盐酸盐(4.9)至盛有50.0mL丙酮(4.4)的烧杯中，再加人1mL苯胺(4.10)，混合搅拌，同时加人5mL85%的磷酸(4.6)，完全溶解后，冷冻保存或使用当日配制。4.16薄层层析板:硅胶G板200mmX200mm，膜厚0.25mm，用前在110℃活化1h后，置于干燥器中放冷至室温，备用。I GB/T18932.2-20025仪器5.1真空干燥箱可调节温度(65士2)0C，真空度26kPa--33kPa52恒温干燥箱。5.3旋转蒸发器5.4玻璃喷雾器:薄层色谱用。5.5真空抽气泵:可调真空度。一100kPa,56薄层色谱展开槽5.7微量注射器:10琳。5.8分析天平:感量。.0001g.5.9电吹风机。5.10活性炭柱:按附录A中图A.1所示，在内径20mm--22mm，长300mm-400mm的玻璃管的底部塞少量的玻璃棉，关掉活栓后加水到玻璃管的中部，然后放水除去玻璃棉中的气泡至水量约10mL时关掉活栓。在小烧杯中称取2.09的硅藻土(4.8)，加人少量的水搅拌后注人管中，自然沉降后在玻璃棉的上方堆积成约1cm厚的硅藻土层，然后称取活性炭(4.7)和硅藻土混合物(1+1)12g，加人工50mL的水搅拌后注人管中。打开活栓，在真空抽气泵的吸引下使活性炭混合物沉降堆积。水面到达柱面1cm时关掉活栓，用玻璃棒除去沾在管壁的混合物，再次注人用水混合后的2.0g硅藻土，让其自然沉降后，在真空抽气泵吸引下，用500mL水预洗活性炭柱，通过调节真空抽气泵的真空度控制流速在8.5mL/min左右。液面到达柱上1cm时关掉活栓，备用。应在使用前填装，如暂时不用，可用乙醇溶液(1+1)200mL浸泡，用前再用250mL水预洗。6试样制备与保存6.1试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出。.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记6.2试样的保存将试样于常温下保存。7分析步骤7.1样品前处理在50mL烧杯中称取1g试样，精确到1mg,溶于10mL水后，缓慢加到活性炭柱(5.10)上，打开活栓，在真空抽气泵吸引下，使试料溶液通过柱子。分两次各用5mL水冲洗烧杯后，冲洗液也加人柱中，液面下降到柱面上端时应关闭活栓，停止吸引，不要抽干液体。量取乙醇溶液(7+93)300m1加到活性炭柱中，真空抽吸控制流速在8mL/min左右，弃掉流出液。然后再加人乙醇溶液(I十1)100ML,在同样条件下洗脱，洗脱液全部收集在200mL在干燥器中干燥恒重过的茄形瓶中。用旋转蒸发器在80℃水浴中蒸干，把茄形瓶放人真空干燥箱，在650C,26kPa-33kPa减压条件下，干燥30min。干燥后把茄形瓶取出放入干燥器中放冷至室温，称取茄形瓶的质量，计算出溶出物的质量以每10mg溶出物加0.1mL水的比例加人一定量的水溶解后，作为薄层层析用点样液。7.2薄层层析用10pL微量注射器在距离薄层板下端2.0cm的位置，点上2.0pL--6.0pL(2X3pL或3X2pL)的点样液，同时水平间隔2cm，点上同样量经过同样处理的纯蜂蜜和含有5%,10%糖浆的蜂蜜的标准液(标准液可以一次制备冷冻保存，长期使用)作为对照。把薄层板放人展开槽中(薄层展开 c13/T18932.2-2002前，展开槽用展开剂蒸气预饱和15min)，按倾斜上行法展开，当展开剂前沿到达薄层板顶端时，从展开槽中取出薄层板，用吹风机把展开剂完全吹散后，把显色剂(4.15)均匀喷雾在薄层板上，等显色剂完全蒸发后，放人90"C-95℃的恒温干燥箱中烘7mm-10min使之显色。7.3结果判定纯蜂蜜在R值。35以上的区域只有2--3个蓝色中带灰色或咖啡色的斑点，相比较搪浆或混有糖浆的蜂蜜却是从原点开始呈现蓝色带状样的斑点群。参见附录13中图11.1混有糖浆5%的蜂蜜，如果点样6KL，可出现混有糖浆蜂蜜一样的特点因此，假如从原点开始到尺值。.35附近有蓝色带状斑点群出现，应考虑可能混有由淀粉转化来的高果糖淀粉糖浆，此时判定阳性应经过下面的确证试验。确证试验:按7.1进行样品前处理时，用乙醇溶液(7十93)300ml冲洗活性炭柱后，再用乙醇溶液(1+3)100mL冲洗，最后用乙醇溶液C十1)100mL洗脱，这样得到的样液如果在原点和R，值0.35之间仍然出现蓝色带状斑点群，就可以判定阳性。8结果表述用阳性和阴性表示。 GB/T18932.2-2002附录A(规范性附录)活性炭柱示意图分液漏斗玻瑞柱硅藻土层活性炭一硅藻土层硅藻土层玻璃ltd接真空泵收Sl瓶图A.1活性炭柱示意图 GB/T18932.2-2002附录B(资料性附录)薄层色谱图1-高果糖淀粉糖浆;2—掺假蜂蜜;3—纯正蜂蜜;4-10%糖浆蜜。图B薄层色谱图