意大利蜜蜂春繁阶段代用花粉中va、ve适宜水平的研究 54页

山东农业大学硕士学位论文意大利蜜蜂春繁阶段代用花粉中VA、VE适宜水平的研究姓名：冯倩倩申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：杨维仁20120614 山东农业大学硕?l=学位论文摘要VA、VE对蜜蜂的生长发育有重要作用。目前对蜜蜂营养需要的研究较薄弱，蜜蜂代用花粉中VA、VE的添加水平并不清楚。本研究通过在代用花粉中添加不同水平的VA(VE)对意大利蜜蜂春繁阶段蜂群群势、封盖子量、工蜂初生重、抗氧化性、肠道发育及寿命的影响，探索意大利蜜蜂春繁阶段适宜的VA、VE供给水平，为蜜蜂代用花粉中VA、VE的添加及蜜蜂饲养标准的制定提供参考，为蜜蜂营养需求的研究提供理论依据。本研究丌展了以下两个独立试验。VA对意大利蜜蜂春繁阶段群势、抗氧化性及肠道发育的影响。选取群势相当、品种统一的本地意大利蜜蜂30群(群内无花粉贮备)，随机分为6组。其中1组为对照组，饲喂油菜蜂花粉；其余5组为试验组，饲喂添加了不同水平VA的代用花粉，各组VA添加水平分别为0IU／kg、5000IU／kg、10000IU／kg、15000IU／kg、20000IU／kg。正式试验期共36天。在试验的第12天、24天、36天对各组蜂群群势及封盖子量进行测定。试验后期对工蜂初生重、抗氧化性能及肠道形态学指标进行测定。结果表明：①10000IU／kgVA显著提高了(P<0．05)蜂群群势、封盖子量及总取食量。②VA水平为10000IU／kg、15000IU／kg组工蜂初生重显著高于(尸O．05)。③代用花粉中VA水平为10000IU／kg～15000IU／kg时蜂体T-AOC、T-SOD活性、CAT活性显著高于(尸<0．05)其他试验组。代用花粉中添加20000IU／kgVA时蜂体抗氧化酶(T-SOD、CAT)活性显著低于(尸<0．05)其他试验组。提示过高剂量的VA对机体的抗氧化能力的提高无积极作用。④代用花粉VA水平为10000IU／kg时中肠AKP活性显著升高(尸0．05)。④代用花粉中VE水平为480mg／kg～960mg／kg组工蜂存活率显著高于(P0．05)。本研究表明，意大利蜜蜂春繁期代用花粉中VA、VE对蜂群群势、封盖子量、工蜂初生重、抗氧化能力、寿命及肠道发育有显著影响。在以本地意大利蜜蜂为试验对象的条件下，春繁期代用花粉中适宜的vA水平为10000IU／kg～15000IU／kg，适宜的VE水平为480mg／kg～960mg／kg。过高剂量的VA(20000IU／kg)对蜜蜂抗氧化能力的提高无积极作用。关键词：意大利蜜蜂；VA：VE；营养需要II 山东农业火学硕士学位论文OptimallevelofVAandVEinpollensubstitutesofApismelliferaligusticaduringtheI：riodofspringligusticadUringtheperiodolspringmul。ti‘p’li‘cat‘i‘onABSTRACTVAandVEplayimportantrolesinhoneybee’Sgrowthanddevelopment．Sofar，therehavebeenfewstudiesonnutrientrequirementofhoneybeeandtheoptimallevelofVAandVEinpollensubstitutes．ThisexperimentwasconductedtostudytheeffectsofVAandVEonthecolonydevelopment，emergentweight，workerantioxidation，midgutdevelopmentandlongevityofApismelliferaligusticaduringtheperiodofspringmultiplication，SOastodeterminetheoptimalamountofVAandVEinpollensubstitutesduringtheperiodofspringmultiplicationandexplorethetheoryaccordanceofmutrientrequirementofhoneybee．Twoexperimentswerecarriedoutinthisstudy．Thirtycoloniesofhoneybees(nopollenincolonies)fromalocalapiarywereusedinthestudy．Thehoneybeecolonieswererandomlyallocatedto6groupswith5replicationseach．OneofthegroupswasfedpurerapepollenonlyandotherswerefedabasaldietwithsupplementationofVAatthelevelsof0IU／kg，5000IU／kg，10000IU／kg，15000IU／kgand20000IU／kg，respectively．Thecolonydevelopment，emergentweight，workerantioxidationandmidgutdevelopmentofhoneybeeswereditermined，Theresultsshowedthat：①Thepopulationofbeecolony,amountsofsealedbroodandtotalfeedingamountweresignificantlyincreased(P<0．05)by10000IU／kgVA．②111eworkers’emergentweightof10000IU／kggroupand15000IU／kggroupwerecorrespondent(P>0．05)withcontrolgroupbutweresignificantlyhigher妒<0．05)thantheotherexperimentalgroups．③10000IU／kg～15000IU／kgVAincreased(尸<0．05)theT-AOC，T-SODactivitiesandCATactivitiesofhoneybee．20000IU／kgVAdecreased(尸O．05)．④480mg／kg～960mg／kgVEincreased(尸O．05)．Theseresultsindicatedthat：OptimaldietVAlevel(10000IU／kg—。15000IU／kg)andVElevel(480mg／kg～960mg／kg)willincreasethepopulationofbeecolonyandantioxidantactivitiesofApismelliferaligusticaduringtheperiodofspringmultiplication．ExcessiveVA(20000IU／kg)hadnopositiveeffectontheincreaseofantioxidantactivities．Keywords：ApiSmelliferaligustica；VA；VE；NutrientrequirementsIV AKPMDACATT-AOCGSH—PxT．SODSOD朔VEVCVK。VDOD02‘PMAlkalinePhosphataseMalondialdehydeCatalase符号说明TotalantioxidantcapacityGlutathioneperoxidaseTotalsuperoxidedismutaseSuperoxidedismutaseVitaminAVitaminEVitaminCVitaminKVitaminDOpticaldensitySuperoxideanionPeritrophicMembrane碱性磷酸酶丙二醛过氧化氢酶总抗氧化能力谷胱甘肽过氧化物酶总超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶维生素A维生素E维生素C维生素K维生素D光密度氧自由基围食膜 山东农业大学硕士学位论文1前言在自然状态下，花粉和花蜜是蜜蜂的主要饲粮来源，其中含有丰富的维生素(王开发，张玉兰，1997；MariaetaL，2008)。春繁时期外界蜜粉源缺乏，蜂群的饲粮供给受限、生长发育受阻。人工代用花粉的应用是解决季节性饲料短缺问题的主要途径。了解蜜蜂的营养需要是进行人工代用花粉合理配制的基础。人工代用花粉中的营养物质要包括蜜蜂生长发育所需要的各种营养成分，这与高等动物基本相同，都需要氨基酸、糖类(碳水化合物)、脂肪、维生素和无机盐等(赵宗礼，1988)。VA、VE作为动物必需的脂溶性维生素，除了影响动物的视觉、生长、上皮细胞分化及繁殖能力外，还是动物体中最有效的抗氧化剂(李英哲等，2001：PalaeiosetaL，1996)。到目前为止，国内外对VA、VE在昆虫上的营养作用研究甚少，对于蜜蜂VA、VE营养需要量的研究更未见报道。1．1维生素对蜜蜂的营养作用1．1．1维生素在蜜蜂生长发育中作用维生素参与蜜蜂机体内三大营养物质氧化还原反应和新陈代谢作用，与蜜蜂的健康、生长发育和繁殖密切相关。1．1．1．1保证正常的生长发育，维持正常的生理机能维生素是维持蜜蜂生长发育所必需的活性物质，用量虽小，作用极大，一旦缺乏，将会造成蜂体生理机能紊乱，腺体发育与分泌等活动停止。水溶性维生素是蜜蜂正常生长发育必不可少的营养物质，幼虫正常发育需要B族维生素(郑本乐等，2009)。维生素对于蜜蜂的生长、发育和新陈代谢都是必要的。花粉和蜂粮是蜜蜂维生素的主要来源(袁耀东，1992)。维生素B6对于蜜蜂幼虫的生长发育是必需的，它能提高工蜂的哺育能力，合适的添加量是4mg／5009人工饲粮(Leroy，1976)。VC对幼虫及成蜂腺体发育也很重要，还能有效地刺激蜜蜂取食。肌醇能刺激蜜蜂腺体发育，胆碱除了促进幼虫发育外，还对蜂王产卵有刺激作用(汪礼国，1992)。有研究表明，VA能够维持蜜蜂『F常的视觉。对于暗光适应的蜜蜂头部几乎不含VA，在光适应过程中VA含量增加。在每克蜜蜂头部组织中VA的量最多达到O．1ug，且这些VA是由视黄醛经酶还原而得(TimothyetaL，1964)。l 意人利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究一般而言，B族维生素(硫胺素、核黄素、烟酸、维生素B6、泛酸、叶酸、生物素)对于昆虫是必需的，这些维生素必须与其他的营养成分相平衡。维生素的需要量与同粮蛋白质水平相关(Dadd，1973)。1．1．1．2增强哺育能力，提高蜂群的生产性能维生素的种类很多，不同的维生素有不同的作用。大量的研究表明维生素能够增强蜂群的哺育能力，培育强群，从而提高蜂群的生产性能(主要是王浆产量)。在蜜蜂『F常的饲料来源中常常会发生某一类维生素缺乏现象，因此，适量添加种类齐全的维生素，对提高王浆产量与蜂群繁殖有一定的促进作用(汪礼国，1993)。Robinson(1968)和Haydak(1970)研究表明人工饲粮中维生素的缺乏会导致蜂群哺育能力降低，影响幼虫发育。与天然花粉相比，添加了维生素的花粉饲喂蜜蜂能显著提高蜂群的子量及产蜜量(Elbassiouny，2006)。．脂溶性维生素对蜜蜂咽下腺发育作用较明显，能更有效地提高王浆产量，尤其是VE。有研究表明，VE对咽下腺分泌细胞的分泌功能有较大的促进作用。用2．5mg／kgVE糖浆饲喂工蜂，可显著促进工蜂咽下腺发育，使咽下腺重量于10～18日龄时比对照组高47％～76％，发育期至少延长5天以上(陈崇羔等，1989)。用添加了VE的人工代用花粉和添加了VE的糖浆饲喂蜂群，王台接受率和王浆产量均明显高于对照组(花粉组)，其中整个蜂群的王浆产量分别比对照组高24．6g、28．9g(Nurayela1．，2005)。蜜蜂一般不需要脂溶性维生素，但添加VE能有效地促进咽下腺中分泌细胞的分泌功能，还能延缓王浆分泌细胞的衰老过程，延长王浆分泌期，提高王浆产量(汪礼国等，1992)。VC(250mg／1．5L糖浆)有利于工蜂咽下腺发育，能够提高工蜂哺育能力，增加子脾面积(AyoubandMahmoud，2008)。饲粮中添加脂溶性维生素，尤其是VA，与对照组相比，能显著提高哺育蜂的哺育能力，增加封盖子量(Herbert，1978)。哺育蜂需要水溶性维生素进行泌浆，而脂溶性维生素则有利于培育强群(郑本乐等，2009)。1．1．1．3增强免疫，延长蜜蜂寿命维生素除了其营养作用以外，还与机体的免疫力密切相关。维生素，尤其是VA和VE，能增强蜜蜂的免疫功能，减少疾病的发生。蜜蜂机体不能自身合成维生素，所以必须由食物供应，如果蜜蜂完全缺乏某种维生素或某种维生素供给不足，代谢就会失调，生长停滞，繁殖力与生活力下降，疾病也随之发生。有研究表明，VC有助于延长蜜蜂寿命。在蜜蜂饲粮中添加VC，使蜜蜂平均寿命延长了15．6％(刘富海，1990)。2 山东农业火学硕七学位论文1．1．2维生素来源与供应．蜜蜂与其它动物一样，在其生命活动中需要摄入蛋白质、脂肪、碳水化合物、水分、无机盐、维生素和一些微量元素。蜜蜂是一种自由采食的昆虫，一般情况下，这些物质可以从R常采食的花蜜和花粉中获得。花粉、花蜜是蜜蜂主要的营养来源，在蜜蜂不同的生长发育阶段需要的营养来源不同，所必需的维生素在量上和种类上都有不同。但可以肯定，维生素对于蜜蜂的生长发育来说是必需的。除了脂溶性VA和VK，过量饲喂的其他维生素很容易被排泄(李继莲，2007)。1．1．2．1花粉花粉是蜜蜂主要饲料之一，是蜜蜂繁衍生存的主要营养源。蜂花粉营养成分相当全面、复杂。它是天然的多种维生素的浓缩物，含有机体所需的绝大多种维生素。这些维生素在营养生理方面有不可替代的作用。花粉中所含维生素有VA、B族维生素、VC、VD、VE、VK、维生素P、维生素H、胡萝b素等。花粉中富含水溶性维生素，如生物素、叶酸、烟酸、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、肌醇和抗坏血酸。B族维生素是蜜蜂正常发育所必需的(韩仙瀛，1992)。一般而言，花粉富含水溶性维生素，而脂溶性维生素较为贫乏。关于蜜蜂对4种脂溶性维生素(A、D、E、K)的需要及机能等尚无多少研究，仅有人证实VA在蜜蜂的视力方面有作用(吕丽萍等，2006)。1．1．2．2蜂蜜蜂蜜含微量维生素，其中有VA、VC、VD、B族维生素、VK及胆碱等。不同种类的蜂蜜中维生素的种类和含量都有较大差异。但总的来说，B族维生素在所有已知种类的蜂蜜中含量都较高。1．1．2．3维生素添加剂蜜蜂饲料应用于外界蜜粉源不足时，部分或全部代替天然饲料，以保证蜜蜂正常的生长发育和繁殖所需。同畜禽饲料一样，蜜蜂饲料在配制中会添加不同种类的添加剂，如维生素添加剂、酸化剂等。、为了满足蜜蜂的营养需要，使其进行正常的生长发育，就必须配制营养全面的蜂饲料，其中维生素的添加是必不可少的。初步研究发现，在繁殖期蛋白质饲料中添加比例适当的维生素预混料，对于扩大蜂群群势、增加蜜蜂子量都有较好的效果：在越冬期能量饲料中添加维生素，对于提高蜜蜂越冬期成活率也有较好效果。此类维生素添加剂中 意人利蜜蜂奋繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究维生素种类主要有维生素Bl、维生素B2、维生素B5、维生素B6、维生素Bll、VC、VD、VA、VE等。蜜蜂饲料中所添加的维生素不仅要种类齐全，还要有合适的添加量，过多或过少都会对蜜蜂的生长j发育和繁殖造成不良影响。1．2蜜蜂维生素营养需要研究进展1．2．1蜂花粉中维生素的含量花粉、花蜜和蜜露是蜜蜂的天然饲粮。我们对蜜蜂营养需要的研究及进行代用花粉的合理配制参考蜜蜂天然饲粮中不同营养成分的种类和含量。蜂花粉中维生素种类及含量因花粉来源及采收时间的不同而不同(Herbert，1997)。1．2．1．1B族维生素蜂花粉中B族维生素的含量为：B3(烟酸)40mg／kg—110mglkg，Bit(叶酸)3mg／kg～10mg／kg，Bt(硫胺素)1．3mg／kg～148mg／kg，B2(核黄素)0．9mg／kg-68mg／kg，B5(烟酸)2mg／kg～210mg／kg，B6(吡哆醇)3mg／kg-716mg／kg，H(生物素)O．5mg／kg～0．8mg／kg(王开发和张玉兰，1997；Mariaeta1．，2008)。1．2．1．2VC王丌发和张玉兰(1997)研究表明蜂花粉中VC含量为30mg／kg～835mg／kg。Maria等(2008)研究结果与此相近，为70mg／kg．--560mg／kg。另外，也有研究结果为136mg／kg一1943mg／kg(HerbertelaL，1985)。1．2．1．3vA、VE’．‘表1．1为近些年来国内外对蜂花粉中VA、VE含量的研究。表中第三栏为换算为统一单位后结果。表1．1花粉中VA、E含量(干花粉)TableI-1ContentofVAandVEofbeepollen(dried)4 山东农业大学硕士学位论文‘一个罔勋：甲位(IU)的VA相当于0．399的视赞醇、0．6lag的p．胡萝卜索(杨凤，1999)。不同动物将p．胡萝卜素转化为VA的能力集中在200／0～30％，蜜蜂中尚未研究，暂以25％计。2本研究中所用油菜花粉样品vA、VE含量由北京ff养源聊f究所测得。1．2．1．4VD、VK蜂花粉中VD的含量为0．38mg／kg～15．40mg／kg，VK为0．4mg／kg～6．0mg／kg(王开发和张玉兰，1997)。综上所述，蜜蜂所摄入食物(蜂花粉)中营养成分种类及含量变化范围较大，具有不确定性。花粉(蜜蜂所在地蜜粉源植物花粉)中营养成分如VA、VE含量并不一定是蜜蜂所需的最适营养水平。因此，人工代用花粉中营养成分如VA、VE的适宜水平需进一步探讨。1．2．2蜜蜂维生素营养需要研究进展1．2．2．1B族维生素．水溶性维生素中的B族维生素对蜜蜂的生长发育有重要作用。人工饲粮中维生素B6(吡哆醇)含量为8mg／kg时能保证幼虫发育(LeroyandDietz，1976)。Haydak和Dietz(1972)研究表明B族维生素为蜜蜂培育幼虫所必需。1．2．2．2VCHerbert等(1985)研究发现，代用花粉中高含量的抗坏血酸有利于蜂群封盖子量的提高。但也有研究表明：自然状态下，花粉中VC水平与蜂群子量无关，蜜蜂在前蛹期机体自身能够产生VC(BadamchianelaL，1994)。1．2．2．3VA、VEVA是脂溶性维生素的一种，不溶于水。VA又名视黄醇(retin01)，是所有具有视黄醇生物活性化合物的总称，含有p．白芷酮环的不饱和一元醇。VA有视黄醇、视黄酸和视黄醛3种形式。VA的来源主要存在于动物界。植物中的类胡萝卜素具有与VA相似的 意人利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究化学结构，能在体内转化为vA。己知至少有50种以上类胡萝卜素化合物可转化为VA，其中以B．胡萝卜素的活性最高。蜜蜂代用花粉中VA的添加量为181IU／1009，3-胡萝卜素为1770IU／1009(Abdolrezaetal．，2010)。按照表1中方法换算后VA添加量约为6300IU／kg干粉料。需要注意的是该研究饲料配方中所含维生素仅限VA和B一胡萝卜素，且直接饲喂干粉，蜜蜂自由采食。Herbert等(1978)发现饲喂VA添加量为0．4ug／g的日粮，与对照组(无VA添加)相比蜂群封盖子量增加一倍。Ayoub署BMahmoud(2008)研究所饲喂的糖浆中VA添加量为400IU／1．5L。VE又称为生育维生素或抗不育因子，是一类活性相近、化学结构相似的酚类化合物的总称，按结构可分为生育酚和生育醇两类。每类又可分为0t、13、Y和64种，其中以0【．生育酚活性最高、分布最广。Nuray等(2005)研究发现VE能够提高王台接受率，增加蜂群封盖子量。该研究中VE添加量为2mlDLa-生育酚／L糖浆，再将配制的干粉料与添加了VE得糖浆按5：2的比例混合饲喂蜂群。换算后饲料中VE添加水平约为760mg／kg。另外，VE能够在营养水平上控制实验动物的老化：如能够延长果蝇寿命、提高小鼠抗氧化能力等(Manohar，1996)。1．3衡量蜜蜂VA、VE营养状况的指标VA对维持上皮细胞的正常功能和结构的完整性，维持正常视觉、动物繁殖性能和免疫功能都具有重要作用。VA还参与体内许多氧化过程，尤其是不饱和脂肪酸的氧化。,VE作为动物必需的脂溶性维生素，具有广泛的生物学功能，在动物体内发挥重要的生理功能，如作为有效的抗氧化剂、提高机体免疫力、改善畜禽产品质量等，尤其对畜禽的繁殖性能发挥着重要作用。蜜蜂VA、VE的营养状况通常以蜂群群势、封盖子量、初生重、抗氧化能力及寿命等指标来衡量。1．3．1封盖子量及群势在畜禽动物中，VA对动物繁殖的影响主要表现在维持生殖器官及胚胎的正常生长发育。VA对上皮组织的形成、发育及维持有重要作用，特别是对生殖器官的上皮有明显影响(李雪梅等，2008)。VA缺乏阻碍各级生精细胞生长发育、卵子发生、胚胎发育及胎儿生长发育。在蜜蜂营养中，VA对蜂群繁殖的影响可能表现在对工蜂哺育能力的影响上。饲粮中添加脂溶性维生素，尤其是VA，与对照组相比，能显著提高哺育蜂6 山东农业大学硕士学位论文的哺育能力，增加封盖子量(Herbertela1．，1978)。因此，封盖子量的测定或许可作为蜜蜂VA营养状况评价的指标之一。VE又称“生育酚”，对于维持动物的正常生殖能力有重要作用。VE可促进性腺发育，调节性机能；促进精子的生成，提高其活力；增强卵巢机能，使卵泡增加黄体细胞。同样，在昆虫上，VE也被证明与成熟个体的繁殖功能有关(Lili￡ineta1．，2001)。同VA，VE对蜂群繁殖的影响可能表现在对工蜂哺育能力的影响，具体又表现为对工蜂咽下腺发育的影响。许多研究都表明VE能够促进工蜂咽下腺发育，提高王浆产量，增加封盖子量(汪礼国，19921陈崇羔，1989；Nuray，2005)。因此，封盖子量的测定或许可作为蜜蜂VA营养状况评价的指标之一。1．3．2初生重VA能够促进骨骼的生长发育，维持成骨细胞及破骨细胞正常功能、保障骨细胞正常代谢。VA的缺乏可引起骨骼发育受阻，软骨上皮的成骨细胞和破骨细胞的活动受到影响，使骨骼发生变形。VA过量也会引起骨骼代谢紊乱。VA还具有调控脂肪代谢的作用。vA可能通过调节甘油三酯的合成或改变甘油三酯的分解或同时影响这两个过程发挥作用。在昆虫上，VA或类胡萝b素的缺乏会阻碍其第二代的生长，引起不规则着色和行为异常(Dadd，1985)。工蜂的初生重是衡量其个体质量的重要指标(程艳华等，2008)。VA对蜜蜂生长发育的影响或许可通过初生重来反映。VE由于具有提高动物免疫机能、增强抗病能力等作用，因而添加VE对促进动物生长发育、提高饲料报酬具有良好效果。另外，有研究表明VE能够刺激脑垂体生长激素的分泌(Badamchianeta1．，1994)，从而促进动物生长。VE还可保护对动物生长发育有促进作用的VA免受氧化破坏，从而提高VA的效价。同VA，蜜蜂VE营养状况评价中或许可进行初生重的测定。1．3．3抗氧化能力在正常生理状态下，动物机体能产生多种内源性抗氧化自由基的活性物质，它们能不断的清除自由基，从而使机体内的自由基产生与清除处于平衡状态。但当动物遭受氧化应激刺激时，机体内的这种平衡就会被打破，出现脂质过氧化，机体内源和外源的抗氧化体系将会产生应答清除自由基以保持机体内自由基的稳衡状态，动物机体对抗氧化营养元素的需要可能会发生改变。VA分子中的双烯共轭键是单线态氧、羟自由基、脂 感人利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究质过氧化自由基以及其他自由基有效的淬灭剂和捕捉剂。VA在细胞膜上可利用其分子结构所含的多个双键与氧自由基结合，从而保护细胞免受氧化损伤。当VA缺乏时，机体的抗氧化屏障缺失，细胞膜上含有丰富的多不饱和脂肪酸。自由基及活性氧使其发生链式反应，氧化生成饱和脂肪酸，造成细胞膜的破坏，使自由基进一步攻击DNA，造成DNA损伤(韩磊等，2004)。机体的抗氧化酶主要有GSH—Px、SOD、CAT和其他血红蛋白过氧化物酶。这些酶不但协同地防止活性氧的损伤效应，而且相互问还起保护作用。因此，一旦系统中某一成员减弱或减少，整个酶保护系统就可能全线崩溃，导致细胞的氧化损伤。MDA是脂质过氧化链式终止阶段产生的小分子产物，它能通过生物膜多不饱和脂肪酸的过氧化和脂质过氧化物的分解产物引起细胞损伤。测定MDA的含量可以反映自由基产生情况和机体内脂质过氧化的程度，间接反映机体组织和细胞损伤的程度(KamadaandOtsuji，1983)。T．AOC值代表了机体防御体系中抗氧化能力的强弱，是体内各种抗氧化酶共同作用的结果。它主要通过三种途径进行氧化防护作用：消除自由基和活性氧避免发生脂质过氧化；分解过氧化物，阻断过氧化链；除去起催化作用的金属离子。T．AOC值代表机体抗氧化水平的高低，是机体抗氧化能力的标志。VA的抗氧化作用可对机体内抗氧化酶类形成保护。因此，我们可通过测定蜂体中T-AOC、T．SOD、MDA、CAT等来评价蜜蜂VA营养状况。动物体内的氧化途径主要有两类：一是清除抗氧化剂，包括SOD、GSH．Px和CAT：另一类是断链抗氧化剂，包括VE、VC和p一胡萝卜素等，主要作用是阻断脂肪氧化的反应链。VE定位于细胞膜，作为断链抗氧化剂，可以阻断细胞膜中过氧化物的形式，从而维持了膜的结构和功能的完整，降低不饱和脂肪酸、胆固醇的氧化还原，延缓动物屠宰后肌红蛋白的氧化，进而提高动物的生产性能与肉品品质。近些年来，关于VE抗氧化作用的研究越来越多(Mazlan，2002)。VE作为抗氧化剂，其抗氧化作用能对机体内抗氧化酶类如SOD、CAT等形成保护，阻碍有害物质如MDA的生成。因此，蜂体内SOD、CAT活性及MDA含量等的测定可应用于蜜蜂VA营养状况评价。●1．3．4肠道发育肠道是利用VA的主要器官。VA在肠腔内主要以视黄醇和类胡萝卜素(主要是13．胡萝卜素)的形式被吸收进入肠上皮细胞。添加适宜水平的VA可促进肠道生长。gojas和Ronnestad(2003)在幼鼠上发现，添加适量VA可使肠隐窝变浅，绒毛高度增高。8 山东农业火学硕士学位论文添加适宜水平的VA能促进肠道发育。哺乳动物肠道AKP通常与吸收糖原和油脂有关，其活性在一定程度上反映肠道发育状况，主要集中在肠上皮细胞的纹状缘部分，参与细胞内消化及其上皮细胞脱落到肠腔内的细胞外消化过程。AKP的活性越高肠道的发育越成熟(牟彬，2007)。蜜蜂营养物质的消化吸收主要集中于中肠。因此，中肠AKP活性的测定可用于反映蜜蜂肠道发育情况，从而间接评价VA营养状况。PM是大多数昆虫中肠内的半透膜，主要由几丁质、蛋白质构成。由于位于食物与中肠上皮细胞间而在中肠生理中起重要作用，相当于脊椎动物的胃粘膜。PM能够保护中肠上皮细胞免于机械损伤以及病原菌、毒素的入侵；还可作为半透膜以及将中肠分为不同的区室而在营养物质的消化和吸收中具有重要作用(相静波等，2004)。蜜蜂PM的研究对于了解蜜蜂营养状况、抗病能力等有重要意义。因此，可以通过对PM厚度的测定(会汤东等，2009)反映蜜蜂中肠发育情况，从而了解其营养状况。1．3．5寿命衰老的自由基学说(LeibovitzandSiegal，1980)认为衰老是自由基反应的破坏作用积累的结果。一般来说，自由基损害来自脂类的过氧化作用。按此学说，抗氧化剂如VE能够阻碍脂质过氧化，减少有害物质的生成，从而延缓衰老、增长寿命。除此之外，VE的抗衰老机理还有VE对蛋白质合成的促进作用(Guamirieta1．，1980)及对线粒体的保护作用和对ATP酶活性的影响(王焕葆等，1986)。寿命是评价昆虫营养状况的常用指标。对寿命的测定可应用于蜜蜂VE营养状况的研究。1．4本研究的目的与意义VA、VE作为动物必需的脂溶性维生素，除了影响动物的生长、繁殖以外，还是动物体中最有效的抗氧化剂。到目前为止，国内外对VA、VE在蜜蜂上的营养作用研究甚少，对于蜜蜂VA、VE营养需要量的研究更未见报道。在自然状态下，蜜蜂的饲粮来源主要是花蜜和花粉。春繁阶段是蜜蜂蜂群发展的重要阶段，需要充足的营养来保证蜂王产卵、幼虫发育及成年蜂生长、泌蜡造脾、分泌王浆。然而春繁时期外界蜜粉源缺乏，天然花粉价格昂贵且极易携带病原微生物，蜂群的饲粮供给受限、繁殖受阻。近些年来，人工代用花粉的应用越来越广泛，是解决季节性饲料短缺问题的主要途径。营养全面及充足是人工代用花粉的配制的最基本要求。目前国内外人工代用花粉的配制多缺乏理论9 意人利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究依据，科学性不强，凭经验者居多(李成成等，2010)，影响代用花粉的质量和使用效果。了解蜜蜂的营养需要是进行人工代用花粉合理配制的基础。本试验选取在目前蜜蜂生产上占主要地位的意大利蜜蜂(ApismelliferaligusticaSpinola)为研究对象，通过在人工代用花粉中添加不同水平的vA、VE来研究其对意大利蜜蜂春繁阶段群势、封盖子量、初生重、抗氧化性能及肠道发育、寿命的影响，探索意大利蜜蜂春繁阶段适宜的VA、VE供给水平，为蜜蜂饲养标准的制定和养蜂生产中代用花粉的配制提供参考，为蜜蜂营养需求的研究提供依据。lO 山东农业大学硕_J：学位论文2材料与方法2．1VA对意大利蜜蜂春繁阶段群势、抗氧化性及肠道发育的影响2．1．1试验时间、地点本试验于2011年2月23同．4月12日在山东农业大学桃花峪试验蜂场进行，共48天，其中预试期12天，正试期36天。2．1．2试验蜂群试验蜂群选用山东泰安地区本地意大利蜜蜂(Apismellifera坛usticaSpmola)，由山东农业大学试验蜂场提供。2．1．3基础日粮以油菜花粉中营养成分的种类及含量为参考设计基础日粮配方【71。如表2．1所示。基础日粮中胡萝卜素含量0．096mg／kg为计算值，按表l-l中换算后为VA含量40IU／kg。表2．1饲粮组成及营养水平(干物质基础)Table2-lThecompositionandnutrientlevelsofthebasicdiet(ONaDMbasis)％项日item配比Percentage饲粮纽成Ingredients玉米Corn豆翱Soybeanmeal蔗糖Sucrose磷睃氧例CaHP04石粉Limestonemeal硫睃弧铁FeSO,柠檬陂{；lJISodiumcitrate维生索颅混料1Premix‘合计Totalm罨；册加∞叫卯如啪姗删姗嗍蚴洲咖删 感人利蜜蜂春繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究机生[J质Crudeprotein能量GE／{MJ／kg)钟Calcium磷Phosphorus胡萝卜索Carotene(mg／kg)24．5817．25O．340．26O．101维生岽颅混科龇方(每T‘克伞价料中含量)Thepremixprovidedfollowingperkgofdiet：VBl6rag；VB26mg；VC276mg"VD2000IU：VE240mg；VB67mg；叶酸folicacid20rag；烟酸niacin19rag；肌醇inositol328mg．2．1．4试验分组在山东泰安地区蜜蜂春繁开始前，选取群势相当、品种统一的本地意大利蜜蜂30群(群内无花粉贮备)，随机分为6组。其中l组为对照组，饲喂油菜蜂花粉；其余5组为试验组，饲喂添加了不同水平VA的代用花粉，各组VA添加水平见表2．2。表2-2各组VA添加水平Table2-2VAlevelsofdifferentgroups2．1．5饲养管理试验丌始前将各群蜂量及巢脾数调整一致。试验采用多脾开繁。蜂场设在干燥、向阳、避风处：紧脾缩巢，密集群势使蜂略多于脾；蜂箱之间夹稻草等保温物，晴暖中午翻晒箱内保温物；夜晚加盖保蜂罩。试验开始后将饲料做成粉饼放于框梁上供蜜蜂取食(按代用花粉配方将混合好的干粉料加入适量白砂糖、荆条蜜、水调至适宜湿度)。试验过程中蜜糖饲料均保证充足，数量基本一致，定期检查蜂群，根据蜂群发展情况适时加脾扩群。试验后期有蜜粉源时用孔径较小的脱粉器片控制蜂群进粉。 山东农业火学硕：L学位论文2．1．6测定指标2．1．6．1蜂群群势及封盖子量试验丌始前将各群蜂量及巢脾数调整一致，记录初始群势。待蜂群稳定、试验开始后每隔12天记录群势、封盖子量。共记录三次，绘制群势随时问变化曲线。蜂群群势用“足框蜂”(王颖等，2011)来衡量。封盖子量用每张脾上封盖子的面积记录，每群蜂的封盖子量为该群中各脾封盖子量的总和。本试验采用10cmx14cm的透明方格纸计量封盖子脾面积。2．1．6．2蜂群取食量记录每次喂料时间、料重，统计各箱蜂整个试验期的总取食量。各蜂群中每足框蜂的取食量为各箱蜂总取食量与其相应群势的比值。2．1．6．3蜂体抗氧化性分别对5日龄工蜂幼虫、0日龄成蜂、7日龄成蜂蜂体抗氧化性能进行测定。在蜂箱中插入一张空巢脾(皆为新脾)，隔一段时间后开箱检查产卵与否，若己产下整片卵，记录为第1天，到第8天所取幼虫为5日龄，各群取5日龄的工蜂幼虫15只；第2l天幼蜂出房，各群取10只；第21天将刚出房幼蜂进行标记，7天后所标记工蜂为7同龄，各群取7日龄工蜂10只。所取样品用于蜂体抗氧化酶活性测定。将样品在10ml离心管内混匀，准确称取待测样品O．3g左右，匀浆后按重量体积比加生理盐水制备成10％的组织匀浆，3000r／min离心10min，取上清制成l％的组织匀浆。分别对T-SOD活性、T-AOC、MDA含量、CAT活性进行测定。用UV-2000可见光分光光度计(snectrophotmeter)测定光密度，根据光密度值计算酶活性。酶活性的单位均以每毫克组织蛋白(／mgport)表示。T-SOD测定采用T-SOD试剂盒A001．1(南京建成生物工程研究所)测定，该试验方法参照亚硝酸赫法(Oyanagui，1984)。T-AOC测定采用T-AOC试剂盒A015(南京建成生物工程研究所)测定。T-AOC的测定参照Benzie和Strain(1996)的方法。定义为在37℃时，每分钟每毫升血清或每毫克组织蛋白使反应体系的吸光度(OD)值每增加O．01时，为一个总抗氧化能力单位。MDA含量的测定采用MDA试剂盒A003．2(南京建成生物工程研究所)测定。测定方法为硫代巴比妥酸(ThibabituricAcidTBA)法。组织匀浆中MDA含量单位为11mol／mg组织蛋tt(PlaceretaL，1966)。CAT活性测定采用CAT试剂盒A007(可见光法)(南京建成生物工程研究所)测定。每毫克组织蛋13 意人利蜜蜂奋繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究白每秒钟分解1lamol的H202的量为一个活力单位。2．1．6．4蜂体蛋白质浓度分别对5同龄工蜂幼虫、0日龄成蜂、7日龄成蜂蜂体蛋白质浓度进行测定。蜂体蛋白质浓度的测定采用总蛋白定量测试盒A045．2(南京建成生物工程研究所)测定。测定方法为考马斯亮蓝法。2．1．6．5工蜂初生重蜂箱中所加空巢脾5日龄工蜂幼虫取样完毕后第16天各群耿刚羽化出房的工蜂20只用电子天平(0．0001g)称重并记录初生重。2．1．6．6中肠蛋白质浓度、碱性磷酸酶活性和中肠形态学指标各组取7日龄成年工蜂，分离中肠并测定中肠蛋白质浓度及AKP活性。中肠蛋白质浓度采用总蛋白定量测试盒A045．2(南京建成生物工程研究所)测定。AKP活性采用AKP试剂盒A059．1(南京建成生物工程研究所)测定。每克组织蛋白在37℃与基质作用l5分钟产生1mg酚为l单位。各组取7日龄成年工蜂样品，分离中肠，迅速固定于10％的福尔马林溶液，取保存好的组织块，用乙醇逐级脱水，二甲苯透明，采用BMJ23型包埋机包埋，LEICARM2135切片机进行切片(5rtm)，用苏木精和伊红(H&E)染色，树胶封片，日本PM．20显微照像设备进行图像采集，载玻片在100×放大倍数下用光学显微镜检查并测量PM厚度。2．1．7数据处理●试验数据用平均数士标准差(za：SD)表示。采用SAS9．1软件进行统计学处理。方差分析使用One．wayANOVA，多重比较采用邓肯氏(Duncan)法，显著性水平P<0．05。2．2VE对意大利蜜蜂春繁阶段群势、抗氧化性及寿命的影响2．2．1试验时间、地点本试验于2011年2月23日_4月12日在山东农业大学桃花峪试验蜂场进行，共48天，其中预试期12天，正试期36天。2．2．2材料试验蜂群选用山东泰安地区本地意大利蜜蜂(apismelliferaligusticaSpinola)，由山14 山东农业大学硕：l：学位论文东农业大学试验蜂场提供。2．2．3试验基础日粮以油菜花粉中营养成分的种类及含量为参考设计基础日粮配方。如表2—3所示。表中VE含量为计算值。表2．3饲粮组成及似养水，F(干物质皋础)Table2-3Thecompositionandnutrientlevelsofthebasicdiet(onaDMbasis)％项日Item配比Percentage铡粮组成Ingredients玉米Corn豆半nSoybeanmeal蔗糖Sucrose磷睃氮钙CaHP04石粉Limestonemeal硫睃弧铁FcS04柠檬睃钠Sodiumcitrate维生索预混科’Premix’合计Total彳7养水5I，．Nutrientlevels辋I蛋[J质Crudeprotein能量GE／(MJ／kg)钙Calcium磷PhosphorusVE(mg／kg)20．oo48．0030．590．40O．200．olO．50O．30loo．0024．5817．25O．34O．265．89rag；VD2000IU；VA50001U；VB67mg；nl。酸folicacid20mg；烟酸niacin19rag；肌醇inositol328mg．2．2．4试验分组在山东泰安地区蜜蜂春繁开始前，选取群势相当、品种统一的本地意大利蜜蜂30群(群内无花粉贮备)，随机分为6组。其中1组为对照组，饲喂油菜蜂花粉；其余5 意人利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、ME适宜水平的研究组为试验组组，饲喂添加了不同水平VE的代用花粉，各组VE添加水平见表2-4。室内：代用花粉配方同表2．3，试验分组同表2．4，每处理3个重复。测定工蜂寿命。表2-4各组VE添加水平Table2-4VElevelsofdifferentgroups2．2．5饲养管理室外饲养管理同2．1．5；室内饲养：试验前将同一蜂箱内的封盖子脾放入恒温恒湿培养箱(32"C，60％RH)，当新蜂出现，将24h内新蜂转移至饲喂盒内(22．5cm×4．5cm×9．5cm)，每个饲喂盒50只新蜂。每个饲喂盒内饲喂相同的蔗糖溶液和饮用水，每天定时饲喂并清理死亡蜜蜂。2．2．6测定指标’2．2．6．1蜂群群势及封盖子量具体方法参照2．1．6．1。2．2．6．2蜂群取食量具体方法参照2．1．6．2。2．2．6．3蜂体抗氧化性对5同龄工蜂幼虫、0日龄成蜂及7Et龄成蜂蜂体抗氧化性进行测定。具体方法参照2．1．6．3。2．2．6．4蜂体蛋白质浓度对5同龄工蜂幼虫、0日龄成蜂及7日龄成蜂蜂体蛋白质浓度进行测定。具体方法参照2．1．6．4。16 山东农业大学硕．}：学位论文2．2．6．5工蜂初生重具体方法参照2．1．6．5。2．2．6．6工蜂寿命室内饲养试验进行30天，每天记录蜜蜂死亡数并将其移除饲喂盒，计算蜜蜂存活率。2．2．7数据处理试验数据用平均数-1-标准差(X士SD)表示。采用SAS9．1软件进行统计学处理。方差分析使用One．wayANOVA，多重比较采用邓肯氏(Duncan)"法，显著性水平P<0．05。17 感人利蜜蜂春繁期代用花粉中VA、VE适宜水’F的研究3结果与分析3．1VA对意大利蜜蜂蜂群群势及封盖子量的影响各组蜂群群势随时间的变化曲线如图3．1所示，VA对各组封盖子量的影响如表3．1(见P25)所示。122436群势测定日期Determinationdate(d)图3．1蜂群群势随时间的变化曲线Fig．3·lColonydevelopmentinthedynamicchangesOVal"times·图3．1显示，试验期间，蜂群群势总体表现为先下降，后上升的规律，试验后期(36●天)群势以10000IU／kg组增长最快，与对照组相当；0IU／kg、5000IU／kg、15000IU／kg组效果相当；20000IU&g组增长最慢。因此，日粮中添加适宜水平的VA有利于试验后期群势的增长。各组初始群势调整一致，试验前、中期(12、24天)群势各组间均无显著性差异(尸>O．05)。试验后期群势，VA水平为10000IU／kg组显著高于其他试验组(尸<0．05)，与对照组差异不显著(尸>0．05)。20000IU&g组显著低于对照组及其他试验组(尸<0．05)。由表3．1可以看出，蜂群封盖子量随VA水平的增加而呈二次增长(厶P>0．1；Q，P<0．05)，VA水平为10000IU／kg组在试验第12天封盖子量显著高于对照组及其他试验组(尸0．05)。24天封盖子量以对照组显著高于试验组(尸0．05)，但均显著高于其余试验组(尸0．1；QP<0．05)，在整个试验过程中，对照组总取食量(g／箱)和单位取食量(g／足框蜂)均显著高于试验组(氏0．05)。由此得出，代用花粉适口性较天然花粉有一定差距。在试验组中，蜂群总取食量在试验前、中期以VA水平为5000IU／kg和10000IU／kg组最高(P0．1；QP<0．05)，vA水平为10000IU／kg、15000IU／kg组工蜂初生重与对照组相当(尸>O．05)，显著高于其他试验组(尸0．053。但7日龄成蜂头胸部蛋白质浓度随VA水平的增加而呈线性和二次的增长(厶P<0．05；Q，P<0．05)，无VA添加的试验组7同龄成蜂头胸部的蛋白质浓度显著低于其他试验组(尸O．1；Q，P<0。05)。19 患人利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究在幼虫上，T-SOD活性以l5000IU／kg组最高，显著高于其他试验组(尸O．05)。0同龄成蜂及7日龄成蜂T-SOD活性以10000IU／kg、15000IU／kg组较高，与对照组差异不显著(尸>O．05)。随VA水平的升高，蜂体MDA含量呈先降低后升高的趋势。幼虫MDA含量以10000IU／kg组最低，显著低于对照组及其余试验组(P<0．05)。5000IU／kg～15000IU／kg组O日龄成蜂MDA含量相近(尸>O．05)。除0IU／kg组外，其余试验组问MDA含量无显著差异(尸>O．05)。VA水平为10000IU／kg和15000IU／kg的试验组幼虫CAT活性最高。VA对O日龄成蜂及7日龄成蜂CAT活性无显著影响(pO．05)。20000IU／kg组幼虫各抗氧化酶活性均最低，丙二醛含量也较高。可见，过高剂量的VA(20000IU／kg)对机体抗氧化能力的提高无积极作用。3．5VA对意大利蜜蜂工蜂中肠AKP活性及PM厚度的影响vA对意大利蜜蜂工蜂中肠AKP活性及PM厚度的影响如表3．5(见P29)所示。表中显示VA对中肠蛋白质浓度无显著影响，但10000IU／kg～15000IU／kg组中肠AKP活性显著高于其他试验组(尸<0．05)，与对照组无显著差异(胗O．05)。中肠PM厚度以10000IU／kg组最高，显著高于其他试验组(尸<0．05)，与对照组效果相近(胗0．05)。图3．2至3．7所示为不同处理组工蜂中肠组织形态。由图中可以看出，PM厚度随VA水平的不同而变化。对照组、10000IU／kg组及15000IU／kg组PM完整、致密且厚度较大，而0IU／kg组及20000IU／kg组PM稀疏、层数少、厚度小。由此可得，饲粮中适宜水平的VA有利于蜜蜂中肠PM的发育。 山东农业大学顾士学位论文：魄幽3-2对照11l中肠纽织切JI，H&E染色，IOOX图3-30|U／kg组中肠组织切片，H&E染色，IOOxFig．3-2Midguthistologicalpictureofpollengroup．H&Estain．100XFig．3-3Midguthistologicalpictureof0IU／kggroupH&Estain．100×图3-4‘5000IU／kg组中肠组织切片，H&E染色，lOOX图3-510000lU／lcg组中肠组织切片，H&E染色，IOOXFig．3-4Midguthistologicalpictureof5000IU／kggroup．H&Estain，100X幽3-615000IU／kg组中肠组织切片，H&E染色，100×Fig．3-6Midguthistologicalpictureof15000m／kggroupH&Estain．100XFig．3-5Midguthistologicalpictureof10000lU，kggroup．H&Estain，100X图3-720000IU／kg组中肠组织切片，H&E染色，lOOXFig．3-7Midguthistologicalpictureof20000IU&ggroup．H&Estain。100×．I_． 患大利蜜蜂备繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究3．6VE对意大利蜜蜂蜂群群势及封盖子量的影响图3—8为各组蜂群群势随时间的变化曲线，表3-6(见P29)所示为VE对各组封盖子量的影响。’224弱群势测定日期Determinationdate(d)图3-8蜂群群势随时间的变化曲线Fig．3-8Colonydevelopmentinthedynamicchangesovertimes图3．8显示，试验期间，蜂群群势总体表现为先下降，后上升的规律，试验36天群势以480mg／l(g～720mg／kg组增长最快，与对照组相当：240mg／k卧960mg／kg组效果相当：0mg／kg组增长最慢。因此，日粮中添加适宜水平的VE有利于试验后期群势的增长。各组初始群势调整一致，试验12天、24天群势各组间均无显著性差异(胗O．05)。试验后期群势，VE水平为480mg／kg一720mg／kg组显著高于其他试验组(尸O．05)。720mg／kg一960mg／kg组第36天封盖子量显著高于对照组及其余试验组(P0．05)，试验期后期以480mg／kg～960mg／kg组最高(尸<0．05)。同样，饲喂代用花粉的各试验组蜂群单位取食量在试验前、中期均无显著差异(尸>O．05)，试验期后期以480mg／kg～720mg／kg组较低。VE添加水平对蜂群取食量的影响不明显。3．8VE对意大利蜜蜂蜂体蛋白质浓度及工蜂初生重的影响不同水平VE对意大利蜜蜂蜂体蛋白质浓度及工蜂初生重的影响见表3．8(见P31)。由表3—8可得，工蜂初生重随VA水平的增加而呈二次增长(厶P<0．1；Q，P<0．05)。除不添加VE的处理组外，其余各组工蜂初生重差异不显著(．胗O．05)。0mg／kg组工蜂初生重与240mg／kg、480mg／kg组无显著差异，但显著低于对照组及其试验组。可见，VE缺乏会阻碍工蜂正常生长发育。VE对蜜蜂不同发育阶段整个蜂体的蛋白质浓度均无显著影响(扮0．05)，对7日龄成蜂头胸部蛋白质浓度影响亦不显著(尸>0．05)。3．9VE对意大利蜜蜂蜂体抗氧化性的影响不同水平VE对意大利蜜蜂各发育阶段蜂体抗氧化性的影响见表3-9(见P32)。表中显示，随VE水平的升高，蜂体T-AOC呈逐渐升高的趋势，其中幼虫和O日龄成蜂T-AOC呈线性和二次增长(厶P<0．05；QP<0．05)，7日龄成蜂T-AOC呈线性增长(厶P<0．05；QP>0．1)。480mg／kg一960mg／kg组蜂体T-AOC较高，与对照组差异不显著(尸>O．05)。VE对幼虫虫体T-SOD活性影响较显著，随VE水平增长而变化的趋势与T-AOC相同，呈线性和二次增长(厶P<0．05；QP<0．05)。960mg／kg组幼虫T-SOD活性最高，与720mg／kg组及对照组差异不显著(胗O．05)，显著高于其他试验组(尸<0．05)。OR龄成蜂T-SOD活性以480mg／kg～960mg／kg组最高，与对照组差异不显著(尸>0．05)。7同龄成蜂T-SOD活性各组间无显著性差异(尸>O．05)。随VE水平的升高，蜂体MDA含量呈逐渐降低的趋势。三个发育阶段MDA含量均以0mg／kg组最高(尸．，o．05)，其余各组间MDA含量相近。VE对蜂体CAT活性影响不显著。试验组各发育阶段蜂体CAT活性差异不显著(尸>0．05)。 忠人利蜜蜂奋繁期代用花粉中VA、VE适宜水平的研究3．10VE对意大利蜜蜂工蜂寿命的影响图3-9为工蜂存活率随时间的变化曲线。由图可得，工蜂存活率随日龄的增长逐渐降低，以0mg／kg组和240mg／kg组下降最快。到第30天，480mg／l(g～960mg／kg组存活率显著高于其他试验组(PO．05)。由此得出，代用花粉中VE的添加有利于工蜂存活率的提高、寿命的增加。寥、_，暑．：昱2盘‰曼暑2芒静蜒雉日龄Age(d)图3-9"1-蜂存活率随时间的变化曲线Fig．3-9PercentageproportionoflivebeesinthedynamicchangesOVCq"times24 山东农业人学硕J：学位论义表3．1不同水平VA对封盖子量的影响Table3-1￡ffbctofdiffcrentIevelsofVAontheamountofsealedbrood封盖子脾面积Amountofsealedbrood(cm2)对照组Control试验组VA水平VAlevelofpollensubstitute【IU／k8)P．值EffeCt(尸-value)0500010000l500020000线悱Linear二二次Quadratio12．d905．33士49．17。634．67士140．236658．00士50．485918．40士30．29-634．67士49．66b560．00*38．97bO．5252O．028224．d653．33士40．41‘520．33士44．46b557．67士45．54b520．33士42．19b522．67士60．35b378．00士48．50cO．OI57O．002036-d1445．50士57．30。1255．33-+-22．50bc1390．67士32．33"1435．00-士61．02*1360．33士121．71山1220．33j：28．29。0．60320．0007同行肩标不同小写字母表示差异显著(尸<0．05)，相同字母或不标表示差异不显著(Jp>0．05)。下表同。Inthesozrlerow,valueswithdifferentsmalllettersuperscriptsmeshsignificantlydifferent(PO．05)．Thesameasbelow． 表3．2不同水平VA对蜂群取食量的影响Table3-2EffectofdifferentRevelsofVAonfeedingamountofbeecolony一●————————————————————————————————————————————————————————一试验组VA水平P。值取食量Feedingamount对照组-⋯⋯一⋯-_⋯_⋯⋯⋯⋯⋯⋯●-+一ControlVAleverofpollensubstituteOU&g)Effectf户-value)050001500020000线性Linear-二次Quadratic∥箱24．d754．38士55．84t255．03士II．946334．26士0．00bc346．64士21．44b485．244-13．86cd240．91士0．86d0．3629