全自动固相萃取-高效液相色谱荧光法测定蜜饯中人工合成甜味剂对乙氧基苯脲含量.pdf 3页

中国调味昌第39卷第3期ChinaCondiment分析检测2014年3月全自动固相萃取一高效液相色谱荧光法测定蜜饯中人工合成甜味剂对乙氧基苯脲含量陈章捷，陈金凤，张艳燕，钟坚海，魏晶晶(福建龙岩出入境检验检疫局，福建龙岩364000)摘要：提出了高效液相色谱法测定蜜饯中人工合成甜味剂对乙氧基苯脲含量的方法。样品采用醋酸一醋酸铵缓冲液超声提取，全自动固相萃取仪净化，SB-C18反相色谱柱分离，荧光检测器检测。对乙氧基苯脲在O～10mg／L范围内的线性相关系数为0．9987，方法定量限(S／N-10)小于0．1mg／kg。以三种空白蜜饯为基体，在3个添加水平进行加标回收试验，平均回收率在81．7"--92．4A0之阃，相对标准偏差(n=6)在2．4／~i～6．8之间。关键词：全自动固相萃取；高效液相色谱；蜜饯；对乙氧基苯脲中图分类号：TS202．3文献标志码：Adoi：10．3969／j．issn．1000—9973．2014．03．028文章编号：1000-9973(2014)O3—0112一O3DeterminationofArtificiaISweetener4．EthOXyphenyIUreainSuccadebyAutomaticSolid—phaseExtractionandHighPerformanceChromatographywithFluorescenceMethodCHENZhang~ie，CHENJin-feng，ZHANGYan-yan，ZH0NGJian-hai，WEIJing-jing(LongyanEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Longyan364000，China)Abstract：Highperformanceliquidchromatographyisappliedforthedeterminationofartificialsweete。ner4一Ethoxyphenylureainsuccade．Thesampleisultrasonicextractedwithaceticacid／ammoniumacetatebuffersolutionandpurifiedbyautomaticsolid-phaseextraction．TheextractisseparatedbySB-CI8columnanddetectedbyfluorescencedetector．Thevalueofcorrelationcoefficientintherangeof0to10mg／Lis0．9987．Thelimitofquantity(S／N=lO)islessthan0．1mg／kg．Usingblanksampleofsuccadeasmatrixes，therecoveryistestedat3differentconcentrationlevelsandthevaluesofrecoveryareintherangeof81．7％to92．4withRSDs(n=6)intherangeof2．4to6．8．Keywords：automaticsolid-phaseextraction；HPLC；succadc}4一Ethoxypheny1urea对乙氧基苯脲(4一Ethoxypheny1urea)又称(4一乙人体一次口服8～10g，会引起严重的胃炎，大量反复氧基苯基)脲，是一种人工合成甜味剂，甜度相当于蔗给动物服用会发生贫血症。糖的250倍，其吸收快，排泄慢，在体内会分解成对乙由于对乙氧基苯脲的毒性，特别是对动物致癌，目氧基苯胺，进一步形成对氨基酚，从而导致肝癌等症。前食品添加剂联合委员会JECFA和许多国家都已禁收稿日期：2013—10—31基金项目：福建省科技攻关重点项目(2010Y0001)作者简介：陈章捷(1980一)，男，福建福州人，工程师，硕士，研究方向：食品理化检测。一112— 中国调味晶第39卷第3期ChinaCondiment分析检测2014年3月止其作为食品甜味剂使用。早在1950年美国就已在其1．3试验方法法典内明确规定对乙氧基苯脲为不允许添加到食品的取5g样品(可食部分)于5OmL离心管中，加入物质。日本和欧盟均未将对乙氧基苯脲列入可以在食25mL醋酸一醋酸铵缓冲液，涡旋混匀，超声提取品中使用的添加剂，我国也不允许其作为食品添加剂使15rain，4000r／min离心5rain，取全部上清液于全自用。但少数不法企业为了增加食品的甜度，获取更大的动固相萃取仪进样瓶中备用。利益，仍将其放在蜜饯、饮料、果酱或其他食品中，对人全自动固相萃取仪程序设定：用6mL甲醇、6mL们的生命健康造成了严重的威胁。中国WTO／TBT-水活化平衡ProElutPLS柱，样品提取液全部注入柱．S通报咨询网数据表明，从2003年1月至2013年9子，用20mL醋酸-醋酸铵缓冲液淋洗，弃去淋洗液，氮月美国FDA扣留中国出口食品中，共有125批次产品气吹干，以3mL甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃条件下含有对乙氧基苯脲，绝大部分食品为蜜饯类产品。但迄氮气吹干，然后采用红外定容功能，用乙腈／醋酸一醋酸今为止，国内尚无检测食品中对乙氧基苯脲含量的检测铵(2：8)混合溶液定容至1mL。标准。为维护我国人民健康，保证食品安全，加强出口样品最终定容液过0．22tan滤膜，供液相色谱分析。食品安全监督，建立一种食品中对乙氧基苯脲含量的准确、简便的检测方法显得尤为重要。2结果与讨论参考文献[1一lO3后，建立了测定蜜饯中对乙氧基2．1净化条件的选择苯脲含量的液相色谱分析方法，并针对蜜枣、话梅、葡对乙氧基苯脲在水中溶解度较小，为1210mg／L，萄干三种蜜饯基质开展方法验证。在水相中可形成弱阴基团，其logP值为1．28，偏极1试验部分性。选择四种固相萃取柱ProElutPXA，ProElutSAX，ProElutNH2和ProElutPLS柱以比较净化效1．1仪器与试剂果。实验表明：ProElutPXA和ProElutNH2柱对目Agilent1200型液相色谱仪，配备自动进样器、四标物的回收率低于ProElutPLS，而ProElutSAX柱元泵、自动脱气机和荧光检测器；FOTECTOR-O6型由于吸附强度大，洗脱效果不佳，回收率更低，故选择全自动固相萃取仪；TDL_5一A型离心机；VortexGen-ProElutPLS柱为萃取净化手段。ius3型涡旋混合器。2．2色谱条件的选择对乙氧基苯脲标准溶液：100mg／L，称取对乙氧2．2．1流动相配比基苯脲标准品10．0mg，以温水溶解，冷却后定容至考察流动相中乙腈和醋酸醋酸铵缓冲液的不同比100mL。例(5，1O，2O，3O％)对含有对乙氧基苯脲样品色谱醋酸一醋酸铵缓冲液：0．005mol／L，称取0．385g表征的影响。结果表明：含5％，10乙腈流动相保留时乙酸铵，加水约990mL溶解，用冰醋酸调节pH至6．0间较长，含3O乙腈的流动相目标物出峰与前部干扰峰后，用水定容至1L。乙腈／醋酸一醋酸铵(2：8)混合溶液：取200mL乙无法有效分离，故选择2O％乙腈作为流动相配比。腈与800mL醋酸一醋酸铵缓冲液充分混合。2．2．2检测器固相萃取柱：ProElutPLS柱，6mL，500mg。比较紫外检测器(240nm)波长和荧光检测器(激1．2色谱条件发波长237nm，发射波长340nm)对对乙氧基苯脲标SB-C18反相色谱柱(4．6mm~150mm~5tan)。流准物质的响应灵敏度，以信噪比S／N>10为判定依动相：A相为醋酸-醋酸铵缓冲液(O．005mol／L，pH6．0)，据，当对乙氧基苯脲进样浓度为1mg／L时，二种检测B相为乙腈，洗脱条件为0～10min，2OB相；10～器均有明显响应，但进样浓度为0．4mg／L时，紫外检2Omin，40B相。流速为1mL／min，柱温35℃，荧光检测器已无响应，而荧光检测器仍有响应，故选择灵敏度测器：激发波长237nln，发射波长340nm。更高的荧光检测器作为对乙氧基苯脲的色谱检测器。一1】3一 中目调味昌第39卷第3期ChinaCondiment分析检测2014年3月2．3色谱行为3结论在试验条件下，三种样品基质中的对乙氧基苯脲都得到了很好的分离。在目标物出峰位置，没有杂质本研究采用固相萃取液相色谱法测定蜜饯中对乙峰干扰其测定。对乙氧基苯脲加标水平为0．1mg／kg氧基苯脲的含量，方法可靠简便，各项方法学指标均符的话梅色谱图见图1。合GB／T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》中检测方法确认的技术要求，可为我国建立食品中对乙氧基苯脲含量测定的检测标准提供技术参考。参考文献：[-1-[ZyglerA．Analyticalmethodologiesfordeterminationofar—tificia[sweetenersinfoodstuffs[J]。TrendsinAnalytical0246lOl2Chemistry，2009，28(9)：1082-1102．圈1加标样品色谱圈1-23ZyglerA．Determinationofninehigh-intensitysweetenersFig．1Chromatogramofspikedsamplesinvariousfoodsbyhigh-performanceliquidchromatography2．4标准曲线withmassspectrometricdetection[J]．Ana1．Bioana1．Chem．。2011(400)：2159-2172．移取一定量的100mg／L对乙氧基苯脲标准溶1,3]ThompsonCO．Micellarelectrokineticcapillarychromato—液，用乙腈／醋酸一醋酸铵(2：8)混合溶液定容至graphicdeterminationofartificialsweetenersinlow-Joule25mL，配制成0，0．4，1，2，5，10mg／L系列浓度，以标softdrinksandotherfoods1,J]．JournalofChromatography准物质峰面积为纵坐标，浓度为横坐标。结果表明：对A，1995(694)：507-514．乙氧基苯脲在O～10mg／L浓度范围内线性回归方程[4]ZyglerA．Retentionbehaviourofsomehigh-intensity为y=7．0889x-0．962，相关系数为0．9987。sweetenersondifferentSPEsorbents[J]．Talanta，20102．5测定下限(82)：1742-1748．对蜜枣、话梅、葡萄干3种蜜饯分别平行测定1,5]WasikA．Simultaneousdeterminationofnineintensesweet—enersinfoodstuffsbyhighperformanceliquidchromatogra—6次，以信噪比(S／N)等于10计算方法的定量限依次phyandevaporativelightscatteringdetection-development为84．7，89．2，92．4~g／kg。andsingle-laboratoryvalidation[J]．JournalofChromatog—2．6方法的回收率和精密度raphyA，2007(1157)：187—196．按试验方法对从市场购买的不含对乙氧基苯脲的[63RaoMV．Spectrophotometricdeterminationofduicin(p-三种蜜饯进行加标回收试验，添加水平为100，200，EthoxyPhenylUrea)infoods口]．FoodChemistry，1983500t~g／kg，平行测定6次，计算平均回收率和相对标(12)：109-113．准偏差，结果见表1。[7]ZyglerA．Thecontentofhigh-intensitysweetenersindif-表1回收率和精密度结果(n=6)ferentcategoriesoffoodsavailableonthePolishmarket[J]．FodAdditives＆Contaminants：PartA，2012，29(9)：Table1ResultsofrecOveriesandprecision1391-1401．[8]ChenBH．Simultaneousdeterminationofpreservatives，sweetenersandantioxidantsinfoodsbypaired-ionliquidchromatography1,J]．Chromatographia。1995·41(5-6)：43。5O．[9]刘婷．食品中甜味剂的检测方法口]．中国调味品，2011。36(3)：1-12．[1O]曾广植．甜味分子和人工合成甜味剂的结构化学l-J]．应用化学，1990，7(5)l11-36．一114—