拜发试剂盒 酶联免疫法定量检测牛奶,蜂蜜,虾,肉,鱼粉和蛋中的氯霉素 7页

拜发试剂盒酶联免疫法定量检测牛奶，蜂蜜，虾，肉，鱼粉和蛋中的氯霉素RIDASCREEN®Chloramphenicol体外诊断试剂储存温度2-8°C拜发分析系统销售（北京）有限公司购买联系方式广州市瑞品生物技术有限公司（020）84386071手机13610174887QQ1851480094产品简介RIDASCREEN®Chloramphenicol（订货号：R1505）氯霉素检测试剂盒，采用竞争性酶联免疫法定量测定奶、奶粉、蜂蜜、虾、肉、鱼粉和蛋中的氯霉素。试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。试剂盒足够进行96次检测（包括标准测定）。定量分析需要使用微孔板酶标仪。样品处理：均质，提取，离心，浓缩，干燥（奶样品：可直接进行检测）检测时间：样品制备（以10个样品为例）视样品不同............................................1.5至2小时检测时间（孵育时间）.......................1小时15分钟检测限：奶.......................................................................5ppt奶（直接检测）................................................25ppt奶粉.................................................................25ppt蜂蜜..................................................................25ppt虾，肉，鱼粉................................................6.25ppt蛋.....................................................................25ppt回收率：奶和奶粉.........................................................>80%蜂蜜................................................................>80%虾，肉，鱼粉.................................................>80%蛋...................................................................>80% 特异性：RIDASCREEN®Chloramphenicol氯霉素检测试剂盒的特异性根据与相关抗生素的交叉反应确定。氯霉素.........................................................100%氯霉素碱..........................................................12%甲砜霉素.....................................................<0.1%1.用途RIDASCREEN®Chloramphenicol氯霉素检测试剂盒采用了竞争性酶联免疫法定量检测奶、奶粉、蜂蜜、虾、肉、鱼粉和蛋中的氯霉素药物残留。1998年9月德国根据其食品与日用品法LMBG第35章（01.0068）正式通过了一项检测牛奶中氯霉素残留的方法。该方法即为基于微孔板基础的ELISA筛查方法。2.概要氯霉素是一种广谱抗生素，具有很好的抗菌效果和药物动力学性质，常用于畜牧业生产中。然而，氯霉素会造成人的再生障碍性贫血，而且诱发浓度还没有确定，所以目前已经禁止在动物及食品中使用氯霉素。3.检测原理检测的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有氯霉素抗体。加入标准品、样品溶液和氯霉素酶连接物。游离的氯霉素与氯霉素酶连接物竞争氯霉素抗体（竞争性酶联免疫法）。没有结合的氯霉素酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶连接物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm测量。吸光度值与样品中的氯霉素浓度成反比。4.试剂盒组份每一个盒中的试剂足够进行96次检测（包括标准测定），盒中的组份如下：1x96孔微孔板（12条每条8孔）包被有氯霉素抗体6x标准品（每瓶1.3ml）0ppt（零标准品）,25ppt，50ppt，100ppt，250ppt，750ppt氯霉素水溶液，即用型1x酶连接物（0.7ml）.........................................................................红色瓶盖过氧化物酶标记的氯霉素浓缩液1x底物/发色剂（10ml）.......................................................................棕色瓶盖红色1x反应终止液（14ml）........................................................................黄色瓶盖含1N硫酸1x缓冲液（100ml）酶连接物及样品稀释缓冲液 1x洗涤缓冲液（盐）用于制作10mM的磷酸盐缓冲液，pH7.4含有0.05%Tween205.另需的试剂和设备5.1.设备：−微孔板酶标仪（450nm）−离心机−振荡器−漩涡混合器−均质器（Stomacher,Ultraturrax）−蒸发器−刻度移液管−20-200µl和200-1000µl微量移液器5.2.试剂：−乙酸乙酯−正己烷（或正庚烷）针对奶样品（用乙酸乙酯提取）：−CarrezI:0,36M亚铁氰化钾(II)x3H2O−CarrezII:1,04M硫酸锌x7H2O6.操作者应该注意之事项标准品中含有氯霉素。请小心使用。反应终止液为1N硫酸（R36/38，S2-26）。7.储存条件保存试剂盒于2-8°C，不要冷冻。将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2-8°C条件下。底物/发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。对过了有效期（见试剂盒标签）的试剂盒不再提供任何质量保证。不能交叉使用不同批号的盒中试剂。8.试剂变质的迹象−红色的底物/发色剂在使用前发现颜色变蓝−零标准品的吸光度值小于0.6（E450nm<0.6）9.样品处理样品应避光冷藏保存。9.1.奶样品（直接进行检测）−用旋涡混合器将奶样品混合均匀−取50µl奶样进行检测稀释倍数：............................................1 检测限：................................................25ng/kg(ppt)定量检测限：.........................................25ng/kg(ppt)9.2.奶样品（用乙酸乙酯提取）−取10ml奶样品到离心管中−加入500µlCarrezI（参见5.2），充分混合−加入500µlCarrezII（参见5.2）−充分混合，离心：10分钟/3000g/4–12°C如果没有制冷式离心机，可在离心之前将样品预先冷却至8°C左右。−移取4.4ml上层样品（相当于4ml奶样）至新的离心管中−加入8ml的乙酸乙酯振荡提取10分钟−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−移取4ml乙酸乙酯层（相当于2ml奶样）至新的离心管中，60°C下氮气吹干浓缩样品−用400µl缓冲液稀释干燥的残留物并在旋涡下混合−取50µl进行检测稀释倍数：............................................0.2检测限：................................................5ng/kg(ppt)定量检测限：.........................................10ng/kg(ppt)请注意9.6.后的注意事项！9.3.奶粉−用10ml的蒸馏水溶解2g奶粉于离心管中−加入1mlCarrezI（参见5.2）充分混合−加入1mlCarrezII（参见5.2）−充分混合（旋涡），离心：10分钟/3000g/4-12°C如果没有制冷式离心机，可在离心之前将样品预先冷却至8°C左右。−移取3.6ml上层样品（相当于0.6g奶粉）至新的离心管中−加入6ml的乙酸乙酯振荡提取10分钟−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−移取4ml乙酸乙酯层（相当于0.4g奶粉）至新的离心管中，60°C下氮气吹干浓缩样品−用400µl缓冲液稀释干燥的残留物并在旋涡下混合−取50µl进行检测稀释倍数：............................................1检测限：................................................25ng/kg(ppt)定量检测限：.........................................50ng/kg(ppt)请注意9.6.后的注意事项！9.4.蜂蜜−用4ml的蒸馏水溶解2g蜂蜜样于离心管中−加入4ml的乙酸乙酯上下振荡约10分钟−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−移取1ml乙酸乙酯层（相当于0.5g蜜样）至新的离心管中，60°C下氮气吹干浓缩样品 −用0.5ml缓冲液稀释干燥的残留物并在旋涡下混合−取50µl进行检测稀释倍数：............................................1检测限：................................................25ng/kg(ppt)定量检测限：.........................................75ng/kg(ppt)乙酸乙酯蒸发后的残渣不能完全溶解，但是不影响氯霉素检测的回收率>80%。请注意9.6.后的注意事项！9.5.虾、肉和鱼粉−取适量的样品（例如100g），用适当的仪器（Ultraturrax高速分散机或是搅拌器）进行均质−取3g均质后的样品与3ml的蒸馏水混合，再加入6ml的乙酸乙酯−强烈振荡10分钟（例如，上下振荡）−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−移取4ml乙酸乙酯层（相当于2g样品）至新的离心管中，60°C下氮气吹干浓缩样品−用1ml的正己烷溶解干燥的残留物−加入0.5ml缓冲液，在旋涡上混合约1分钟−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−取50µl下层的水相进行检测稀释倍数：............................................0.25检测限：................................................6.25ng/kg(ppt)检测下限：............................................12.5ng/kg(ppt)请注意9.6.后的注意事项！9.6.蛋（整个生蛋）−取适量的样品（例如100g），用适当的仪器（Ultraturrax高速分散机或是搅拌器）进行均质−取2g均质后的样品加入12ml乙酸乙酯−强烈振荡10分钟（例如，上下振荡）−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−移取6ml乙酸乙酯层（相当于1g样品）至新的离心管中，60°C下氮气吹干浓缩样品−用1ml的正己烷溶解干燥的残留物−加入1ml缓冲液，在旋涡上混合约1分钟−离心：10分钟/3000g/室温(20-25°C)−取50µl下层的水相进行分析稀释倍数：............................................1检测限：................................................25ng/kg(ppt)检测下限：............................................50ng/kg(ppt)注意：用乙酸乙酯进行处理的样品，我们建议将阳性样品的cutoff（临界）值设定为相应给出的定量检测限值，因为阴性结果可能产生背景干扰。溶剂样品可能得到大于标准品2 的数值。因此建议，每次实验附带一个溶剂空白样实验（样品处理时没有样品，从蒸干乙酸乙酯层浓缩步骤开始进行处理），并且从样品结果中减去溶剂空白样品的检测结果值。如果需要附加的关于血清/血浆、混合饲料和蜂王浆样品的处理方法，请与当地的R-Biopharm公司分销商联系。10.检测步骤10.1.检测前的准备使用之前将所有试剂回温至室温（20-25°C）。样品和洗涤缓冲液是PBS-Tween缓冲液，为此试剂盒中提供了一袋洗涤缓冲液盐（参见4.）。使用1L蒸馏水溶解一袋洗涤缓冲液盐制得缓冲液。制备好的缓冲液可在2-8°C下保存大约4－6周时间。或者：用100ml蒸馏水溶解袋中的洗涤缓冲液盐，得到10倍的洗涤缓冲液盐浓缩液，此溶液能在室温（20-25°C）下储存8－12周。使用时，用9份蒸馏水溶解1份此浓缩液得到洗涤缓冲液。氯霉素酶连接物（红盖帽）为浓缩液。由于稀释的酶连接物稳定性不好，所以只稀释实际需用量的酶连接物。在吸取浓缩液之前，要仔细地轻轻振摇。用缓冲液以1:11（1+10）的比例稀释酶连接物浓缩液（参见4.）（例如：200µl浓缩液+2ml缓冲液，足够4个微孔板条用）。10.2.检测操作仔细进行洗板的操作非常重要。在使用中不要让微孔出现干燥。1.将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架，均做两个平行实验，记录下标准品和样品的位置。2.将50µl标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中。3.加入50µl稀释的酶连接物，用手将轻敲微孔板进行溶液混合，在室温（20-25°C）下孵育1小时。4.倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3次）以保证完全除去孔中的液体。加入250μl洗涤缓冲液（参见10.1.），再次倒掉微孔中液体。上述操作重复进行两遍。5.向每一个微孔中加入100μl底物/发色剂，充分混合并在室温（20-25°C）条件下暗处孵育15分钟。6.向每一个微孔中加入100μl反应终止液（黄色瓶盖），充分混合。在加入反应终止液后30分钟内于450nm处测量吸光度值。11.结果评估请使用R-Biopharm德国拜发公司专门为RIDASCREEN®系列产品设计的应用软件RIDA®SOFTWin（订货号：Z9999）来进行结果分析。关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。对单次检测建议使用Logit/log曲线进行结果分析，对两次或多次平行检测应该使用CubicSpline曲线进行结果分析。以下是没有使用软件的计算方法： 标准品的吸光度值（或样品）-----------------------------x100=%吸光度比值零标准品的吸光度值吸光度值以百分比表示，因此零标准品等同于100%。计算标准品相应的比值，并绘成一个与氯霉素浓度（ng/kg）相关的半对数坐标系统的曲线图。为了获得样品中氯霉素的实际浓度ng/kg，从校正曲线上读出的浓度值必须乘以相对应的样品稀释倍数（参见9.1.至9.6.）。