代用花粉中α-亚麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响 58页

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目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IAbstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．IIIl前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1蜂花粉中的脂类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．2蜜蜂体内的脂类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1l。2．1蜜蜂体内脂类种类及含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．2．2蜜蜂体内脂类的合成、贮存和分泌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．3脂类对蜜蜂的营养生理作用⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一21．3．1构成机体的必需成分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．3．2提供能量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．3．3对蜜蜂具有诱食作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3．4抗氧化、抗菌及免疫作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一41．3．5影响蜜蜂寿命⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4昆虫脂肪酸代谢的分子研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51．4．1脂肪酸合成酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4．2乙酰辅酶A羧化酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61．4．3激素敏感脂肪酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．4．4脂肪储存小滴⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。71．4．5脂动激素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．5蜜蜂代用花粉⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．71．5．1蜜蜂代用花粉研究现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．5．2蜜蜂代用花粉存在的问题⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯。81．6蜜蜂脂类营养需要研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81．7本研究的目的意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1春繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量、群势及寿命的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO2．1．1试验蜂群⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．2试验设计及试验日粮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1．3饲养与管理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO 2．1．4测定指标⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102．1．5数据处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l22．2秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．2．1试验蜂群⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2．2试验设计及试验日粮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2．3饲养与管理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．2．4测定指标⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．2．5数据处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．173结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。183．1春繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量、群势及寿命的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．183．1．1春繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量及消化能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。183．1．2春繁期代用花粉ALA水平对蜂群群势和封盖子量的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。193．1．3春繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂初生重的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．203．1．4代用花粉ALA水平对蜜蜂寿命的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。203．2秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯．213．2．1秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。2l3．2．2秋繁期代用花粉ALA水平对蜂群群势和封盖子量的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。213．2．3秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂体重的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。223．2．4秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂体内粗脂含量的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。233．2．5秋繁期代用花粉ALA水平对蜂体脂肪酸成分的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯233．2．6秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂血淋巴脂质含量的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．2．7秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂主要脂质代谢基因mRNA表达水平的影响⋯284讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．294．1代用花粉ALA水平影响蜜蜂采食⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．294．2蜜蜂对代用花粉的消化能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯294．3代用花粉ALA水平影响蜂群群势和封盖子量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。304．4代用花粉ALA水平影响蜜蜂体重⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3l4．5代用花粉ALA水平影响蜜蜂寿命⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．324．6代用花粉ALA水平影响蜜蜂蜂体粗脂含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。334．7代用花粉ALA水平影响蜜蜂蜂体脂肪酸构成与含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34 4．8代用花粉ALA水平影响蜜蜂血淋巴脂质含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯344．9代用花粉ALA水平影响蜜蜂主要脂质代谢基因mRNA表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯355总体结论及创新点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯375．1总体结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．375．2创新点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．375．3后续展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯376参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．387致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．478攻读学位期间发表论文情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48基金资助⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49 山东农业大学硕士学位论文中文摘要脂类对蜜蜂的生长发育有重要作用。目前对蜜蜂营养需要的研究比较薄弱，对蜜蜂代用花粉中脂肪酸的添加水平并不清楚。本研究通过在代用花粉中添加不同水平的Q一亚麻酸(ALA)对蜜蜂生长发育、血淋巴和组织脂质含量、成蜂寿命、相关酶活性及基因表达的影响，探索代用花粉中脂肪酸的适宜添加水平，为蜜蜂的脂类需要、制定饲养标准、配制蜜蜂代用花粉提供理论依据和参考。研究分为春繁和秋繁两个时期，结果如下：春繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂采食量、群势及寿命的影响。春繁期，选用健康、群势相近的蜜蜂36群，随机分为6组(每组6群，每个重复1群蜂)。其中1组为对照组：饲喂不添JJIIALA的代用花粉，其余5组为试验组：饲喂添力nALA水平分别为2％、4％、6％、8％和10％的代用花粉，预饲期为14天，正试期为36天。在试验的第12天、24天和36天对各组蜂群群势和封盖子量进行测定。试验后期，对蜜蜂初生重、成蜂寿命和消化酶活性指标进行测定。试验结果表明：(1)春繁期代用花粉ALA水平显著影响蜂群采食量和消化酶活性。代用花粉ALA水平为4％组蜂群采食量显著高于对照组与ALA水平为6％～10％代用花粉组(P0．05)(3)代用花粉ALA水平显著影响各阶段蜜蜂脂肪酸构成与含量。蜜蜂幼虫期和蛹期，其不饱和脂肪酸(UFA)／饱和脂肪酸(SFA)的比值低于2，且试验组不饱和脂肪酸含量显著高于对照组(尸0．05)．(3)TheALAlevelsinsubstitutepollensignificantlyaffectedthefattyacidcompositionandlipidcontentofeachdevelopmentstageofthehoneybee．Inlarvaandpupastage，theratioofUFA／SFAwaslessthan2，andUFAcontentinexperimentalgroupWaSsignificantlyhigherthanthatinthecontrolgroup(P<0．05)．(4)Compared埘tIlthecontrolgroup，ALAlevelinexperimentalgroupsignificantlyreducedTGcontent(P--0．0099)，TCcontent(尸0．05)．The姗easbelow．蜜蜂采食代用花粉后，主要由其中肠消化酶消化，所以蜜蜂的消化能力可由中肠消化酶活性体现。由表7数据可知，代甩花粉ALA水平对蜜蜂中肠脂肪酶活性有极显著影响(p，o．01)。蜜蜂中肠脂肪酶活性随代用花粉中ALA水平的提高呈现先降低后升高的趋势，以D组脂肪酶活性最低，显著低于A组、B组、E组和F组，与C组无差异。代用花粉中ALA水平对蜜蜂中肠淀粉酶活性和蔗糖酶活性无显著影响(尸>o．05)(表7)。13 山东农业人学硕士学位论文表7春繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂消化酶活性的影响!呈!!三：曼垒!竺：21￡21112：竺!：!!!竺!!：：!1221竺生呈!!!!!：三12211墨!：!堡!12三兰竺!苎竺立i!：21兰2111：!宝宝．．⋯蜜蜂中肠消化酶活性Midgutenzymeactivity组别ALA添加水平(％)———一GmupLevels。fALA脂肪酶活性淀粉酶活性蔗糖酶活性LPSactivity(U儋prot)AMSactivity(U／mgprot)Sucraseactivity(U／mgprot)3．1．2春繁期代用花粉ALA水平对蜂群群势和封盖子量的影响试验期间，各试验组蜂群群势总体表现为逐渐升高的趋势。代用花粉ALA水平对第12d蜂群群势无显著影响，但对第24d和第36d蜂群群势有显著影响(P<0．05)。在第24d和第36d，各试验组蜂群群势随代用花粉ALA添加水平的升高呈现先升高后降低的变化规律，均以C组最高，与A组相比，分别提高了32．63％和28．28％(尸O．05)。2l警lA芒暑”乞oqooJo暑薯宣2盘目墨窆 代用花粉中洳亚麻酸水甲对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响表lO秋繁期代用花粉ALA水平对蜂群采食量的影响Table10EffectsofALAlevelondietconsumption、AI，Aintakeandsealedbroodofhoneybeecolonies同行不同小写字母表示差异显著(尸<0．05)，相同字母或小标表示差异不显著(尸>0．05)，下同。Inthesarnerow,values晰tlldifferentlowercaselettermesrlsignificantlydifferent(P0．05)．Thesameasbelow．表ll秋繁期代用花粉ALA水平对蜂群群势和蜂群封盖子量的影响mlbIe11EffectsofALAleveloncolonydevelopmentandsealedbroodofhoneybeecolonies3．2．3秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂体重的影响表12代用花粉AL．a冰平对不同发育时期蜂体重的影响(mg)Tablel2EffectsofALAlevelonaveragebodyweightofbeesofdifferentages代用花粉ALA水平对幼虫、蛹和成蜂蜜蜂体重的影响见表12。由表12可以看出，代用花粉ALA水平对5d幼虫、5d蛹及刚出房蜜蜂体重均有影响(P<0．05)，且均以MA组蜜蜂体重最高。5d蛹期体重几乎为5d幼虫的两倍，羽化出房时，由于蛹期单向代谢消耗营养成分，体重大幅度降低。代用花粉ALA水平对成蜂体重影响不显著(P>0．05)。22 山东农业大学硕士学位论文3．2．4秋繁期代用花粉ALA水平对蜜蜂体内粗脂含量的影响代用花粉脂肪酸水平对不同发育阶段蜜蜂体内脂肪含量的影响如表13所示。表中数据显示，代用花粉ALA水平显著影响成蜂体内脂肪含量(P0．05)。表13代用花粉ALA水平对不同发育时期蜂体粗脂含量的影响(％，干基)Tablel3EffectsofALAlevelonaveragebodyEEofbeesofdifferentages(‘‰air-drybasis)3．2．5秋繁期代用花粉ALA水平对蜂体脂肪酸成分的影响代用花粉ALA水平对不同发育阶段蜂体脂肪酸成分的影响见表14．18。表14代用花粉Pa,A,"g平对幼虫脂肪酸组成的影响(％)Tablel4EffectsofALAlevelsOnfattyacidcompositionoflarva 代用花粉中小亚麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响表14数据显示，代用花粉ALA水平显著影响幼虫单不饱和脂肪酸含量(尸<0．05)，尤其是C18：l的含量，日粮中添J]I口ALA可增加幼虫体内C18：1的含量，HA组和MA组明显高于LA组(P<0．01)；代用花粉ALA水平虽然对幼虫体内饱和脂肪酸总和及多不饱和脂肪酸总和影响不明显(尸>0．05)，但对幼虫体内C18：3(n一6)、C20：4和C20：5含量影响极显著(尸o．05)。代用花粉触A水平抑制蜜蜂基因ACC和基因HSLmRNA的表达，与对照组相比，MA组和HA组两基因mR．NA的表达均明显下降(P<0．05)；代用花粉ALA水平促进基因HSLmRNA的表达(P．o．05)。表2l春繁期代用花粉AI．A水平对蜜蜂主要脂质代谢基因表达水平的影响Table21EffectofALAlevelsonmRNArelativeexpressionsofrelatedgenesinadulthoneybee 山东农业大学硕上学位论文4讨论4．1代用花粉ALA水平影响蜜蜂采食采食是蜜蜂摄取营养物质的基本途径，影响采食的因素很多，主要有蜜蜂种类、饲粮营养水平、环境和饲喂技术等。就蜜蜂自身而言，其生长发育的不同阶段，需要蛋白质、碳水化合物、脂肪及维生素的质和量不同。花粉的颜色、气味、脂类物质等因素对蜜蜂的吸引力均有影响(马兰婷等，2011)。另外，目前也已证实花粉中的一些脂类物质对蜜蜂具有诱食作用(Lepageeta1．，1968；Hopkinseta1．，1969；Herberteta1．，1980；Dobsoneta1．，1997)，不同来源的蜂花粉对蜜蜂的吸引力也不同(Doull，1966；Boch，1982；Levineta1．，1995)。亚麻酸是蜜蜂的必需脂肪酸(周冰峰，2002)，饲粮中添加亚麻酸可以提高其适口性，吸引蜜蜂采食(Singheta1．，1999；马兰婷等，2011)。Singh等(1999)认为亚油酸和亚麻酸可能会对蜜蜂有一定的诱食作用。春繁期，随代用花粉ALA水平的升高，蜜蜂采食量呈现先增加后降低的变化趋势，当代用花粉ALA添加水平为4％时，蜂群总取食量和粉料摄入量达到最高，且显著高于其它各组(PMA组>LA组，这一结果为研究ALA对蜂体脂质代谢的影响提供了条件。结合春繁期和秋繁期蜜蜂采食量的变化情况以及Herbert(1997)和Manning(2001，2002)的报道，可知配制代用花粉日粮时，脂肪酸添加水平为2％-4％最佳。4．2蜜蜂对代用花粉的消化能力花粉和代用花粉能够为蜜蜂提供充足的蛋白质、氨基酸、淀粉和脂肪等营养物质，在这些营养物质的消化和吸收过程中消化酶起到了关键作用。蜜蜂体内的消化酶主要包29 代用花粉中a一亚麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、蔗糖酶和海藻糖酶(Snodgrass，1956)，而中肠是消化酶的主要分泌部位(Standifer,1980)以及食糜的消化吸收部位，因此，测定中肠消化酶活性，可在一定程度上反应蜜蜂的消化能力。本试验中，代用花粉ALA水平对蜜蜂中肠淀粉酶和蔗糖酶活性影响不显著，但对脂肪酶活性有极显著影响。脂肪酶是催化脂肪水解为甘油和脂肪酸的酶，在脂肪代谢中起着重要作用。脂肪酶除了具有水解作用外，还有酯交换、酯合成的作用，脂肪酶活性受激素、代用花粉等多种因素的影响。一些研究证实，代用花粉中的脂肪酸能够影响脂肪酸合成酶基因的表达，而且这种影响往往是抑制性的，Mersmann等(1973)研究发现代用花粉中的脂肪酸能够抑制脂肪合成酶活性。本研究中，代用花粉从A组到D组，脂肪酶活性逐渐降低。说明随着ALA水平的增加，蜜蜂体内吸收的ALA增多，从而抑制脂肪酶的水解作用，脂肪酶活性逐渐降低。但有趣的是，当代用花粉中ALA含量过高时(E组、F组)，脂肪酶活性再次随代用花粉中ALA水平的升高而增高，这可能是当代用花粉中ALA含量过高时，由于蜜蜂摄取了过量的ALA，造成其体内脂肪酸严重失衡，此时蜜蜂通过正常的代谢途径已不能消除过量ALA对蜜蜂的负面影响，只能被动地提升脂肪酶活性以启动酯交换和酯合成这种迅速而直接的应急措施以清除多余的脂肪酸，同时促进脂肪酶分解脂肪酸及酯水解效应，降低高脂肪酸水平对蜜蜂造成的不利影响。4．3代用花粉ALA水平影响蜂群群势和封盖子量群势是指蜂群中蜜蜂的数量，可以衡量蜂群的强弱，也是估计蜜蜂营养需要的指标(李杰銮等，2005)。在春繁阶段，饲喂蜂群花粉或代用花粉，可以缓解蜂群春季蜂花粉饲粮储备不足，促使蜂群快速繁殖，保证群势快速增长。春繁期，蜂群群势前期上升缓慢，后期上升迅速，这与Hoffman等(2008)及冯倩倩等(2011)研究中群势先下降后上升的研究结果并不一致，原因可能有两点：一是由于试验期间气候因素的影响，导致本试验相对于冯倩倩等开始时间要晚，即在试验开始前期蜂群已经过群势下降阶段；第二，本试验预饲期为14天，比冯倩倩等人的研究预饲期多了7天，加上正式试验第12天测群势时，已有26天。由于蜜蜂每代发育周期为21天左右(曾志江，2007)，因此与冯倩倩等试验相比已多出将近5代的蜜蜂出房，新生蜜蜂的数量大于死亡的数量，故蜂群群势总体表现为上升，但增长缓慢。．封盖子量是反映蜂群的强弱和蜜蜂哺育能力的重要指标。蜜蜂从封盖子至羽化出房大约需要12天左右时间(曾志江，2007)。春繁期，从第12天封盖子量数据可以看出，30 山东农业人学硕』二学位论文在试验前期，代用花粉中应添加适宜水平的ALA以满足蜜蜂春繁阶段对ALA的营养需求。由于第12天和第24天封盖子量大量增加，当这两个时期内的封盖子出房后(即在第24天和第36天)蜂群群势会相应地迅速增长，充分说明了蜂群群势与封盖子量的正相关关系。Schmidt等(1992)研究证实子脾面积、成年蜂数量的变化与蜂群的饲料消耗量存在明显联系。由表3和表4数据统计结果说明，蜂群群势和封盖子量总体来说均以2％、4％和6％ALA添加组为好，O％、8％和10％ALA添加组次之，本试验结果与Schmidt等研究结论相似。秋繁期，代用花粉ALA水平增加蜂群群势和封盖子量，4％组好于8％组。代用花粉中添加脂肪酸可以增加蜂群的产卵力，这与春繁期试验和前人的研究结果一致(Herbert，1980)。葛凤晨等(1990)认为，蜂群越冬期前存在一个群势最低点，这个点直接影响春繁期蜂群的发展，而秋繁期蜂群群势的强弱影响蜂群越冬结果的好坏，因此，秋繁期代用花粉中应添加适量脂肪酸，以增加蜂群的产卵量，增强蜂群群势，为下一年春繁提前做好准备。4．4代用花粉ALA水平影响蜜蜂体重对蜜蜂体重的研究中，春繁期主要集中在对蜜蜂初生重的测定上。蜜蜂初生重是衡量蜜蜂个体质量的重要指标(程艳华等，2008)，蜜蜂初生重受多种因素的影响。研究证实，蜜蜂初生重主要由蜜蜂的种性决定，同时也受蜂房大小、蜂群群势、哺育蜂数量、季节和蜜粉储备等因素的共同影响(刘先蜀等，2002)。研究表明，蜜蜂的吻长与蜜囔大小都与体重呈正相关，因此蜜蜂的初生重也是衡量其采集力等生产性能的重要指标(王志等，2005)。春繁期，4％和6％ALA添加组蜜蜂初生重显著高于对照组、2％组和10％ALA添加组，与8％ALA添加组相比无显著差异。这说明代用花粉中的ALA水平影响蜜蜂初生重。可能是由于哺育蜂采食了不同ALA水平代用花粉后，饲喂给幼虫的食物中ALA水平会产生差异。幼虫采食的ALA，除了一部分用于能量消耗外，也会通过转化为三大物质的形式进行体沉积，从而使蜜蜂初生重增加。但代用花粉ALA水平过高，哺育蜂采食降低，则会降低哺育蜂的哺育质量，造成幼虫营养供给不足，蜜蜂初生重减小；另外，也可能是由于幼虫食物中的高ALA水平对幼虫的采食产生了抑制效应，抑或高水平的ALA抑制了幼虫的生长发育速度，从而影响了幼虫的正常生长发育并导致初生重降低。秋繁期试验证实了代用花粉ALA水平能够对幼虫生长发育产生影响，这是代用花粉因素3l 代用花粉中小亚麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响能够影响幼虫营养供给(Herberteta1．，1980)的又一理论依据。和其它完全变态昆虫一样，蜜蜂发育要经过4个阶段(卵、幼虫、蛹和成虫)。幼虫期，是蜜蜂采食和生长的重要阶段，幼虫期末经变态发育进入蛹期；蛹期，蜜蜂历经蜕皮和色素沉着等一系列复杂的变化，羽化出房为成蜂(Reinholdeta1．，1980，Thrasyvoulouetai．，1982)。秋繁期，代用花粉中添)JHALA可显著增加蜜蜂幼虫、蛹及羽化出房蜜蜂的体重(初生重)，4％ALA添加组增重效果优于8％ALA添加组，但对于5日龄蜂蛹，8ALA添加组体重低于对照组，表明，代用花粉中脂肪酸添加量超过一定限度，则会抑制蜂体的增重。曹光辛(1997)指出，饲料中添力111％的ALA，能显著提高虹鳟的重量，单独添加ALA的效果要好于ALA和亚油酸混合添加的效果。蜜蜂蛹期体重高于幼虫期，羽化出房蜜蜂体重小于蛹期，原因可能为蜜蜂幼虫期是体重增长最快的时期，6日龄幼虫封盖前，体重达到最高；与其它完全变态昆虫类似，蜜蜂进入蛹期后，要经过一系列复杂的体内变化与代谢过程羽化为成蜂，在此过程中，需要消耗大量能量，因此体重降低。代用花粉ALA水平对7日龄成蜂和14日龄成蜂体重影响不明显，但高于刚羽化出房蜜蜂。原因可能为蜜蜂羽化出房后，通过采食代用花粉，体内营养物质得到累积与恢复。仔细分析数据可发现，7日龄成蜂即哺育蜂，主要负责饲喂幼虫，其采食添力IIALA的代用花粉后，体重增加，相应其所哺育的幼虫体重明显高于对照组(LA组)，从而提高羽化率；14日龄成蜂即青年蜂，主要负责饲喂幼虫、清理巢房、筑造巢脾等劳力工作，对能量的需求大，因此饲喂添加ALA的代用花粉可减缓其体重下降的幅度，增加蜜蜂的寿命。4．5代用花粉ALA水平影响蜜蜂寿命蜜蜂寿命，是评估花粉或代用花粉品质优劣的重要指标(Schmidteta1．1987)，也是影响蜂群发展和蜂群生产力的重要因素(周冰峰，2002)。不同季节，蜜蜂的平均寿命相差很大，夏季比冬季寿命短(周冰峰，2002)。代用花粉蛋白水平和维生素添加量也可影响蜜蜂的寿命(冯倩倩等，201l；李成成等，2011)。本试验通过室内饲养刚出房蜜蜂，记录每天死亡数目，测定蜜蜂寿命。虽然室内笼养和大群饲养对蜜蜂寿命的影响有一定差异，但季节对蜜蜂的影响较大，而室内笼养消除了环境等因素的差异，更能反映饲料脂肪酸水平对蜜蜂寿命的影响。许多研究证实，日粮中脂肪酸水平与蜜蜂寿命有密切关系。Manning等(2007)研究发现，高油酸日粮能显著降低蜜蜂寿命，并推测油酸32 山东农业人学硕士学位论文含量过高可能会对蜜蜂产生毒性，日粮中高亚油酸同样能降低蜜蜂寿命。Bryant等(1982)和Matheson(1982)指出，当饲喂蜜蜂全脂豆粉和脱脂豆粉时，蜜蜂更倾向采食脱脂大豆粉，并具有较高的存活率。从图2可知，代用花粉中添加一定水平ALA(2％～6％添加组)与对照组相比(0％添加组)，可增加蜜蜂的存活率，这可能与长链脂肪酸ALA的生物学功能有关。由图l知，2％"-"6％ALA添加组蜜蜂初生重高于对照组，可见，蜜蜂初生重与蜜蜂寿命密切相关。有研究认为，蜂花粉及蜜蜂肠道中高浓度的ALA可以为蜜蜂防止细菌(Manning，2001)、真菌感染(Pandeyela1．，1983)提供强有力的保护，增强蜜蜂的肠道健康，延长蜜蜂的寿命。而代用花粉中ALA添加量为8％和10％时，蜜蜂存活率较低，这可能与过量的ALA添加量对蜜蜂产生毒性有关。4．6代用花粉ALA水平影响蜜蜂蜂体粗脂含量昆虫是一类粗脂含量非常丰富的生物，昆虫的脂肪含量一般占干基的10％以上，很多达30％，个别可高达77．16％(t仲礼，2003)。同种昆虫，以幼虫期、蛹期和越冬期脂肪含量较高。昆虫生活环境、饲粮和发育阶段的不同，均可导致其脂肪含量的变化(周琼等，2003)。脂类是蜜蜂主要的能量储备物质，也是蜜蜂体壁表层和细胞膜的结构物质(周冰峰，2002)，参与蜂体的生长发育和饥饿供能等。代用花粉ALA水平对幼虫期和蛹期体脂含量影响不显著，主要是因为幼虫不直接采食代用花粉，而是由哺育蜂采食代用花粉后，经消化分解合成幼虫代用花粉后再饲喂给幼虫(曾志江，2007)，这样就淡化了代用花粉ALA水平对幼虫体脂的影响；蛹期是完全变态发育时期，无采食行为，其体脂含量的多少由幼虫期营养和蛹期代谢情况决定。代用花粉ALA水平显著影响成蜂期蜂体脂肪含量，这与蜜蜂羽化出房后直接采食ALA代用花粉有关，高脂代用花粉明显增加蜂体脂含量(Manning，2001)。从表12发现，5日龄蛹期粗脂含量比5日龄幼虫粗脂含量高5％(干基)左右，可能主要与蛹期蛋白消耗有关；新出房蜜蜂4％ALA添加组和8％ALA添加组体脂含量低于对照组，但其体重高于LA组，可见蜜蜂在羽化过程中，采食添力I：IALA的饲粮后，可通过增加对脂肪的利用来减缓对体蛋白的消耗；7日龄和14日龄成蜂，通过采食代用花粉，可弥补蛹期对脂肪的消耗，但添加过量的脂肪酸不利于脂肪的合成或脂肪酸的积累。 代用花粉中a．亚麻酸水甲对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响4．7代用花粉ALA水平影响蜜蜂蜂体脂肪酸构成与含量昆虫体内脂肪酸组成与含量受昆虫发育阶段、代用花粉来源和外界环境条件等因素的影响(吴时敏等，2000)。昆虫脂肪酸具有两个特点：第一，昆虫体内不饱和脂肪酸(主要为亚油酸和亚麻酸)含量高，一般是其体内饱和脂肪酸的2．5倍以上；第二，不能合成类固醇类物质，必须由日粮提供(王仲礼，2003)。通过分析蜜蜂不同发育阶段蜂体脂肪酸的变化规律，发现脂肪酸C16：0和C18：2含量在成蜂期大幅度降低，而脂肪酸C18：IT在成蜂体内含量较高，这与脂肪酸的功能密切相关。资料显示，棕榈酸可以提高血清中TG和LDL含量，油酸降低血清LDL浓度。蜜蜂幼虫体水分含量高达80％左右，粗脂含量占干基的26．05％(翟爱华等，2004)，血淋巴量和粗脂含量远大于成蜂，幼虫体脂肪酸中高含量的C16：0、C18：2和低含量的C18：IT可以有效提高幼虫血淋巴中脂质浓度，从而调控生脂基因的表达，增加体脂积累，以满足蛹期代谢对能量的需求。蜜蜂幼虫期和蛹期，其UFA／SFA的比值低于2，成蜂期高于2．5，反映了蜜蜂羽化后，受环境和职能影响，对不饱和脂肪酸需要量增加，对饱和脂肪酸需要量降低，因此，饱和脂肪酸经去饱和酶氧化还原为不饱和脂肪酸以满足机体的需求。总体来说，代用花粉ALA水平对蜜蜂各发育阶段影响都较显著。成蜂脂肪酸的组成中，各组之间脂肪酸C18：3(n．3)差别较大，4％ALA添加组和8％ALA添加组明显高于对照组，可见蜜蜂采食添加ALA的代用花粉后，一定程度上促进TCl8：3(n．3)在体内的积累。4．8代用花粉ALA水平影响蜜蜂血淋巴脂质含量和其它昆虫一样，血淋巴是蜜蜂体内唯一的细胞外液体。包括各种脂质物质，如甘油三酯、甘油二酯、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甾醇、磷脂等。蜜蜂的发育阶段和采食都能影响血脂的浓度(黄少康，2011)。大量研究表明，n．3PUFA能有效降低血清TG、TC等血脂浓度，效果比“PUFA明显(WongandReardon，1985：HaugandHostmook，1987：Aarslandeta1．，1990：ConnorandDeFrancesco，1993)。由本试验结果可知，代用花粉中添加』UA显著降低蜜蜂血淋巴中TG、TC和LDL含量，但MA组降低的幅度大于HA组降低的幅度，可见，蜜蜂代用花粉中添加适量的n．3PUFA可有效降低血淋巴中血脂浓度，有利于蜜蜂健康。蜜蜂血淋巴中HDL含量随代用花粉ALA添加量的升高而显著增加，这也与前人的研究结果一致。中华稻蝗虫油脂可有效降低小白鼠血清中TG、TC含量，显著提高HDL．C的含量(段玉 山东农业人学硕上学位论文峰，2005)。Mensink(1998)指出富含不饱和脂肪酸的杏仁可以降低血清中TC的含量。研究发现饲喂大鼠不同水平ALA的猕猴桃籽油的大鼠血清中甘油三酯和胆固醇水平均显著降低，说明ALA具有辅助降低血脂的作用(陈祜旭，2009)。许继取(2006)同样发现ALAfl邑够明显降低高脂大鼠体内甘油三酯、血浆总胆固醇含量。4．9代用花粉ALA水平影响蜜蜂主要脂质代谢基因mRNA表达水平脂肪酸合成酶(FAS)是基本代谢酶类，可以催化乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A合成棕榈酸(C16：0)，促进脂肪酸的合成；激素敏感脂肪酶(HSL)是脂肪分解的关键酶，能催化脂肪分解为甘油和脂肪酸。Blarke等(1990)研究表明，饲喂大鼠多不饱和脂肪酸日粮，可大幅度抑制其肝中FASmRNA的表达丰度。Clarke等(1990)试验证明，饲喂红花油大鼠其肝脏FASmRNA的表达水平是饲喂鱼油大鼠表达量的2倍，同时指出，n．3脂肪酸抑制FAS基因转录的作用I：gn．6脂肪酸明显。本试验中，4％ALA添加组和8％ALA添加组蜜蜂成蜂FASmRNA表达量明显低于对照组，说明ALA对蜜蜂基因FASrnRNA表达同样有抑制作用；蜜蜂成蜂基因HSLmRNA表达量与基因FAS呈现明显的负相关，这与刘作华等(2007)对动物的研究结果一致。他指出，代用花粉能量水平增加，会促进HSLmRNA的表达，抑制FASmRNA的表达。可见，多不饱和脂肪酸对昆虫脂肪代谢的调控与动物存在某些相似之处。通过对比表13和表21可发现，基因FASmRNA表达量与成蜂体脂呈负相关，而基因HSLmRNA表达量与幼虫和成蜂体脂肪含量呈正相关，很好的反应了代用花粉ALA水平是通过调控脂肪合成与分解相关基因的表达水平来调节蜂体的脂肪含量。乙酰辅酶A羧化酶(ACC)是长链脂肪酸合成的主要限速酶。关于代用花粉PUFA对基因ACCmRNA表达量的影响研究结果并不一致。Salati等(1986)和Hagve等(1988)发现，代用花粉PUFA抑$1]ACCmRNA表达，而Thierry等(1999)指出，饲喂动物鱼油时，其肝脏ACCmRNA表达丰度增加。本试验中，代用花粉中添}JI]ALA显著抑制蜂体基因ACCmRNA表达水平。蜜蜂心侧体分泌的脂动激素(AKH)是调节体内脂解的激素。AKH可与脂肪体表面受体结合，激活cAMP酶，促进cAMP的合成(黄少康，2011)。脂滴是调控昆虫蛹期发育与羽化的主要器官之--(Liueta1．，2009)，脂滴结合蛋I圭t(LSD)是脂滴表面的PAT家族蛋白，在调控脂肪代谢过程中发挥重要作用(Pateleta1．，2005：A1TeSeet讲．，2008)。AKH调节脂解过程中，蛋白激酶A(PKA)可将LSD磷酸化，通过调控体内脂肪酶的活性调节脂35 代用花粉中a．亚麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响解的速率(Pateleta1．，2005)。i面Arrese等(2005)对烟草天蛾的研究表明，AKH不是通过甘油三酯酶发挥脂解活性，而是由脂滴表面蛋白LSD发挥脂解作用。PKA只是将甘油三酯酶磷酸化，并不激活它(Patelela1．，2004，2006)，同时研究表明，LSD只在成虫体内表达，并不存在于在幼虫体内(Arreseet讲．，2006)，很好的解释了AKH不能调节烟草天蛾幼虫的脂解却能提高成虫的脂类降解作用。本试验中，各组之间AKHmRNA表达量并无明显差异，但基因LSDmRNA不仅在成蜂体内表达，在幼虫体内同样表达，但代用花粉ALA水平明显抑$lJLSDmRNA在蜂体内的表达水平，这与Liu等(2009)研究结果一致。可见，不同种类昆虫对脂肪代谢的调控过程存在不同之处。综上知，ALA通过抑制蜜蜂蜂体生脂基因FAS、ACC和LSDmRNA的表达，促进脂解基因HSLmRNA的表达，合理调控机体脂肪的合成与分解过程。 山东农业大学硕士学位论文5总体结论及创新点5．1总体结论5．1．1代用花粉ALA水平影响春繁期和秋繁期蜜蜂采食量、蜂群群势和封盖子量等；且以4％ALA添加量效果最好；5．1．2代用花粉中ALA水平能够影响蜜蜂血淋巴中脂质含量、蜂体脂肪酶活性及蜂体相关基因表达水平、蜂体各发育阶段体重、脂肪含量及脂肪酸构成。5．2创新点5．2．1首次以ALA为脂类供体，探讨了饲料ALA水平对蜜蜂采食量、群势的影响。探明了蜜蜂代用花粉脂肪酸的适宜添加水平。5．2．2初步探究了ALA水平对蜜蜂脂质代谢的影响机理。通过测定蜜蜂血淋巴中TG、TC、LDL和HDL浓度，FAS，ACC等基因mRNA表达水平，得知饲料ALA水平影响蜜蜂脂质代谢。5．3后续展望脂肪酸对蜜蜂脂肪代谢的影响是多方面的，本试验只是选取了部分与脂肪代谢直接相关的基因和酶活进行测定，并未进行组织学水平和细胞水平的研究；虽然得出了蜜蜂代用花粉中脂肪酸的适宜添加范围，并初步了解了蜜蜂血淋巴中脂质含量、生脂和脂解基因对蜂体成分有直接影响，但代用花粉多不饱和脂肪酸具体是通过何种途径如何影响机体脂肪代谢还不太清楚，关于这方面的资料太少，因此，需要在多层面、多水平系统和深入的研究脂肪酸对蜜蜂脂肪代谢的影响。37 代用花粉中小亚麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响6参考文献曹光辛．鱼类词料配制中的营养问题(续)【J】．中国词料，1997，20：28·30．陈祜旭．延缓衰老作用试验报告单．长沙：湖南省公共卫生检测检验中心，2002．程艳华，刘亚男，胡福良．蛋白质营养水平对蜜蜂初生重和咽下腺发育的影响【J】．中国蜂业，2008，59(12)：11-13．段玉峰，2005，蝗虫营养价值与生物学功能研究【D】．陕西师范大学博士学位论文，2005．李杰銮，王志，丁艳波．不同方式饲喂花粉对蜂群春繁的影响四．养蜂科技，2005，3：24．马兰婷，王颖，胥保华．蜂花粉中的脂类对蜜蜂的作用【J】．动物营养学报，2011，24(9)：1643．1646．’范晖，何承顺．蜜蜂蜂体营养成分的分析与评价。山东农工业大学学报，1999，3(30)：37-41．冯倩倩，胥保华，李成成，杨维仁．维生素A对蜜蜂群势、封盖子量及抗氧化性的影响【J】．动物营养学报，2011，23(6)：971-975．高艳华，王联结，耿越，李延娜．8种蜜源植物花粉中脂肪酸组成的分析【J】．陕西科技大学学报，2003，2l(3)：40—42．葛凤晨，薛运波．论蜜蜂越冬死亡【J】．中国养蜂，1990，(5)：1-3．黄少康．蜜蜂生理学【M】．北京：中国农业出版社，2011．李成成，胥保华，冯倩倩，杨维仁．蜜蜂的营养需要及研究方法【J】．中国蜂业，2010(002)：14．15．李成成，胥保华，肖培新，冯倩倩，杨维仁．我国蜜蜂饲料开发与利用现状分析川．蜜蜂杂志，2010(001)：6-g．李成成，杨维仁，胥保华，冯倩倩．蜜蜂生长发育适宜蛋白供给水平及其对幼虫抗氧化活性的影响阴．中国农业科学，201l，44(22)：4714-4720．刘梅芳，徐国恒．PAT家族蛋白在细胞内脂滴代谢过程中的作用．生理科学进展．2006，37(2)：103-107．．一，刘先蜀．蜜蜂育种技术[M】．北京：金盾出版社，2002，25-26．王荫长．昆虫生理学【M】．北京：中国农业出版社，2004．王颖，马兰婷，胥保华．蜜蜂营养需要研究的必要性及策略叨．动物营养学报，2011，23(8)：1269一1272．38 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山东农业大学硕：仁学位论文7致谢本文至此，已近尾声；再次细读，内心感触良多。回想过往，内心感慨万分，充满了感恩。本研究是在导师胥保华老师和杨维仁老师的耐心指导和细心关怀下完成的。从三年前懵懵懂懂，到如今的硕士毕业：从试验设计，到生活学习，无不浸透着恩师的鼓励、关心和指导。恩师治学严谨，学识渊博，不仅授我以知识，更教我如何做人，使我终生受益无穷。回首三年时光，我即将离开熟悉的实验室，告别一张张熟悉的笑脸，忘不了的是三年来与师兄师姐、师弟师妹的欢笑与泪水，永远铭记的是恩师的教诲。感谢郭兴启老师3年来对我的关心、鼓励和教诲，郭老师工作忘我的风格、治学严谨的态度使我深受感动。感谢康明江老师、孙汝江师兄和刘锋师兄在这3年来对我生活、试验和学习上的关心、帮助和支持。感谢王中华老师、林海老师、李福昌老师、杨在宾老师、王纪亭老师、宋志刚老师、焦洪超老师、林雪彦老师、苏鹏程老师、姜淑贞老师、张桂国老师的指导，值此论文完成之际，谨向各位导师致以最崇高的敬意和由衷的感谢!三年来的学习、生活无时无刻离不开实验室的兄弟姐妹和蜂场师傅的无私帮助与支持。感谢张光亮夫妇和张光军夫妇对我试验的大力支持以及生活上的无私关怀和照顾。感谢师兄肖培新、巩志宏、刘利、郑本乐、刘昭华、焦震，师姐王倩、李迎军、王改英、李成成、冯倩倩的悉心指导，是你们帮我迈出了研究生生涯的第一步。感谢与我并肩奋战的王颖和吴在富，以及师弟师妹张怡丁、张鸽和杭晓波，我永远铭记在蜂场一起时的艰辛和快乐光景，感觉真好，感谢你们对我的帮助。感谢可爱的的师弟师妹们，李肖、赵风奎、王圣伟和董文斌对我的关心和帮助，在此一并向他们表示衷心感谢!时至今日，我已在外求学19年。19年来，我的父母含辛茹苦，背负生活的重担默默的支持着我，感谢姐姐和妹妹在这些年来为家庭付出的艰辛与汗水和对我的关心、鼓励、支持与包容，你们对我生活上无微不至的关心、照顾和爱是我今天我顺利完成学业的最坚强厚盾!今天我终于要告别学校走向社会了，我一定倍加珍惜，更加努力。再次感谢给予我关心与帮助的老师、家人、同学和朋友147马兰婷-—-"●2013年5月 代用花粉中a．砸麻酸水平对蜜蜂采食量、群势及脂质代谢的影响8攻读学位期间发表论文情况①马兰婷王颖胥保华．蜂花粉中的脂类对蜜蜂的作用[J】．动物营养学报，2012，24(9)：1643．1646．②王颖马兰婷胥保华．蜜蜂营养需要研究的必要性及策略【J】．动物营养学报，201l，23(8)：1269—1272．获得奖励2011-2012年度，获得硕士生中期考核“二等奖学金”。2013，获得山东农业大学“优秀毕业生”。 山东农业大学硕士学位论文基金资助本研究由国家蜂产业技术体系建设专项资金(CARS．45)和公益性行业(农业)科研专项“饲料营养价值与畜禽饲养标准研究与应用(200903006)”资助。49