意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究 60页

山东农业大学硕士学位论文意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究姓名：王改英申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：胥保华20120614 山东农业大学硕士学位论文中文摘要蜂王浆是养蜂业主要的蜂产品之一，其产量和品质的高低直接影响养蜂者的经济效益，蜜蜂为了维持正常的产浆活动必须不断从外界获取蛋白质以满足咽下腺发育及泌浆的需要。目前，对于蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究比较薄弱，为了弄清楚蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平，本研究以意大利蜜蜂为研究对象，在产浆期饲喂不同蛋白质水平的代用花粉，通过测定咽下腺发育、产浆性能以及与蜂王浆品质密切相关的王浆主蛋白基因表达量，探讨意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平，研究内容分为以下两个部分：试验一为代用花粉蛋白质水平对意大利蜜蜂产浆性能的初步研究。选取35群品种、群势一致的本地意大利蜜蜂，随机分为7个处理组，每个处理组5群蜂，设有6个试验组，分别饲喂蛋白质水平为15％、20％、25％、30％、35％及40％的代用花粉，另外1个为对照组饲喂油菜蜂花粉。试验共计36天，分别在第12d，24d及36d测定蜂群群势，整个试验均进行产浆，并平均取5次蜂王浆样品，试验后期取标记的工蜂测其咽下腺发育指标。结果如下：1．．代用花粉蛋白质水平对蜂群采食量有显著影响(氏0．05)，对群势影响不明显。随着蛋白质水平的递增，采食量呈先增加后降低的趋势，并以30％代用花粉组采食量最高，但与20％和25％代用花粉组差异不显著(胗O．05)。2．代用花粉蛋白质水平为30％时，有利于工蜂咽下腺发育。3．随着代用花粉中蛋白质水平的增加，产浆量呈先升高后降低的变化趋势，蛋白质水平达到30％时产浆量最高，但与20％和30％代用花粉组无显著差异。结果表明，代用花粉蛋’白质水平在20％．30％范围内适合产浆。试验二为意大利蜜蜂产浆期代用花粉中蛋白质适宜水平的研究。试验一已得到适合产浆的大致蛋白质水平范围为20％．30％，为了获得更精确的代用花粉适宜蛋白质水平，本试验在20％．30％之间又分出5个蛋白质梯度，代用花粉蛋白质水平分别为20％、22．5％、25％、27．5％、30％，用来作为5个试验组的饲料，设有1个对照组饲喂油菜蜂花粉。试验期36天，分别在第12d，24d及36d取蜂王浆样品并测定蜂群群势，试验后期取标记工蜂测其个体发育指标。大群(室外)饲养结束后，取新出房的工蜂转移至饲喂盒内进行室内饲养，测定工蜂中肠蛋白酶活性及寿命。结果如下：1．对照组蜂群干粉采食量及蛋白质采食量均显著高于各代用花粉组(户O．05)，标不同字母表示差异显著(PO．05)． 山东农业大学硕二b学位论文3．1．1．2代用花粉蛋白质水平(15％．40％)对群势的影响由表6可知，代用花粉蛋白质水平对蜜蜂产浆期蜂群群势影响不显著(尸>O．05)，在试验进行的整个过程中，蜂群群势随着时间的延长呈现逐渐下降的趋势。在试验前期，对照组显著高(P0．05)。表6代用花粉蛋白质水平对蜂群群势的影响Table6Effectsofpollensubstitutesproteinlevelsonbeepopulation表中数据为r，F均值士标准误，同列肩标不同字母表示差异显著(PO．05)。下表同。Datainthefigaremearl士SE．Inthesamecolumn，valueswithdifferentlettersuperscriptsmeansignificantdifference【P0．05)．Thesameasbelow．3．1．2代用花粉蛋白质水平(15％．40％)对工蜂咽下腺发育的影响．由图2所示，从4d到10d，工蜂咽下腺腺泡面积随日龄的增加而不断发育增大。不同蛋白质水平代用花粉对工蜂咽下腺腺泡面积差异极显著(P<0．01)，蛋白质水平对三个同龄段工蜂咽下腺腺泡面积的影响有着相似的趋势，即随着代用花粉中蛋白质水平的递增，工蜂咽下腺腺泡面积呈现先增大后缩小的变化趋势，均在蛋白质水平为30％时达到最高。对于4d工蜂，30％代用花粉组的工蜂咽下腺腺泡面积最大，与35％代用花粉组差异不显著(尸>O．05)，但与其他代用花粉组及对照组相比，差异极显著(PO．05)，极显著高于其他代用花粉组；30％代用花粉组10d工蜂咽下腺腺泡面积极显著(尸0．05)。0．060O．05S“c0．050董釜0．0·15《墨O．040裂鬟o。0350．030PI5P20P25P30P35P40po．en图2代用花粉蛋白质水平对工蜂咽下腺腺泡面积的影响Fig．2EffectsofpollensubstituteproteinlevelsOnAeiniareaofhypopharyngealglandofworkerbees同一目龄比较，标相同字母表示差异不显著(尸>O．05)，标不同字母表示差异显著(PO．05)，andthedifferentletterindicatesignificantdifference(P0．05)，30％、35％代用花粉组与15％、20％、25％代用花粉组均差异极显著(尸<0．01)，15％、20％、25％代用花粉组之间亦差异不显著(P>0．05)，均极显著(P0．05)。 山东农业火学硕士学位论文7：●-以略：：、一盐!‘。●釜．上·=g8070bP15P20P2，P30乃5P40posen图3代用花粉蛋白质水平对工蜂咽下腺蛋白质含量的影响Fig．3Effectsofpollensubstituteproteinlevelsonproteincontentofhypopharyngealgland图中数据为平均值±标准误，标相同字母表示差异不显著(JP>O．05)，标不同字母表示差异显著(P<0．05)．Datainthefigarcmean士SE．Differentlettersabovestandarderrorbarsindicatesignificantdifference(P<0．05)，thesameletterindicatenOsignificantdifferences(pO．05)．3．1．3代用花粉蛋白质水平(15％-40％)对产浆性能的影响3．1．3．1代用花粉蛋白质水平(15％．40％)对产浆量和王台接受率的影响如表7所示，从总产浆量来看，随着代用花粉中蛋白质水平的递增，总产浆量呈先升高后降低的变化趋势，以30％代用花粉组产浆量最高，且显著高于对照组、15％和40％代用花粉组(尸O．05)。b疡缀霾lIll～“111一lIl2co：’=苗7((1f1一II"一％弓。功一墨I’=厶：LIh|{ 表7代用花粉蛋白质水平对产浆量和王台接受率的影响Table7Effectsofpollensubstitutesproteinlevelsonproductionofroyaljellyandratesofacceptance纰号总产浆量接受率GroupsProductionofroyalje．y／gRatesofacceptance／％P15P20P25P30P35P40pollenP值P-value267．25：1：I1．9bc300．25士24．09曲306．00-士18．37-b329．00il4．63‘300．00士l1．62"b236．25：1：7．36。271．60-a：12．26bc0．00663．1．3．2代用花粉蛋白质水平(15％。40％)对蜂王浆成分的影响组别GroupsP15P20P25P30P35P40pollen尸值P．value表8代用花粉蛋白质水平对蜂王浆成分的影响84．09-a：5．21曲85．49士l0．24。85．76士-6．45。90．34+3．54‘83．82士6．18ab75．09士5．60b85．32+6．41。O．0463Table8EffectsofpollensubstitutesproteinlevelsOilcompositionofroyaljelly10．HDA／％1．80-士0．031．80士0．051．84：L-0．061．86士O．071．8∞：o．071．74士O．071．89士0．070．7452粗蛋白Protein觞l4．03士O．2914．44士-0．2514．49"士-0．3714．96：t-0．3414，53士O．1914．51士O．27l4．86-J：0．240．3732Acidity"／ml38．27士0．3838．32士0．8l37．53士O．5238．2l士O．6937．59士1．1l37．44：L-0．8239．34士-0．740．600524 山东农业大学硕：J二学位论文从表8可以看出，饲喂不同蛋白质水平代用花粉对蜂王浆中粗蛋白、10．HDA的含量及酸度的影响均不明显，与对照组相比差异不显著(尸>O．05)。各代用花粉组随着蛋白质水平的递增，蜂王浆中粗蛋白和10．HDA含量及酸度呈现先升高后下降的变化趋势，以30％代用花粉组达到最高，其他代用花粉组蜂王浆中粗蛋白含量均低于对照组，但对照组中的lO．HDA含量和酸度均高于所有代用花粉组。3．2意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究3．2．1代用花粉蛋白质水平(20％一30％)对蜂群采食量和群势的影响3。2．1．1代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对蜂群采食量的影响各处理组蜂群饲料采食量和蛋白质采食量见表9，试验结果表明：代用花粉蛋白质水平对蜂群饲料采食量和蛋白质采食量有极显著影响(火0．01)，对照组饲料采食量和蛋白质采食量均显著高于各代用花粉组(氏0．05)，各代用花粉组中，30％代用花粉组的蛋白质采食量／群和蛋白质采食量／框均显著高于其他代用花粉组(尸0．05)。‘表9代用花粉蛋白质水平对蜂群饲料采食量和蛋白质采食量的影响Table9EffectsofpollensubstitutesproteinlevelsOndietconsumptionandproteinconsumptionincolony 感人利蜜蚴}产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究3．2．1．2代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对群势的影响各处理组蜂群群势变化见表10，试验结果表明：代用花粉蛋白质水平对蜂群群势的影响不大(P>0．05)，从整个试验期来看，蜂群群势随着试验时间的延长呈逐渐下降的趋势，在试验的不同阶段(12d、24d和36d)，各代用花粉组之间及与对照组相比，蜂群群势均差异不显著(尸>0．05)，各代用花粉组之间及与对照组之间蜂群平均群势亦差异不显著(P>O．05)。表10代用花粉蛋白质水平对不同时期蜂群群势的影响Table10Effectsofpollensubstitutesproteinlevelsonbeepopulationindifferentstages3．2．2代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对工蜂咽下腺发育的影响各处理组工蜂咽下腺发育的情况见表11，试验结果显示：代用花粉蛋白质水平对工蜂咽下腺腺泡大小和咽下腺蛋白质含量有显著性影响(PO．05)，随着代用花粉中蛋白质水平的递增，工蜂咽下腺腺泡长、宽和面积逐渐增大。对于工蜂明下腺蛋白质含量，25％代用花粉组咽下腺蛋白质含量最高，但与对照组、30％和27．5％代用花粉组差异不显著(尸>0．05)，显著高于20％和22．5％代用花粉组(PO．05)，各代用花粉组在试验期不同阶段所产蜂王浆中粗蛋白质含量及酸度与对照组相比均差异不显著(P>O．05)。表13代用花粉蛋白质水平对不同时期蜂王浆中粗蛋白含量的影响Table13Effectsofpollensubstitutesproteinlevelsonproteincontentofroyaljellyindifferentstages组号CP(％)Groups12d24d36dP20．0P22．5P25．0P27．5P30．0pollenP值P-value14．45士o．3313．7钍O．2314．48-士-0．13f3．93士0．4414．01士-0．4314．67士O．4l0．377014．16士0．16l4．09士0．5814．1l：tO．3814．174-0．3914．1吐0．3614．45="-0．230．9817表14代用蛋白质水平对不同时期蜂王浆中酸度的影响l3．95tq)．2813．79士0．2914．03：t-0．5314．19士0．5814．154-0．1713．82士0．450．9739Table14Effectsofpollensubstitutesproteinlevels011Acidityofroyaljellyindifferentstages组号酸度AciditylmlGroups12d24d36dP20．OP22．5P25．OP27．5P30．0pollenP值P-value42．014-1．1440．47士1．0840．95+i．2842．8啦O．9042．834-1．0142．84-1．090．474539．644-0．7339．09士1．0941．5妊0．6641．59士1．3541．57士-0．7840．544-0．5l0．180539．97士0．8740．68：1：1．4440．604-0．7140．74士o．994I．8衄=o．9l41．7∞=o．870．7705 山东农业大学硕士学位论文3．2．4代用花粉蛋白质水平(20％。30％)对工蜂个体发育的影响3．2．4．1代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对蜂体蛋白质含量的影响各处理组蜂体蛋白质含量见表15，试验结果表明：代用花粉蛋白质水平对6d幼虫和8d工蜂体蛋白质含量均有显著性影响(尸O．05)。对于6d幼虫体蛋白质含量，25％代用花粉组体蛋白质含量最高，显著高于20％、22．5％和30％代用花粉组(PO．05)；对于0d幼蜂体蛋白质含量，各处理组均差异不显著(扮O．05)；对于8d工蜂体蛋白质含量，对照组最高，显著高于20％代用花粉组(P0．05)。表15代用花粉蛋白质水平对蜂体蛋白质含量的影响Table15EffectsofpollensubstitutesproteinlevelsoRbodyproteincontentofworkerbees3．2．4．2代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对工蜂初生重的影响各处理组的工蜂初生重见表16，试验结果表明：代用花粉中蛋白质水平对工蜂初生重有显著性影响(尸O．05)，与对照组和其他代用花粉组差异显著(尸<0．05)。3．2．4．3代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对血淋巴蛋白质浓度的影响各处理组工蜂血淋巴蛋白质浓度见表16，试验结果表明：代用花粉蛋白质水平对血 淋巴蛋白质浓度有显著性影响(PO．05)，其他代用花粉组均与对照组无差异(尸>0．05)。表16代用花粉蛋白质水平对工蜂初生重和JfIL淋巴蛋白质浓度的影响Table16Effectsofpollensubstitutesproteinlevelsonbirthweightandhaemolymphproteinconcentration组0初生重JfIL淋巴蛋白质浓度GroupsBirthweight／mgHaemolymphproteinconcentration(rtVta)P20．0103．13：1：3．35。14．76士o．44。P22．5P25．OP27．5P30．0pollen108．61士2．29bc118．774-2．1oIl13．06士1．96"109．65：1：2．06bc109．87i-0．83k21．10士1．08‘23．22士0．74。22．264-2．25‘22．79士1．57"19．7l士2．03‘P值P-valueO．00590．00573．2．4．4代用花粉蛋白质水平(20％一30％)对工蜂中肠蛋白酶活性的影响表17代用花粉蛋白质水平对工作中肠蛋白酶活性的影响’T曲le17Effectsofpollensubstitutesproteinlevels面midgutproteolyticenzymeactivityofworkers组号中肠蛋白酶活性Midgutproteolyticenzymeactivity／UGroups0d4d8d15dI"20．033．04：L-O．3725．38：1：1．40b24．19士o．63曲P22．5P25．09．89-a：0．39P27．5P30．0pollen32．82a：2．6827．43士0．62由22．82．-1：1．05b35．40士o．7928．24：t-0．73曲25．234-1．06曲31．04士0．4230．834-I．79*26．074-0．92"b33．734-2．3830．15：1：2．06*27．094-0．92。33．844-1．2730．64士1．46125．434-1．78曲P值P-value——0．56220．04560．0415●一___—---——●-—____————____——-___——_—_——-_-__—_———_--_______-__--___——__一30 山东农业大学硕士学位论文各处理组工蜂中肠蛋白酶活性的变化见表17，试验结果显示：0d工蜂中肠蛋白酶活性较低，到4d蛋白酶活性达到高峰，随着日龄的增加，中肠蛋白酶活性逐渐降低。代用花粉蛋白质水平对4d工蜂中肠蛋白酶活性无显著影响(尸>O．05)，各代用花粉组之间及与对照组相比均差异不显著(胗0．05)；蛋白质水平对8d工蜂中肠蛋白酶活性有显著影响(尸0．05)；对于15d工蜂中肠蛋白酶活性，30％代用花粉组显示最高，显著高于22．5％代用花粉组(尸<0．05)，与对照组和其他代用花粉组差异不显著(尸>O．05)。3．2．4．5代用花粉蛋白质水平(20％一30％)对工蜂存活率的影响各处理组工蜂存活率见图4，试验结果显示：总体来看，代用花粉蛋白质水平对工蜂寿命的影响差异不明显，除了在第10d和15d，对照组均显著高于22．5％代用花粉组(尸0．05)，其他时间各代用花粉组之间及与对照组之间均差异不显著(P>0．05)；由图可知，0d．25d之内，工蜂存活率比较平稳，直到30d和35d，存活率急剧下降。誉一≮．三己3∞簪口·’：芒Numbcrofdays幽4代用花粉蛋白质水5F对工蜂存活率的影响Table4Effectsofpollensubstitutesproteinlevelsonsurvivalofworkers 意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水sP的研究3．2．5代用花粉蛋白质水平(20％．30％)对MRdPsmRNA表达的影响各处理组工蜂头部王浆主蛋白基因表达量见表18，试验结果显示：代用花粉蛋白质水平对王浆主蛋白基因的表达量有显著性影响(P<0．05)。对于MRJPl基因表达量，27．5％代用花粉组MRJPl基因表达量最高，与30％代用花粉组差异不显著(P>O．05)，显著高于对照组和其他代用花粉组；对于MPJP2基因表达量，随着代用花粉中蛋白质水平的增加，MRJP2基因表达量呈升高的趋势，30％代用花粉组基因表达量最高，与27．5％、25％和22．5％代用花粉组差异不显著(胗O．05)，显著高于对照组和20％代用花粉组(尸<0．05)；对于MRJP3基因表达量，27．5％代用花粉组基因表达量最高，显著高于对照组和其他代用花粉组(P<0．05)：对于MRJP5基因表达量，27．5％代用花粉组基因表达量最高，与30％代用花粉组差异不显著(尸>0．05)，显著高于对照组和其他代用花粉细(P<0．05)。表18代用花粉蛋白质水平对王浆主蛋白基因(麒＆H％)mRNA相对表达置的影响Tablel8EffectsofpollensubstitutesproteinlevelsOffmRNAlevelofMRdPs 山东农业人学硕：卜学位论文4讨论4．1代用花粉蛋白质水平影响蜂群采食量和群势4．1．1代用花粉蛋白质水平影响蜂群采食量采食是一种复杂的活动，采食的饲料在消化道内消化，其养分被吸收并参与体内代谢。采食量的高低影响生产性能，采食量过低，不能满足生长需要，生产效率降低，采食量过高，使生产成本提高，对于动物会降低产品质量，降低饲料转化率(杨风，2000)。蜂群采食量受蜜蜂本身、饲料、环境和饲喂技术等因素的影响，就饲料本身而言，其适口性、能量浓度及蛋白质水平均不同程度的影响蜜蜂采食量。饲料的适口性决定其被蜜蜂接受的程度，蜜蜂一般对甜味比较敏感，所以饲喂蜜蜂的代用花粉中均不同程度的添加白砂糖；代用花粉中缺乏蛋白质会降低采食量，因为蛋白质缺乏会降低消化酶的合成量；当饲粮中蛋白质水平过高也会降低采食量，其机理可能是由于蛋白质的热增耗高，引起体内温度升高而引起(李德发，2001；娄玉杰，2002)。A1．Ghamdi等(2011)研究表明蜂粮和花粉：糖(1：1)混合物的采食量高于花粉补充物和酵母、谷蛋白混合物，传统代用品采食最少。试验一的结果表明，各代用花粉组的饲料采食量均显著低于对照组，与DeGrandi．Hoffman等(2010)和AI．Ghamdi等(2011)研究的结果相似，说明蜂花粉是蜜蜂最理想的蛋白质饲料。就代用花粉而言，蜂群对代用花粉的采食量有一个很明显的趋势，即随着代用花粉中蛋白质水平的增加，蜂群采食量呈先升高后降低的变化趋势，并以蛋白质水平为30％时采食量最高，说明蜜蜂喜食此蛋白质水平的代用花粉。试验二又进一步测了蜂群蛋白质采食量，结果表明，对照组蛋白质采食量显著高于各代用花粉组，代用花粉中蛋白质水平越高，蜂群消耗蛋白质量就越大，各代用花粉组中，30％代用花粉组蛋白质采食量最高。。4．1．2代用花粉蛋白质水平影响群势群势是指一蜂群中工蜂个体的数量，是反映蜂群繁殖力和生产力的主要指标。蜂群群势随气候和蜜粉源等周期性改变而有规律的变化，影响蜂群群势的因素很多，内部因素主要有蜂种、蜂王产卵力、工蜂哺育力及寿命等(周冰峰，2002)，外在因素主要有病害、农药、环境、营养状况等，这些因素单独或相互结合影响着蜂群(VanengelsdorpandMeixner，2010)，蜂群群势的强弱是养蜂业能否优质高产的基础。夏季气温高、蜜粉源少、敌害多、蜜蜂的死亡率超过繁殖率，到秋季来临时，群势将逐渐衰退，正如本试验研究结果，随着试验的进行，蜂群群势逐渐下降，再加上蜂王 意人利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究浆的生产，消耗大量劳动力，因此到试验后期，蜂群群势下降明显。前人研究，在相同季节和环境条件下，饲料是影响蜜蜂寿命的关键因素(张中印和陈崇糕，2003)，从而影响到蜂群群势。冯倩倩等(2011)研究表明，添加7500IU／kg维生素A的人工日粮组与无添加维生素A的基础日粮组相比，蜂群群势无显著性差异。刘俊峰等(2011)指出3种不同成分的人工饲料对春繁期蜂群群势的影响差异不显著。本试验结果与上述的研究结果相似，代用花粉蛋白质水平对蜂群群势的影响不明显，在试验的不同阶段(12d、24d和36d)，各代用花粉组之间及与对照组相比，蜂群群势均差异不显著。可能由于群势受气候等多种因素的影响调控，从而对饲料中蛋白质水平的影响显得并不敏感。4．2代用花粉蛋白质水平影响工蜂咽下腺发育咽下腺俗称王浆腺，位于工蜂头内两侧，为一对呈葡萄状腺体，蜂王和雄蜂的咽下腺已退化。咽下腺活性指咽下腺合成及分泌蜂王浆物质的能力，受蜂种，工蜂日龄，蜂群内幼虫数量及花粉储备量的影响。咽下腺在工蜂羽化后24h就已经发育，但工蜂不表现哺育行为，至少到第4日龄腺泡丌始进一步扩展发育。幼虫是影响咽下腺活性的主要因素，幼虫分泌的幼虫信息素能诱发咽下腺的蛋白质合成。然而，即使在没有幼虫的越冬蜂群，虽然工蜂咽下腺蛋白质合成活性很低，但是腺体外部形态发育良好，说明咽下腺有能量贮存功能。蜂群对花粉最主要的利用方式是将花粉中的营养物转换成富含蛋白质的蜂王浆，而这种转换则在工蜂咽下腺内实现(DeGrandi．Hoffmanetal，2010)，花粉是蜂群所需蛋白质的唯一来源，咽下腺的发育及其蛋白质的合成必须消耗蛋白质(Sagilietal，2005)，Peters等(2010)研究了花粉日粮对工蜂咽下腺提取蛋白量的影响，试验表明饲料中增加花粉能促进工蜂咽下腺蛋白质合成以至于获得更多的蛋白质提取量，说明工蜂咽下腺的发育和蜂王浆的合成必须以蛋白质为物质基础。试验一测定了不同日龄(4d、7d、10d)工蜂咽下腺腺泡面积及7日龄工蜂咽下腺蛋白质含量，结果表明，随着工蜂日龄的增长，其咽下腺腺泡面积不断增大，不同蛋白质水平代用花粉对工蜂咽下腺腺泡面积及咽下腺蛋白质含量的影响均是随着蛋白质水平的增加呈先升高后降低的趋势，并以蛋白质水平为30％时工蜂咽下腺腺泡面积及其蛋白质含量达到最高，且明显高于对照组和其他代用花粉组。试验--N定了8d工蜂咽下腺腺泡的长、宽、面积及腺体蛋白质含量，结果显示，当代用花粉中蛋白质水平为25％．30％时，咽下腺发育显著好于20％和22．5％代用花粉组。34 山东农业大学硕士学位论文与对照组相比，代用花粉组采食量少，然而工蜂咽下腺蛋白质含量却显著高于对照组，咽下腺腺泡面积与对照组差异不显著，这说明消耗的多并不意味着可测得的蛋白质水平就高，特别是花粉粒有一层难以消化的蜡壁，可能影响了蜜蜂对花粉中某些营养物质的吸收，这与DeGrandi—Hoffman等(2010)人的研究结果相似。4．3代用花粉蛋白质水平影响产浆性能4．3．1代用花粉蛋白质水平影响产浆量和王台接受率蜂王浆生产是利用蜂群过剩的哺育力，根据蜂群育王过程中，会在王台中堆积大量蜂王浆哺育蜂王幼虫的原理，人为地制造王台，创造条件培育蜂王，以达到获取蜂王浆的目的。生产蜂王浆必须使蜂群达到强群，且蜂群内蛋白质饲料必须充足。蜂王浆产量及王台接受率受很多因素的影响，Mouro等(2004)，Kumova等(2005)及Sahinler等(2005)研究了季节和基因型对蜂群产浆量和王台接受率的影响，李蕊等(2009)研究了不同时长对产浆量的影响。产浆量不仅受蜂种、季节、泌浆蜂日龄、蜜粉源及取浆时间的影响，还受饲料营养水平的影响(王改英等，2010)。Perlin(1999)实现了糖加奶粉作为蜜蜂饲料的应用，且产浆量明显高于添加豆粉的饲料组。罗建能等(2009)指出产浆期可用鲜牛奶作为蜜蜂蛋白质饲料，因为其产浆量明显高于纯花粉组和豆粉组，证明饲料蛋白质水平和质量均影响蜂王浆产量。：提高蜂王浆产量是养蜂业所重视，也是需要解决的重大问题。冯倩倩等(2011)采用添加360IU／kg维生素E组，未添加维生素E组和蜂花粉组饲喂蜂群，试验证明日粮中添加维生素E能显著提高产浆量。汪礼国等(2001)表明，饲喂螺旋藻营养添加剂能延缓工蜂咽下腺的衰老和退化，使工蜂泌浆时间延长，增加蜂王浆产量。Sahinler等(2005)研究表明，提供蜂群糖浆或花粉补充物能显著提高蜂王浆产量，再添加VE会使效果更明显。很多有关应用花粉代用品或花粉补充物对蜂王浆增产效果的研究，其增产机理无非是花粉代用品或花粉补充物促进了工蜂咽下腺的发育，使咽下腺腺泡更饱满，获得更多的蛋白质提取物，提高了工蜂咽下腺合成和分泌蜂王浆的速率，延缓了工蜂咽下腺的退化，从而增加了蜂王浆的产量。王台接受率一方面能反映蜂群内工蜂的哺育性，另一方面与产浆量有一定的相关性。本研究结果表明：随着代用花粉中蛋白质水平的增加，蜂群总产浆量及王台接受率均呈现先升高后降低的趋势，主要因为高蛋白质饲料对工蜂咽下腺发育有促进作用，但过高的蛋白质水平对咽下腺发育反而有一定的抑制作用，这与前文提到的不同蛋白质水 意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水‘l"-的研究平对工蜂咽下腺发育的结果～致，同时也证明咽下腺发育与产浆量之间有一定的正相关性。试验一和试验二的蜂群产浆量相差较大，因为两个试验在不同的年份进行，受当时天气的影响，试验开始时的蜂群群势本就有差距，从而使产浆量有一定差距属于正常现象。4．3．2代用花粉蛋白质水平影响蜂王浆成分．蜂王浆由工蜂咽下腺和上颚腺合成分泌，用来饲喂蜜蜂三日龄内幼虫，是蜂王整个生命过程中唯一的食物。蜂王浆中所含有的蛋白质成分与抗氧化和清除自由基的能力有关，其中的王浆主蛋白有降血压，抑制肿瘤细胞增殖，抗疲劳，抗过敏，调节免疫功能等作用(刘健，2010)。由于蜂王浆具有促进健康及药理特性，具有很大的营养价值，常被用作商业医疗产品、保健食品和化妆品(Dimonelat,2007；Jamniketal，2007；Wu甜al，2009)等领域，为养蜂者提供主要的经济利益。蜂王浆主要化学成分有蛋白质、糖类、脂类、维生素、矿物质、游离氨基酸，还有大量生物活性物质，如10．HDA(Inoueetal，2003)。有学者根据多个国家的蜂王浆中成分含量总结出了蜂王浆中主要成分含量的变化范围，如水分60％．70％，脂类3％．8％，狄分0．8％．3％，10．HDA>I．4(RamadaIlandAI．Ghamdi，2012)。10．HDA作为自然界其他物质中未被发现的蜂王浆特有成分，其含量是衡量蜂王浆品质的重要指标，10．HDA有多种生物及保健功能，有抑制细菌、强化机体免疫等多种生理活性，国家标准规定，蜂王浆中的10．HDA含量必需在1．4％以上才合格(荆战星，2010)。蜂王浆成分受生产蜂王浆的蜂种、移入台基的幼虫日龄、泌浆蜂日龄、取浆时间、采食的饲料等因素的影响。蜂王浆中多种生物活性成分大部分来源于其食物中的蛋白质，因此，蜂王浆的成分受饲料的影响非常明显。试验一测定了蜂王浆中的酸度、粗蛋白和10．HDA含量，结果表明，饲喂代用花粉组所产蜂王浆中10．HDA、粗蛋白含量及酸度与对照组相比差异不显著。试验-N定了不同试验阶段(12d、24d和36d)所产蜂王浆中粗蛋白含量和酸度，结果表明，代用花粉蛋白质水平对蜂王浆中的蛋白质含量和酸度均无显著差异，可能由于蜜蜂咽下腺在合成分泌蜂王浆的时候对其成分有自我调控机制，使得蜂王浆中的成分含量相对稳定。说明这种人工蛋白质饲料完全可以代替蜂花粉，并不影响蜂王浆品质。 山东农业大学硕七学位论文4．4代用花粉蛋白质水平影晌工蜂个体发育4．4．1代用花粉蛋白质水平影响蜂体蛋白质含量蜜蜂体内的含氮量是衡量蜜蜂蛋白质饲料优劣的重要指标。研究表明，蜜蜂成虫羽化后，必须摄入足够的蛋白质才能正常生长发育，蜂群中蛋白质饲料充足，工蜂咽下腺和脂肪体会贮藏大量蛋白质使工蜂寿命延长(方万富等，2010)。蛋白质含量过高的饲料并不利于蜜蜂生长，这可能由于过高的蛋白质导致代谢负荷加重，特别是特殊动力作用增大了热能消耗而降低了蛋白质利用率(刘洋等，2008)，过低的蛋白质饲料因不能满足蜂体生长发育的需要，会出现蜜蜂体重减轻，消化机能减弱，生产性能及抗病能力降低等现象。本结果表明，代用花粉蛋白质水平对6d幼虫和8d工蜂体蛋白质含量有显著性影响，对0dT蜂体蛋白质含量无显著影响。对于6d幼虫体蛋白质含量，25％代用花粉组体蛋白质含量最高，对于8d工蜂体蛋白质含量，对照组显著高于20％代用花粉组，与其他代用花粉组差异不显著。4．4．2代用花粉蛋白质水平影响工蜂初生重工蜂初生重是衡量蜜蜂个体质量的重要指标，蜜蜂初生重由种性决定，同时还受巢房大小、蜂群群势、哺育蜂数量、季节和蜜粉储备量等因素的影响(刘先蜀，2002)。蛋白质饲料对工蜂的影响主要体现在幼虫期的营养供给上，幼虫发育需要高浓度的含氮物(doCarmoZerboandSilvadeMoraes，2001)，而工蜂初生重在一定程度上反映了蜜蜂幼虫期的营养吸收及发育状况。蜜蜂体重特别是出房后的蜜蜂体重，受蜂群营养状况的影响很大，所以初生重可以从一定程度上反映蛋白质饲料的优劣(岁建能等，2009；约翰·布莱克和李继莲，2007)。罗建能等(2009)研究发现饲喂纯花粉与饲喂大豆粉相比，所育工蜂初生重差异不显著，但与饲喂鲜牛奶相比，差异显著。程艳华等(2008b)研究表明饲喂100％茶花粉与饲喂“75％茶花粉+25％黄豆粉”相比，其所育工蜂初生重差异不显著，但与100％黄豆粉相比，差异极显著，说明饲料蛋白质水平和质量均影响工蜂初生重。Roulston和Cane(2002)分别用不同配比的香蒲花粉和大豆及不同种类的花粉饲喂蜜蜂，测定后代的蜂体重量，结果显示，饲料蛋白质水平在20％．37％之间时，能使后代蜂体重提高25％，更高的蛋白质水平却不能提高蜂体重，并表明花粉中蛋白质含量和质量均影响蜂体重。本试验结果显示，代用花粉蛋白质水平影响蜜蜂初生重，随着蛋白质水平的升高，工蜂初生重有先升高后降低的变化趋势，说明工蜂初生重只有在适宜蛋白质水平内才能有所37 意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究提高，过低或过高的蛋白质水平均不利于工蜂发育。4．4．3代用花粉蛋白质水平影响血淋巴蛋白质浓度昆虫的血液是一种循环体液，兼具哺乳动物血液和淋巴样组织液的特性，故被称为血淋巴。血淋巴的体积及其组成成分因虫种，虫态及其生理状态不同而有所变化，也会因为一天中获得的食物和水分多少而发生改变，昆虫的血淋巴中除含有种类较多的血细胞外，还有蛋白质等多种物质，其中蛋白质含量因虫种而不同，鳞翅目昆虫中可达100mg／ml，而双翅目昆虫含有200mg／m!(王荫长，2004)。昆虫中血淋巴蛋白质含量会因为感染了某种病原微生物或食入有毒物质而发生变化(臧敏等，2012；张仙红等，2006；张国洲等，2000)。不同的发育阶段和性别，昆虫血淋巴蛋白质含量也有差异(杨山等，1997)。被狄斯瓦螨感染后的蜜蜂血淋巴蛋白质含量明显增高，显著高于未被感染的蜜蜂(周婷等，2004)。被微孢子虫感染的蜜蜂，8d工蜂血淋巴蛋白质浓度高于健康蜜蜂，11d和14d感染工蜂血淋巴蛋白质浓度低于健康蜜蜂(黄少康等，2008)。饲料也会影响血淋巴中的蛋白质含量和血细胞数量，DeJong等(2009)用不同花粉代用品饲喂蜜蜂，结果表明，代用花粉组与蔗糖溶液组相比，能显著提高蜜蜂血淋巴蛋白质含量。饲料中缺乏蛋白质会导致7．8d工蜂血淋巴中的粒状血细胞显著增加，其他类型的血细胞会减少，代谢活性会降低(Szymas和Jedruszuk，2003)。本研究表明，代用花粉蛋白质水平在22．5％．30％之间时，血淋巴蛋白质浓度变化不明显，和对照组相比并无差异，但均显著高于20％代用花粉组，说明代用花粉蛋白质水平会影响工蜂血淋巴中的蛋白质浓度。4．4．4代用花粉蛋白质水平影响工蜂中肠蛋白酶活性昆虫消化吸收的主要场所在中肠，其分泌的蛋白酶是昆虫消化食物重要的消化酶。昆虫中肠所分泌的蛋白酶按酶活性部位的基团不同，可分为丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶及天冬氨酸蛋白酶等，其中丝氨酸蛋白酶包括胰蛋白酶，凝乳蛋白酶及类胰蛋白酶等，最适pH为碱性，而半胱氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶最适pH为酸性，又称羧肽酶，昆虫所分泌的蛋白酶类型总是与其pH相适应，目的就是达到有效的消化(王荫长，2004)，因此，即使同一类群昆虫因长期所涉入的食物不同，肠内蛋白酶类型也不一定完全相同。昆虫中肠中一般有多种类型的蛋白酶，Nakonieczny等(2007)研究T5,-I波罗绢蝶幼虫期中肠内不同蛋白酶的活性，王琛柱和钦俊德(1996)对棉铃虫幼虫中肠内主要的蛋白酶进行的鉴定。张其康等(2004)比较了中华蜜蜂与意大利蜜蜂的中肠消化38 山东农业大学硕：l：学位论文酶活性，试验表明，中华蜜蜂和意大利蜜蜂成蜂间的蛋白酶活性有显著差异，同一蜂种内，成蜂中肠内蛋白酶活性高于大、小幼虫。影响消化酶活性的因素有温度、中肠pH及氧化还原电位等，食物对蛋白酶的影响如何，很多学者通过植物中某种特有成分对昆虫中肠蛋白酶活性的影响来研究其杀虫的作用机理，周琼等(2011)研究了苍耳甾醇物质对菜青虫中肠蛋白酶活性的影响，发现苍耳衔醇物质能够抑制菜青虫的中肠蛋白酶活性并对其中肠上皮组织有破坏作用。郭新荣等(2007)发现马桑内酯能增强粘虫蛋白酶活性，可能是由于毒素的侵入，刺激体内组织细胞过量分泌蛋白酶，使之能够降解毒素或与其相结合。许多研究表明蛋白酶抑制剂能抑制昆虫中肠蛋白酶活性，使昆虫不能正常发育，缩短寿命甚至死亡(Belzunesetat,1994；Burgesselat,1996；Sagilietal，2005)。为了使昆虫更好的生长发育，也有学者饲喂昆虫有益物质，有助于提高蛋白酶活性(Ⅵn甜al，2011)。金汤东等(2008)饲喂蜜蜂EM制剂后能明显提高中肠酪蛋白酶活性。陈崇羔等(1990)将磁化水饲喂蜜蜂，发现磁化水能够显著提高蜜蜂中肠的蛋白酶活力。本试验结果表明，0d工蜂中肠蛋白酶活性较低，到4d蛋白酶活性达到高峰，随着同龄的增加，中肠蛋白酶活性又逐渐下降。0d工蜂可能由于消化器官不发达，消化腺机能还不完善，再加上还未进任何食物，不能刺激中肠细胞中蛋白酶的合成与分泌，因此，活性相对很低。到4d，工蜂中肠蛋白酶活性达到较高水平(因为试验中没有对每天工蜂中肠蛋白酶活性进行测定，所以不能确定就是4d达到高峰)，可能由于这个时期工蜂咽下腺等其他组织开始发育，·需要更多的蛋白质来维持生命活动，消化器官已发育完善，所以需要更多的蛋白酶分解蛋白质，以满足机体对蛋白质的需要。到了第8d，工蜂中肠蛋白酶活性有所下降，也许是因为蜜蜂在饲喂盒内无法飞行排泄，过多的食糜留在肠内，影响其正常的生理机能，王启发等(2002)人测定了3．15日龄蜜蜂中肠蛋白酶活性，由图表数据可知，5-9d工蜂中肠蛋白酶活性处于较稳定的高峰期，之后便逐渐下降，这与本试验有相似之处。从8d和15d工蜂中肠蛋白酶活性来看，代用花粉蛋白质水平能显著影响其活性，显示蛋白质水平在25％．30％之间时，工蜂中肠蛋白酶活性高于20％和22．5％代用花粉组。4．4．5代用花粉蛋白质水平影响工蜂存活率工蜂寿命是影响蜂群群势和生产力的重要因素，影响工蜂寿命的因素主要是其体内营养的积累和消耗，遗传特性和季节也不同程度的影响工蜂寿命。不同季节，工蜂的平均寿命相差很大，夏季比冬季寿命短(周冰峰，2002)。’．39 患火利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究饲料营养是影响寿命的关键因素，吴杰等(2009)用不同饲料饲喂小峰熊蜂，结果显示，只饲喂白砂糖或蜂蜜的处理组工蜂寿命显著短于有花粉的饲料组，带有玉米花粉的饲料组工蜂寿命显著短于杏花，油菜，向日葵和茶花粉，表明不同饲料对小峰熊蜂工蜂的寿命影响很大。不同苜蓿品种对苜蓿斑蚜的存活率有较大的影响(马建华等，2010)，不同的温度和营养条件对管侧沟茧蜂成虫寿命有显著影响，补充蜂蜜水能显著延长成虫寿命(路子云等，2010)。vanderSteen(2007)用不同饲料饲喂蜂群，发现饲喂花粉代用品的蜂群蜜蜂平均寿命高于饲喂蜂粮组和无代用品组。Costa等(2010)研究表明，饲喂含有百里香酚或白藜芦醇的糖浆的蜜蜂寿命(23d和25d)显著比单独饲喂糖浆的蜜蜂(20d)寿命长。本试验结果表明，代用花粉蛋白质水平在20％．30％范围内，对工蜂寿命的影响不大，除了在第10d和15d，对照组均显著高于22．5％蛋白质日粮组，与其他各代用花粉组均差异不显著，其他时间段各代用花粉组之间及与对照组之间均差异不显著。在0d．25d之间，工蜂存活率处于一个比较平稳的状态，之后开始急剧下降，直到第35d，不同处理组的工蜂存活率达到20％．40％不等。在采集季节，工蜂平均寿命只有35d左右，而越冬蜂，一般能生存长达几个月(曾志将，2009)，在室内笼养和大群饲养蜜蜂寿命还是有一定的差异，在室内笼养，工蜂没有清理巢房、分泌蜂王浆、哺育幼虫、飞行采集等活动，而且无法飞出排泄，影响了其正常的生理机能，由于大群饲养测定工蜂寿命的局限性，室内测定的工蜂寿命同样具有一定的参考性。4．5代用花粉蛋白质水平影响MIUPsmRNA表达量蛋白质是蜂王浆中最主要的组分之一，约占王浆鲜样的12％．15％，占王浆干物质的50％，王浆蛋白包括水溶性蛋白和非水溶性蛋白，其中水溶性蛋白占总蛋白含量的90％左右，为王浆蛋白的主要部分，称为主要王浆蛋白(majorroyaljellyprotein，MRJPs，简称王浆主蛋白)(苏松坤等，2005)。目前，王浆蛋白的分子水平方面的研究主要集中在MRJPs家族，目前己报道编码西方蜜蜂MRJPs蛋白家族的基因有9个，即MRJPl．9。蜂王浆有多种生物学功能及医疗保健作用，可能与王浆中的一些MRJPs密切相关(邢丽萍等，2006)。它们包含数量相当高的必需氨基酸，这些发现进一步证明MRJPs在蜜蜂营养中起重要作用(陶挺等，2008)。不同MRJPs之问序列的变异性可以反映这些蛋白的功能，显然至少MRJPl，M1LIP2，MRJP3和MRJP5发挥着营养功能(Ohashietal,1997)。MRJPs(比如，MRJP3 山东农业大学硕士学位论文和M1LIP5)的营养功能与初级结构中相当高的必需氨基酸比例和大量的含氮重复区域相一致(Albertetal，1999)。前人研究结果表明，蜂王浆的相关生理功能均与其所含有的王浆主蛋白有关，尤其是占总王浆主蛋白82％．90％的5种王浆主蛋白，即MRJPl．MRJP5(刘健，2010)。尽管MRJPs各成员在结构上关系密切，但基因表达模式不同，MRJPl的mRNA在哺育蜂和采集蜂的咽下腺内均含量较高，而MRJP2和MRJP3主要在哺育蜂咽下腺合成(Malecovaetal。2003)。本试验结果表明，代用花粉蛋白质水平对工蜂头部王浆主蛋白(MRJPl，MRJP2，MRJP3，MRJP5)基因mRNA表达量有显著性影响，随着蛋白质水平的递增，其mRNA表达量有先升高后降低的变化趋势，并以27．5％代用花粉组表达量最高。王浆主蛋白基因是一个非量产基因，其mRNA表达量的高低反映了单只工蜂咽下腺分泌蜂王浆中王浆主蛋白能力的高低，其含量高低在一定程度上反映了蜂王浆质量的优劣(刘健，2010)。本试验表明代用花粉蛋白质水平对工蜂咽下腺分泌MRJPl，MRJP2，MRJP3和MRJP5的能力有影响，当蛋白质水平在27．5％．30％时，分泌能力最强。41 意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究5总体结论与研究展望5．1总体结论5．1．1代用花粉蛋白质水平为25％．30％时，能够提高蜂王浆产量，且有利于工蜂咽下腺发育，咽下腺发育与产浆量之间呈正相关性。5．1．2代用花粉蛋白质水平为25％．30％时，工蜂初生重、血淋巴蛋白质浓度、工蜂体蛋白质含量及中肠蛋白质酶活性等指标表现最好。5．1．3代用花粉蛋白质水平影响工蜂头部MRJPsmRNA表达量，代用花粉蛋白质水平为27．5％．30％时MRJPsmRNA表达量最高。5．1．4意大利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜的蛋白质水平为25％．30％。5．2课题创新与研究展望5．2．1课题创新本试验研究了意大利蜜蜂产浆期代用花粉中蛋白质的适宜需要量，并采用室内室外饲养试验相结合，在产浆性能、生理生化、组织及分子生物学水平等各个层面上探讨蜜蜂产浆期代用花粉中蛋白质水平的适宜需要量，为意大利蜜蜂营养需要量的制定和人工蛋白质饲料的研制提供科学理论依据。5．2．2研究展望本试验对于促进产浆机制的研究只涉及到工蜂咽下腺的腺泡外部形态大小及其蛋白质含量水平，需要进一步对咽下腺的超微结构等进行更深层的研究。另外，由于蜂群产浆量受季节和地区的影响极大，下一步开展不同季节和地区意蜂产浆期对代用花粉中适宜蛋白质水平的研究很有必要。42 山东农业大学硕士学位论文参考文献陈崇羔，张向阳，沈国忠，李和军．饲喂添加维生素E糖浆对工蜂咽下腺发育的影响[J】．中国蜂业，1989，(3)：2—5．陈崇羔，赵照林，缪正瀛．饲喂磁化水对工蜂中肠蛋白酶活力的影响【J】．中国养蜂杂志，1990．(4)j2—3．陈崇高，会汤东，曾志江．磁化水对工蜂王浆腺发育影响的初探【J】．蜜蜂杂志，1989，(1)：3．4．陈晓东．蜂王浆的颜色与朵状【J】。中国蜂业，2008，59(4)：37．程艳华，刘亚男，胡福良，郑火青，金水华．蛋白质营养水平对蜂王浆产量和成分的影Illf，J[J]．蜜蜂杂志，2008a，(4)：7-9．程艳华．蛋白质饲料对工蜂初生重与咽下腺发育及产浆的影响【D】．福建：福建农林大学，2008b．方万富，郭海坤，林法俊，纪旭光，彭秋玫，贺茜，段晓峰，张会杰．不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂工蜂幼虫体蛋白含量的影响【J】．中国蜂业，2010，61(9)：17．19．冯倩倩，胥保华，李成成，杨维仁．维生素A对意大利蜜蜂群势、封盖子量及抗氧化性的影响【J】．动物营养学报，2011，23(6)：971-975．冯倩倩，杨维仁，胥保华，李成成．维生素E对意大利蜜蜂产浆性能及抗氧化性的影响【J】。福建农林大学学报(自然科学版)，2011，40(6)：632．635．龚蜜，徐洁，钱爱萍．蜂王浆中牛磺酸含量分析初报【J】．蜜蜂杂志，1993，(6)：3-4．郭芳彬．影响蜂王浆成分的因素浅析[J】．蜜蜂杂志，1994，(7)：6．8．郭海坤，彭秋玫，林法俊，纪旭光，贺茜，段晓峰，张会杰，方文富．不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂工蜂适121性影响的研究【J】．中国蜂业，2009a，60(5)：12．13．郭海坤．不同配比油菜花粉与黄豆粉混合饲料对意大利蜜蜂工蜂幼虫的影响[D】．福建农林大学，．2009b。郭立军．影响王浆产量的因素【J】．养蜂科技，1989，(2)：19—20．郭新荣，张雅林，李孟楼．马桑内酯对粘虫体内蛋白质和消化酶的影响【J】．西北植物学报，2007，27(12)：2456．2460．胡福良，李英华，朱威．影响蜂王浆质量的因素．兼析春季油菜王浆质优的原因[J】．蜜蜂43 意人利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究杂志，2004，(6)：28-29．黄少康，胡庆银，董捷．微孢子虫感染对中蜂工蜂血淋巴蛋白的影响[J】．福建农林大学学报，2008，(6)：46—50．会汤东，赵红霞，罗建能，梁勤．EM制剂对蜜蜂中肠酪蛋白酶活性的影响【J】．中国蜂业，2008，59(7)：7—9．荆战星．意大利蜜蜂(却括mellife朋ligustica)工蜂上颚腺10．HDA分泌规律及腺体蛋白研究【D】．福建：福建农林大学，2010．李德发．中国日粮大全【M】．北京：中国农业出版社．2001，127．129．李建科，王惠杰，高国锋．环境控制措施与蜂王浆产量关系的研究【J】．郑州牧专学报，1996，16(4)：11．16．李建科．取浆时间和王浆产量的关系研究【J】．养蜂科技，1995，(2)：4-5．李蕊，陈强，程尚，杨永娇，陈云娟，杨翠，和绍禹．产浆周期与王浆采收量变化的研究【J】．蜜蜂杂志，2009，(7)：13-15．励建荣．新型蜜蜂饲料的研究[J】．粮食与饲料工业，1994，(7)：24—25．刘富海，陈崇羔．用磁化水提高王浆产量的试验【J】．中国蜂业，1985，(6)：4—5．刘富海．矿物质、维生素C、鞣酸对蜜蜂寿命的影响【J】．中国养蜂，1990，(2)：8—10．刘健．三个意蜂种群MRJP3的基因表达及其蛋白含量的比较分析【D】．安徽：安徽农业大学，2010．刘俊峰，刘光楠，颜伟玉，吴小波．三种人工饲料对中华蜜蜂春繁的影响阴．江西农业大学学报，2011，33(1)：0137．0140．刘先蜀．蜜蜂育种技术【M】．北京：金盾出版社，2002，25．26．刘洋，姜志强，王福强，陈晓慧．大泷六线鱼对蛋白质的最适需要量[J】．大连水产学院学报，2008，23(5)：387—390．刘光楠，曾志将，吴小波，颜伟玉．免移虫生产蜂王浆技术研究【J]．蜜蜂杂志，2009，(10)：3-6．娄玉杰．实用动物饲养学【M】．长春：吉林科学技术出版社．2002，39-42．路子云，钟勇，屈振刚。刘文旭，李建成．温度和营养条件对管侧沟茧蜂成虫寿命的影响[J】．河北农业科学，2010，14(8)：75—76．罗建能，陈秀云，金汤东，梁勤．EM制剂对工蜂咽下腺发育的影响【J】．中国蜂业，2009，60(3)：5．9． 山东农业大学硕：l：学位论文罗建能，沈生初，金汤东．蜜蜂蛋白质饲料对工蜂初生重和蜂王浆生产的影响研究【J】．浙江畜牧兽医，2009，(5)：5-6．马建华，高丽，张蓉．五种不同苜蓿品种对苜蓿斑蚜实验种群存活率和生殖力的影响及抗性分析【J】．昆虫知识，2010，47(6)：1161—1164．牛勃．现代生物学技术进展[M】．太原市：山西人民出版社，2007，371—373．沈基楷，肖体元．蜜蜂哺育幼虫和泌蜡造脾对王浆产量的影响[J】，蜜蜂杂志，1996，(8)：3．5．苏松坤，陈盛禄，钟伯雄，郑火青，StefanAlbert．中华蜜蜂MRJPlcDNA的克隆及其序列分析[J】．遗传学报，2005，31(11)：1248—1253．陶挺，苏松坤，陈盛禄，杜宏沪．蜂王浆蛋白生物学功能的研究【J】．昆虫知识，2008，45(1)：33．37．汪礼国，曾志将，徐崇钧．螺旋藻营养添加剂对蜂群王浆产量及工蜂咽下腺发育影响的研究[J】．江西农业大学学报，2001，23(4)：510—512．汪礼国．不同营养素对蜂王浆增产效果的研究【J】．中国蜂业，1992，(6)：6—9．王改英，康明江，杨维仁，刘峰，胥保华．蜜蜂人工日粮对蜂王浆产量及品质的影响【J】．蜜蜂杂志，2010，30(2)：6．8．王开发，耿越．花粉中的脂类研究[J】。养蜂科技，1998，(5)：2—5．王开发，张盛隆，张卫东．花粉中的蛋白质和氨基酸【J】．养蜂科技，1999(6)：10·14王启发，武茜，张全义，孙建民．浆蜂同本地意蜂工蜂中肠胃蛋白酶活力的比较研究【J】．安徽技术师范学院学报，2002，16(4)：14．15．王琛柱，钦俊德．棉铃虫幼虫中肠主要蛋白酶活性的鉴定[J】．昆虫学报，1996，39(1)：7．14．王荫长．昆虫生理学[M】．北京：中国农业出版社，2004，129—145．吴杰，黄家兴，安建东，胡福良．不同饲料对小峰熊蜂工蜂群发育的影响【J】．昆虫学报，2009，52(10)：1115．1121．肖培新，胥保华．不同人工代花粉对蜂群群势和生产性能的影响[J】．昆虫知识，2010，47(5)：900．903．肖锡红，曾志将．麦饭石对意蜂王浆产量的影响[J】．蜜蜂杂志，1990，(6)：3．邢丽萍，沈立荣，乌晓云，施婉君，高其康，程家安，张传溪．中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达[J】．上海交通大学学报(农业科学版)，2006，24(5)：460—470．45 意人利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究杨风．动物营养学【M】．北京：中国农业出版社，2000，193—207．杨山，温新宇，迟淑萍．德国小镰成虫血淋巴中蛋白质含量动态变化[J】．医学动物防制，1997，13(2)：16．17．余林生，孟祥金，朱永胜，吴承武．九华山EH2R意蜂生产性能试验报告【J】．蜜蜂杂志，2003，(9)：6．8．一^~·约翰·布莱克，李继莲．蜜蜂的营养【J】．中国蜂业，2007，58(8)：44—46．臧敏，秦萍，王勇，钟亮，秦利，王振东，姜义仁．柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析[J】．蚕业科学，2012，38(1)：92—93．曾志将，江永成，熊红华，刘梅森．麦饭石对意蜂王浆增产机理研究【J]．养蜂科技，1996，(3)：2．4．曾志将．养蜂学[M】．北京：中国农业出版社，2003，7-14．曾志将．养蜂学【M】．北京：中国农业出版社，2009，38．张国洲，王亚维，徐汉虹．B·谷甾醇等化合物对昆虫血淋巴蛋白质含量的影响【J】．湖北农学院学报，2000，20(3)：201．202．张其康，刘彩珍，吴珍红，付中民，缪晓青．中华蜜蜂与意大利蜜蜂中肠消化酶活性差异性探讨【J】．中国养蜂，2004，55(1)：4·5．张仙红，王宏民，李文英，贺运春，郝赤．菜青虫感染玫烟色拟青霉后血淋巴蛋白质含量及几种保护酶活力的变化【J】．昆虫学报，2006，49(2)：230-234．张中印，陈崇糕．中国实用养蜂学【M】．河南：河南科学技术出版社，2003，35—37．章加宝，谢丰国，许丽容．蜜蜂饲粮对蜂王浆产量之影响【J】．中华昆虫，1993，(13)：15l一159．周冰峰．蜜蜂饲养管理学【M】．厦门：厦门大学出版社，2002，11·101．周琼，熊正燕，欧晓明．苍耳甾醇物质对菜青虫取食、血淋巴和中肠酶活性及中肠组织的影响[J】．昆虫学报，201l，54(9)：1034—1041．周婷，姚军，王强，王凤忠．微孢子虫和狄斯瓦螨分别侵染后的意蜂血淋巴蛋白质含量变化【J】．昆虫学报，2004，47(4)：530—533．AbbasT．，HasnainA．，AliR．．BlackgramaSapollensubstituteforhoneybees【J】．AnimalFeedScienceandTechnology,1995，54：357—359．AbdE1．WahabT．E．，GomaaAM．ApplicationofyeastcultureaSpollensubstituteinfeeding·honeybee【J】．JournalofAppliedScienceResearch，2005，l(5)：386·390．46 山东农业大学硕士学位论文AlauxC．，DuclozE，CrauserD．，LeConteY．Dieteffectsonhoneybeeimmunocompetence[J】．BiologyLetters，2010，6(4)：562-565．AlbertS．，KlaudinyJ．，SimuthJ．．MolecularcharacterizationofMRJP3，highlypolymorphicproteinofhoneybee(Apismellifera)royaljelly[J】．InsectBiochemistryandMolecularBiology,1999，29(5)：427—434．‘AI—GhamdiA．A．，A1-KhaibariA．M．，OmarM．O．．Consumptionrateofsomeproteinicdietsaffectinghypopharyngealglandsdevelopmentinhoneybeeworkers【J】．SaudiJournalofBiologicalSciences，201l，l8(1)：73—77．BelzuneesL．E，LenfantC．，DiPasqualeS．，ColinM．E．．InvivoandinvitroeffectsofwheatgermagglutininandBowman—Birksoybeantrypsininhibitor,twopotentialtransgeneproducts，onmidgutesteraseandproteaseactivitiesfromApismellifera【J】．Comparativebiochemistryandphysiology．B：Comparativebiochemistry．1994，109B(1)：63—69．BurgessE．P．J．，MaloneL．A．，ChristellerJ．T．．Effectsoftwoproteinaseinhibitorsonthedigestiveenzymesandsurvivalofhoneybees(Apismellifera)【J】．JournalofInsectPhysiology．1996，42(9)：823-828．CampanaB．J．MoellerEE。Honeybees：Preferenceforandnutritivevalueofpollenfromfiveplantsources【J】．JournalofEconomicEntomology．1977，70(1)：39—41．CostaC．，LodesaniM．，MaistrelloL．．EffectofthymolandresveratroladministeredwithcandyorsyruponthedevelopmentofNosemaceranaeandonthelongevityofhoneybees(ApismelliferaL．)inlaboratoryconditions明．Apidologie，2010，41(2)：141．150．CrailsheimK．。Tlleproteinbalanceofthehoneybeeworker【J】．Apidologie．1990，21(5)：417．429．CrailsheimK．，StolbergE．．Influenceofdiet，ageandcolonyconditionuponintestinalproteolyticactivityandsizeofthehypopharyngealglandsinthehoneybee(ApisMelliferaL．)[J】．JoumalofInsectPhysiology．1989，35：595—602．CrailsheimK．，SchneiderL．H。W，HrassniggN．，BuhlmannQ，BroschU．，GmeinbauerR．SchoffmannB．．Pollenconsumptionandutilizationinworkerhoneybees(Apismelliferacamica)：dependenceonindividualageandfunction[J】．JournalofInsectPhysiology．1992，38：409．419．●47 意人利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究DeGrootA．P．．Proteinandaminoacidrequirementsofthehoneybee(ApismellificaL．)【J】．PhysiologiacomparataetOecologia．1953，3：197—285．DeJongD．，daSilvaE．J．，KevanP．G，AtkinsonJ．L。Pollensubstitutesincreasehoneybeehaemolymphproteinlevelsasmuchasormorethandoespollen．JournalofApiculturalResearch(J】．2009，48(1)：34—37．DeGrandi-HoffmanQ，ChenYP．，HuangE．，HuangM．H．．Theeffectofdietonproteinconcentration，hypopharyngealglanddevelopmentandvirusloadinworkerhoneybees(ApismelliferaL．)【J】．JournalofInsectPhysiology,2010，56(9)：1184—1191．DimonM．，GorasG，ThrasyvoulouA．．Pollenanalysisasameanstodeterminethegeographicaloriginofroyaljelly[J】．Grana，2007，46(2)：l18—122．doCarmoZerboA．，SilvadeMoraesR．L．，Brochetto—BragaM．R．．ProteinrequirementsinlarvaeandadultsofScaptotrigonapostica(Hymenoptera：Apidae【correctionofApidia]，Meliponinae)：midgutproteolytieactivityandpollendigestion阴．ComparativeBiochemistryandPhysiologyPartB，2001，129(1)：139—147．HaydakM．H．．Honeybeenutrition[J】．AnnualReviewofEntomology．1970，15：143-156．HaydakM．H．．VitaminContentofRoyalJellyFromHoneyBeeColoniesFedNormalDietandFromThoseFedPollenSubstitutes【J】．AnnalsoftheEntomologicalSocietyofAmerica．1960，53(5)：695．HerbertE．W．，BickleyW．E．，ShimanukiH．．Thebrood—rearingcapabilityofcagedhoneybeesfeddandelionandmixedpollendiets．JournalofEeonomicEntomology【J】．1970，63(1)：215．218．HerbertE．W．，SvobodaJ．A．，ThompsonM．J．，ShimanukiH．．Sterolutilizationinhoneybeesfedasyntheticdiet：Effectsonbroodrearing【J】．JournalofInsectPhysiology．1980，26：287．289．HumanH．，NicolsonS．w．，StraussK．，PirkC．W．w．，DietemannV．Influenceofpollenqualityonovariandevelopmentinhoneybeeworkers(Ap／smelliferascutellata)[Y1．JournalofInsectPhysiology．2007，(53)：649—655．InoueS．，Koya·MiyataS．，UshioS．，1wakoK．，IkedaM．，KurimotoM．．RoyalJellyprolongsthelifespanofC3H／HeJmice：correlationwithreducedDNAdamage【J】．ExperimentalGerontology,2003，38(9)：965—969．48 山东农业大学硕：}=学位论文JamnikP．，GoranovicD．，RasporE．Antioxidativeactionofroyaljellyintheyeastcell【J】．ExperimentalGerontology,2007，42(7)：594—600．KnoxD．A．，ShimanukiH．，HerbertE．W．．DietandtheLongevityofAdultHoneyBees【J】．JoumalofEconomicEntomology,1971，64(6)：1415-1416．KrivtsovN．I．，SavushkinaL．N．．Effectofanumberoffactorsonefficiencyofroyaljellyproduction【J】．RussianAgriculturalSciences，2004，(2)：28—31．KumovaU．，KorkmazA．，BerkinO．，InceerM．．Aninvestigationabouttheeffectsofvariousfactorsonroyaljellyproductionindifferenthonebee(ApismelliferaL．)genotypes【J】．Mellifera．2005，5(9)：56-64．MalecovfiB．，RamserJ．，O’BrienJ．，K．，JanitzM．，JfidovfiJ．，LehrachH．，SimfithJ．．Honeybee(ApismelliferaL．)MRJPgenefamily：computationalanalysisofputativepromotersandgenomicstructureofMRJP1，thegenecodingforthemostabundantproteinoflarvalfood明．Gene，2003，303(1—2)：165-175．ManningR．，RutkayA．，EatonL．，DellB．．Lipid-enhancedpollenandlipid—reducedflourdietsandtheireffectonthelongevityofhoneybees(ApismelliferaL．)【J】．AustralianJoumalofEntomology,2007，46(3)：251-257．MasaruH．，TakahiroK．，TetsuhikoS．，NakamuraJ．，MasamiS．．Reducedexpressionofmajorroyaljellyproteinlgeneinthemushroombodiesofworkerhoneybeeswithreduced·learningability【J】．Apidologie．2009，41(2)：197-202．·MouroGE，ToledoVV．EvaluationofApismelliferaCarniolanandAfricanizedhoneyBeesinroyaljellyproduction叨．BrazilianArchivesofBiologyandTechnology,2004，47(3)：469-476．NakoniecznyM．，MichalczykK．，KedziorskiA。MidgutproteaseactivitiesinmonophagouslarvaeofApollobutterfly,Pamassiusapollossp【J】．Frankenbergefi．Comptesrendusbiologies．2007，330(2)：126-134．．OhashiK．，NatoriS．，KuboT．．Changeinthemodeofgeneexpressionofthehypopharyngealglandcellswithallage—dependentrolechangeoftheworkerhoneybeeApismelliferaL【J】．TheFEBSJournal，1997，249(3)：797-802．PerlinT．A．．Untritionalvalueofsoybeanmeal，honeBmilkymealandsugaratbeehives(Ap／smellifera)intheproductionofroyaljelly【J】．CidnciaRural,1999，29(2)：345-347．,19 意人利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究PetersL．，Zhu。SalzmanK．，PankiwTI．Effectofprimerpheromonesandpollendietonthefoodproducingglandsofworkerhoneybees(ApismelliferaL．)【J】．InsectPhysiol，2010，56(2)：132—137．RamadanM．E，A1-GhamdiA．．Bioactivecompoundsandhealth—promotingpropertiesofroyaljelly：Areview【J】．JournalofFunctionalFoods，2012，4(1)：39．52．RoulstonT．H．，CaneJ．H。TheeffectofpollenproteinconcentrationonbodysizeinthesweatbeeLasioglossumzephyrum(Hymenoptera：Apiformes)【J】．EvolutionaryEcology．2002，16(1)：4％5．SaffariA．，KevanP．G，AtkinsonJ．L。PalatabilityandConsumptionofPatty—formulatedPollenandPollensubstitutesandTheirEffectsonHoneybeeColonyPerfomance阴．JournalofApiculturalScience，2010，54(2)：63·71．SagiliR．R．，PankiwT．，Zhu—SalzmanK。Effectsofsoybeantrypsininhibitoronhypopharyngealglandproteincontent，totalmidgutproteaseactivityandsurvivalofthehoneybee(ApismelliferaL．)【J】．InsectPhysiol，2005，51(9)：953—957．SahinlerN．，GiiLA．，SahinA．．VitaminEsupplementinhoneybeecoloniestoincreasecellacceptancerateandroyaljellyproduction【J】．JournalofApiculturalResearch，2005，44：58—60．SahinlerN．，KaftanogluO．．Theeffectsofseasonandhoneybee(ApismelliferaL．)genotypeonacceptanceratesandroyaljellyproduction·【J】，TurkishJournalofVeterinary&AnimalSciences．2005，29(2)：499-503．SchmidtJ．O．，ThoenesS．C．，LevinM．D．．Survivalofhoneybees，Apismellifera(Hymenoptera：Apidae)，fedvariouspollensources．AnnalsoftheEntomologicalSocietyofAmerica．1987，80(2)：176—183．SouthwickE．E．．Allometricrelations，metabolismandheatconductanceinclustersofhoneybeesatcooltemperatures【J】．JournalofComparativePhysiologyB．．1985，156：143．149．SouthwickE．E．．111eHoneybeeclusterasahomeothermicsuperorganism【J】．ComparativeBiochemistryandPhysiologyA，1983，75(4)：641-645．StabentheinerA．，VollmannJ．，KovaeH．，CrailsheimK．．Oxygenconsumptionandbodytemperatureofactiveandrestinghoneybees【J】．JournalofinsectPhysiology．2003，49：50 山东农业大学硕士学位论文88l-889．StandiferL．N．．Acomparisonoftheproteinqualityofpollensforgrowth．stimulationofthehypopharyngealglandsandlongevityofhoneybees，ApismelliferaL．(Hymenoptera：Apidae)【J】．InsectesSociaux．1967，14：415—426．Stocker八，SchramelP．，KettrupA．，BengschE。Traceandmineralelementsinroyaljellyandhomeostaticeffects[J]．JournalofTraceElementsinMedicineandBiology,2005，19(2·3)：183—189．SzymasB．，JedruszukA．．Theinfluenceofdifferentdietsonhaemocytesofadultworkerhoneybees，Apismellifera[J】．Apidologie，2003，34(2)：97-102．vanderSteenJ．．Effectofahome’madepollensubstituteonhoneybeecolonydevelopment[J】．JoumalofApiculturalResearch．2007，46(2)：114·119．VanengelsdorpD．，MeixnerM．D．．AhistoricalreviewofmanagedhoneybeepopulationsinEuropeandtheUnitedStatesandthefactorsthatmayaffectthem【J】．JournalofInvertebratePathology,2010，103：sS0-95．WuL．M．，ZhouJ．H．，XueX．F．，LiY，ZhaoJ．．Fastdeterminationof26aminoacidsandtheircontentchangesinroyaljellyduringstorageusingultra-performanceliquidchromatography[J]．JournalofFoodCompositionandAnalysis，2009，22：242—249．YinYP，MuD．D．，ChenS．J．，LiuL．，WangZ．K。EffectsongrowthanddigestiveenzymeactivitiesoftheHepialusgonggaensislarvaecausedbyintroducingprobiotics阴．WorldJournalofMicrobiologyandBiotechnology,2011，27(3)：529—533．ZhangH．Q．，HuF．L．，DietemannV．Changesincompositionofroyaljellyharvestedatdifferenttimes：consequencesforqualitystandards【J】．Apidologie，2010，(42)：39-47．51 意人利蜜蜂产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究致谢本研究是在导师胥保华教授和杨维仁教授的悉心指导下完成的。两位导师治学严谨、学识渊博、豁达的胸怀、对待工作孜孜不倦及真诚待人的高贵品质是我学习的榜样。在三年的研究生生活中，恩师兢兢业业的科研工作态度和高风亮节的为人处事态度一直影响着我，也会继续影响在我以后的工作学习，我不仅学习了丰富的专业知识，更重要的是学到了为人处事，待人接物的道理。在此论文完成之际，首先向思师致意最诚挚的敬意和最衷心的感谢!感谢山东农业大学动物科技学院领导和老师们的关怀和支持，师恩难忘，永记于心。在丌题和课题实施过程中，感谢动物营养系王中华教授、林海教授、杨在宾教授、李福昌教授、苏鹏程教授、姜淑珍教授、宋志刚教授、李显尧教授、林雪彦教授、王桂芝教授、康明江教授、焦洪超、王淑静、王云等老师给予的帮助、关心和建议；在试验过程中感谢刘峰和孙汝江博士，肖培新、刘利及巩志宏师兄，同级同学李迎军、焦震、郑本乐、刘昭华、冯倩倩、李成成及师弟师妹马兰婷、王颖、吴在富、张怡丁、张鸽、杭晓波等对我试验的大力帮助。感谢山东农业大学桃花峪试验蜂场张光亮师傅及其家人和张光军师傅对我试验的帮助。深深感谢含辛茹苦抚养我、仍在辛苦劳作的父母，正是他们无私的奉献和理解，使我们走完这十年在外求学生涯，正是他们殷切的目光和期望推动着我不断前进、战胜挫折。感谢哥哥、姐姐和李振在我求学生涯中在生活、学习及精神上的无私帮助和支持!最后，再次感谢导师胥保华教授对我的培养，我还要向前面未能提到的关心、支持和帮助我的各位同仁、同学和朋友致以最衷心的感谢!祝所有老师、同学、朋友及家人们幸福快乐、平安一生。52 山东农业大学硕士学位论文攻读学位期间发表论文情况1．饲粮蛋白质水平对蜂群繁殖性能的影响[J】．应用昆虫学报，2012，49(2)：486—489．第一作者2．饲粮蛋白质水平对意大利蜜蜂咽下腺发育及产浆量的影响【J】．动物营养学报，2011，23(7)：1147一1152．第一作者3．同粮蛋白质水平对浙农大l号意大利蜜蜂产浆及咽下腺发育的影响【J】．江西农业大学学报，2011，33(6)：1176-1180．第一作者4．不同蛋白质水平同粮对意大利蜜蜂体蛋白含量的影响【J】．中国蜂业中旬刊(学术)，2011，62(4)：11．12．第一作者5．蜜蜂人工饲料对蜂王浆产量及品质的影响[J】．蜜蜂杂志，2010，(2)：6-8．第一作者6．不同催化剂对凯氏定氮消化效果的影响【J】．中国饲料添加剂，201l，(8)：29．32．第二作者53 感人利蜜妁}产浆期代用花粉中适宜蛋白质水平的研究项目资助本研究由国家蜂产业技术体系建设专项资金(CARS．45)和公益性行业(农业)科研专项“饲料营养价值与畜禽饲养标准研究与应用(200903006)"资助。54