蜜茱萸地上部分化学成分研究 102页

AthesiforthedegreeofMasterStudyonChemicalConstituentsfi"omtheaerialpartoftheMelicopepatulinervia(Merr．&Churl)HuangBvTingLiu，一SuperviorProf．YanbingZhangandProf．KeyuanPharmaceuticalChemistryDepartmentofPharrnacyApril2012 {IIIIIIIIIIIlUlIIIIIIIIillllllllllllllY210263咖2学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：到蝣日期：#012年6月艿日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：麦』暗日期：2【)／爻年6月a岁日 摘要本论文主要包括以下四个方面的研究工作：蜜茱萸(Melicopepamlinervia(，Merr．＆Chun)Huang)地上部分化学成分的研究；蜜茱萸中化学成分的高效液相色谱分析和含量测定；蜜茱萸总黄酮、总多酚含量测定以及抗氧化和抗菌活性进行测定。(1)蜜茱萸(Melicopepatulinervia(Merr．&Chua)Huang)为芸香科(Rutaeeae)蜜茱萸属(MelieopeJ．R．etQForst)植物。是我国海南特有珍惜濒危植物。本课题采用DimonHP．20、正相硅胶、SephadexLH．20凝胶、RP．18、MCIgelCHP．20P、Toyopead凝胶等分离填料和传统分离技术，从蜜茱萸地上部分分离鉴定了19个化合物，分别为：(E)．甲基．3．{4．[(E)．3，7．二甲基．2，6．二烯基】氧基苯基)．2．丙烯酯(MZY．1)，蜜茱萸素(MZY．2)，3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(MZY．3)，Melibentin(MZY-4)，5．羟基．3，7，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(比Y．5)，球松素(MZY．6)，5．羟基．3，6，7，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY-7)，7．异戊烯氧基．3，5，6，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY-8)，吴茱萸黄碱(MZY．9)，3B-hydroxystigmast⋯5cn7．one(MZY．10)，山柑子碱(MZY-11)，香草木宁(MZY．12)，Phytylhexadecanoate(MZY．13)，原茵芋碱(MZY．14)，7．异戊烯氧基．5．羟基．3，6，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY-16)，豆甾醇(MZY．17)，B．谷甾醇(MZY．18)，1．羟基．3．甲氧基．10．甲基．10H．氮葸．9-酮(彪Y．19)，1，2．二甲基喹啉．4．酮(MZY．20)，其中MZY．16为新化合物，所有化合物均首次从本植物中分离得到。(2)蜜茱萸中化学成分的色谱分析和含量测定：利用本课题组从蜜茱萸中分离得到的单体化合物，建立应用HPLC同时定量测定蜜茱萸茎和叶中7个活性化合物的方法。结果表明：茎和叶中所含黄酮和生物碱的种类多，且叶中含量较大。(3)蜜茱萸提取物的活性成分含量测定结果表明：蜜茱萸叶75％甲醇提取物中总黄酮含量较高，为41．3194士0．071mg·g～。但酚酸类物质含量较低。(4)蜜茱萸活性初步研究结果显示：蜜茱萸抗氧化能力很低。在抗菌方面， 摘要蜜茱萸叶的75％甲醇提取物对植物常见病原菌有一定的抑菌作用，但对细菌的抑菌作用很弱。关键词：蜜茱萸化学成分黄酮生物碱多甲氧基高效液相抗氧化抗菌Ⅱ 摘要AbstractThisthesisWSSmainlyconcernedthestudyonthechemicalconstitucksofMelicopepatulinervia(Merr．＆Chun)Huang,HPLCdeterminationofbioaetivecomponentinmelicopepatulinervia，evaluationofthecontentofactivecomponentsandantimicrobialandoxidantactivities．(1)Melicopepatulinervia(Merr．&Chun)Huangisthe豫∞andendangeredplantintheHainanProvince，China．ThecompoundswereisolatedbyDiaionHP-20，SephadexLH-20，MCI-GELandsilicagelcolumnchromatographicmethods．PhysicochemicalandmodemspectroscopictechniquessuchasMS，H-NMR,C-NMRand2D-NMRwereusedtOidemifythecompounds．19constituentsWereisolatedfromtheaerialpartofMelicopepatulinervia．Theirsliuctureswereidentifiedas(E)-Methyl·3-{4一【(E)-3，7一dimethylocta-2，6·dienyloxy]phcnyl}prop-2一铋oate(MZY-1)，Melitematin(MZY-2)，3,5，8-Trimethoxy-6，7；3’，4’一dimethylenedioxflavone(MZY-3)，Melibentin(MZY-4)，5-hydroxy·3，7，8-trimethoxy-3’，4’-methylenedioxyflavone(MZY-5)，Pinostrobin(MZY-6)，5-hydroxy·3，6，7，8-tetramethoxy一3’，4"-methylenedioxyflavone(MZY-7)，7-(3-Methyl·but-2-enyloxy)-3，5，6，8-tetramethoxy-3’，4"-methylenedioxynavones(MZY-8)，Evoxanthine(MZY-9)，313-hydroxystigrnast一5-en-7-one(MZY·10)，Arborinine(MZY-11)，Kokusaginine(MZY-12)，PhytyLhexadecan·oate(MZY·13)，Preskimmianine(MZY-14)，7-(3·Methyl—but一2·enyloxy)-5-hydroxy·3，6，8-tdmethoxy-3’，4"-methylenedioxyflavone(MZY·16)，Stigmasterol(MZY·17)，13-sitosterol(MZY-iz)，1-Hydroxy-3-methoxy-10-methyl·lOH-aeridin-9-one(套，【ZY-19)，1,2-dimethylquinolin-4-one(Mzv-20)．AllthecompoundsWereisolatedfromMelicopepatulinerviaforthefirsttime，andMZY·16Wasanewcompound．(2)HPLCdeterminationofchemicalcomponentsinMelicopepatulinervia．AHPLCmethodforsimultaneousdeterminationof7kindsofchemicalcompoundsfromMelicopepatulinerviawastakenout．TheresultsshowsthatleavesofMelicopepatulinerviacontainedalargeamourofflavonesandalkaloids，whilethecontentofthemin1eaveswashigherthanthestems．rrr 摘要(3)ThispartwasconceivedtoevaluatetheactiveingredientsofMelicopepatulinerviaHuang．Theresultsshowedthatthe70％methanolexttagtsoftheleaveshadhigherleveloftotalflavonoids，谢也acontentof41．3194士0．07ling‘g-1．ButitWasstrangethatthecontentsoftotalphenoloftheextractsoftheplantⅥ啪significantlylessthanthatoftotalflavonoids．(4)Preliminarilyinvestigatetheantimicrobial，antioxidantactivitiesofMelicopepatulinervia．Theantioxidautactivitiesofthedifferentparts，differentsolventsextractsofMelicopepatulinerviawereallweak．Theleafextractshowedantimicrobialactivityagainst4ofplantpathoqenicfunqispecies．KeyWordsMelicopepatulinervia(Mere．&Chun)Huang,chemicalconstituents，PMFs，HPLC，antimicrobialactivity,antioxidantactivityⅣ 摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯．Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯v1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1化学成分⋯⋯⋯⋯』⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1．1．1特征成分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．2其他类化合物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．2药理活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．2．1黄酮类化合物活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。141．2．1生物碱类化合物活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l51．2．2色烯和苯乙酮类活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162蜜茱萸地上部分化学成分研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。172．1概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．2结构鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．3实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。292．3．1仪器与材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．3．2化学成分的分离与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。292．3．3实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．292．4本章总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯383蜜茱萸化学成分的含量测定和色谱分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393．1仪器与材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯。39V 略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．z13⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45含量测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯!；()5蜜茱萸活性初步研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯545．1概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．545．2蜜茱萸抗氧化和抗菌活性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯545．3本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。62参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。586研究总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．73附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯89个人简历及发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90V1 堕堕塑室一————_—_—-_—●-_————-————-—_————————————————一一一缩略词表-_—_-———_————————————_——————__—l_-—————————一DMSODimethylsulfoxideDPPH1，1．Diphenyl-2-picrylhydrazylradicalTPTz1"3"5-ui(2一p妒dyl)-2，4，6-triazineTrolox6-Hydroxy．2，5，7，8．tetrarnethylchroman·2。carboxylicAcidESI．MSElectrosprayionization‘massspecmunTLCThinlayerchromatographyNMRNuclearmagneticresonancespectroscopylH』NMR1HnuclearmagneticresonancespectroscopynC．NMR13CnuclearmagneticresonancespectroscopyDEPTdistortionlessenhacementbypolarizationtransfer2D-NMRTwodimensionalnuclearmagneticresonancespectroscopylH．1HCOSY1H_IHcorrelatedspectroscopyHSQC1HdetectedheteronuclearsinglequantumcoherenceHMBC1HdetectedheteronuclearmultiplebondconnectivityHPLCHi曲performanceliquidchromatographym．P．MeltingpoilltPDAPotatoDextroseAgar(Medium)LrVUltravioletvisiblespecmmaPMFsPolymethoxylatedflavones6化学位移J偶合常数s单峰信号d二重峰信号t三重峰信号m多重峰信号dd翌三蔓些堡呈一——_—_—I—l—I-I-●——l_●___l—————————————————一Ⅶ 1前言蜜茱萸属是芸香科的一个属，约50种，为乔木或灌木，主产于太平洋各岛屿和澳大利亚，亚洲大陆较少。蜜茱萸属的叶为对生或互生，单小叶或3出叶，很少出现羽状复叶，叶片上有透明的腺点。蜜茱萸属的花小，通常为单性，由少数花组成腋生的聚伞花序或密伞花序：有4裂萼片：4裂呈镊合状排列的花瓣，盛开时花瓣顶部向内反卷；8枚雄蕊；4个几乎分离的心皮组成雌蕊，每一个心皮内有胚珠2枚；花柱为单生或顶端4裂。成熟的心皮有1-4个，呈2瓣裂，通常有1枚发亮的种子。蜜茱萸属和吴茱萸属很相近，但是蜜茱萸属的雄蕊为花瓣数的2倍，而吴茱萸属的雄蕊与花瓣数相同。[1-2]蜜茱萸属的其他植物在其他国家有作为传统用药或药用植物。【3．8】通过对植株的化学成分进行分析研究，发现某些化合物单体具有很好的药理活性。本文将就国内外的一些文献报道，对蜜茱萸属化学成分及药理活性研究进展做一综述整理。1．1化学成分1．1．1特征成分蜜茱萸属所含化学成分中，黄酮类、生物碱类和苯乙酮类化合物的含量较高，并在植物分类学中，作为蜜茱萸的特征成分存在。1．1．1．1黄酮类该属植物的黄酮是否具有高含量的3．甲氧基取代黄酮(如化合物11)，以及是否含有亚甲二氧基(如化合物11)，可以作为该属化学分类学的一个指标。E9-13】并且，蜜茱萸属中黄酮苷元的含量明显高于黄酮苷。仅ZhuSheng—hua等、ChenK等从Melicopepteleifolia中分离得到3个黄酮苷(见化合物1，2，6)【1知15】以及SultanaN等从MelieoperrL{crococca中分离到2个黄酮苷(见化合物3，4)。【16】其它化合物见Table1．1。1 1前言RlO1R，呻．口筒筒毗喃镊jR：m4：h-H；R闻HI"畸2R，=芸香骑t＆-OMe：Fb_OH：R4,,Hl1．I3R，t槐耱IR产O¨戗融∞H：艮=H【15l4R，t嘲槐暇麓：R．_OMe；R产OH；R‘；Hl嘲eR，。阿拉伯毗哟诗lRz,,OMe：R3喇：鼬,e4eI1为Table1．1蜜茱萸属中黄酮1111q2 1前言3 1前言1．1．1．2生物碱类喹啉生物碱已经成为芸香科的代表成分幽】。蜜茱属作为芸香科的一员，植物中除黄酮外的另一类主要代谢产物就是生物碱，现已分离出的生物碱成分，主要是来源于邻氨基苯甲酸的喹啉类(如化合物7、8、9)、吖啶酮类(如化合物36、37、38)以及双生物碱类(如化合物1、2、3、4、5)。且这类生物碱一般都有一定的药理活性。[29-31】其它化合物见Table1．2。4MeOCH3RR27R1=H：R2=H；13418R1--OCH3：R22H：【3q9R1=OCH3：R2=OCH3：【3叼 38R1_R3=OCH3：R2=H[S2]37R1=OH：R2=R3=OCH3152IR1=OCH3：R2．R3"OCHzO嘲Table1．2蜜茱萸属中生物碱类化合物编号名称植物来源1MelicodeninesA【32】Melicopedenhamit2MelicodeninesB【32】mclicobisquinolinOncA【33】paraensidimerineD【3，】mclicObisquinolinOncB【32】6N．mcthylnindcrsines【32】7白鲜碱【3．】8cvolitrine[3．】9菌芋碱【34l10l-oxo．2．hydroxy．1。2．dihydro．12．dcsmc也ylnoracronycine【3，】12$-methoxymaculinc【’6113Confusameline[37】14Skimmianine[3’】15dictaminell6]16evolitrinell6]17pteleine[1‘1187．(2’．hydroxy．3’．chloroprenyloxy)·4-mcthoxyfuroquinolinc【391197-(2’。3’．epoxyprenyloxy)．4．mcthoxyfuroquinoline【，，】20evcllcrine[3，】21Aurantiamideacetate[39]MelicopedenhamiiMelicopepteleifollaMelicopepteleifoiiaMeltcopedenhamiiMelicopedenhamtlMelicopepteleifoliaMelicopeptelelfoliaMelicopepteleifoliaSarcomelicopedogniensi$MelicopeptelefoltaMeltcopeptelefoliaMelicopecofusaMelicopecofusaMeltcopetrfphyHaMelicopetr妒hyllaMelicopetriphyllaMellcopebonwickllMellcopebonwicMtMelicopebonwlckllMelicopebonwickit 1前言1．1．1．3香豆素和苯乙酮类化合物AnneAdsersen等综述了苯乙酮类化合物在芸香科的分布情况，在文章中指出带有一O-香叶基侧链(如化合物16)的苯乙酮类只在蜜茱萸属有发现，因而该类化合物应该可以成为蜜茱英属的分类学标志。[231其它化合物见Table1．3。O16p哪Table1．3蜜茱萸属中香豆素类和苯乙酮类化合物6 编号名称植物来源1三桠苦甲素【17】MellcopepteleifollaMcthylcvOdiOnOlf，●】isOevodionol【3qcis·LeptinC【3．】cis-LeptinA【3．】trans·LeptinBⅢ】cis·3，4-dihydroxy-5，7·dimethoxy-6-acetyl·2。2-dimethychroman[34l5-hydroxy·6·acctyl-7-methoxychromanone[34lOctandrenolone[50】Imperatorin[16】phellopterin[1‘】2，4，6·trihydroxy-3-prcnylacetophenonc【，6】2。4。6-u"ihydroxy-3·geranylacctophenone[3‘】2,4。6·u"ihydroxy·3·geranylgeranylacetophenone[36】p-O·geranylcoumaricacid[3‘】2,4。6·Irihydroxy·3．farnesygeranylacetophenone[3‘】p-O-geranyl．7”．acetoxycoumaricacid[22】7-(3’。3’-dimethylallyloxy)．coumarin[52】7·(3’-carboxybutoxy)-coumarin[52】7·(3’-carboxy．2．butenoxy)．coumarin【52】5-acetyl．2-isopropenylbenzofuran[52】sibiricinIs2]8啦c‘y1·5·7-d5hyd眦y。2，2-dn‘mzoep‘hYyraljn辨。m。‘hyl·2由u‘enyl’·2H小bcPJevodioneIs2]Evodionolmethylether[52】0．methylallocvOdiOnol【52】encecalin[s215·O．demethylcvOdione【52】methyldemcthoxywut曩iensatef52】evofolinB【52】MelicopepteleifoliaMelicopeptele帕ilaMelicopepteleifoliaMelicopepteletfoliaMelicopepteleifoltaMellcopepteleifoliaMelicopepteleifoliaMelicopeoctandraMelicopetr驷砂llaMelicopetrfphyHaMelicopeptelefoHaMelicopeptelefoliaMelicopeptelefollaMelicopeptelefoliaMelicopeptelefollaMelicopeptelefoliaMelicopevttifloraMelicopevitifloraMelicopevifffloraMeflcopevittfloraMelicopevifffloraMelicopevifffloraMeflcopevttlfloraMelicopevifffloraMelicopevltifloraMellcop口vttffloraMelicopevthflo阳MelicopevtfffloraMelicopevtttflora723456789加n屹B¨"坫"墙侈∞殂挖筋M笱弱"丛”∞ 1前言31hainanmurpaninl52】Melicopevitiflora325-methoxy-8．geranyloxypsoralent：201s越蚰n咖f；Dfata33scoparone[：53】34Limettin【53】356．methoxy．7．(3．methyl．2．butenyl)coumarint：”】36Cedrelopsint”137psoralen[：’3】7．(1．Mcthoxyethyl),-5，6，8-trime．thoxy·2，2-dimethyl·214．-1·benzopyranl。385l】39Melicot】"iphyllinA【21】40MclicotriphyllinBt：¨141MelicotriphyllinC【2l】42Melicou"iphyllinD【21】438-8erany|oxy．5·me．thoxypsoralen【21】44Phellopterin【：21】45ostheno["‘0146ostholc【"‘01475，5"-dimethoxy．alloagerasaninE“】48(+)．7．(3．methyl．4．carboxybutanoxy)umbelliferonemethester【5‘】49Umbelliferonet：‘q507-(3．methylbut．2．∞oxy)umbclliferonc【，4】51Melifolin[“】52al|oevodionolt：51l53allapevodionolmethylethc一51】548-(1．．hydroxyethyi),．5。7．,dimethoxy．2，2·．dimethyl·,2H-1·．benzopyran【51】558-(1．mcthoxyethyl)．5，7．dimethoxy．2。2·dimethyl．·214,·1-benzopyran【51】56g-vinyl．5。7．dimethoxy．2，2．dimethyl-2H·1·．benzopyran【51】8-acetyi．5。7．．dihydroxy·6·isopentenyl·2，2·．dimethyl·2H·1-benzopyranI57511MelicopeborbonicaMelicopeborbonh：aMelicopeborbor妇aMelicopeborbonicaMelicopeborbonicaMelicope乃枥磅ff口MelicopeTriphyllaMelicopeTriphyllaMelicopeTriphyllaMelicope弦fp砂ff口MelicopesemecarpifoliaMelicopesemecarpifoliaMelicopeptelefoliaMelicope咖aettMelicopejhc驴即ifMelicopehayesetiMelicopeptelefollaMelicopeptelefoliaMelicopeptelefoliaMelicopeptelefoliaMelicopeptelefoliaMelicopeptelefolia批丝量掣里l=窖船一皇t—l_I_业e-，l_S．-，一0一n2一o．．一d截一O∽一吖景Io吧一l口一二～羹一 1前言1．1．2其他类化合物除以上三种类型的化合物外，蜜茱萸属分离出来的其他类型的化合物种类较少且对于蜜茱萸属而言没有什么代表性。下面笔者将对从蜜茱萸分离出来的其他类化合物做一分类概括。I．I．2．1木脂素R1R21R，．R2wOCH20；R3．R4,-OCH20眄312R，-R2。OH：I％．．p．4,,OMeP’l3R，-R2·R3-R．一o^^．13’l4R，=Ft2=OMe；R3-艮-oC心OmlTable1．4蜜茱萸属中木脂素类化合物9 驿嘞。聱R。爷1l嘲纂辫玎佃65⋯R=HII="rl刀．从．越 1前言O更陬Table1．5蜜茱萸属中萜类化合物 1617180leanolicacid4-stigmasten-3-oneLinal00lMelicopeptelefoliaMelicopeptelefoliaMelicopeobscura1．1．2．3苯并吡喃酮类1MOOH21271OH4网Table1．6蜜茱萸属中苯并吡喃酮类化合物1Evodionolmethylether朋叠肠咿pe印妇拥Bn，缸2l-(5-geranyloxy-7-hydroxy-2,2-dimethyl-2H-chromen·8-y1)ethaaoneMelicopesemecarpifolia31-[5-geranyloxy-7-hydroxy-2-methyl-2-(4-methylpent-3-enyl)*2H-chroMelicopem∞．3．yl】ct,hanoncsemecarpifolia4(KE)·l·(5·(3，7·dimethylocta·2，6·dicnyloxy)·3，7·dihydroxy’2，2-Melicopedimethylchroman·8-y1)ethanonesemecGrp∥o，i口1．1．2．4其他类12 i。1前言从蜜茱萸属中分离出来的其它类化合物包括：芳香小分子(如化合物1、2)、长链脂肪酸(如化合物20、22)、氨基酸(如化合物27)等，其它化合物见Table1．7。1R=H嘟I2R=CH3[Sal3n"12H。∥0搿∥HTable1．7蜜茱萸属中其它类化合物编号名称植物来源1Eugenol[53lMelicopeborbonlca2Methyleugenol[5’JMelicopeborbonica3p．O．geranylcoumaricacid嘲MelicopeTrtphylla4香草酸I嘲MelicopeTriphylla5hortiolidep2]Melicopevitiflora6(E)·3·acetyl-6-(3。7·dimethlocta·2，6-dienyloxy)-2，4·dihydrMelicopesemecarp蜘liaoxybenzoicacid[="】7(E)·3·acetyl·4·(3，7-dimethylocta·2。6·dienyloxy)·2。6·dihyMellcopesemecarpifoltadroxybenzoicacid鲫82"0’．geranyloxy)．4。6．dihydroxyacetophenone[271Melicopesemecarptfolta920(1’．Oeranyloxy)．4w6trihydroxyacetophe-none曙7】Mellcopesemecarptfolia／104-(1·．geranyloxy)．2。6．dihydroxyacetophenone[27]Mellcopesemecarplfollal14-(1·．gcranyloxy)．2，6．p．trihydroxyacetophcnonc【27】Melicopes!哆／～ 1前言122，6-dihydroxy·4·geranyloxyacetophenone[561Melicopeobscura134-geranyloxy·2。6，9-trihydroxyacetophenone[sqMel[copeobscura142,6．dihydroxy·4·geranyloxy-3·prenylacetophenone[56】Melicopeobtustfolia154-geranyloxy-3·prenyl·2，6，B·trihydroxyacetophenone[56IMelicopeobtusifolia16xanthoxylin[531Melicopeborbonica17methylxanthoxylin[53】胁如胖borbonical8a．curcumene[53】Melicopeborbonica193,6·epidioxy-1。10·bisaboladiene[53】Melfcomborbonica20cis·phytylpalmitatel"]Melicopeptelefolia21syringicacid[40]Melicopesemecarpifolia22Methyloleate[删Melicopesemecarpifolia23Sessiliflorene[a]Melicopesessilifloro24sessiliflorolsA【柚】Melicopesessilifloro25SessiliflorolsB[4s]Melicopesessilifloro26Methylp-geranyloxy．trans-cinnamate[z1】Melicope乃刎眵妇27N-P·coumaroyltyramine[H1Melicopehayeselt28N··methyl··2··pyrolidinoneIs4]Melicopehayeseii1．2药理活性对于该属的植物，国内外对其活性研究较少。下面笔者将分化学结构类型，对特征类化合物的活性进行总结。1．2．1黄酮类化合物活性目前对蜜茱萸属的黄酮类化合物的活性研究表明，该属黄酮有M胆碱受体阻断作用，抑制血小板聚集作用，抗病毒作用以及杀虫作用等。L．Ychung等【20】报道从Melicopesubunifoliolata树皮的甲醇提取物有显著的M胆碱受体的活性，从中分离出的6个黄酮(melibentin(5)；melisimplexin3，3’"4’，5，7-pentamethoxyflavone(10)；melitematin(7)；3,5，8-U"imethoxy’，6，7-bismethylenedioxyflavone(6))对M胆碱受体分别都有中等强度的阻性，其活性受取代的甲氧基的位位置和数量的影响14 1前言Ting．TingJong[16，26】等对从三叶蜜茱萸(台湾)的叶中分离得到五个黄酮和两个生物碱进行体外抑制血小板聚集实验，表明其中三个黄酮melitemin，melitematin以及3，5，8．三甲氧基．3’，4’6，7．双亚甲二氧基黄酮(100ttg／m1)活性较好。值得注意的是，HouR．S．等【8】还从该植物中分离得到两个具有细胞毒活性的黄酮：4．羟基．3，5，7，3’．四甲氧基黄酮和3，3’，4’，5，8．五甲氧基．6，7．亚甲二氧基．Chang-HuiLiao等【，7】研究表明：5-hydroxy-2-(4一hydroxy·3-methoxyphenyl)-3，7．dhetlloxy-5H．chromen．4．orlc(MSF．2)通过抑制磷脂酰肌醇3．激酶的活性对由fMLP诱导的人体嗜中性白细胞呼吸爆发有压制作用。Simoes掣58】对两个黄酮化合物(3．甲氧基黄酮是4’，5．二羟基．3，3’，7，8．四甲氧基黄酮(tematin)和3，5．二甲氧基．6，7；3’，4’．双亚甲二氧基黄酮(melitematin))所做的抗DNA和RNA病毒实验(选择的病毒包括脊髓灰质炎病毒、腺病毒、疙疹病毒HSVI和2型、VSV病毒)表明：这两个黄酮在相同的实验条件下，tcmatin对实验病毒所引起的细胞病理效应有抑制作用，但是melitematin却没有此作用。同时tematin在病毒的多步复制实验中能有效地降低病毒滴度尤其是脊髓灰质炎病毒和腺病毒的滴数。从构效关系看，C3位上的甲氧基、C2和C3之间的双键以及C4位上的羰基时必需的。同时，亚甲二氧基在6，7位和3’，4，使活性消失，而8位的甲氧基估计也是活性所必需的。Jih-JungChen等【2．7】对从M．semeearpifolia中分离出的三个黄酮和两个苯乙酮衍生物进行抗炎活性测试，表明5，4’．二羟基．3，7，3’．三甲氧基黄酮，5，4’．二羟基．3，7．二甲氧基黄酮和5．羟基．3，7，3’，4’．四甲氧基黄酮对人的弹性蛋白酶的释放以及嗜中性粒细胞所产生的超氧化物阴离子有较强的抑制作用。ShuitHungHo等【59】研究表明Melicopesubunifoliolata(Stap39T．GHartley俾utaceae)对象象鼻虫属鼻虫科的玉米象有很强的拒食活性，并且杀死双翅目埃及伊蚊的活性很好。EO’Donnell等IS2]从Melicopevitiflora的甲醇提取物对ML和MRSA有抗茵活性。1．2．1生物碱类化合物活性目前已报道的蜜茱萸中生物碱的活性主要是抗血小板聚集，细胞毒和抗真菌方面的活性。FaridanAbas等【36】研究研究表明：化合物Kokusaginine对鼠科体内腹膜巨15 1前言噬细胞有N0抑制作用。Kung．WOONam等【3刀研究表明：化合物skimmianine、kokusaginine、confu．sameline、evolitnne对人体内的磷酸二酯酶(”DE5A)有抑制作用。引人注意的是IsmiamiKomala等【39】研究表明：从Melicopebonwickii(F．Muell)T．Hartley中分离得到的化合物7-(2’-hydroxy一3"-chloroprenyloxy)-4一methoxyfiaroquinoline，7-(2’，3"-epoxyprenyloxy)-4-mcthoxyfuroquinoline对子宫颈癌有明显的抑制作用。抗血小板lh．ShengChcn等【40】使用浊度滴定法研究表明Melicopesemecarpifolia根皮的甲醇提取物有很强的抗血小板作用。Tsann-LongSu等【l纠从Melicopetriphylla中分离得到的化合物dictamine，evolitrine，pteleine，imperatorin对ADP诱导的血小板凝集有中等抑制作用。1．2．2色烯和苯乙酮类活性该类化合物发现的活性较少，主要是抗炎以及抗菌作用。化合物xanthoxylin是从M．borbonieade叶中分离得到的苯乙酮类化合物有弱的抗真菌活性。这种植物当地人用来促进伤口愈合、治疗风湿等三种化合物的含量占树叶干重的2．5％，也许这种高含量强化该植物中成分的抗茵活性。比如。KhozirahShaari等【竭从Melicopeptelefolia植物中提取出来的化合物2，4，6-trihydroxy-3一geranylacetophenone，P-O-gcranylcoumaric，kokusaginine，scoparone(其中kokusaginine为主要成分)对大豆15．脂氧合酶和人类的5．脂氧合酶有明显的抑制作用，并对人半胱氨酰白三烯的形成有阻碍作用。他阁在文中提出M．ptelefolia的标准提取物在小鼠体内有抗炎作用，这科学的解释了M．ptelefolia具有传统的抗炎作用。16 2蜜茱萸地上部分化学成分研究2．1概述蜜茱萸Melicopepatulinervia儆照＆C而驯Huang为芸香科蜜茱萸属灌木或乔木，是我国海南特有的珍惜濒危植物【硎。国内并没有蜜茱萸作为药用的记载。但国外，有蜜茱萸属其他植物入药的报道【3～。本论文首次对分布于海南三亚的蜜茱萸地上部分进行了化学成分研究，从中分离并鉴定了19个化合物，分别为：(E)-甲基·3一{4-[(E)·3，7-二甲基一2，6．二烯基】氧基苯基)．2．丙烯酯(MZY．1)，蜜茱萸素(MZY．2)，3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(M[zY．3)，Melibentin(MZY-4)，5．羟基．3，7，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．5)，球松素(MZY-6)，5．羟基．3，6，7，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．7)，7．异戊烯氧基．3，5，6，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．8)，吴茱萸黄碱(MZY-9)，313一hydroxysfigmast⋯5ell7．one(MZY-10)，山柑子碱(MZY-11)，香草木宁(MZY-12)，Phytylhexadecanoate(MZY．13)，原茵芋碱(比Y．14)，7．异戊烯氧基．5．羟基．3，6，8．三甲氧基．3’，4，-亚甲二氧基黄酮(MZY-16)，豆甾醇(MZY．17)，B．谷甾醇(MZY-18)，1．羟基．3．甲氧基．10．甲基．10H．氮葸．9．酮(MZY-19)，l，2．二甲基喹啉-4．酮(MZY-20)，其中MZY．16为新化合物，所有化合物均首次从本植物中分离得到。各化合物结构见Fig．2．1。17 MZY．●殍饭囊Mz丫．7S．强誊3．8．7．0．冈叫氯羹．3’．4‘．诬印_二氯薹炙酮打M2"Y．B7．异院爆瓴薹．3．S．B．■其叩氛墓．3’．4‘．亚巾二奴整黄酮IMeMZY-∞弗·h，-嚣婀l口喇_·5．·-7．·一MZY-11山括子■弹-"3-Z丫．12吾革本宁Idar"-I$—哪一-帽_∞脯 2蜜茱萸地上部分化学成分研究MZY-14恿壕葶黛MZY-167-髯戊蠕簟L慕．5-疑基．3．6，B-I咿●‘爰}3’，●’-亘甲C新化台朔}--眨Y．"7豆蹈薛kMZy．竹"-羟墓．孓甲氯墓·"厶甲墓-10H-重置-9-酮MZY-lgl·谷甾尊咚阱201．2-：甲羹畴_k‘酮Fig．2．1ThestructureofcompoundsMZYl"--20isolatedfromtheMelicopepatulinervia化合物MZY．1：无色透明晶体(EtOAc)，易溶予石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮，难溶于甲醇；1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：2个双氢双峰(67．468，dd，2H，J=8．4Hzl86．912，dd，2H，J=8．8Hz)，说明分子中含有对位二取代苯，即AA"BB’系统；有1个甲基二重峰(61．590，dd，J=11．2Hz)，2个甲基单峰(61．742，81．675)，2个亚甲基峰(62．070-一62．139)，一个连氧亚甲基峰(64．570，dd，3H，J=6．4Hz)，2个烯氢质子(65．477，t，1H：65．086，t，1H)推断为一个(CH3)2C=CHCH2CH2C(CH3)=CHCH2-O-片段；2个反式双键上的质子(67．652，dd，IHJ=15．6Hz：86．309，dd，1H，J=16．41-1z)，一个连氧甲基单峰(63．795)。结合13C-NMR(数据见实验部分)数据与文献【711对照基本一致，确定为MZY-l为(E)·甲基-3-{4-【(E)·3，7-二甲基．2，6．二烯基】氧基苯基)-2-丙烯酯((E)-Methyl-3-{4-【(E)-3，7一dimethylocta-2，6-dienyloxy]phenyl)prop．2．enoate)，为该植物中首次分离得到的化合物。19 2蜜茱萸地上部分化学成分研究化合物MZY．2：白色固体(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮，难溶于甲醇；1H-NMR(400MHz，CDCh)谱中显示：芳香区出现3个芳香氢信号(67．572，d，1H，J-1．6Hz；66．925，d，1H，J=8．4I-Iz；67．641，dd，1H，J=8．8，2．0Hz)，说明分子中含有1，3，4三取代苯，即ABX系统，分别为H．2’、H．5’、H．6，的信号；66．660处有一个单质子单峰，推测为黄酮H．8的信号。由以上1H-NMR谱数据可知该化合物可能为黄酮类化合物。除母核上氢信号外，在63．868、64．133处各出现一个三氢单峰，提示有两个甲氧基存在。66．056处出现一个四氢单峰，提示可能有两个亚甲二氧基存在。乃C-NMR(100MHz，CDCl3)谱中出现19个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，6173．986为黄酮4位羰基的特征信号，692．990为黄酮的8位碳信号。6101．612、6102．128分别为两个亚甲二氧基的碳信号。经过以上推断，并与文献【$3,94】对照基本一致，确定为蜜茱萸素(Melitematin)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY-3：白色固体(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮，难溶于甲醇；1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现3个芳香氢信号(57．743，dd，1H，J=8．4，1．6Hz：56．941，d，1H，J-8．4Hz；87．659，d，1H，J=1．6Hz)，说明分子中含有1，3，4三取代苯，即ABX系统，分别为H．2’、H．5’、H．6’的信号。除母核上氢信号外，在63．883、64．046、64．066处各出现一个三氢单峰，提示有三个甲氧基存在。66．056、66．077各处出现一个二氢单峰，提示可能有两个亚甲二氧基存在。”C-NMR(100MHz，CDCl3)谱中出现20个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，6174．017为黄酮4位羰基的特征信号，由以上核磁谱图数据可知该化合物可能为黄酮类化合物。6101．612、6102．494分别为两个亚甲二氧基的碳信号。经过以上推断，并与文献【83,a4]对照基本一致，确定为3，5，8．三甲氧基．6,7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(3，5，8．Trimethoxy．6，7：3’，4，．dimethylenextioxy．flavone)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZN：淡黄色块晶(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮，微溶于甲醇：1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现3个芳香氢信号(57．740，dd，1H，J=8．4，1．6I-Iz；66．929，d，1H，J=8．4Hz；87．654，d，1H，J=1．6I-Iz)，说明分子中含有1，3，4三取代苯，即ABX系统，分别为H．2’、H．5’、H-6’的信号。除母核上氢信号外，在63．857、63．926、63．950、63．975、64．076处各出现一个三氢单峰，提示有五个甲氧基存在。66．050处出现一个二 2蜜茱萸地上部分化学成分研究氢单峰，提示可能有一个亚甲二氧基存在。”C-NMR(IOOMHz，CDCl3)谱中出现21个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，8173．746为黄酮4位羰基的特征信号，由以上核磁谱图数据可知该化合物可能为黄酮类化合物。6101．563为一个亚甲二氧基的碳信号。经过以上推断，并与文献【刚对照基本一致，确定为3，5，6，7，8-五甲氧基．37，4’．亚甲二氧基黄酮(Melibentin)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY-5：黄色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇：遇FeCl3．It3[Fe(CN)6】试剂显棕色，久置显蓝色，说明含有酚羟基。1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现3个芳香氢信号(87．740，dd，1H，J=8．4，1．6Hz；86．929，d，1H，J---8．4Hz；87．654，d，IH，J=1．6Hz)，说明分子中含有1，3，4三取代苯，即ABX系统，分别为H．2’、H．5’、H．6’的信号。除母核上氢信号外，在63．857、83．926、63．950处各出现一个三氢单峰，提示有三个甲氧基存在。86．050处出现一个二氢单峰，提示可能有一个亚甲二氧基存在。612．573处出现一个单氢单峰信号，提示为黄酮5位羟基的特征信号。13C-NMR(100MHz，CDCl3)谱中出现19个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，6179．250为黄酮4位羰基的特征信号，由以上核磁谱图数据可知该化合物可能为黄酮类化合物。6101．745为一个亚甲二氧基的碳信号。经过以上推断，并与文献【跖】对照基本一致，确定为5．羟基．3，7，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(5·hydroxy-3，7，8-tri-methoxy·3’，4’-methylenedioxyflavone)。为该植物中首次分离得到的化合物。．．化合物MZY．6-白色针晶(EtoAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、微溶于甲醇；遇FeCl3．K3[Fe(CN)6】试剂显棕色，久置显蓝色，说明含有酚羟基。1H-NMR．(400MI--Iz，CDCl3)谱中显示：芳香区两组氢信号：2个芳香氢信号(86．076，d，1H，J=2．0Hz：86．064，d，1H，J=1．6Hz)为苯环间位偶合的两个质子，分别为H．8，H．6的信号；5个芳香氢信号(87．369"-87．466，m，5H)说明分子中有一个单取代的苯环，分别为H．2’、H．3’、H-4’、H．5，、H．6’的信号。65．431(2H，dd，J=2．8，12．8Hz)，83．084(1H，dd，J=13．2，17．2Hz)，82．803(1H，dd，J=3．2，17．2Hz)这一组氢质子为二氢黄酮2位和3位氢的特征吸收峰。除母核上氢信号外，在63．807处出现一个三氢单峰，提示有一个甲氧基存在。612．017处出现一个单氢单峰信号，提示为黄酮5位羟基的特征信号。由以上1H-NMR谱图数据可知该化合物可能为二氢黄酮类化合物。21 2蜜茱萸地上部分化学成分研究13C-NMR000MHz，CDCl3)谱中出现16个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，6162．806为黄酮4位羰基的特征信号，679．239、643．392处出现二氢黄酮C．2、C．3的特征信号。经过以上推断，并与文献【86】对照基本一致，确定为球松素(Pinostrobin)。化合物MZY．7：黄色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；遇FeCl3．K3[Fe(CN)6】试剂显棕色，久置显蓝色，说明含有酚羟基。1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现3个芳香氢信号(67．765，dd．，1H，J--8．4，1．6Hz；86．955，d，1H，J=8．4Hz；87．669，d，1H，J-1．6Hz)，说明分子中含有1，3，4三取代苯，即ABX系统，分别为H．2，、H．5’、H．6’的信号。除母核上氢信号外，在63．877、84．105处各出现一个三氢单峰；63．949处出现一个六氢单峰信号，提示有四个甲氧基存在。66．085处出现一个二氢单峰，提示可能有一个亚甲二氧基存在。612．366处出现一个单氢单峰信号，提示为黄酮5位羟基的特征信号。HC-NMR(100MHz，CDCl3)谱中出现20个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，6179．307为黄酮4位羰基的特征信号，由以上核磁谱图数据可知该化合物可能为黄酮类化合物。6101．777为一个亚甲二氧基的碳信号。经过以上推断，并与文献【87】对照基本一致，确定为5．羟基．3，6，7，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(6-hydroxy-3，6，7，8tetramethoxy．3’，4’．methylenedioxyflavone)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY．8-淡黄色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现3个芳香氢信号(87．772，dd，1H，J-8．4，1．6Hz：86．952，d，1H，J---8．4Hz：87．679，d，lH，J=1．6Hz)，说明分子中含有1，3，4三取代苯，即ABX系统，分别为H．2’、H．5’、H．6’的信号。除母核上氢信号外，在63．877、83．944、63．963、63．995处各出现一个三氢单峰，提示有四个甲氧基存在。66．068处出现一个二氢单峰，提示可能有一个亚甲二氧基存在。64．754(2H，d，J=7．2Hz)、65．575(1H，m)、61．744(3H，s)、61．789(3H，s)由这一组氢推断黄酮母核上有一连氧异戊烯基取代。13C-NMR000Mnz，CDCl3)谱中出现24个碳信号，其中15个碳为黄酮母核上的碳信号，8173．931为黄酮4位羰基的特征信号，由以上核磁谱图数据可知该化合物可能为黄酮类化合物。6101．629为一个亚甲二氧基的碳信号。经过以上推断，并与文献【蚓对照基本一致，确定为7．异戊烯氧基．3，5，6，8．四甲氧基．3’，4’·亚甲二氧基黄酮(7．(3．Methyl．but．2-enyloxy)-3，5，6，8-tetramethoxy-3’，4’ 2蜜茱萸地上部分化学成分研究·methylenedioxyflavone)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY-9：黄色块晶(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇：与改良碘化铋钾反应显橙黄色，说明为含氮化合物。(+)ESI．MSm／z：284【M+H】+，提示分子量为283(见Fig．3．2)，进一步说明分子中含有氮原子。1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现4个芳香氢信号(68．463，d，J--7．2Hz，1H；67．375，d，J--8．4Hz，1H；67．617，d，J=8．4，1．2Hz，1H；67．238，d，J=7．6，1．6Hz，1H)，说明分子中含有一个邻位二取代苯。66．648处出现一个单氢信号，推断可能有一个五取代苯。”C-NMR(100MHz，CDCl3)谱中出现6176．753羰基信号。由此推断化合物可能为吖啶酮类生物碱。66．023处出现一个二氢单峰信号，提示可能含有一个亚甲二氧基片段。64．154、63．753处各出现一个三氢单峰信号，而碳谱中高场碳出现在661．012、635．151，由此推断有一ocn3和-NCH3片段。以上数据和吴茱萸黄碱的核磁数据非常相似。不同的是该化合物碳谱中仅显示15个碳，与吴茱萸碱的16个碳不符。HMQS谱显示C．6(6132．635)与H一6(67．617，d，J--8．4，1．2Hz，1H)直接相连，但HMBC谱显示6132．635与H-4(66．648，s，1H)以及2，3位取代亚甲二氧基(66．023，s，2H)远程相关，由此推断C．6与C．2信号重叠。经过以上推断，并与文献【89】对照基本一致，确定为吴茱萸黄碱(Evoxanthine)。为该植物中首次分离得到的化合物。多86．。94·I13。6·ill637．．322lr41Fig．2．2The(+)ESI-MSofMZY·9 2蜜茱萸地上部分化学成分研究化合物MZY．10：白色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯；1H-NMR(400MHz，CDCl3)显示：具有甾体化合物的特征，85．692(1H，d，J-1．2Hz)为1个双键氢，83．673(IH，m)为1个连氧的氢，在62．521—1．00内存在典型的“扫帚峰"为甾体骨架上的亚甲基和次甲基的信号重叠产生，60．8l~0．93(3H×4)为C．21、C．26、C．27、C．29四个甲基的系列峰：80．786(3H，s)、81．568(3H，s)为两个角甲基的氢信号，13C-NMR000MHz，CDCl3)显示：低场8202．254为羰基C，8165．001、8126．158为双键C，提示化合物中有一个羰基，两个双键，870．562为连氧C。经过以上推断，并与文献【90J对照基本一致，确定为3B．hydroxystigmast．5．％．7．one。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY．11：黄色晶体(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；氯仿溶解后，黄色溶液呈现出蓝光，紫外灯下254nm显强荧光蓝；与改良碘化铋钾反应显橙黄色，说明为含氮化合物。(+)ESI-MSm／z：286[M+H】+，提示分子量为285，进一步说明分子中含有氮原子(见图Fig．3．3)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)、13C-NMR000MHz，CDCl3)谱中显示信号与MZY．9相似。推断化合物为吖啶酮类生物碱。64．027、63．936、63．854处各出现一个三氢信号，碳谱中高场碳出现在660．825、656．030、634．143，由此推断有两个．OCH3和一个-NCH3片段。经过以上推断，并与文献【91】对照基本一致，确定为三柑子碱(Arborinine)。为该植物中首次分离得到的化合物。284．0839l¨_加一^一Fig．2．3The(+)ESI-MSofMZY-1124 2蜜茱萸地上部分化学成分研究化合物MZY．12：白色固体(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；遇FeCl3-K3[Fe(CN)6】试剂显棕色，久置显蓝色，说明含有酚羟基；与改良碘化铋钾反应显橙黄色，说明为含氮化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现四个氢信号g其中两个单氢信号(67．48，S，1H；87．34，S，1H)，推测为苯环上对位氢。即结构中含有一个四取代苯环片段。另两个氢信号(87．576，d，J=2．4Hz，1H)87．052，d，J--2．8Hz，1H)为呋喃环上双键H．2，和H．3’的特征信号。64．445、84．030、64．028处各出现一个三氢信号，推断有三个甲氧基片段。经过以上推断，结合”C-NMR(数据见实验部分)数据与文献192]对照基本一致，确定为香草木宁(Kokusaginine)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY．13：白色油状物(EtOAc)，易溶于石油醚、氯仿、乙酸乙酯；1H-NMR(400Mnz，CDCl3)谱中显示：85．346为一双键H，83．493为连氧C上的，61．353～61．256(36H)为13个亚甲基的峰，80．835"80．896(10H)，81．625(3H)，82．004(3H)，82．347(3H)为5个甲基峰。结合13C椭偶中显示的8179．009酯羰基峰，与文献【lloJ对照基本一致，确定为Phytylhexadeeanoate为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY-14：透明块晶(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇：与改良碘化铋钾反应显橙黄色，说明为含氮化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示g芳香区出现两个单氢信号(87．443，d，J=8．8，1H；86．846，d，J--8．8，1H)，推测为苯环上邻位氢。即结构中含有一个四取代苯环片段。63．953、63．939、63．912处各出现一个三氢信号，推断有三个甲氧基片段。83．354(2H，d，J=6．4Hz)；85．269(1H，m)、81．691(3H，s)：81．797(3H，s)由这组氢推断结构中含有一个异戊二甲基片段。69．014(1H，brs)为-NH．氢信号。经过以上推断，结合13C-NMR(数据见实验部分)数据与文献【93,941对照基本一致，确定为原茵芋碱(Preskimmianine)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY．16(新化合物)：黄色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；遇FeCl3．K3[(FeCN)6]试剂显棕色，久置显蓝色，说明含有酚羟基；盐酸．镁粉反应阳性，说明为黄酮类化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)显示g芳香区出现3个质子氢信号，分别为87．779(1H，dd，J-1．6，8．4Hz)，87．673(1H，d，J_1．6I-Iz)和86．963(1H，d，J=8．4Hz)属于ABX系统，说明 2蜜茱萸地上部分化学成分研究B环3’、4’连有取代基，A环上的氢均被取代。81．753(3H，s)和81．790(3H，s)为两个甲基信号，85．582(IH，m)为双键上的氢信号，84．773(2H，d，J--7．2Hz)为连氧亚甲基的两个氢信号，由此可以推断有一连氧异戊烯基片段。除此之外，86．082(2H，s)为亚甲二氧基的亚甲基信号，83．947(6H，s)和83．876(3H，s)为三个甲氧基氢信号。13C-NMR(100MHz，CDCl3)谱在100．--185之间有18个碳信号，其中6101．770为亚甲二氧基的特征碳信号。根据HSQC和HMBC谱找到连氧异戊烯基双键氢85．582(1H，m)对应的碳为：6120．025，以及双键另一个碳对应的信号为：6139．430。(见Fig．2．4、Table2．1)除去这三个碳，其余15个低场碳为黄酮母核上的15个碳信号。其中179．345为黄酮类化合物4位羰基的特征信号。根据HMBC谱找到与连氧异戊烯基相连的碳信号为152．092，黄酮母核上的只有7号碳被含氧基团取代才可能出现这么高场的峰。根据以上数据可以推断化合物16为7．异戊烯氧基．5．羟基．3,6，8．三甲氧基．3r,4’-亚甲二氧基黄酮((7—3·Methyl-but-2-enyloxy)-5-hydroxy·3，6，8-trimethoxy-3’，4"-methylenedioxyfla-vonc)。Fig．2．4The吼玎I曲矾andHMBCcorrelationofMZY-16Table2．1ThespectraldataofMZY-16 l’2’3’4’5’2”3"4’，5”6”3-OMe6-oMc8-OMe3’，4’-OCH20·5-OH124．362C．．．⋯7．673(1H，d，J124．362，148．086，108．5∞II．6蚴CH150．047‘148．086C150．047C6．963(1H·d·J148．086，150．047，108．636⋯．CH7．779-8．4Hz)124．3627．779(1H，dd，108．636，150．047．123．833．．CH6．963J11．6．8．4Hz)155．616⋯。。⋯，．4．773(2H，d，J⋯．139．430，152．092，5．582，1．753，70．662CH2’。。’一’-7．2Hz)120．0251．790120．0255．582(1H，m)CH18．047，25．849，70．6624．773139．43C18．0471．753(3H，s)CH3139．430，120．0255．58225．8491．790(3H，s)CH3139．430，120．0255．58260．1613．876(3H，s)CH3138．80262．0173．947(3H，s)CH3136．86661．0633．947(3H，s)CH3133．533101．776．082(2H，s)CH2148．086．150．047107．644，136．866。12．342(1H．s)NMRdataWgl"fmeasuredinCDCl3at400IVlHzforprotonandat100MHzforcarbon．TheassignmentsbasedonDEPT，HSQCandHMBCexperiments．_’II—■叩．．卜●I棚Fig．2．5The(+)ESI-MSofMZY-1627 2蜜茱萸地上部分化学成分研究化合物MZY．17：白色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯；1H-NMR(400MHz，CDCl3)显示：具有甾体化合物的特征，85．352(1H，d，J=5．2Hz)为1个双键氢，／i3．354(1H，m)为1个连氧的氢，在82．321—1．00内存在典型的“扫帚峰"为甾体骨架上的亚甲基和次甲基的信号重叠产生，60．81~0．93(3HX4)为C．21、C-26、C一27、C-29四个甲基的系列峰；80．699(3H，s)、81．000(3H，S)为两个角甲基的氢信号，13C=NMR(100MHz，CDCls)显示：低场8140．759、G138．330、8129．268、8121．731为双键C，提示化合物中有两个双键，871．817为连氧C。经过以上推断，并与文献【舛】对照基本一致，确定为豆甾醇(Stigrnaster01)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY．18：无色透明晶体(EtOAe)，溶解性不佳，氯仿甲醇混合溶液中溶解度较好。在TLC分析，紫外下无吸收(254nm、365nm)，与B．谷甾醇对照品在3种不同溶剂系统下共薄层展开，两斑点Rf值均一致，显色颜色一致，混合斑点均为一个斑点。结合理化性质鉴定MZY．18为B．谷甾醇(13-sitoster01)·化合物MZY．19：黄色晶体(EtOAe)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；与改良碘化铋钾反应显橙黄色，说明为含氮化合物。1H-NMR(400MHz，CDCh)、13C-NMR(100MHz，CDCIa)谱中显示信号与MZY．9相似。推断化合物为吖啶酮类生物碱。63．921、63．841处各出现一个三氢信号，碳谱中高场碳出现在655．631、634．120，由此推断有两个．OCH3和一个-NCH3片段。经过以上推断，并与文献【19】对照基本一致，确定为1．羟基．3．甲氧基．10．甲基．10H．氮葸．9．酮。(1-Hydroxy．3-methoxy-10-methyl一10H-aeridin．9-one)。为该植物中首次分离得到的化合物。化合物MZY．20：淡黄色粉末(EtOAc)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇；与改良碘化铋钾反应显橙黄色，说明为含氮化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)谱中显示：芳香区出现四个氢信号：68．469(dd，J--8．0，1．6Hz，IH)，67．365(t，J=7．6Hz，1H)，67．680(ddd，J=7．2，7．2，1．2Hz)，67．517(dd，J=8．4，2．4Hz，1H)由此推断结构中含有一个邻位二取代苯片段。63．756、62．498处各出现一个三氢信号，13C-NMR(100MHz，CDCl3)中高场碳出现在634．313、622．203，由此推断有两个-NCH3和一个-CH3片段。碳谱低场中出现6177．669羰基特征信号。推断化合物为喹啉酮类生物碱。经过以上推断，并与文献阳对照基本一致，确定为l，2．二甲基喹啉4酮(1,2-dimethylquinolin-4-one)。为该植 2蜜茱萸地上部分化学成分研究物中首次分离得到的化合物。2．3实验部分2．3．1仪器与材料仪器：DPX．400核磁共振仪(TMS为内标)，BrukerDaltonies质谱仪(HR．ESI．MS)，WRS．1B数字熔点仪(未校正)，真空薄膜浓缩装置【粥】(自装)，SHZ--D(III)型循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂生产)，KQ．250B超声波提取器(江苏昆山超声仪器有限公司)；材料：柱色谱填充剂DiaionI-IP．20、ToyopearlHW-40、MCI．GEL均系日本三菱公司生产，SephadexLH．20为ParmaciaBioteck公司生产，RPl8为日本YMC公司生产；柱色谱所用硅胶(青岛海洋化工厂生产，颗粒范围160"-"200目，200"-"300目)，薄层色谱用硅胶GF254(青岛海洋化工厂生产，颗粒范围10,-一40tt)。所有试剂均为分析纯；显色剂：紫外灯(254mn，365nm)，碘蒸气，5％磷钼酸乙醇溶液，I％FeCl3．1％K3【(FeCN)6】试剂(1：1)临用鲜配，改良碘化铋钾溶液；溶剂系统：石油醚／乙酸乙酯(不同比例)，石油醚／丙酮(不同比例)，乙酸乙酯／乙醇／水(上层，不同比例)，石油酣乙酸乙酯／甲酸(不同比例)，氯仿／甲醇(不同比例)，氯仿／甲醇／水(不同比例)，BAW系统；药材：蜜茱萸地上部分(9．7kg)，2008年采自中国海南省三亚，经海南大学植．物分类学教授黄世慢鉴定为芸香科蜜茱萸属植物蜜茱萸(Melicopepatulinervia)的地上部分。2．3．2化学成分的分离与纯化蜜茱萸地上部分9．7kg，用粉碎机打成粗粉。用3倍量的70％的甲醇溶液冷浸提取3次，每次3天，抽滤合并滤液。用真空薄膜浓缩装置回收甲醇，浸膏(687g)挥至无醇味，用水打散，用乙酸乙酯萃取，将总浸膏分为乙酸乙酯和水部位。乙酸乙酯部位(250g)，进行硅胶柱层析粗分打段，得到组分Fr．1．Fr．8。流分Fr．2(109)经硅胶柱色谱用石油醚．乙酸乙酯(20：1)洗脱，得到化合物MZY-1(10rag)。流分Fr．5(789)经硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯(15：1)29 FMr．1,mFt．38,Fr．4、I掣掣咩●■-__‘●o_一-_oooro_一—————rFr．7、Fr．8lIFr(糸)．1～Fr(木)．5MZY-2(20rag)MZY-3(98mg)MZY．-4(1245mg)MZY-5(32mg)MZY-6(1ling)MZY-7(17mg)MZY-8(21mg)MZY-10(12mg)MZY二9(Be)rag)M乙Y：1l(120m8)MZY"12(8rag)MZY-13(34rag)MZY-14(98mg)MZY-16(1ling)M乙*19(7mg)MZY-20(8rag) 2蜜茱萸地上部分化学成分研究Fig．2．6TheExtractionandisolationprocedureofchemicalconstituentsfromtheaerialpartsofMelicopepatulinervia2．3．3实验结果通过多种分离与纯化的方法从蜜茱萸地上部位总浸膏乙酸乙酯萃取部位分离得到20个单体化合物，即MZY-I"．，MZY-20。运用各种物理手段和波谱技术对分离得到的20个化合物进行结构鉴定，化合物名称见Table2．2，结构见Fig．2．1Table2．2CompoundsisolatedandidentifiedfromtheaerialpartsofMelicopepatulinervia编号化合物名称M[zY：12N阱13N阱14MzY：．16新化合物M【zY：17(E)-甲基一3·{4-[(E)-3，7-二甲基·2，6-二烯基】氧基苯基)2-丙烯酯((E)-Methyl-3-{4-【(E)-3，7-dimethylocm·2，6-dienyloxy]phenyl}prop-2-enoate)蜜茱萸素(Melitematin)3，5，8．三甲氧基-6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(3，5，8-Trimetlmxy-6，7；3’，4’·dimethylenedioxflavono)3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(Melibentin)5．羟基．3，7，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(5-hydroxy·3，7，8-u"imethoxy-3’，4"-methylenextiox3rflavone)球松素(Pinosu"obin)6．羟基．3，6，7，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(6·hydroxy·3，6，7，8-tetramethoxy-3’，4"-methylenedioxyflavone)7．异戊烯氧基．3，5，6，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7．(3-Methyl-but-2-enyloxy)-3，5，6，8-tetmmethoxy-3’，4’·methylenedioxyfiavone)吴茱萸黄碱(Evoxanthine)3p-hydroxystigrnast-5-en··7··one山柑子碱(Arborinine)香草木宁(Kokusaginine)．Phytylhexadecanoate原茵芋碱(Presldmmianine)7．异戊烯氧基．5．羟基．3。6，8．三甲氧基．37，4’．亚甲二氧基黄酮(7．(3·Methyl·but-2-enyloxy)-5-hydroxy-3，6，8-uSmethoxy·3’，4’·methylenedioxyflavone)豆甾醇3ll23456789MHM阳MNM汜凇汜淞眦泄 (2H，d，J=8．4Hz，2．H)，6．912(2H，d，J--8．8Hz，3．H)，6．912(2H，d，J--8．8Hz，5．H)，7．468(2H，d，J=8．4Hz，6．H)，7．651(1H，d，J-15，6Hz，7．H)，6．308(1H，d，J=16．4Hz，8．H)，3．795(3H，s，．OMe)，4．570(2H，d，J--6．4Hz，1’．H)，5．477(t，1H，J=6．OHz，2’．H)，1．675(3H，s，4’-H)，2．101(4H，m，5’，6’．H)，5．086(1H，m，7’-H)，1．604(3H，d，9’．H)，1．742(3H，s，10’．H)；”C心Mi(CDCl3，lOOHz)6：126．915(1．C)，129．685(2．C)，114．999(3，5．C)，160．709(4．C)，129．685(6．C)，144．605(7．C)，115．058(8．C)，167．825(9．C)，51．587(．OMe)，64．956(1’．C)，118．945(2’．C)，141．733(3’．C)，16．688(4’．C)，39．505(5’．C)，26．218(6’．C)，123．672(7’．C)，131．891(8’．C)，17．700(9’．C)，25．685(10’．C)。化合物MZY-2：蜜茱萸素(Meliternatin)，白色固体(EtOAc)；1H啪(CDCl3，400Hz)6：6．660(s，1H，8．H)，7．572(d，J--2．5Hz，1H，2’·H)，6．925(d，J--8．4Hz，5’．H)，7．641，dd，J=8．8，2．0Hz，1H，6’．H)，3．868(S，3H，3．OMe)，4．133(s，3H，5-OMe)，6．056(S，4H，6，7．OCH20．，3’，4"-0CH20-)；HC小m绿(CDCl3，100Hz)6：152．964(2．C)，140．835(3．C)，173．986(4．C)，152．954(5．C)，134．803(6．C)，153．658(7．C)，92．990(8．C)，150．066(9．C)，113．177(10C)，124．523(1’．C)，108．396(2’．C)，147．875(3’-C)，149．357(4’-C)，108．396(5’．C)，123．822(6’．C)，59．889(3．OMe)，61．228(5．OMe)，101．612(3’，4"-OCH20一)，102．128(6，7．0CH20．)。化合物MZV3：3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4，．二亚甲二氧基黄酮(3，5，8．Trimethoxy-6，7；3’，4"-dimethylenedioxy．tlavone)，白色固体(EtOAc)；32 2蜜茱萸地上部分化学成分研究1H-NMR(CDCls，400Hz)6：7．659(d，J=1．6Hz，1H，J=8．4HZ，5"-H)，7．743，dd，J--8．4，1．6Hz，1H，6’．H)，3．8834．046(s，3H，5-OMe)，4．066(s，3H，8．OMe)，6．056(s，2H，6，7．OCH20．)，6．977(s，2H，3’，4"-OCH20-)；DC-NMR(CDCl3，lOOI-h)6：152．964(2·C)，141．129(3-C)，174．017(4．C)，142．583(5-C)，136．404(6．C)，146．019(7．C)，135．822(8．C)，150．066(9．C)，113．884(10C)，124．717(1’．C)，108．505(2’·C)，147．928(3’．C)，149．436(4’．C)，108．505(5’-C)，123．263(6’．C)，59．840(3—0Me)，61．093(5-OMeor8．OMe)，61．686(5．OMeor8．OMe)，101．612(3’，4"-OCH20一)，102．494(6，7．OCH20．)。化合物MZⅥ：3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(melibentin)，淡黄色块晶(EtOAc)；1H籼(CDCl3，400Hz)6：7．654(d，J=1．6Hz，1H，2’-H)，6．929(d，J=8．4I-Iz，5’．H)，7．740(dd，J=8．4，1．6I-Iz，1H，6’．H)，3．857(s，3H，3-OMe)，4．076(s，3H，5．OMe)，3．950(s，3H，6．OMe)，3．926(s，3H，7-OMe)，3．975(s，3H，8．OMe)，6．050(s，2H，．OCH20．)：”C小讯偶(CDCl3，100Hz)6：152．866(2．C)，137．750(3．C)，173．746(4-C)，149．453(5-C)，143．744(6．C)，151．202(7．C)，140．617(8．C)，148．002(9-C)，114．930(10C)，124．528(1"-C)，108．432(2’．C)，149．453(3’．C)，147．853(4’-C)，108．318(5’一C)，123．224(6’．C)，59．756(3-OMe)，61．563(5-OMe)，62．182(6-OMe)，61．756(7．OMe)，61．935(8．OMe)，101．563(．OCH20．)。，，化合物MZV5：5-羟基．3，7，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(5．hydroxy．3，7，8-trimethoxy-3’，4"-methylenedioxyflavone)，黄色粉末(EtOAe)；1H-NMR(CDCl3，4001-1z)6：6．444(s，IH)，7．654(d，J=1．6I-Iz，1H，2’．H)，6．929(d，J=8．4Hz，5"-H)，7．740(dd，J=8．4，1．6I-Iz，1H，6’．H)，3．857(s，3H，3-OMe)，3．950(s，3H，6-OMe)，3．926(s，3H，7．OMe)，6．050(s，2H，-OCH20-)，12．573(s，5-OH)；¨C-NMR(CDCl3，100Hz)6：148．645(2-C)，138．586(3-C)，179．250(4．C)，149．946(5．C)，127．054(6．C)，155．344(7-C)，130．361(8-C)，148．016(9．C)，105．042(10C)，124．209(1’．C)，108．610(2’-C)，144．776(3’·C)，147．943(4’．C)，108．471(5"-C)，123．683(6’-C)，60．181(3-OMe)，61．047(7-OMeor8-OMe)，61．807(7．OMeor8-OMe)，101．745(．OCH20-)。33 (7．OMe)。化合物MZY-7：5．羟基．3，6，7，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(6一hydroxy一3，6，7，8-tctramethoxy-3’，4’-methylenedioxyflavone)，黄色粉末(EtOAc)：1H心㈣(CDCl3，400Hz)6：7．669(d，J--1．6Hz，1H，2’．H)，6．955(d，J--8．4Hz，5’．H)，7．765(dd，J=8．4，1．6Hz，1H，6’一H)，3．877(S，3H，3．OMe)，3．949(s，3H，6．OMe)，4．105(s，3H，7-OMe)，3．949(s，3H，8-OMe)，6．085(s，2H，·OCH20-)；¨C小mIli(CDCl3，100Hz)6：149．151(2．C)，138．586(3．C)，179．307(4．C)，152．964(5．C)，138．796(6．C)，155．656(7．C)，132．858(8．C)，150．066(9．C)，107．478(10C)，124．290(1’。C)，108．648(2’．C)，144．856(Y-C)，148．086(4’．C)，108．558(5"-C)，123．822(6’．C)，60．173(3．OMe)，61．174(6．OMe)，62．146(7．OMe)，61．723(8．OMe)，101．777(．OCH20-)。化合物MZY-8：7．异戊烯氧基．3，5，6，8．四甲氧基．3’，4，-亚甲二氧基黄酮(。7-(3-Methyl-but-2-enyloxy)-3，5，6，84etramethoxy-3’，4"-methylenedioxyflavone)，淡黄色粉末(EtOAc)；1H-NMR(CDCl3，400Hz)6：7．679(d，J=1．6Hz，1H，2’一H)，6．952(d，J=8．4Hz，5’—H)，7．772(dd，J=8．4，1．6Hz，1H，6’．H)，4．754(d，J=7．2Hz，2H，2”-H)，5．575(m，J=7．2Hz，IH，3”．H)，1．744(S，3H，5”．H)，1．789(S，3H，6”．H)，3．877(S，3H，3．OMe)，3．949(S，3H，3-OMe)，3．944or3．963or3．995(5．OMeor6．OMeor8-OMe)，6．068(S，2H，-OCH20一)；¨C-NMR(CDCl3，100Hz)6：152．954(2．C)，140．768(342)，173．931(4．C)，144．518(5-C)，147．946(6．C)，150．373(7C)，138．602(8C)，146．620(9．C)，115．210(10C)，124．771(1’C)，108．542(2’．C)，147．976(3"-C)，149．546(4’-C)，108．495(5’．C)，123．37034 2蜜茱萸地上部分化学成分研究(6’．C)，70．543(2’’．C)，119．945(3’’．C)，139．515(4’’．C)，18．025("-H)，25．846(6”．H)，59．870(3．OMe)，61．738or61．908or62．253(5．OMe，6．OMe，8．OMe)。化合物MZY-9：吴茱萸黄碱(Evoxanthine)，黄色块晶(EtOAe)，(+)ESI·MSm／z：284【M+H】+；1H悯(CDCl3，400I-"Iz)6：8．463(d，J=7．2Hz，1H，8-H)，7．375(d，J=8．4Hz，1H，5．H)，7．617(d，J=8．4，1．2Hz，6．H)，7．238(d，J=7．6，1．6Hz，1H，7．H)，6．648(s，lH，4．H)，6．023(s，2H，一O．CH20．)，4．154(s，3H，1．OMe)，3．753(s，3H，N．Me)：1jC心咖(CDCls，100Hz)6：143．314(1．C)，132．635(2．C)，153．581(3．C)，89．717(4．C)，114．178(5．C)，132．635(6．C)，121．257(7．C)，127．549(8．C)，176．753(9．C)，142．249(4a．C)，141．482(5a-C)，123．860(8a-C)，111．904(9a-C)，61．012(3．0Me)，35．15l(N．Me)，101．710(．OCH20．)。化合物MZY-10：3B-hydroxystigmast⋯5cn7·one，白色粉末(EtOAc)”C小M℃(CDCl3，100Hz)6：36．377(1．C)，31．235(2．C)，70．562(3．C)，41．840(4．C)，165．001(5．C)，126．158(6．C)，202．254(7．C)，45．444(8．C)，49．976(9．C)，38．296(10．C)，21．247(11．C)，38．736(12．C)，41．840(13．C)，49．976(14．C)，26．341(15．C)，28．566(16．C)，54．748(17．C)，11．990(18．C)，17．330(19．C)，36．103(20．C)，18．945(21．C)，36．103(22．C)，23．086(23．C)，38．736(24．C)，28．566(25．C)，21．247(26．C)，19．805(27．C)，25．417(28．C)，12．262(29．C)。．化合物汜Y．1l：山柑子碱(Arborinine)，黄色晶体(EtOAc)，(+)ESI—MSm／z：286D订+H】十；1H悯(CDCl3，400Hz)6：8．458(dd，J=8．0，1．6Hz，1H，8．H)，7．287(t，J=7．6Hz，1H，7-H)，7．733(ddd，J=7．2，7．2，1．2Hz，6．H)，7．518(dd，J=8．4，2．4Hz，1H，5一H)，6．292(s，1H，4．H)，4．027(s，3H，2．OMe)，3．936(s，3H，3-OMe)，3．8543(s，3H，N．Me)，14．755(s，1H，1．OH)；uCjNMR(CDCl3，100Hz)6；156．294(1．C)，130．258(2．C)，159．359(3·C)，86．740(4一C)，114．558(5-C)，133．975(6-C)，121．528(7．C)，126．724(8．C)，180．882(9．C)，140．587(4a．C)，142．072(5a．C)，120．845(8a-C)，105．882(9a．C)，56．030(3-OMe)，60．825(3-OMe)，34．143(N．Me)。化合物MZY．12：香草木宁(Kokusaginine)，白色固体(EtOAc)；1H．NMR35 2蜜茱萸地上部分化学成分研究(CDCh，400Hz)6：7．490(s，lH，5．H)，7．342(s，1H，8．H)，7．576(d，J--2．4Hz，1H，2’．H)，7．052(d，J--2．8Hz，1H，3’．H)，4．445(s，3H，4．OMe)，4．028(s，1H，6-OMeor7一OMe)，4．030(s，3H，6．OMeor7-OMe)；¨C啪(CDCl3，100Hz)6：163．149(2．C)，113．024(3．C)，155．607(4．C)，100．274(5．C)，152．665(6．C)，147．864(7．C)，106．816(8．C)，102．282(4a．C)，142．502(8a-C)，142．502(2’．C)，104．615(3’．C)，58．901(4．OMe)，56．062(6．OMe)，56．028(7一OMe)。化合物MZVl3：Phytylhexadecanoate，白色油状物(EtOAc)；1H棚(CDCll，400Hz)6：5．346(t，J=7．6Hz，2-H)，3．493(s，1．H)，61．353～81．256(m，36H)，60．835～60．896(m，10H)，81．625(nl，3H，3a-H)，82．004(m，3H，4．H)，82．347(t，3H)；¨C二NMR(CDCl3，100Hz)6：179．009(a)，34．419(b)，14．114(c)，129．745(2)，130．043(3)，36．661(4)，24．708(5)，36．542(6)，31．939(7)，36．661(8)，24．708(9)，36．661(10)，33．883(11)，36．661(12)，24．708(13)，36．661(14)，29．048(15)，16．634(3a)，19．239(7a，11a)，22．700(15a，16)。化合物MZY-14：原茵芋碱(Preskimmianine)，透明块晶(EtOAe)；1H二N^傈(CDCl3，400Hz)6：7．443(d，J=8．8Hz，lH，5．H)，6．846(d，J=8．8Hz，1H，6．H)，3．354(d，J=8．8Hz，2H，l’．H)，5．269(m，1H，2’．H)，1．691(s，3H，4’．Me)，1．797(s，4H，5’．Me)，9．014(s，1H，NH)：乃C小Mi(CDCl3，100Hz)6：1“．286(2．C)，120．656(3．C)，161．874(4．C)，118．535(5．C)，107．414(6．C)，147．864(7．C)，106．816(8．C)，112．037(9．C)，142．502(8a-C)，23．409(1’．C)，121．606(2’．C)，132．396(3’-C)，25．720(4’．C)，18．009(5’．C)，56．100(4．OMe)，61．775(7．OMe)，60．961(8-OMe)。化合物MZVl6：7．异戊烯氧基．5．羟基．3，6，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7一(3-Methyl-but-2-enyloxy)-5-hydroxy·3，6，8-trimethoxy-3’，4"-methylenedioxyflavone)，黄色粉末(EtOAc)，(+)ESI—MSm／z：284[M+H】+；1H心懈(CDCl3，400Hz)6：7．779(1H，dd，J=1．6，8．4Hz，6’-H)，7．673(1H，d，J=1．6Hz，2’．H)，6．963(1H，d，J--8．4I-lz，5’-H)，6．082(2H，s，．OCH20．)，3．947(6H，s，6，8．OMe)，3．876(3H，s，3-OMe)，4．773(2H，d，J音7．2Hz，2”．H)，5．582(1H，m，3”．H)，1．753(3H，s，"-H)，1．790(3H，s，6”．H)，12．342(1H，s，5．OH)：”C小咖i(CDCIs，100Hz)6：36 2蜜茱萸地上部分化学成分研究155．616(2．C)，138．802(3-C)，179．345(4．C)，149．012(5-C)，136．866(6．C)，152．092(7．C)，133．553(8-C)，144．800(9．C)，107．644(10．C)，124．362(1’．C)，108．583(2’-C)，148．086(3"-C)，150．047(4’．C)，108．636(5"-C)，123．833(6’．C)，60．161(3-0Me)，62．017(5．OMe)，61．063(8．0Me)，101．770(3’，4’．OCH20．)，70．662(2”-C)，120．025(3”．C)，139．430(4”．C)，18．047(5”．C)，25．849(6”．C)。化合物MZVl7：豆甾醇(Stigmaster01)，白色粉末(EtOAc)”C椭保(CDCl3，100Hz)6：37．254(1．C)，31．666(2．C)，71．817(3．C)，42．215(4．C)，140．759(5．C)，121．731(6．C)，31．903(7．C)，31．666(8．C)，51．242(9．C)，36．508(10．C)，21．053(11．C)，39．680(12．C)，42．215(13．C)，56．867(14．C)，24．306(15．C)，28．930(16．C)，55．942(17．C)，11．865(18．C)，19．405(19．C)，40．509(20．C)，21．221(21．C)，138．330(22．C)，129．268(23．C)，50．127(24．C)，31．903(25．C)，21．086(26．C)，19．033(27．C)，25．417(28．C)，12．262(29．C)。化合物汜Y-18：p．谷甾醇(13．sitoster01)，无色透明晶体；仅TLC对照，未打谱。化合物MZY．19：1．羟基．3．甲氧基．10．甲基．10H．氮葸．9酮(1-Hydroxy．3．methoxy-10-methyl．10H-aeridin一9-one)，黄色晶体(EtOAc)；1H椭偶(CDCl3，400Hz)6：8．498(dd，J=8．0，1．6Hz，1H，8．H)，7．303(t，J--7．6Hz，1H，7-H)，7．736(ddd，J=7．2，7．2，1．2Hz，6．H)，7．513(dd，J=8．4，2．4Hz，1H，5一H)，6．339(s，2H，2．Hand4．H)，3．921(s，3H，3．OMe)，3．814(S，3H，N-Me)，14．840(s，1H，1．OH)：1jC二NMR(CDCl3，100Hz)6：166．139(1-C)，90．160(2．C)，166．139(3．C)，94．049(4．C)，114．494(5．C)，134．115(6一C)，121．484(7．C)，126．887(8．C)，180．898(9．C)，142．514(4a．C)，144．836(5a．C)，121．172(8a．C)，105．882(9a．C)，55．631(3．OMe)，34．120(N．Me)。化合物MZY-20：1，2．二甲基喹啉．4．酮(1，2-dimethylquinolin-4．one)，淡黄色粉末(EtOAc)：1H．NMR(CDCl3，400Hz)6：8．469(dd，J-8．0，1．6Hz，1H，5．H)，7．365(t，J=7．6Hz，1H，6-H)，7．680(ddd，J=7．2，7．2，1．2Hz，7-H)，7．517(dd，J=8．4，2．4Hz，1H，8·H)，6．275(s，1H，3．H)，3．756(S，3H，N·Me)，2．498(s，3H，2-CH3)；13C小iMR(CDCl3，100Hz)6：150．972(2．C)，111．866(3．C)，177．669(4-C)，126．796(5．C)，123．378(6．C)，132．12737 2蜜茱萸地上部分化学成分研究(7．C)，115．130(8．C)，141．786(9．C)，126．576(10．C)，22．203(2一Me)，34．313(N．Me)。2．4本章总结首次对分布于海南三亚的蜜茱萸地上部分进行了化学成分研究，从中分离并鉴定了19个化合物，分别为：(E)一甲基．3．{4．[(E)．3，7．二甲基-2，6-二烯基]氧基苯基)．2．丙烯酯(MZY．1)，蜜茱萸素(MZY．2)，3，5，8-三甲氧基一6，7：3，，4，．二亚甲二氧基黄酮(MZY．3)，Melibentin(MZY-4)，5·羟基-3，7，8．三甲氧基．3，，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．5)，球松素(MZY-6)，5-羟基·3，6，7，8．四甲氧基．3’，4，．亚甲二氧基黄酮(MZY．7)，7一异戊烯氧基-3，5，6，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY-8)，吴茱萸黄碱(MZY-9)，(比Y一10)，山柑子碱(MZY．11)，香草木宁(MZY．12)，(MZY．13)，原茵芋碱(MZY．14)，(MZY．15)，7．异戊烯氧基．5．羟基．3，6，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．16)，豆甾醇(MZY．17)，1．羟基．3．甲氧基．10．甲基．10H．氮葸．9．酮(MZY．19)，l，2．二甲基喹啉-4．酮(MZY．20)。所有化合物均首次从该植物中分离得到，其中MZY．16为新化合物。 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量测定3蜜茱萸化学成分的含量测定及色谱分析虽然到目前为止，国内外对蜜茱萸化学成分、药理作用、入药方面的研究报道未见。但在我们对蜜茱萸化学成分的分离提取过程中发现，蜜茱萸化学成分主要为黄酮和生物碱，均为具有广泛药理活性的化学成分类别。蜜茱萸中所含黄酮有个典型特征即多甲氧基黄酮(PMFs)，国内雷海民课题组及王志斌【鲫以嗍课题组对与蜜茱萸同科柑橘属多甲氧基黄酮的研究表明，多甲氧基黄酮具有明显的抗肿瘤活性。本实验首次建立Ⅷ，LC法同时测定蜜茱萸叶和茎中7个主要活性成分的含量测定方法，即MZY-9、MZY-12、MZY-11、MZV3、MZY-2、MZY-14、MZ¨(即肿LC色谱图中1．7)。3．1仪器与材料仪器：WatersHPLC(Waters2695)高效液相色谱仪系统，配备二元溶剂管理器、自动进样器、Waters2996PDA二极管阵列检测器、二元高压泵，色谱工作站，MilliporeSimplicity型超纯水器(Millipore公司)，AUTOSCIENCE溶剂过滤装置，舒美KQ2200DE数控超声仪。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。药材：蜜茱萸药材采自中国海南省三亚，由海南大学植物分类学教授黄世满鉴定为芸香科(Rutaceae)蜜茱萸属植物蜜茱萸(melicopepatulinervia)的叶和茎。样品经40℃干燥，粉碎，过60目筛备用。对照品：均为自行提取精制，并经1H-NMR，13C．NMR鉴定结构，经HPLC检测，归一化法计算纯度均大于98％。3．2方法与结果3．2．1溶液的制备对照品储备液：精密称取1、2、3、4、5、6、7适量，分别置于5ml容量39 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量测定瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得质量浓度分别为0．704nag·L-10．342mg·L．1、0．262mg·L～、0．4796mg·L～、0．2814mg·L～、0．0475nag·L～、0．700mg·L-1的对照品储备液，将7种对照品储备液分别取1．0ml、1．3ml、0．9ml、0．4ml、0．3ml、1．0ml、1．0ml容量瓶中，用甲醇定容，即得混合对照品溶液。微孔滤膜(O．45j上tn)滤过。避光低温保存。供试品溶液：精密称取干燥恒重并过60目筛的蜜茱萸叶和茎粉末约1．0g，精密称定，分别用25mL的70％甲醇超声提取三次，每次提取20rain，静置过滤，合并滤液，于45℃真空浓缩至成干粉后，用甲醇定容于10mL量瓶中，微孔滤膜(O．45岫)滤过，即得供试样品。3．2．2色谱条件色谱柱：SunFire—C18柱(4．6ramx250ram，51ma)；流动相：甲醇·水，检测波长254nm，柱温28。C，梯度洗脱，见Table．3．1。在该色谱条件下，各相邻色谱峰之间的分离度均大于1．5，理论踏板数均大于30000，满足定量要求。色谱图见Fig．3．1’Tab．3．1Theratiosettingofmobilephasel勺黾∞30．∞36．0040．0046．00瓢∞鸶．∞60．00弱．∞70．00历．∞80．0085．∞弧A 一篇．∞∞．∞∞，∞∞．∞46．00瓢∞56．∞60∞∞．∞70．0075．0080．0085．00S0．00B√L几～3～一一受§受§6又．．。．．J2fk0030．00筠舶40．00艏舯80．00甑∞∞．00舐∞70．0075．0080∞．娩∞鞭CCI：MZY-9；2：MZY-12；3：MZY-11；4：MZY-3；5：MZY-2；6：MZY-14；7：MZY-4Fig．3．1HPLCChromatogramofreferencesubstances(A)，stems(B)，leaves(C)3．2．3线性关系考察用“3．2．2"项下的色谱条件，对混合对照品溶液分别进样5、10、15、20、25、30此进行分析，并记录峰面积。以进样样品的含量(腿)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，线性回归方程及相关系数见Table3．4，表明三种黄酮(4、5、6)，四种生物碱(1、2、3、6)的线性关系良好。Table3．2Calibrationcurvesandcorrelationcoefficientsofsevencomponentsinthemixedreferencefluid(n．=6)编号成分回归方程r线性范围(components)(regressionequation)(1inearrange)／ag番草木宁(Kokusaginine)山柑子碱(Arborinine)Y-1．16x10’X．3．34x10s0．99980．3626-2．4590Y-1．15x107X．2．21x1050．99980．1351--0．9281Y"5．13x107X．7．17x1050．99990．2443。1．0807 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量测定3，5，8---甲氧基-6，7；3’，4"--"亚甲二5氧基黄酮(3，5，8-Trimethoxy-6，7；3·，Y．昌4．45xlOeX．2．04xlOs0．99950．0458．．-0．70484"-dimethylenedioxflavone)6原茵芋碱(Prcsldmmilmine)Y=4．95x10eX-6．89x10．0．99970．0252,,．0．183373，5’6’2．!垩甲氧基。3’，4’-亚甲二氧Y：4．07。106X．1．ol。105o．99980．3632．2．4783基黄酮(Melibentin)3．2．4精密度实验7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(4)、蜜茱萸素(5)、原茵芋碱(6)、3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7)的RSD分别为1．12％、1．82％、1．64％、1．09％、0．93％、1．53％和1．42％(戚)，表明仪器精密度良好。3．2．5重复性实验取蜜茱萸叶，按“3．2．1”项下制备供试品溶液的方法，照“3．2．2”的色谱条件进样分析，分别求得吴茱萸黄碱(1)、香草木宁(2)、山柑子碱(3)、3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(4)、蜜茱萸素(5)、原茵芋碱(6)、3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7)的RSD分别为0．30％、0．90％、2．90％、1．78％、1．92％、2．81％和2．87％(n16)。3．2．6稳定性实验取蜜茱萸叶，按“3．2．1"项下供试品溶液制各方法制备供试品溶液，室温放置2、8、16、24、32、48h后，照“3．2．2”项下的色谱条件进样分析，分别求得吴茱萸黄碱(1)、香草木宁(2)、山柑子碱(3)、3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(4)、蜜茱萸素(5)、原茵芋碱(6)、3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7)峰面积的RSD分别为0．49％、0．74％、2．29％、1．88％、2．“％、2．47％和2．06％。结果表明供试品溶液在48h内稳定。42 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量测定3．2．7加样回收率取已测定吴茱萸黄碱(1)、香草木宁(2)、山柑子碱(3)、3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(4)、蜜茱萸素(5)、原茵芋碱(6)、3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7)含量的蜜茱萸药材粉末9份，每份约1．Og，精密称定后，加入一定量的混合对照品溶液，按“3．4．2．1和3．4．2．2"项下方法制各样品溶液并进行含量测定。结果表明吴茱萸黄碱(1)、香草木宁(2)、山柑子碱(3)、3，5，8．三甲氧基．6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(4)、蜜茱萸素(5)、原茵芋碱(6)、3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(7)的平均回收率分别为92．78％，98．91％，105．39％，104．92％，105．93％，103．12％和95．69％(n芦3)。3．2．8样品测定分别取蜜茱萸叶和茎约1．0g，精密称定，按“3．2．1”项下制备供试品溶液的方法，按“3．2．2”项下的色谱条件进样分析，分别计算6种有效成分的百分含量，结果见Table3．3。Table3．3ThecontentsofsevencomponentsinstemandleaveofMelicopepatulinervia(n=3)3．3讨论(1)供试品溶液制各方法的确定分别考察了不同的提取溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、75％甲醇)和不同的提取方法(超声法、浸提法、回流法、冷侵法、渗漉法)，采用正交实验设计，确定了蜜茱萸中总黄酮成分的最佳提取方法，即：分别用25mL的75％甲醇超43 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量测定声提取三次，每次提取20rain。(2)检测波长的选择鉴于本实验检测的7个成分中，三个黄酮成分具有相同的母核骨架，紫外吸收光谱基本一致，在250am、350nto附近有两个强吸收带，并且在254nm处吸收最强。四个生物碱中香草木宁、原茵芋碱在250hm附近有强吸收。而吴茱萸黄碱、山柑子碱的紫外吸收光谱在270hm附近有一个强吸收带。为保证7种成分都具有适宜的灵敏度和精密度，最终选择了254nm作为测定波长，基线平稳，7个成分达到完全分离。(各化合物紫外吸收光谱见Fig．3．7)0．30"j299．8j／＼乏n20-}／＼：‘：刍芍／L鬯一笋0．0刚一一．．一一‘====一一0．04J|338．7乏⋯o一247．3，／／一＼＼o．哆—＼／7。＼O．1纠249．7j／1乏nq／＼o·o纠一／I307．7320．8o．ooj一兰．∑竺I／‘、—^、2∞．∞300．∞3∞．∞纳米3乏麓波尺、o．01正、7一、、、／＼O．O峨．．．．．．．．≥＼＼v一呻叫叫哩一∞裟2∞懈4∞ 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量测定O乏oOO．乏：O．Fig．3．2TheultravioletabsorptionspecmⅡnofcompounds1-7(3)流动相的选择‘在选择流动相时，比较使用了甲醇．水和甲醇．磷酸水溶液，加酸后对分离度、峰型影响不大。并且在实验中发现本实验检测的七个成分极性差别非常大，采用等度洗脱所用时间过长，且分离效果不好。因此采用甲醇．水梯度洗脱。(4)柱温的选择实验中发现柱温对七个成分的分离效果影响最大。将柱温分别控制在24℃、28℃、32℃、36℃进行试验。当柱温保持在30℃以上时，各个成分出峰时间提前并且存在相互堆叠的现象，虽然调低流动相比例和流速，可以使各成分勉强分开，但拖尾严重，因此色谱柱温度设置为28℃。(5)测定结果分析本实验以七个成分为研究对象，对蜜茱萸不同部位的有效成分的含量进行了考察。从测定结果可以看出，同一成分在蜜茱萸不同部位中以及同一部位中各成分的含量差异较大。总体来说，叶中有效成分含量较丰富，茎中含量较少。叶中吴茱萸黄碱含量最高，占叶干重的0．2706％；茎中含3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮最高，含量达茎干重的O．0354％。3．4本章小结以从蜜茱萸中分离得到的化合物为对照品，建立了同时测定蜜茱萸中3种黄酮(蜜茱萸素(MZY-2)、3，5，8-三甲氧基-6，7；3’，4’-二亚甲二氧基黄酮(MZY-3)、3，5，6，7，8-五甲氧基-3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY珥))，4种生物碱(吴茱萸黄碱(MZY-9)、香草木宁(MZY-12)、山柑子碱(MZY-11)、∞||；l7∞詈il6∞ 3蜜茱萸中活性物质的色谱分析及七个活性成分的含量’铡定原茵芋碱(MZY-14))的HPLC分析方法。发现蜜茱萸叶中所含7个化合物远高于茎中的；测得叶中吴茱萸黄碱含量最高，占花干重的0．2706％；茎中含3，5，6，7，8．五甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮最高，含量达茎干重的0．0354％。本实验所建立方法为蜜茱萸该类成分的HPLC定量分析工作奠定了基础。 4蜜茱萸提取物总黄酮和总多酚含量测定4蜜茱萸提取物总黄酮和总多酚含4．1概述蜜茱萸Melicopepatulinervia(Merr．&Chun)Huang为或乔木，是海南岛特有的珍惜濒危植物汹3。国内外学者对蜜茱萸属植物化学成分、药理作用、分析方法等方面均有报道。但我国蜜茱萸植物总黄酮和总多酚的研究报道未见。由于多酚类和黄酮类化合物具有显著的生物活性№1删，在抗诱变、抗肿瘤、抗病毒抗微生物、抗衰老、抗氧化等很多方面具有良好的作用。因此，本论文对其总多酚和总黄酮的含量及其抗氧化抗菌活性进行了研究。利用紫外分光光度法，在单因素试验的基础上，采用b(34)正交试验，以提取物总黄酮、总多酚的含量作为考察指标，优选提取工艺为：提取时间20rain，提取次数：3次，提取温度室温，甲醇浓度75％，液料比l：25(g·皿。1)。4．2总黄酮、总多酚含量的测定4．2．1仪器与材料仪器：FE220型中型粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司)，UV-2102PCS紫外可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)，101．3电热鼓风恒温干燥箱(杭州蓝天化验仪器厂)，旋转蒸发仪(上海申胜生物科技有限公司)，KQ．250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，移液枪(北京青云卓立精密设备有限公司)。材料：没食子酸(中国药品生物制品鉴定所110831．200302)，槲皮素(中国药品生物制品鉴定所100081-200406)实验所用其他溶剂均为分析纯。药材：蜜茱萸地上部分，2008年采自中国海南省三亚，经海南大学植物分类学教授黄世慢鉴定为芸香科蜜茱萸属植物蜜茱萸(Melicopepatulinervia)的地上部分。药材干燥后，各取其叶、茎、地上部分50g打粉后过60目筛，密闭于干燥阴凉处备用47 定面容量瓶中，摇匀得至25“容量瓶中，摇按正交试验得到的最佳提取方案，分别精密称取1g蜜茱萸叶、茎、地上部分粉末，用25ml75％甲醇超声提取三次，每次提取20min，将提取液分别减压浓缩成干粉后，用75％甲醇定容至50m1。4．2．4测定波长的选择4．2．4．1芦丁测定波长的选择‘删精密量取芦丁对照品溶液0．5mL于10mL量瓶中，加入5％的亚硝酸钠溶液0．5mL，摇匀，放置5min，加10％的硝酸铝溶液0．5mL，摇匀，再放置5min后，加入4％的氢氧化钠溶液4mL，用75％甲醇稀释至刻度，摇匀，放置15min。按波长扫描的操作方法分别对芦丁对照品溶液进行波长扫描，波长范围200．700nm，扫描结果可见图4．1，在510nm处有最大吸收峰，故选择510rim为测定波长。4⋯242没食子酸测定波长的选择㈨精密量取没食子酸对照品溶液O．5mL于10mL量瓶中，用蒸馏水稀释至5．0mL，加入Folin．Ciocalteu试剂0．5mL，摇匀，最后用10％NaC03定容至刻度，摇匀后，在室温下暗处反应2h后。按波长扫描的操作方法对没食子酸对 4蜜茱萸提取物总黄酮和总多酚含量测定照品溶液进行波长扫描，波长范围200．800砌，扫描结果可见图4．2，在700rlrn处有最大吸收峰，故选择700nm为测定波长。Fig．4．1芦丁对照品全波长扫描图Fig．4．2没食子酸对照品全波长扫描图4．2．5标准曲线的绘制4．2．5．1芦丁标准曲线的绘制准确吸取4．2．2．1所述芦丁对照品溶液O、O．5、1．O、1．5、2．0、2．5、3．0mL，分别置于10mL量瓶中，按照4．2．4．1所述方法，以75％甲醇溶液为空白参比，在波长510I吼下测吸光值，实验结果以芦丁当量表示。以芦丁浓度(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标绘制标准曲线，所得回归方程为Y=12．93x+0．010，R2=0．9988。4⋯252没食子酸标准曲线的绘制准确吸取4．2．2．2所述没食子酸对照品溶液O、O．1、0．2、0．3、0．4、0．5、0．6mL，分别置于10mL量瓶中，按照4．2．4．2所述方法，以75％甲醇溶液为空白参比，在波长700I瑚下测吸光值，实验结果以没食子酸当量表示。以没食子酸浓度(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标绘制标准曲线，所得回归方程为Y=466．3x．0．006，Ra薯0．9997。49 4蜜茱萸提取物总黄酮和总多酚含量测定4．2．6提取溶剂的选择为了选择合适的溶剂进行提取，称取5份1g蜜茱萸叶的干燥粉末，分别选用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇5种不同溶剂各25“超声提取三次，每次提取20min，将提取液分别减压浓缩干后，用甲醇定容至50血。按照4．2．4所述方法，以甲醇溶液为空白参比，测定不同溶剂提取液的吸光度，重复测定3次。根据4．2．5所示标准曲线换算出总黄酮和总酚酸含量。结果见表4．1。Table4．1不同溶剂提取物总黄酮与总酚酸的含量样品总酚酸含量(mg·g．1)总黄酮含量(mg·g-1)石油醚0．1888-"0．0311．1462-+0．054乙酸乙酯0．2041：L-0．0272．1852--+0．037氯仿0．2298-士-0．0152．2409-I-0．034乙醇0．2815：L"0．0362．0128士-0．031甲醇0．3721：C"0．0355．5437：L-0．082ValuesintablearccxprcsseAasmeans士standarddeviation(n23)．由表4．1可以看出，用5种不同溶剂对蜜茱萸叶进行超声提取，以甲醇为溶剂进行提取，所得的抗氧化物质含量最高，且总黄酮含量比以乙醇提取高出一倍多。因此选定甲醇为提取溶剂。4．2．7提取方法的选择4．2．7．1回流提取法称取蜜茱萸叶的干燥粉末1g，用25ml75％的甲醇回流提取3次，每次1h。合并提取液，将提取液减压浓缩干后，用甲醇定容至50血。4．2．7．2超声提取法称取蜜茱萸叶的干燥粉末1g，用25ml的75％甲醇置超声波提取器中室温超声提取3次，每次提取20rain。合并其提取液，将提取液减压浓缩干后，用甲醇定容至50血。 4蜜茱萸提取物总黄4⋯273渗漉提取法称取蜜茱萸叶的干燥粉末1g，用75％1甲醇湿润后装入渗漉柱中，加75％甲醇浸泡24h后开始渗漉。控制流速3mL·rain"1收集渗漉液75mL。将渗漉液减压浓缩干后，用甲醇定容至50蚰。4．2．7．4冷浸提取法称取蜜茱萸叶的干燥粉末1g，用25ml75％甲醇浸提8h，共提取3次。合并提取液，将提取液减压浓缩干后，用甲醇定容至50ml。4⋯275索氏提取法称取蜜茱萸叶的干燥粉末1g，置索氏提取器滤纸套筒中，加100ml75％乙醇进行连续回流提取8h。按照4．2．3所述方法，以甲醇溶液为空白参比，测定不同提取方法的吸光度，重复测定3次。根据4．2．4所示标准曲线换算出总黄酮和总酚酸含量。结果见表4．2。Table4．2不同提取方法总黄酮与总酚酸的含量Valuesintablea聆expressed笛means±standarddeviation(n。3)．由表4．2可以看出，用5种不同提取方法对蜜茱萸叶进行提取，超声提取物中总黄酮含量相对较高，索氏提取物中总酚酸含量相对较高，超声提取法、回流提取法次之。考虑到蜜茱萸提取物中总黄酮含量明显高于总酚酸含量，且超声提取法进行试验操作安全、简单、方便；而索氏提取法在试验操作上存在周期长操作不便等缺点，故在提取方法上选择超声提取法。‘7135l 2131456738393Klc摹__)19．370K2(簟-_)19．889657555657555657519．834．19．78315：125：115：l25：l10：125：110：115：119．88419．55820301020301018．97421．02519．87220．03919．28219．20521．18022．02220．27219．5191．3471．3201．3401．3561．3021．3651．3211．330K3(皇膏_)20．60420．24620．42219．86452 4蜜茱萸提取物总黄酮和总多酚含量测定Valuesintablearcexpressed璐means士standarddeviation(nt3)．从表4．4可以看出：总黄酮的极差分析为D>A>C>B，提取蜜茱萸中总黄酮的最佳条件为A383C3D2，即提取次数为3次、甲醇浓度为75％、料液比为1：25(g．ml。1)、提取时间为20rain。验证实验结果表明蜜茱萸叶中总黄酮含量可达41．3194-t-O．071mg·分1。总酚酸的极差分析为C>A>D>B，提取蜜茱萸中总酚酸的最佳条件为A382C3D2，即提取次数为3次、甲醇浓度为65％、料液一比为1：25(g·ml。1)、提取时间为20rain。验证实验结果表明蜜茱萸叶中总酚酸含量可2．0045士0．013mg·g～。但由于蜜茱萸中总黄酮含量明显高于总酚酸含量，且通过总酚酸的极值分析发现B乙醇浓度的影响最小。因此最终确定蜜茱萸中抗氧化物质的提取最佳条件为A383C3D2，即提取次数为3次、甲醇浓度为75％、料液比为1：25(g·Ⅱ11。1)、提取时间为20rain。4．3本章小节首次对海南三亚的蜜茱萸植物提取物进行了总黄酮、总多酚含量测定。运用利用紫外分光光度法，在单因素试验的基础上，采用L9(34)正交试验，以提取物总黄酮、总多酚的含量作为考察指标，优选了提取工艺。通过蜜茱萸提取物总黄酮、总多酚含量测定研究发现1、蜜茱萸总黄酮提取最佳工艺为：提取次数为3次、甲醇浓度为75％、料液比为1：25(g．ml‘1)、提取时间为20rain。因此在蜜茱萸化学成分研究时，采用75％甲醇提取。2、蜜茱萸提取物总黄酮含量较高，但总酚酸含量很低。蜜茱萸叶75％甲醇提取物的总黄酮含量达：41．3194士0．071mg·g～，总酚酸含量仅为：2．0045士O．013mg·g一。结合蜜茱萸化学成分研究推断，可能是因为蜜茱萸中所含黄酮的取代基多为．OMe，而不是．OH的原因所致。53 新华滤纸用打孔器。材料：1，1．二苯基．2．苦肼基自由基(DPPH，美国sigma-Aldrich公司)，三吡啶三哑嚷(TPTZ，AladdinChemistryCo．Ltd)，6．羟基．2，5，7，8．四甲基苯并二氢吡喃．2．羧酸(Trolox，美国sigma-Aldrich公司)，营养琼脂培养基(杭州微生物试剂有限公司)，葡萄糖，琼脂，实验所用其他溶剂均为分析纯。测试菌种：细菌：大肠杆菌(E．colJ)、枯草芽孢杆菌(B．subtilis)植物病原菌：青霉菌(Penicillium．sp)、苹果腐烂病菌(Cytosporaspp．)、小麦赤霉病菌(FusariumgraminearumSchw)、番茄灰霉病菌(Botrytiscinema)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、松针褐斑病菌(Lecannostictaacicola)、水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolan0“ 药材：5．2．2精匀得质5．2．3样品溶液的制备’样品溶液制备同4．2．35．2．4DPPH自由基清除能力嘲处于生理浓度的自由基是正常细胞功能所需的，但是过量的自由基会损伤细胞成分，诸如脂肪组织，蛋白质和DNA。因此，抗氧化剂所具有的自由基清除能力能够保护人体免受自由基的损伤和延缓许多慢性疾病的进程。DPPH法被广泛用于植物自由基清除能力的测定【73扔】。本实验利用DPPH的褪色效应测定不同浓度提取液的A530，并计算对DPPH自由基的清除率。5⋯241最大吸收波长的确定精密量取Trolox对照品溶液20山，加入200山DPPH甲醇溶液(精密称取DPPH30．4mg，用75％甲醇溶解并定容至100mL。即配成DPPH母液。从母液从精密量取4．5mL，用75％甲醇定容至25mL。即为DPPH甲醇溶液)，室温混匀放置30min后，使用酶标仪按波长扫描的操作方法进行波长扫描，波长范围200-700sln，扫描结果可见图5．1，在530Sill处有最大吸收峰，故选择530nm为测定波长。I、55 5蜜茱萸活性初步研究／／／＼．⋯⋯{⋯p’／一＼＼⋯⋯一||i7＼j，／＼／Fig．5．1DPPH法测定对照品抗氧化能力全波长扫描图5⋯242标准曲线的制作准确吸取5．2．2所述Trolox对照品溶液O．5、1．O、1．5、2．O、3．0、4．0mL，分别置于10mL量瓶中。按照2．3．4．1所述方法，用酶标仪测定530nnl处的吸光度，用以下的公式计算DPPH自由基清除率：Scavenging％=1-(Ap·Ac)／Amaxx100％其中Ap为200此的DPPH溶液和20“L样品试液反应稳定后的吸光度，Ac为20此样品试液和200“L75％甲醇溶剂反应稳定后的吸光度，Amax为200此的DPPH溶液和20此75％甲醇反应稳定后的吸光度。以新鲜的Trolox工作液用来校正，以Trolox浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，所得回归方程为Y=7．261x+0．535，R2=0．997。5．2．4．3提取液的测定分别精密吸取4．2．3所述蜜茱萸叶、茎、地上部分提取液和4．2．6所述蜜茱萸叶不同溶剂提取液O．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8mL，定容至1mL后，按上述方法测定不同浓度梯度的提取物的吸光度值，代入公式计算不同提取物的DPPH自由基清除的能力。以清除率达到50％的提取物的浓度IC50(半数抑制浓度)作为判断清除DPPH自由基活性强弱的依据，若IC50值越小，表明清除自由基的能力越强。结果见表5．1 5蜜茱萸活性初步研究Table5．1蜜茱萸不同部分、不同溶剂提取液DPPH自由基清除能力样品回归方程R2IC50(rag·ml’1)地上部分Y=0．022x+0．4080．9584．182-士o．031叶Y=0．030x+0．4510．9661．633士-0．035茎Y=0．009x+0．3330．88418．560-士0．023石油醚Y=0．007x+0．2320．92738．29-士-0．044乙酸乙酯Y=0．01x+0．2750．98422．500-J：0．009氯仿Y=0．014x+0．2660．99516．714士-0．010乙醇Y=0．012x+0．3070．99416．083：b0．020甲醇Y20．015x+0．3420．95810．53士o．025Valuesintablearcexpressed私me．ans．4-standarddeviation(n=3)．从表5．1可以看出，总的来说蜜茱萸提取物对DPPH自由基清除能力较弱。蜜茱萸茎75％甲醇提取物对DPPH自由基清除能力很弱。蜜茱萸叶和地上部分75％甲醇提取物对DPPH自由基有一定的清除能力，其IC50值分别为1．633士0．035mg·ml一、4．182-j：0．031mg·ml～。不同溶剂蜜茱萸叶提取物的IC50值大小为甲醇>乙醇>氯仿>乙酸乙酯>石油醚。5．2．5总抗氧化能力(FRAP法)FRAP法的原理是在TPTZ存在的情况下将Fe3+还原为Fe2+，同时生成更稳定的在595nrll处具有最大吸收的深蓝色Fe2+．TPTZ，从而打断自氧链反应，引起吸光度的增加。许多研究表明植物提取物的还原能力与其抗氧化活性之间关系密切。还原力越大，其抗氧化活性越强【份791因此可通过还原力大小反映其抗氧化活性的强弱。FRAP法即是以样品中的抗氧化物质作为还原剂，检测其还原能力，即总抗氧化能力。5．2．5．1FRAP法测定波长的选择57 5．2．5．2标准曲线的绘制准确吸取5．2．2所述Trolox对照品溶液O．5、1．O、1．5、2．O、3．0、4．0mL，分别置于10mL量瓶中。用5．2．4．1所述方法FRAP法测定总抗氧化能力，反应在酶标板中进行。将20gL75％的甲醇中加入200止的FRAP试剂作为空白，室温反应30rain后测定595nm处的吸光度。以新鲜的Trolox工作液用来校正，以Trolox浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=7．768x+0．340。R2=0．998。5．2．5．3提取液的测定分别精密吸取4．2．3所述蜜茱萸叶、茎、地上部分提取液和4．2．6所述蜜茱萸叶不同溶剂提取液20山，按5．2．5．1所述方法测定不同提取液的吸光度值。通过5．2．5．2所示标准曲线计算样品的总抗氧化能力，结果以TEAC值表示。TEAC值表示lg干重药材相当于多少微克的Trolox，简称TE(gg·g-1)。代入公式计 5蜜茱萸活性初步研究算不同提取物的DPPH自由基清除的能力。蜜茱萸不同溶剂提取物与不同部位提取物的总抗氧化能力如表5．2所示。Table5．2蜜茱萸不同部分、不同溶剂提取液的TEAC值样品地者部茎叶石油醚甲醇乙醇乙墓乙氯仿TEAC110．64681．685188．19516．41561．34441．11232．67335．127(ttg·g-1)士0．028士o．032士0．022：tO．070士0．009士0．031圭0．023：tO．019从图表中可以看出，总的来说蜜茱萸提取物的总抗氧化能力较弱。不同部位75％甲醇提取物的总抗氧化能力强弱依次为：叶>全草>茎，其中蜜茱萸叶的TEAC值为(188．195士0．022)gg·g～，表示lg干燥叶的抗氧化能力相当于(188．14-0．022)ggTrolox；不同提取溶剂提取物的还原能力强弱依次为g甲醇>乙醇>氯仿>乙酸乙酯>石油醚，其中甲醇提取部位的TEAC值为(61．344士0．009)gg·g-1，表示1g甲醇提取部位相当于(61．344士0．009)ggTrolox的抗氧化能力。5．2．6抗菌活性初步研究5⋯261培养基的配置供细菌实验用的培养基为牛肉膏蛋白胨，配方为0．5g牛肉膏、1．0g蛋白胨、0．5gNaCl、2g琼脂、100ml水。真菌测试菌用PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH7．0--7．2·5⋯262供试菌活化供试细菌牛肉膏蛋白胨培养皿活化，细菌在33℃培养15h供试真菌PDA培养皿活化，在28℃培养2．4d。5．2．6．3抗菌活性测定抗细菌实验：供试细菌采用滤纸片扩散法【80．811。用打孔器将滤纸打成直径为5mm的圆形滤纸片，120"C高压蒸汽灭菌锅中灭菌2h备用，把已灭菌的纸片59 5蜜茱萸活性初步研究放入药液中浸透，挥干待用。取制好的菌悬液O．1mL，注入倒有固体培养基的平皿，用无菌涂布器均匀涂布在培养基表面，用无菌镊子夹取含药纸片，放入含菌培养基上，每个样品对每种测试菌做3个重复，另取滤纸片浸取75％甲醇，挥干后作空白对照。将制好的平板置于37"C培养箱中培养15h。抗真菌实验：供试真菌采用对峙法【81】。在无菌条件下，将牛津杯放在倒有PDA的培养皿中心，然后把病原真菌的4个菌块按照以牛津杯为圆心的圆周上，向牛津杯中加入200山原发酵液后(以加入2009l75％甲醇为空白对照)，放入4"C的冰箱内放置1h，然后置28℃培养2_4d，每个处理重复3次，采用十字交叉法测量抑茵圈直径。5．2．6．3抗菌实验结果分别精密吸取4．2．3所述蜜茱萸叶、茎、地上部分提取液200出，按5．2．6．3所述方法测定不同提取液的抗菌活性。采用十字交叉法测量抑茵圈直径。蜜茱萸叶提取物对苹果腐烂病菌和小麦赤霉的抑制效果如图5．3。蜜茱萸不同溶剂提取物抗菌活性测试如表5．3所示。Fig．5．3蜜茱萸不同部位提取物对苹果腐烂病菌和小麦赤零的抑制效果(左为对照，右为蜜茱萸叶处理后效果) 5蜜茱萸活性初步研究大肠杆菌(E．cold枯草芽孢杆菌(B．subtilis)青霉菌(Penicillium．sp)苹果腐烂病菌(CyCosporaspp．)番茄灰霉病菌(Botrytiscmema)水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)松针褐斑病菌(Lecannostictaacicola)小麦赤霉病菌(FusariumgrarninearurnSchw)2(+)30．19(+H)25．01(卅)18．01(卅)20．36(+H)19．23(卅)11．19(++)7．59(+)9．65(+)l(+)1(+)25．45(十H)16．01(++)11．60(++)12．21(++)Note：Allvalues玳me．,all$ofthreereplicates．"．4-4-1-一meansdiaphanous，“++一mcansclear，_+一mca,l坫eyeable．。一”mCa璐nOTable5．4蜜茱萸不同化学成分抗菌测试结果Diametersofinhibitoryzones／mm化合物小麦赤霉玉米大斑番茄灰霉松针褐斑病菌6l 5蜜茱萸活性初步研究由表5．3以及表5．4可看出：蜜茱萸提取物对两种细菌的抑菌作用很弱。对7中植物病原菌的抑制作用不具有普遍抑制性。其中对青霉菌、松针褐斑病菌、水稻纹枯病菌基本无抑制性。对苹果腐烂病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌有明显的抑菌效果，其中对苹果腐烂病菌的抑制效果最好。不同部位提取物的抑菌活性，叶明显高于茎和全株。茎的抑菌活性最弱。4个化合物对玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌的抑菌效果较好，有些甚至强于阳性对照。5．3本章小结首次对海南三亚的蜜茱萸植物提取物进行了抗氧化抗茵活性方面的研究。采用DPPH和FRAP两种方法测定了蜜茱萸不同部位、不同溶剂提取物的抗氧化活性。同时采用滤纸片法、对峙法对蜜茱萸不同部位75％甲醇提取物进行了抑菌活性的初步研究。通过蜜茱萸提取物抗氧化抗菌活性方面的研究发现1、蜜茱萸提取物的抗氧化能力较弱。在后期研发中不适合开发为抗氧化药剂及相关方面的保健品。．2、蜜茱萸提取物对苹果腐烂病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤·霉病菌有明显的抑菌效果，其中对苹果腐烂病菌的抑制效果最好。在后期研发中可以针对提取到的单体做相关方面的研究，开发为植物农药。 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6研究总结本论文首次对蜜茱萸(Melicopepatulinervia(Merr．&Chun)进行了蜜茱萸地上部分化学成分的研究；蜜茱萸中活性成分进行了色及总黄酮、总多酚含量及其抗氧化和抗菌活性进行测定；希望能为开茱萸药材，寻找活性成分，建立蜜茱萸活性成分的含量测定标准，提数据。从蜜茱萸(Melicopepatulinervia(Merr．&Chun)Huang)地上部分分离鉴定了19个化合物，分别为：rE)．甲基．3．{4“(E)．3，7．二甲基．2，6．二烯基]氧基苯基)．2．丙烯酯(MZY．1)，蜜茱萸素(MZY．2)，3，5，8．三甲氧基-6，7；3’，4’．二亚甲二氧基黄酮(MZY．3)，Melibentin(MZY．4)，5．羟基．3，7，8-三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．5)，球松素(抛Y．6)，5．羟基-3，6，7，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．7)，7．异戊烯氧基．3，5，6，8．四甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(MZY．8)，吴茱萸黄碱(地Y．9)，313．hydroxystigmast．5．％．7．one(MZY．10)，山柑子碱(MZY．11)，香草木宁(MZY．12)，Phytylhexadecanoate(MZY．13)，原茵芋碱(MZY．14)，7．异戊烯氧基．5．羟基．3，6，8．三甲氧基．3’，4’．亚甲二氧基黄酮(比Y．16)，豆甾醇(MZY．17)，B．谷甾醇(IVIZY．18)，1．羟基．3．甲氧基．10．甲基．10H．氮葸．9．酮(MZY．19)，1，2．二甲基喹啉．4．酮(MZY．20)。其中MZY-16为新化合物，所有化合物均首次从本植物中分离得到。利用本课题组从蜜茱萸中分离得到的单体化合物，建立应用HPLC同时定量测定蜜茱萸茎和叶中7个活性化合物的方法。结果表明：茎和叶中所含黄酮和生物碱的种类多，且叶中含量较大。研究海南岛特有濒危物种蜜茱萸提取物的活性成分含量及其抗氧化抗菌活性。结果表明蜜茱萸叶75％甲醇提取物中总黄酮含量较高，为41．3194士0．071mg·g～。但酚酸类物质、抗氧化抗菌能力均很低。在抗菌方面，蜜茱萸叶的75％甲醇提取物对植物常见病原菌有一定的抑菌作用，其中对苹果腐霉的抑菌作用最强。但对细菌的抑菌作用很弱。 —Zt·l墟∞CⅥa，弘ohl’‘lI：t0-_甘曲 220200：180160140120100806040200ppm附图3MZY-4的’3C-NMRN川MZY·41HCDCl326／!ruanke9·0日·5e·07．57．06．56．05．55．O4．54．03．53．02．52．01．51．00．5p鲫能附图4MZY-4的1H-NMR75III—iij{j⋯j口No．o●II：l：I：¨HmR州啦oo．一 131211109日765●321薜n幽附图6谷咎谷譬l墨．：l忆Y-5的IfI：lijiiflI燃嚣＼2p■h 2202001801601‘0120100B06040200聃MZY·6：HCDCl3133／yv,anke附图7MZY-6的”C-NMR譬：簧2兽g；。,qp．,qp0景22暑2罱罱兽宝■一I■●●tttt鬯号皇皇e一一■■卜卜卜卜卜卜卜卜卜卜卜i,iD口∞口nn‘nng瓮害2．r,-=罱罟鲁器=g譬鼍■号宅号鼍鼍鼍一t鼍鼍．，：一nnnnNNNN一一一一1211109e，654321]PlPm酋睦附图8MZY-6的1H-NMR㈧固ooo．oI¨，o口o‘ 72／yuanko∥∥l＼＼川IljIj一．ilII-131211109e"65●32l0ppa怂要i附图10掰一7的1㈣78≤必离：o!：窿Ik心·‘kl¨RHK八口_o．T，Z譬Ph 2102001901801"／0160150l●O13012011010090807060．50403020100p芦兰兰墨罾毫基蚕詈誊謇呈卜卜卜卜r--卜卜卜口口∞附图”MZY-8的侣C-NMR=；!!il，ji0。J!e．0-／．5’．06．56．05．55．04．54．03．53．02．52．01．51．00．5ppm幽甾¨崮翩酋目附图12MZY-8的1H-NMRooo．oo∞∞．o￡-NN．一n．～．一口mN．一￡．卜N．一西∞～．一一∞n．一t．一口．一-_卜．一西∞t．．I蚺，o．N—n●．n1．1．∞．n．_予．n一∞竹．nn西昏．n蚺．￡．．_n蛐1．．_々on．n卜呐西．n一曲n．们n上_n．n正．1．n．n一西∞．西∞∞o．啦 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致谢在毕业论文完成之际，回首三年硕士生涯，谨向我的两位导师张雁冰教授和袁珂教授致以衷心的感谢!两位导师深厚的学术造诣、严谨的治学态度、兢兢业业的工作风格，正直的为人以及对学生生活无微不至的关心对我产生了深刻的影响，将使我受益终生．师恩如海、缬草难报。本人在完成论文期间，得到了刘宏民老师、毕跃峰老师、王彩芳老师、符玲老师、李海霞老师、杨华老师、徐海伟老师和李俊平师姐、蒋莹师姐、张静师姐、郭志刚师兄、马刚师兄、张全海师兄、胡重九师兄、廖海兵硕士、刘辉鑫硕士、关若飞硕士、靳银杰硕士、张新乐硕士、徐殿宏硕士、姜东青硕士、黄雅思硕士、刘建波硕士以及刘晓芳、吴燕萍、陈锦、孙伟杰等同学的热情帮助；感谢同学李幸、雷伟、张春丽、张青青、张延君、杨洋、朱楠、吴先斌、蒋腾飞、陈学彬等同学在学习和生活上对我的帮助．感谢实验室的师弟师妹们，感谢郑州大学药学院09级研究生全体同学陪我一起走过的难忘历程!感谢家人对我的支持和理解!在此我对他们的无私奉献，致以最崇高的敬意和感谢!感谢药学院以及研究生院的各位领导和老师对我的关心和指导!衷心感谢在百忙之中评阅我硕士论文和参加答辩的各位专家和学者!最后，谨向所有帮助过我、支持过我、鼓励过我的老师、同学和朋友致以诚挚的谢意!祝你们在以后的学习和工作中心想事成，万事如意!作者：刘婷2012年4月 个人简历及发表论文刘婷，湖南省株洲市人，生于1987年7月，2009年6月毕业于南华大学药学系，同时获得学士学位，之后进入郑州大学药学院药物化学系读研。取得的主要研究成果如下：【1】TmgLiu,KeYuan,YanbingZhang．Activecomponents,AntimicrobialandAntioxidantactivitiesofextracts舶mMelicopepatulinervia[J]．JournalofMedicinalPlantResearch，2012，6(2)：266-272(SCI)[2】TingLiu,HaibingLiao,KeYuan,YanbingZhang．ANewFlavone劬mtheMelicopepatulinervia(Merr．&Chun)Huang[J]．JournalofChemicalResearch，2012，l：31·33(SCI)【3】刘婷，袁珂，张雁冰．蜜茱萸化学成分研究叨．中草药(已接收)【4】李俊平，王彩芳，刘婷，张雁冰，刘延泽，张振中．河南蹄叶橐吾根的化学成分研究阴．天然产物研究与开发(已接收)【5】廖海兵，施湘君，刘婷，刘华亮，袁珂．RP．HPLC法同时测定黄秋葵中三种黄酮苷的含量叨．药物分析(在修改)【6】YanbingZhang,TingLiu，HmbhlgLiao,KeYuan．RP-HPLCsimultaneousdeterminationofsevencomponentsinMelicopepatulinervia(在投)【7】7YuanKe，LiuTing,HuangWeifei，HuJiahui．Methodforextracting)oralflavonoidsfrommelicopepamlinervia．FamingZhuanliShenqing(2011)，1lpp．CODEN：CNXXEVCN102145066A20110810CAN155：363958AN2011：995787CAPLUS