油菜花蜂蜜中挥发性成分的提取与特征图谱的建立_毕业论 28页

常熟理工学院毕业设计（论文）本科毕业设计（论文）题目油菜花蜂蜜中挥发性成分的提取与特征图谱的建立院系生物与食品工程学院年级　2011　专业　食品质量与安全班级Y134111学号Y13411106学生姓名金磊指导教师权英职称副教授论文提交日期2015年5月20日 常熟理工学院毕业设计（论文）常熟理工学院本科毕业设计(论文)诚信承诺书本人郑重声明：所呈交的本科毕业设计(论文)，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。本人签名：日期：常熟理工学院本科毕业设计(论文)使用授权说明本人完全了解常熟理工学院有关收集、保留和使用毕业设计(论文)的规定，即：本科生在校期间进行毕业设计(论文)工作的知识产权单位属常熟理工学院。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许毕业设计(论文)被查阅和借阅；学校可以将毕业设计(论文)的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编毕业设计（论文），并且本人电子文档和纸质论文的内容相一致。保密的毕业设计(论文)在解密后遵守此规定。本人签名：日期：导师签名：日期：I 常熟理工学院毕业设计（论文）油菜花蜂蜜中挥发性成分的提取与特征图谱的建立摘要本论文采用顶空固相微萃取技术萃取油菜花蜂蜜中的挥发性成分，利用气相色谱技术对10种油菜花蜂蜜的挥发性成分进行分析，建立起油菜花蜂蜜挥发性成分的特征图谱。采用顶空固相微萃取方处理油菜花蜂蜜，筛选萃取时间、萃取温度、Nacl加入量三个条件参数，其中萃取温度的选择分为四个梯度，分别为30℃、40℃、50℃和60℃，萃取时间的选择分为四个梯度，分别为20min、25min、30min和40min，萃取氯化钠的添加量分为0g、0.5g、1.0g和1.5g，确定最优的操作条件，通过气相色谱仪对10种品牌的油菜花蜂蜜挥发性成分进行解析处理，得到色谱图，然后对色谱图数字化处理，通过数据分析找出内参考峰，计算保留值，然后按照一定标准找出共有峰建立油菜花蜂蜜的特征图谱。最终确定顶空固相微萃取的最优条件是：萃取温度为40℃，萃取时间为30分钟，加入氯化钠1.0g，此条件下得到蜂蜜的特征共有峰有10个。关键词：油菜花蜂蜜顶空固相微萃取气相色谱特征图谱I 常熟理工学院毕业设计（论文）Extraction and the Characteristic Map of Volatile Composition of  Rape HoneyAbstractInthispaper,headspacesolidphasemicroextractionrapehoneyextractionofvolatilecomponentsbygaschromatographyfor10kindsofrapehoneyvolatilecompoundswereanalyzedtoestablishthecharacteristicchromatogramrapehoneyvolatilecomponents.Headspacesolidphasemicro-extractionsideprocessingrapehoney,screeningextractiontime,extractiontemperature,NaClamount,whichisdividedintofourchoicesextractiontemperaturegradient,respectively30℃,40℃,50℃and60℃,extractiontimeSelectfourgradient,respectively20min25min30minand40min,theamountofsodiumchlorideandextractedinto0g,0.5g,1.0gand1.5g,determinetheoptimaloperatingconditionsbyagaschromatograph10brandstherapehoneyvolatilecomponentsresolvedtogivechromatograms,andthendigitizethechromatogramtoidentifyinternalreferencepeak,calculateretention,andfollowcertainstandardstoidentifycommonpeakestablishrapehoneycharacteristicspectrumdataanalysis.Finalizeheadspacesolidphasemicroextractionoptimumconditionsare:extractiontemperatureis40℃,extractiontimewas30minutes,sodiumchloridewasadded1.0g,gethoneyunderconditionscharacterizedbyatotalof10peaks.Keywords:RapeHoney;Headspacesolidphasemicroextraction;GasChromatography;CharacteristicmapII 常熟理工学院毕业设计（论文）目录1绪论11.1简述11.2蜂蜜鉴定方法的研究进展11.2.1感官分析11.2.2荧光光谱11.2.3高效液相色谱11.2.4气相色谱技术21.3课题研究内容21.3.1研究背景21.3.2研究内容22实验部分32.1实验样品32.2实验试剂32.3实验器材32.4实验方法42.4.1顶空固相微萃取提取油菜花蜜挥发性成分方法42.4.2气相色谱仪的操作流程42.4.3气相色谱条件52.4.5挥发性成分的最优提取条件和气相色谱图的获得52.4.6色谱图的数字化52.5数据处理方法63结果和讨论73.1萃取条件的优化7III 常熟理工学院毕业设计（论文）3.2共有内参考峰的确定93.3相对保留值的处理结果133.4不同油菜花蜂蜜样品的图谱共有峰的分析163.5共有峰的保留时间结果173.6挥发性成分特征图谱的建立184结论20致谢21参考文献22IV 常熟理工学院毕业设计（论文）1绪论1.1简述蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经过在巢脾内转化、脱水、贮存至成熟的过程而成的天然甜物质[1]。油菜蜜呈浅琥珀色，略混浊、有油菜花的香气，稍有辛辣味，贮放日久辣味减轻，味道甜润，极易结晶，结晶后呈乳白色，晶体呈细粒或油脂状。白菜型油菜花期早，蜂群越冬后正处于恢复、发展阶段，气候比较寒冷产量不高；甘蓝型和芥菜型花期较晚且气候比较稳定，温度高是油菜蜜的主产期。油菜蜜是我国的最大众、稳产的蜜种；全年约占蜂蜜总产量40%以上。强群蜂单花期产量可达5-75公斤或更高，蜜度较低。我国油菜分布广，尤其是南方地区种植面积很大[1]。油菜花产蜜量大，蜜呈浅琥珀色，比紫云英蜜略深，有混浊，具有油菜花香味，味道甜润，容易结晶，结晶的油菜蜜白色细腻,属二等蜜[1]。油菜花蜜清热润燥、舒张血管、行血破气，消肿散结、和血补身的功能[1]。1.2蜂蜜鉴定方法的研究进展1.2.1感官分析蜂蜜的感官辨别主要是由有经验的专家根据不同品种蜂蜜的色泽、状态、气味、滋味等感官性状的不同，对被检样品进行感官评价。该方法适用于判定蜂蜜是否发酵、异味或含有不纯物质，但是感官分析辨别蜂蜜品种带有一定的主观性、经验性和不确定性。1.2.2荧光光谱荧光光谱属于发射光谱，提供了有关荧光分子信息。荧光光谱技术的灵敏度高于其他光谱技术100-1000倍，可用于判定蜂蜜的植物来源。蜂蜜中所含的多酚和氨基酸有强烈的荧光团，用荧光光谱有助于鉴定蜂蜜的植物来源，如柑桔蜜的橙皮素[2]，熏衣草蜂蜜所含的特征氨基酸—苯基丙氨酸和酪氨酸，可与桉树蜜区分开[3]。色氨酸和谷氨酸则有助于分类甘露蜜和花蜜[4]。1.2.3高效液相色谱高效液相色谱(HPLC)特征图谱技术与化学计量学相结合的方法，由此可以建立了洋槐蜜、油菜蜜和荆条蜜的HPLC特征21 常熟理工学院毕业设计（论文）图谱,确定了这三种单花蜜的花源酚酸标识物,并结合化学计量学的方法对蜂蜜的植物源及掺假进行了分析鉴定[5]。该研究为蜂蜜的花源鉴定以及掺假研究提供了依据。1.2.4气相色谱技术气相色谱在蜂蜜品种鉴定中主要用于蜂蜜挥发性成分的分离、鉴别。测定多种蜂蜜中的芳香性成分并进行分析，发现每种蜂蜜有各自的色谱图以及特征化合物，因此，利用色谱图确定蜂蜜的蜜源种类似乎可行。迄今为止，约有600种挥发性化合物在许多蜂蜜类型中被鉴定出。AlissandrakisE等研究发现，与单花蜜特殊气味有关的挥发性物质一般来源于对应的植物[6]。通过溶剂萃取，改良的“Likens-Nickerson”蒸汽蒸馏法和溶剂萃取，动态顶空萃取(DHS)，固相微萃取以及气体传感器等萃取方法研究单花蜜中的挥发性物质成分，将挥发性物质作为分类单花蜂蜜的特征标记，是目前研究的热门课题之一[7]。BianchiF等用动态顶空萃取样品，GC-MS法测定分离出草莓蜜中的28个芳香化合物，其中α-异佛尔酮，β-异佛尔酮和酮代异佛尔酮被认为是草莓蜜的特征标记[8]。动态顶空萃取法是花粉分析的有效替代方法，尤其用于处理如草莓蜜这种花粉含量少的蜂蜜样品。1.3课题研究内容1.3.1研究背景我国是世界养蜂大国，由于我国国土辽阔、地理气候优越以及蜜源植物丰富，不仅蜂蜜产量居世界首位(年产约20万吨)，而且蜂蜜品种种类和数量繁多，分布广泛。据不完全统计，我国能被蜜蜂利用的蜜源植物约5000种以上，能取到商品蜜的蜜源植物有100多种[6]。根据国际食品法典委员会蜂蜜标准、欧盟蜂蜜指令及其他相关规定，蜂蜜种类依据来源、生产方式或外观划分[15-16]。最常见的划分是依据蜜蜂所采集的蜜源植物种类而分的，主要蜜源是单一植物的称作单花种蜂蜜，采自多种植物的为杂花蜜或百花蜜。不同蜜源植物来源的蜂蜜的成分主要取决于植物类型、植物花期、气候、蜂群强弱以及取蜜时间等，不仅在感官和内在品质上有一定的差异，而且其营养效果也有所不同[6]。1.3.2研究内容以康思农油菜花蜜为实验对象分别固定氯化钠的量、萃取时间、萃取温度，采取平行实验，得出最优的萃取条件，再以最优条件对其他九种样品进行实验，得到在不同条件下的9种气相色谱图以及不同品牌油菜花蜂蜜下的9种气相色谱图，并由此建立油菜花蜂蜜中挥发性成分的特征图谱。21 常熟理工学院毕业设计（论文）2实验部分2.1实验样品样品均为淘宝、京东销售的产自全国的不同品牌的油菜花蜜。表1不同品牌蜂蜜样品蜂蜜品牌产地生产日期编号暖民四川成都2015年02月10日Y1雷允上浙江宁波2015年02月25日Y2康思农湖北武汉2014年07月27日Y3蜂献安徽安庆2014年12月11日Y4葆丰重庆渝北2015年02月09日Y5刘氏安徽安庆2015年01月29日Y6越贡浙江绍兴2015年01月13日Y7丁氏云南昆明2015年02月17日Y8精灵子重庆云阳2015年01月21日Y9藏原蜜语青海西宁2014年10月16日Y102.2实验试剂蒸馏水（实验室自制），NaCl（分析纯）。2.3实验器材表2主要实验器材主要设备厂家85-2型恒温磁力搅拌器上海司乐仪器有限公司鹤寿一次性无菌注射器常州悦康医疗器材有限公司EL2001电子天平梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司57328-U型PDMS萃取头SUPELCOGC-2014CATF日本岛津有限公司CBM-102GCsolution工作站日本岛津有限公司21 常熟理工学院毕业设计（论文）2.4实验方法以油菜花蜜为实验对象，对别于市场购买10种不同商家的油菜花蜜。总共测定10个样品的特征性图谱，分3阶段经行，第一阶段是优化条件，以一种蜂蜜为实验对象，利用顶空固相微萃取技术，改变萃取条件已达到最优数据，其中萃取条件主要是NaCl的量，萃取温度，萃取时间3个因素，其中NaCl为0g，0.5g，1.0g，1.5g。萃取温度为30℃，40℃，50℃，60℃。萃取的时间为20min，25min，30min，40min。第二阶段为用优化条件针对剩下的9组样品进行分析，这里每组样品只需一组最优数据。第三阶段是整合分析实验数据，最后得到在不同条件下以及不同品牌蜂蜜下油菜花蜜的气相色谱图，并由此建立油菜花蜜中的挥发性成分特征图谱[17]。2.4.1顶空固相微萃取提取油菜花蜜挥发性成分方法准确称取4.00g蜂蜜样品，加入容量瓶中；加入1ml的蒸馏水；加入氯化钠，加入转子，旋紧盖子；用250ml的烧杯加入适量的水，放在磁力搅拌器上加热，作为恒温水浴；用温度计测量水温，待水浴温度恒定后，将PDMS萃取头插入容量瓶至适当位置，再将容量瓶放入恒温水浴中，并用试管架固定好萃取器；调试磁力搅拌器的转动速度，使得转子稳定转动即可，伸出萃取头，开始挥发性成分的采集，并记时；采集完成后，收起萃取头，最后将提取好的萃取器插入气相色谱仪中进行分析。2.4.2气相色谱仪的操作流程开机：u先开氮气阀门，开电脑，打开工作站，打开仪器开关，打开信号采集器，顺时针打开尾吹氢气和空气旋纽。u控制面板打开程序文件。点击System,打开GC。工作站点击“采集参数”，“单次分析”，“样品记录”，设置数据存储路径。u等进样口、色谱柱、检测器3个地方温度升到设定温度，打开氢气和空气钢瓶阀门，控制面板上DET，按“点火”键。u进样，同时按下绿色按纽“START”，同时点击工作站“开始”和按下信号采集器的通道键，直到采集完成。关机：u先关尾吹氢气和空气旋纽，逆时针旋转。u点击SYSTEM，关闭GC。等进样口、色谱柱、检测器3个地方温度低于100度时，关仪器电源，关氮气阀门。u关工作站，关电脑，关信号采集器。21 常熟理工学院毕业设计（论文）色谱柱净化：再较长时间不使用气相色谱仪之后，下一次使用需进行260度净化15分钟（基线不平则继续升温净化）。2.4.3气相色谱条件气相色谱仪（日本岛津GC-2014C），配有FID氢火焰离子检测器、美国Restek毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)，进样口为双填充INJ+，以及TCD热导检测器[15]。对色谱分析中的分离温度进行了优化。为缩短蜂蜜中各挥发性组分的保留时间，提高分离度，同时降低峰宽，选择程序升温体系。兼顾分离效果和色谱峰形，选择的最佳升温梯度为：初始化温度为50℃保持3min；第一阶段以5℃/min的升温速度升至200℃，并保持5min；第二阶段以8℃/min的速度升温至240℃，并保持15min，平衡时间为3min[16]。进样口的温度设定为250℃，检测器的温度为260℃，载气为99.9%高纯度氮气，载气流速是1.2mL/min，采样时间为5min。2.4.5较适条件下挥发性成分的提取和气相色谱图的获得在萃取头已经提取了挥发性成分之后，将萃取头插入气相色谱仪的进样口中，开始进样，萃取头在采集30min之后取出，取出后的萃取头继续进行下一样品挥发性成分的提取。气相色谱的具体操作可以参照2.42，等工作站走完整个流程，得出气相色谱图，并且标识上蜂蜜样品的信息，便于10种蜂蜜的区分。2.4.6色谱图的数字化实验过程中的数据分析过程，是为了对蜂蜜样品色谱图进行比较，然而单纯的通过肉眼来观察分析，是很难精确的分析出共有峰以及得到准确的特征图谱的[18]。所以就必须将这些色谱图进行数字化，由此得到每个样品图谱的数字化信息数据，得到的数字化信息就能够用计算机进行分析比较，并将比较的结果进行量化表述，这样来获得不同蜂蜜样品的共有峰，从而获得油菜花蜂蜜的特征图谱[18]。从一张色谱图中可以的获得三个主要信息：一是保留值（即为气相色谱图的保留时间）；二是峰强度（即是色谱图的峰面积或峰高）；三是半峰宽，由此可以判断色谱分离时的柱效[18]。在这样的三个信息中，保留值和峰强度是判断识别和鉴定油菜花蜂蜜样品挥发性气体中复杂组分的主要依据，是本论文数据分析的重要数据源，将样品色谱图中的保留值和峰强度进行数字化，之后得到的称之为色谱特征谱。21 常熟理工学院毕业设计（论文）2.5数据处理方法采用origin7.0进行萃取条件优化试验数据分析，采用Excel2010软件对10种油菜花蜂蜜样品的内参考峰的获取、相对保留值、共有峰保留时间等数据进行处理[18]。21 常熟理工学院毕业设计（论文）3结果和讨论本论文研究中将保留值和峰强度进行数字化的最简单的方法，就是直接用气相色谱的保留时间的数值来表示保留值，用峰高或峰面积来表示峰强度[18]。但是，用这种数字化方法得到的数字化色谱特征谱，由于色谱本身存在着很大的缺陷而无法使用，这一缺陷就是色谱的保留值受到很多因素的影响。就是将色谱条件，如柱温、流动相的流速、流动相的组成，进样量等等进行严格控制，但它们的一些微小变化也会影响保留值的变化，更何况一些无法控制的因素的变化，如柱料填充状况的变化、室温的变化、流动相中易挥发成分的挥发等等，都将使色谱保留值发生变化[18]。所以直接用保留值进行比较，将会产生很多错误，直接用保留值的数值进行数字化得到的色谱特征图也是无法使用的。本论文研究中为了解决色谱保留值易受到很多因素的影响而发生波动，无法进行比较的缺陷，查阅文献借鉴并引入了“相对保留值（relativeretentionvolume）”的概念[18]。文献中对“相对保留值”的定义：组分图参与组分的调整保留值之比。相对保留值可以消除各种因素对色谱保留值的影响，既便色谱保留值色谱保留值发生了波动，“相对保留值”也是不会随其发生波动，其数值是稳定的[18]。因此，用相对保留值的数值对色谱图进行数字化得到的不同样品色谱特征谱之间就可以相互比较了，以便于取寻找共有峰。由此可以看出，要将色谱特征图谱数字化而得到可以进行比较的数字化色谱特征谱的关键是在色谱图中如何选择或者插入一个合适的参考峰[18]。3.1萃取条件的优化本研究对萃取温度、萃取时间、氯化钠的添加量这三个条件进行了实验：萃取温度的选择分为四个梯度，分别为30℃、40℃、50℃、和60℃；萃取时间的选择分为四个梯度，分别为20min、25min、30min和40min；萃取氯化钠的添加量分为下面四种0g、0.5g、1.0g、1.5g。表3萃取条件优化结果时间（min）峰个数最大峰高（μV）*温度梯度（℃）峰个数最大峰高（μV）*Nacl添加量（g）峰个数最大峰高（μV）*2024355483021511290354496121 常熟理工学院毕业设计（论文）2531393124037674950.531419843039674955031367631.037674954031294006012207651.53352314*峰高大于1000μV计入峰个数图1（a）萃取时间对峰数的影响图1（b）萃取时间对最大峰强度的影响由图1可知道在萃取时间为30min时峰个数最多，最大峰强度最大，则表明30min为最适萃取时间，与文献[17]结果相同。图2（a）萃取温度对峰数的影响图2（b）萃取温度对最大峰强度的影响由图2可知道在萃取温度为40℃时峰个数最多和最大峰强度最大，则表明40℃的萃取温度为最适合的，与文献[17]结果相同。图3（a）萃取氯化钠量对峰数的影响图3（b）萃取氯化钠量对最大峰强度的影响21 常熟理工学院毕业设计（论文）由图3可知当氯化钠的添加量为1.0g时，峰个数最多，最大峰强度最大，则说明1.0g为最佳添加量，与文献[17]结果相同。3.2共有内参考峰的确定参考峰的选择：参考峰的选择时要根据复杂样品的实际分离情况和实验条件的可能性来决定是采用外插参考峰还是内参考峰[18]。外插参考峰用于成分的鉴定试验，而且本论文油菜蜂蜜挥发性成分较多，选择合适的内标物（内标物的色谱峰在进行色谱分离时能够与待鉴定的色谱峰很好的分离、出现的位置要居中，并且能较清晰的分辨出）难度较大[18]。在本论文中，通过观察萃取条件优化实验色谱图和油菜蜂蜜挥发性成分气相色谱图，可以简单的分析出峰的数量一般在30多个，而且峰较多集中在前30分钟，这样的色谱图峰较为密集，几乎无缝可插，这时想在其中插入一个外参考峰几乎是不可能的。此时，在10组油菜蜂蜜挥发性成分色谱图统一选择一个适当的峰，作为内参考峰，将保留值转换为相对保留值[18]。内参考峰必须符合以下条件[18]：①内参考峰必须与相邻的的色谱峰分离较为良好，达到基线分离；②内参考峰的峰位置应位于所有色谱峰的中间，位于居中；③内参考峰应是一个较强的色谱峰；④内参考峰应在10种不同样品的色谱图中都存在。在工作站得到样品Y1-Y10挥发性成分的气相色谱图，肉眼观察很难区分差别，所以本研究中需要数字化的图谱信息，并作出筛选。论文中将筛选条件定为如下的条件：半峰宽为3秒，斜略为294.983μV/min，漂移为0μV/min，参变时间为1000min，最小峰面积为1000，最大切片数为0[18]。为了能确定参考峰，本研究中选出了下面（表4-表13）的数字信息供于分析。表4样品Y1中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）12.1901112.2632117.81823.2941212.8862219.52533.8851313.7302321.27545.1241414.2272426.01357.0841514.5382526.35121 常熟理工学院毕业设计（论文）610.0801614.6662630.284710.3861715.0762737.109810.9231816.068911.1431916.2201012.1322016.869表5样品Y2中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）12.9681112.7882122.17924.8161213.6622225.98435.5111314.60045.6861415.01156.2671516.10166.9091616.400710.2391716.595811.0911816.829912.1841916.9491012.4472021.258表6样品Y3中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）13.0381212.8272316.98824.8781313.1512417.50035.5621413.5582517.80245.7551513.7142619.08856.2961614.2012721.28066.8331714.4792821.91179.6471814.6312922.209810.2701915.0723023.763911.1132016.1193126.0101012.2182116.7171112.4892216.853表7样品Y4中挥发性成分的保留时间21 常熟理工学院毕业设计（论文）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）13.053512.803916.66326.322614.6101021.264311.108715.0151125.982412.193816.110表8样品Y5中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）13.031912.2031716.54724.8711012.4651816.67635.5611112.7991916.83945.7361213.1312016.96156.3071314.6162121.26769.6711415.0232222.184710.2421516.1092324.866811.1101616.3952425.991表9样品Y6中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）13.0441713.3143323.49325.5141813.6343423.76336.3481913.7413525.52446.8132013.8773625.64457.4852114.4503726.05367.6942214.6643827.38577.9352314.7403929.94488.3252415.0724030.17599.3512516.1194130.3321010.1262616.7114230.8201110.3192717.8424331.2841211.1352818.4014431.5651312.0562919.4984532.0331412.2623020.8574634.1671512.8633121.3114736.72221 常熟理工学院毕业设计（论文）1613.1083222.8664838.729表10样品Y7中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）13.033911.1201716.11724.8761012.2131816.73635.7491112.3061916.82746.3361212.4722017.49759.6511312.8062117.788610.2521413.6832221.271710.5951514.6172322.191810.8661615.0282425.998表11样品Y8中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）13.021611.1091115.01424.881712.1941216.10536.320812.4611317.77249.512912.7961421.260510.2351014.6061525.982表12样品Y9中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）12.991912.1731716.81724.8421012.4401817.76835.5291113.6561920.77745.7091214.1582021.25456.7401314.6042125.98666.9511414.9982230.263710.2261516.072811.0731616.63921 常熟理工学院毕业设计（论文）表13样品Y10中挥发性成分的保留时间峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）峰号保留时间（min）12.571912.8481717.81323.0031013.7041819.61434.8931114.2041921.29846.8331214.6442022.221511.0051315.0642126.027611.0941415.3202230.302712.2241516.076812.5071616.714内参考峰的挑选必须要满足前面所述的4个要求，经过分析比较，参考峰的保留时间（min）在14.600-14.700之间，每个样品的内参考峰已在表格中加粗加下划线标出，分别是Y1的16号峰、Y2的13号峰、Y3的18号峰、Y4的6号峰、Y5的13号峰、Y6的22号峰、Y7的15号峰、Y8的10号峰、Y9的13号峰、Y10的12号峰。3.3相对保留值的处理结果查阅文献[18]得知相对保留值的计算方法为：相对保留值=某一样品某一峰号的保留时间/同种样品中内参考峰的保留时间由表4-表13的保留时间得到下面的10种不同油菜蜜挥发性成分的气相色谱图谱的相对保留值（表14-表23）。为了方便共有峰的寻找获得，相对保留值的数值保留两位小数显示在下面的10张表格中。表14样品Y1中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.15100.83191.1120.21110.84201.1430.26120.88211.2140.35130.94221.3350.48140.97231.4660.69150.99241.7770.71161.00251.8080.74171.03262.0690.76181.10272.5321 常熟理工学院毕业设计（论文）表15样品Y2中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.2190.83171.1420.33100.85181.1530.38110.88191.1640.39120.94201.4650.43131.00211.5260.47141.03221.7770.70151.1080.76161.12表16样品Y3中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.21120.88231.1620.33130.90241.2030.38140.93251.2240.39150.94261.3050.43160.97271.4660.47170.99281.5070.66181.00291.5280.70191.03301.6290.76201.10311.77100.83211.14110.85221.15表17样品Y4中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.2150.8891.1420.4361.00101.4630.7671.03111.7740.8381.10表18样品Y5中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值21 常熟理工学院毕业设计（论文）10.2190.83171.1320.33100.85181.1430.38110.88191.1540.39120.90201.1650.43131.00211.4660.66141.03221.5270.70151.10231.7080.76161.12241.77表19样品Y6中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.21170.91331.6020.38180.93341.6230.43190.94351.7440.47200.95361.7550.51210.99371.7760.52221.00381.8870.54231.01392.0480.57241.03402.0690.64251.10412.07100.69261.14422.10110.70271.22432.13120.76281.25442.15130.83291.33452.18140.86301.42462.33150.88311.46472.50160.89321.56482.64表20样品Y7中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.2190.76171.1020.33100.83181.1430.39110.84191.1540.43120.85201.2050.66130.88211.2260.70140.94221.4621 常熟理工学院毕业设计（论文）70.72151.00231.5380.74161.03241.77表21样品Y8中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.2160.76111.0320.3370.83121.1030.4380.85131.1440.6590.88141.4650.70101.00151.77表22样品Y9中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.2190.83171.1520.33100.88181.2230.38110.94191.4240.39120.97201.4650.46131.00211.7760.48141.03222.0770.70151.1080.76161.14表23样品Y10中挥发性成分的相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值峰号相对保留值10.1890.88171.2120.21100.94181.3430.33110.97191.4640.47121.00201.5250.75131.03211.7760.76141.05222.0770.83151.1080.85161.143.4不同油菜花蜂蜜样品的图谱共有峰的分析21 常熟理工学院毕业设计（论文）将表14-表23中的相对保留值和峰号数据对应录入到Excel表格软件中，找出10中油菜花蜂蜜样品中挥发性成分的气相色谱分析图谱的共有的相对保留值，查找结果在表14-表23中用字体加粗表示出来了，那么得到的共有峰有10个（A-J包括了内参考峰），分别如表24所示。表24共有峰在10种样品中的对应峰号关系图共有峰Y1Y2Y3Y4Y5Y6Y7Y8Y9Y10A（0.21）2111111112B（0.76）98938129686C（0.83）10910491310797D（0.88）12111251115139109E（1.00）1613186132215101312F（1.03）1714197142416111413G（1.10）1815208152517121515H（1.14）2017219182618131616I（1.46）23202710213122142019J（1.77）242231112437241521213.5共有峰的保留时间结果在相同的实验条件下（包括顶空固相微萃取实验和气相色谱实验），共有峰的保留时间可以有相对保留值得出。在内参考峰选取是有提到内参考峰的范围在14.600min-14.700min之间，对于源数据精确内参考峰的范围，可得到为：14.600min-14.666min。共有峰的保留时间的计算公式[18]：（算出是一个范围）保留时间=相对保留值*内参考峰的实际范围由此公式算出的共有峰保留时间如表25所示。表25共有峰的相对保留值与保留时间共有峰相对保留值共有峰出峰保留时间范围（min)共有峰相对保留值共有峰出峰保留时间范围(min)21 常熟理工学院毕业设计（论文）A0.213.066-3.080F1.0315.038-15.106B0.7611.096-11.146G1.1016.060-16.133C0.8312.118-12.173H1.1416.644-16.719D0.8812.848-12.906I1.4621.316-21.412E1.0014.600-14.666J1.7725.842-25.9593.6油菜花蜂蜜中的挥发性成分色谱图图7暖民蜂蜜样品的气相色谱图图8雷允上蜂蜜样品的气相色谱图图9蜂献蜂蜜样品的气相色谱图图10葆丰蜂蜜样品的气相色谱图图11刘氏蜂蜜样品的气相色谱图图12越贡蜂蜜样品的气相色谱图21 常熟理工学院毕业设计（论文）图13丁氏蜂蜜样品的气相色谱图图14精灵子蜂蜜样品的气相色谱图图15藏原蜜语蜂蜜样品的气相色谱图图16康思农蜂蜜样品的气相色谱图通过比较10组样品的色谱图和相对保留时间并对照参考峰，共得到10个共有峰。保留时间相对较稳定，因此这10个峰为共有特征峰。研究结果共有峰的峰号(相对保留时间min)：1（3.066-3.080），2（11.096-11.146），3（12.118-12.173），4（12.848-12.906），5（14.600-14.666），6（15.038-15.106），7（16.060-16.133），8（16.644-16.719），9（21.316-21.412），10（25.842-25.959）。21 常熟理工学院毕业设计（论文）4结论本论文利用气相色谱分析了顶空固相微萃取的10种油菜花蜂蜜中的挥发性成分，将气相色谱所得的色谱图中的保留值和峰强度进行数字化，得出萃取的最优条件为40℃，30min，1.0g氯化钠。在内参考峰选取是有提到内参考峰的范围在14.600min-14.700min之间，对于源数据精确内参考峰的范围，可得到为：14.600min-14.666min。研究结果表明共有10个共有峰。共有峰的峰号(相对保留时间min)：1（3.066-3.080），2（11.096-11.146），3（12.118-12.173），4（12.848-12.906），5（14.600-14.666），6（15.038-15.106），7（16.060-16.133），8（16.644-16.719），9（21.316-21.412），10（25.842-25.959）。共有峰的确定可用于区分不同种类的蜂蜜，更是区分真蜂蜜和掺假蜂蜜的重要依据，具有极高的研究意义。21 常熟理工学院毕业设计（论文）参考文献[1]中华人民共和国国标GB14963-2011.[2]Tomas-BarberanFA,MartosI,FerreresF,etal.HPLCflavonoidprofilesasmarkersforthebotanicaloriginofEuropeanunifloralhoneys[J].JSciFoodAgric,2001,81(5):485-496.[3]BousetaA,ScheirmanV,CollinS.Flavorandfreeaminoacidcompositionoflavenderandeucalyptushoney[J].JFoodSci,1996,61(4):683-687.[4]IglesiasMT,DelorenzoC,PoloMD,etal.Usefulnessofaminoacidcompositiontodiscriminatebetweenhoneydewandfloralhoneys.Applicationtohoneysfromasmallgeographicarea[J].JAgricFoodChem,2004,52(1):84-89.[5]张明霞,吴玉文,段长青.葡萄与葡萄酒香气分析方法研究进展[J].酿酒科技,2008(6):95-98.[6]张复兴.现代养蜂生产[M].北京:中国农业大学出版社,1998,285-303.[7]吕美红,严启新,梁慧,等.苍术GC指纹图谱研究[J].中成药,2010,32(10):1652-1656.[8]苗爱东,孙殿甲.Excel2002在中药指纹图谱相似度计算中的应用[J].药学进展,2003,27(1):51-54.[9]李成斌,林瑜,邓国宾,等.八种蜂蜜挥发性成分分析[J].精细化工,2006,23(11):1082-1088.[10]赵立夫，姜宇懋，张清清，等.掺假蜂蜜识别技术的研究进展[J].经济动物学报2012，2(16):115-118.[11]王占禄.中国蜂产品贸易的十年发展[J].中国蜂业:47-50.[12]朱晓玲,朱婕妤,朱露,等.四种蜂蜜中脂肪酸的气相色谱-质谱分析[J].食品科学,2011,16:338-342.[13]罗显来,刘吟,黄文.湖北油菜蜂蜜的指纹图谱研究[J].中国蜂业,2010,04:10-13.[14]涂世,徐丽嫚,陈静,等.油菜蜂蜜中挥发性成分指纹图谱的建立[J].食品科学,2011,20:136-141.[15]Codexstandard12-2001.CodexStandardforHoney[S].[16]CouncilDirective(EC)2001/110ff[S].[17] Beata Plutowska, Tomasz Chmiel, Tomasz Dymerski, et al. A headspace solid-phase microextraction method development and its application in the determination of volatiles in honeys by gas chromatography[J].Food Chemistry, 126(2011), 1288-1298.[18]汪正范.色谱定性与定量[M].北京:化学工业出版社,2007,4-15821 常熟理工学院毕业设计（论文）致谢毕业论文的完成标志着我的大学四年生活即将结束。在此之际，首先我要感谢的是我的导师权英老师。在学习和生活中，权老师以其高尚的道德、渊博的学识、活跃的思维、严谨的实验态度使我受益颇多。权老师不仅在毕业论文的实验中给我以孜孜不倦的指导，在实验的严谨性方面权老师对我影响更加深刻。这为我以后的研究生生活奠定了良好的基础。对权老师的谢意我无法用言语来表达，在此谨向她表示我最衷心的感谢！感谢生物与食品学院的领导和老师，给我们提供了实验的环境和实验的材料，并不时的在论文中给以指导。其中，特别感谢实验室的徐兵老师在实验中提供的大量帮助。感谢和我一起做实验的王伟杰、王雷、叶晶、刘杰、史增杰同学以及给予我帮助的所有人。此外，四年里与许多同学相处、合作极为真诚和融洽，特别是我的室友，在此向他们表示我衷心的谢意。感谢我的父母对我的关怀，是他们对我的支持才是我完成我的学业。最后，要向百忙中抽空阅读本论文的各位领导与老师，致以最衷心的感谢！21