炼蜜炮制机理研究美拉德反应对炼蜜炮制及其生物活性的影响 93页

，：；．托．与Ｖ．哨；梵聲智＜知辟．－＇？戶？．批－：．．＇Ｖ，沪Ｖ；．＇化巧扭．；古次務扣，Ｖ试為．巧＞互巧．苗＇＇巧：社為劳飞分类号：Ｒ９单位代码：１０４２２新讀密级：公开学号；２０１２１４１３６亏１如＜ｉ硕±学位论文ＴｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅ（专业学位）论文题目：；炼蜜炮制机理研究美拉德反应对炼蜜炮制及其生物活性的影响Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｙ：ＥｆｆｅｃｔｏｆＭａｉｌｌａｒｄ．ｒｅａｃｔｉｏｎｏｎｉｔｓｒｏｃｅｓｓｉｎａｎｄｂｉｏｌｏｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｐｇｇ＇？Ｉｒ作者姓名巧巧思當车干培养单位药学院专业名称巧学硕±｜帯指导教师温学森教授－合作导师：：：ＩＩ＿豁１５蘇：提扣２０１５年５月２７日． 分类号；Ｒ９单位代码：１０４２２密级；公开学号；２０１２１４１３６ＳＨＡＮＤＯＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕±学位论文ＴｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒＤｅｒｅｅｇ（专业学位）论文题目：炼蜜炮制初：？理硏究美拉德反应对炼蜜炮制及其生物活性的影响Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｅ田ｎｅｄｈｏｎｅｙ：ＥｆｆｅｃｔｏｆＭａｉｌｌａｒｄｇｒｅａｃｔｉｏｎｏｎｉｔｓｒｏｃｅｓｓｉｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｐｇＩ作者姓名高慧丰培养单位药学院专业名称药学硕±指导教师温学森教授合作导师２０１５年５月２２日 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名？２３日；高筆丰日期：如仪４！同关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：导师签名；期；〇〇故如叩 目录摘要１ＡＢＳＴＲＡＣＴ４符号说明７第一章前言８１．１美拉德反应８１．２焦糖化反应２１１．３炼蜜简介口１．４微生物发酵技术与中药炮制巧１５化疗与窥膜炎化．１６１９．立题依据与研巧思路第二章蜂蜜中两种主要还原性单糖的美拉德与焦糖化反应规律研巧２１２．１仪器与试剂２１２．２实验方法和结果２２２３３４．讨论第Ｈ章美拉德反应及酵母菌发酵对炼蜜的相关成分和体外抗氧化活性影响．．．３７３．１仪器与试剂３７３．２实验方法与结果３８３３４５．讨论第四章美拉德反应及酵母菌发酵对炼蜜抗肌Ｘ诱导小鼠肠道黏膜炎的影响．．．４６４．１仪器与试剂４６４．２实验动物４７４．３实验方法与结果４７４．４讨论６０第五章不同炼蜜与ＭＴＸ联合应用对人白血病细胞帖６２的影响６４４５１６．仪器与试巧ｙ ５．２人白血病细胞Ｋ５６２的培养扣５３巧．实验方法和结果５．４讨论６８第六章主要结论７０参考文献巧麵８４攻读硕±学位期间发表文章目录８５ ＣＡＴＡＬＯＧＵＥＣｈｉｎｅｓｅＡｂｓｔｒａｃｔ１？？？■Ａｂｓｔｒａｃｔ？？？４Ａｂｂｒ７ｅｖｉａｔｉｏｎＣｈａｐｔｅｒ１Ｐｒｅｆａｃｅ８．１８．１Ｍａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎ１２１２Ｃａｒａｌｉｚｔｉ．ｍｅａｏ打１ｎｏ．１３．３Ｓｙｐｓｉｓｉｉｉｎｅｒｓｉｎ…１５１４Ｍｉｃｏｂｉｏｌｏｉｃｆｔｔｉ化ｈｎｉｕｄＣｈｎｅ化ｍｅｄｃｏｃｅｓ－ｒｇｅｒｍｅｎａｏｎｃｑｅａｎｐｇ－１１ｈｅｍｏｈｅｒａａｎｄｍｕｃｏｓｉｔｉｓ６．５Ｃｔｐｙ］．．６Ｓｕｂｅｃｔｂａｓｉｓａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｄｅｓｉｎ１９ｊｇＣｈａｔｅｒ２Ｓｔｕｄｙｏ打ＭａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄＣａｒａｍｅｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｒｅｄｕｃｉｎｓｕａｒｓｉｎｐｇｇｈｏｎｅｙ２１２２ｉｅｎａｎｄｅｎｔ１．１Ｅｑｕｐｍｔｒｅａｇ２ｅｈｏｄｓａｎｄｒｅｓｕｌ２２．２Ｍｔｔｓ２ｉｕｉ３４．３ＤｓｃｓｓｏｎＣｈａｔｅｒ３ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＭａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｙｅａｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｐ－７ｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅ３ｙ３ｉｅｎｅａｅｎ３７．１Ｅｑｕｐｍｔａｎｄｒｇｔ３３８．２Ｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｒｅｓｕｌｔｓ３ｏｎ４５．３ＤｉｓｃｕｓｓｉＣｈａｔｅｒ４ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＭａｉｌｌａｒｄＫａｃｔｉｏ打ａｎｄｅａｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｌｐｙｍｉｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙＭＴＸ４６４１Ｅｕｉｍｅｎｔａｎｄｔ４６．ｑｐｒｅａｇｅｎ４２ｓ—Ａｎｉｍａｌ４７．４３Ｍｅｈｏｄｎｄｕｌｔ．．ｔｓａｒｅｓｓ４７４４Ｄｓｃｕｓｓｉｏ＂？？？？■？？６０．ｉｎ Ｃｈａｐｔｅｒ５Ｅｆｅｃｔｓｏｆｃｏｍｂｉｎｅｄａ如ｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｆｉ打ｅｄｈｏｎｅｙｓａｍｐｌｅｓａｎｄｅｅｉｌｌｌｉ６２６４ＭＴＸｏｎｈｕｎｍａｎｌｕｋｍａｃｅｎｅＫ５ｔ＂６４５．１Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔａｎｄｉｒｅａｇｅ打５２Ｈｖｌ．６５ｉｎｍａｎｌｅｕｋｅｍｉａｌｌｌｉＫ５６２ｃｕｔｕｒｅ．ｃｅｎｅ５．３Ｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｒｅｓｕｌｔｓ６５５ｉｏ．＂６８．４Ｄｉｓｃｕｓｓｎ７０Ｃｈａｐｔｅｒ６ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＲｅｆｅｒｅｎｃｅ－７２ｅｓＡｃｋｎｏｗｌｅｄｇｍｅｎｔ８４Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ８５ 山东大学硕±学位论文炼蜜炮制奶理研究：美拉德反应对炼蜜炮制及其生物活性的影响专业：药学硕±研巧生：高慧丰导师：温学森教授摘要蜂蜜既是食品又是药品，同时还是中药炮制和中药制剂的常用辅料，在作为辅料使用时，通常需要加工成炼蜜。经过炼制，炼蜜的粘度提高，在制剂中发挥粘合剂的作用。但是，在中药炮制过程中，需要用水将炼蜜稀释，然后与。饮片拌匀，再妙干，因此难１＾？用粘度提高解择其炮制机理前人研究发现，经过炼制，蜂蜜中的哲甲基辕酵（ＨＭＦ）含量大幅度增加，结合炼蜜颜色加深的特点，本文巧测其中发生了美拉德反应和焦糖化反应一，其反应产物可能具有增强饮片或制剂生物活性的作用。为了验证这假１）、说，本研巧（评价了葡萄糖果糖和ＨＭＦ单独加热反应Ｗ及与不同氨基酸一－ｈ）起加热反应后，产物的理化性质和抗氧化活性；（２）制备了炼蜜（Ｒ、谷氨酸钢炼蜜－（（ＧＲｈ）添加谷氨酸钢炼蜜Ｗ促进美拉德反应）、发酵谷氨酸钢ＧＲ－ｈ炼蜜（Ｆ）（将谷氨酸钢炼蜜用酵母菌发酵Ｗ降解糖和ＨＭＦ），然后对比了其理化性质和体内外生物活性。主要结果如下：１．热处理对果糖、葡萄糖和ＨＭＦ的影响：果糖和葡萄糖（５００ｍｇ／ｍＬ）分°别于班４．０１００Ｃ条件下加热、，反应液褐变吸收（Ａ４２０）ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ，７＾１Ａ、自由基清除活性均随着反应时间逐渐提高。反应后，果糖体系的４２０ＨＭＦ含量Ｗ及ＤＰＰＨ自由基清除活性分别比葡萄糖体系高９．０９、１７．３８和化８１倍。果糖和葡萄糖分别与１９种不同的氨基酸（摩尔浓度比为５０：１）反应１化〇￣２？３０后，反应液Ａ４２０分别増加．〇９．２７倍和０．６８．４３倍；大部分氨基酸对果糖反应液的ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ自由基清除活性影响不大（除半脫氨酸、脯氨酸和色氨酸外），但是对葡萄糖反应液影响较大（除半脫氨酸外），葡萄糖体系ＨＭＦ？含量及ＤＰＰＨ自由基清除活性比不添加氨基酸时分别提高０．３２１６．１３倍和’０４？．５１．３１倍。ＨＭＦ单独于阳４化ｌＯＯＣ条件下加热反应１２ｈ后反应液Ａ４２０及１ 山东大学硕±学位论文ＤＰＰＨ清除活性较未加热时分别提高１０．９０倍和６．２４倍，除色氨酸外，与１８种一不同氨基酸加热反应后，ＨＭＦ反应液的Ａ４２０及ＤＰＰＨ清除活性均进步显著提离。２．添加氨基酸盐及醇母菌发酵对炼蜜的影响：采用添加谷氨酸钥的方法在‘Ｃｈｂ色彩Ｌ－１２０下炼蜜２，根据Ｌａ模型分析、ａ、ｂＨ者的数值发现ＧＲｈ的颜色－ＨＲ－ｈ明显加深０较生蜜（）和Ｈ中ＨＭＦ．０８４ｍ／ＲｈＦ；含量仅为ｇｇ；的ＨＭ含－－－量显著増加．１２４ｍ／ＧＲｈ的ＨＭＦＲｈ２５％Ｒｈ的，达１ｇｇ；含量较仅增加了；ＤＰＰＨＨ６－．３２和２．９７ＧＲｈ的清除活性及总抗氧化能为比分别提高了倍，而ＤＰＰＨ清除民－ｈ相比又分别提高了２．３０和２．６６倍活性及总抗氧化能力与。在Ｈ与两种炼蜜中，Ｈ的糖含量最高，为７９４．５００ｍｇ／ｇ；炼制使糖含量小幅下降。ＧＲ－ｈ经酵母ＨＭＦ５３０．１８０．４０８／菌发酵后，糖及大部分降解，分别由和１ｍｇｇ下９８．１６０和０．３３５ｍ／。降至ｇｇ，但是体系颜色和抗氧化活性几乎没有变化３．不同炼蜜样品对化疗副作用的预防作用；用化疗药ＭＴＸ（５ｍｇ／ｋｇ体重）诱导小鼠肠道黏膜炎。ＧＳＨ（０．１３ｇ／ｋｇ体重）为阳惶对照，给药组分别－－Ｈ－－给与、Ｒｈ、ＧＲｈ及ＦＧＲｈ（２．６／ｋ重）。结果发现，除Ｒｈ外治疗ｇｇ体，其他组小鼠的体重、食量、白细胞下降情况、旷场实验活动能为、脾脏指数下降程二ＭＴＸ－ｈ度及十指肠组织形态均比模型组小鼠有所改善，其中ＦＧＲ的改善效果最好。从生化指标看，ＭＴＸ组小鼠空麻的ＭＰＯ及ｉＮＯＳ活性较正常对照组（ＮＣ）明显提高（ｐ＜化００１，ｐ＜化００〇，ＭＤＡ及蛋白质殻基含量显著增加（ｐＣＯ．ＯＯｌ，ｐ＜０．００１）；而各给药组均使两种酶的活性及ＭＤＡ、蛋白质幾基Ｒ－ｈ组治疗含量显著下降，四个生化指标的测定结果显示ＦＧ效果最为显著（显ｃｏ著性均为ｐ．ｏｏｌ）。４．不同炼蜜样品对白血病细胞株Ｋ５６２増殖的影响；ＷＭＴＴ法检测不同浓度的ＭＴＸ单独应用及与Ｈ和不同的炼蜜联合应用对人白血病细胞Ｋ５６２増殖的影响，细胞增殖抑制率逐渐升高与ＭＴＸ，结果发现随着ＭＴＸ浓度的增大；ｍｏ－－（０．０５ｎｌ／Ｌ）单独应用时相比，０．５ｍｇ／ｍＬ的ＧＲｈ或ＦＧＲｈ与０．０５叫ｎｏｌ／Ｌ的ＭＴＸ联合应用表现出显著的抑制肿瘤细胞生长的作用（＜０．０１，＜０．０１），ｐｐ－ｈ没。浓度为Ｏ／ｍ，而Ｈ和民有明显作用．ｌｍｇＬ时各种蜂蜜样晶与ＭＴＸ联用后均未对该肿癌细胞表现出不同于ＭＴＸ单独应用时的显著性作用。２ 山东大学硕±学位论文：本文结果表明美拉德反应极大地促进了炼蜜相关成分及活性的变化，美拉德反应和酵母菌发酵的应用改善了炼蜜的性能，提爵了其在缓解化疗导致的消化道黏膜炎方面的应用价值。关键词：美拉德反应；焦糖化反应；炼蜜；发酵；肠道黏膜炎３ 山东大学硕±学位论文Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅ；ＥｆｆｅｃｔｏｆＭａｉｌｌａｒｄｇｙｒｅａｃ村ｏｎｏｎｉｔｓｒｏｃｅｓｓｉｎａｎｄｂｉｏｌｏｉｃａｌａｃｔｉｖｉ村ｅｓｐｇｇＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＭａｓｔｅｒｉｎＰｈａｒｍａｃｙＰｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：ＧａｏＨｕｉｆｅｎｇＳｕｅｒｉｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＷｅｎＸｕｅｓｅｎｐＡＢＳＴＲＡＣＴＨｏｎｅｙｉｓｆｏｏｄａｎｄｍｅｄｉｃｉｎｅ，ａｓｗｅｌｌａｓａｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｘｃｉｐｉｅｎｔｉｎｐｒｅｐａｒａｔｉｏ打ｏｆＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ义８６化化ｂｅｉｎｇｕｓｅｄａｓｅｘｃｉｉｅｎｔｉｔａｌｗａｓ打ｅｅｄｓ化ｐ，ｙｂｅｐｒｏｃｅｓｓｅｄｉ打ｔｏｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｙｄｕｒｉｎｇｗｈｉｃｈｉｔｓｓｔｉｃｋｉｎｅ巧ｅｎｈａｎｃｅｄ．Ｈｏｗｅｖ巧，ｄｕｒｉｎｇｒｏｃ的ｓｉｎＣｈｉｎｅ化ｍｅｄｉｃｉｎｅｓｉｔｉｓｎｅｃｅ巧ａｒｆｂｒｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｔｏｂｅｄｉｌｕｔｅｄｐｇ，ｙｙｗａｔｅｒａｎｄ－ｗｉｔｈｔｈｅｎｂｅｉｎｇｍｉｘｅｄｗｉｔｈｍｅｄｉｃｉｎｅｓｌｉｃｅｓｆｂｒｓｔｉｒｆｒｙｉｎ．Ｓｏｉｔｉｓｄｉｆｉｃｕｌｔｇ化ｅｘｐｌａｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏ打ｅｙｏｎｌｙｂｅｎｈａｎｃｉｎｔｈｅｙｇｓｔｉｃｋｉｎｅｗ．ＰｒｅｖｉｏｕｓｓｔｕｄｉｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｉｉｒｆｕｒａｌＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎ（）ｈｏｎｅｙｇｒｅａｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｂｅｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｅｄ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｉｎｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉ打ｃｒｅａｓｅｄｃｏｌｏｒｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｙｗｅｈｏｔｈｅｓｉｚｅｄｔｈａｔＭａｉｌｌａｒｄ化３〇化〇打ａｎｄ，ｙｐＣａｒａｍｅｌｉｚａｔｉｏｎｏｃｃｕｒｒｅｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅｒｏｃｅｓｓｉｎ．Ｔｈｅｒｏｄｕｃｔｓｍａｂｅｔｈｅｍａｔｅｒｉａｌｐｇｐｙｂａｓｉｓｔｏｅｎｈａｎｃｅｏｒｃｈａｎｇｅｔｈｅｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｍｅｄｉｃｉ打ｅｓｌｉｃｅｓ．Ｉ打ｏｒｄｅｒｔｏ化巧ａｎｄ－ｖｅｒｉｆｙｔｈｉｓｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓｉｎｔｈｉｓｄｉ巧ｅｒｔａｔｉｏ打ｔｈｅｈｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｏｅｒｔｉｅｓａｎｄａｎｔｉ，，ｐｙｐｐｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｒｏｄｕｃｔｓｏｂｔａｉ打ｅｄｆｒｏｍｔｈｅｆｒｕｃｔｏｓｅｌｕｃｏｓｅａｎｄＨＭＦｓ巧ｅｍｐ，ｇｙｗｏｒｉｉｄｄｄｔｉｏｎ－ｈｉｔｈｗｉｔｈｏｕｔａｍｎｏａｃｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｉｎａｉｔｈｅｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅ民，ｙ（），ｍ－－ｇｌｕｔａｉｃｓｏｄｉｕｍｆｏｒｔｉｆｉｅｄ化ｆｉｎｅｄｈｏｎｅｙＧＲｈ）（ａｄｄｉｎｇｇｌｕｔａｍｉｃｓｏｄｉｕｍ化ｅｎｈａｎｃｅ（Ｍａ－－ｉｌｌａｒｄｔａｃｔｉｏｎ）ａｎｄｆｅｒｍｅｎｔｅｄｓｏｌｕｔｉｏ打ｓｏｆＧＲｈＦＧＲｈ）（ａｄｄｉｎｅａｓｔｔｏｒｅｄｕｃｅ（ｇｙｓｕａｒｓａｎｄＨＭＦｗｅｒｅｒｅａｒｅｄ化ｃｏｍａｒｅａｎｄｓｔｕｄｔｈｅｈｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｏｅｒｔｉｅｓｇ）ｐｐｐｙｐｙｐｐａｎｄｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｔｈｅｍａｉｎｒｅｓｕｌｔｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｌ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｅａｔｒｏｃｅｓｓｉｎｏｎｆｒｕｃｔｏｓｅｌｕｃｏｓｅａｎｄＨＭＦｓｓｔｅｍｓ：Ｗｈｅｎｐｇ，ｇｙｆｒｕｃ＊ｔｏｓｅａｎｄｌｕｃｏｓｅｉｅｓｅｃｔｉｖｅｌｕｎｄｅｒｗｅｎｔｈｅａｔｒｏｃｅｓｓｉｎｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｇｐｙｐｇ＂１００ＣａｎｄＨ４．０ｔｈｅａｂｓｏｒｂａｎｃｅａｔ４２０ｎｍＡｏｆｒｅａｃｔｉｏｎｓｓｔｅｍ化ｅｔｈｅｒｗｉｔｈｐ，（４２０）ｙｇｃｃｍｔｅ打ｔｓｏｆＨＭＦａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅ打ｉｎａｃｔｉｖｉｔｉｎｃｒｅ泣ｓｅｄｒａｄｕａｌｌ．Ａｆｔｅｒ７２ｇｇｙｇｙｈｏｕｒｓＡ４２ＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎｉｎａｃｔｉｖｉｔｏｆｔｈｅｆｒｕｃｔｏｓｅ，０？ｇｇｙｓｓｔｅｍｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂ９．０９１７．３８ａｎｄ０．８１ｔｉｍｅｓｒｅｃｔｉｖｅｌｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｙｙ，ｅｓｐｙｐ４ 山东大学硕±学位论文ｇｌｕｃｏｓｅｓｙｓｔｅｍ．Ａｆｔｅｒｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈ１９ｋｉｎｄｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓ（ａｔｔｈｅｍｏｌｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒｏｏｒｔｉｏｎｏｆ５０：１ｆｏｒ１２ｈｏｕｒｓＡｏｆｆｒｕｃｔｏｓｅａｎｄｌｕｃｏｓｅｓｓｔｅｍｓｐｐ），４２０ｇｙｒｅ？？ｗｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ０．０９２．２７ａｎｄ０．６８３０．４３巧ｍｅｓＫｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｙｓｔｅｍｓｗｉｔｈｏｕｔａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＴｈｅｍａｊｏｒｉｔｙｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｈａｄｌｉｔｔｌｅｅｆｆｅｃｔｏｎＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌ化ａｖｅ打ｇｉ打ｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｆｒｕｃｔｏｓｅｓｓｔｅｍ（ｅｘｃｅｔｃｓｔｅｉｎｅｙｐｙ，ｐｒｏｌｉ打ｅａｎｄｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）ｂｕｔｈａｄｇｒｅａｔｅｆｆｅｃｔｓ０打化ｅｇｌｕｃｏｓｅｓｙｓｔｅｍ（ｅｘｃｅｐｔｃｙｓｔｅｉｎｅ）＇ｏｆｗｈｉｃｈｔｈｅＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎｉｎａｃｔｉｖｉｔｗｅｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｇｙｉｙｇ？ａｎｄ？ｅ０．３２１６．１３０．４５１．３１ｔｉｍｅｓｒｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅＡ４２０ａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ＂ａｃｔｉｖｉｔｏｆＨＭＦｓｓｔｅｍｗｈｉｃｈｗａｓｈｅａｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ１００ＣａｎｄＨ４．０ｙｙｐｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ１０．９０ａｎｄ６．２４ｔｉｍｅｓｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｔｉｉｅｕｎｈｅａｔｅｄ．Ｅｘｃｅｐｔｆｏｒｐｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ，ａｌｌｒｅａｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈｔｈｅｏｔｈｅｒ１８ｋｉｎｄｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｆｕｒｔｈｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅＡ４２０ａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎｉｎａｃｔｉｖｉｔｏｆＨＭＦｓｓｔｅｍ．ｇｇｙｙ２．Ｔｈｅｅｆｆｅ。ｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓａｌｔａｎｄｅａｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎ化ｅｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｙ：ｙ＂Ｒｅｆｉｎｉｎｇｈｏｎｅｙｂｙｍｅａｎｓｏｆａｄｄｉｎｌｕｔａｍｉｃｓｏｄｉｕｍａｔ１２０Ｃｆｏｒ２ｈｏｕｒｓｌｅｄｔｏｔｈｅｇｇｄａｒｋｅｒｃｏｌｏｒｏｆｈｏｎｅｙｓａｍｌｅｂａｓｅｄｏｎｔｈｅＬａｂｃｏｌｏｒｍｏｄｅｌ．ＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔｉｎｆｒｅｓｈｐｈｏｎｅｙ（Ｈ）ｗａｓｏｎｌｙ０．０８４ｍｇ／ｇ，ｓｉｍｐｌｅｈｅａｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｉｎｃｒｅａｓｅｄＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔｉｎｈｏｎｅｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，化ｂｅ１．１２４ｍｇ／ｇ，ａｎｄｇｌｕｔａｍｉｃｓｏｄｉｕｍｆｔｉｒｔｈｅｒｉｎｃ化ａｓｅｄＨＭＦ〇ｅｕ－ｌｅｖｌｂｔｏｎｌｙｂｙ２５／＾．ＦｏｒｔｈｅＲｈｔｈｅＤＰＰＨ化ａｖｅｎｉｎａｃｔｉｖｉｔａｎｄｔｏｔａｌ，ｇｇｙａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂ６．３２ａｎｄ２．９７ｔｉｍｅｓ化３６〇巧乂６ｃｏｍａｒｅｄｙ口心ｐｎｄ－ｒｅｅｃｗｉｔｈｔｈｅＨａｔｈａｔｏｆＧ民ｈｗｅｒｅｉｎｃａｓｅｄｂ２．３０ａｎｄ２．６６ｔｉｍｅｓｉｒｅｓｔｉｖｅｌｙ，ｙｐｃｏｍａｒｅｄ－ｐｗｉ化化ｅＲｈ．ＴｈｅｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔｏｆＨｗａｓ７９４．５００ｍ／化ｅｈｉｈｅｓｔａｍｏｎｇｇ，ｇｇｍａａｃ＊ａｌｌｔｈｅｈｏｎｅｙｓａｐｌｅｓ．Ｈｅｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｗｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔａｍｉｎｏｉｄｓａｌｔｉｅｓｕｌｔｅｄｉｎｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｕａｒｃｏ打ｔｅｎ－ｔｔｓｉｎｈｏｎｅ．ＡｓｆａｒａｓＧＲｈｅａｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｉｏ打ｌｅｄｔｏｇｙ，ｙｄｅ＾ｒａｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｓｔｏｆｓｕａｒｓａｎｄＨＭＦｉｅｄｕｃｉｎｆｒｏｍ５３０．１８０ａｎｄ１．４Ｇ８ｍ／化ｇｇ，ｇｇｇ＊９８－．１６０ａｎｄ０．３３５ｍ／ｉｅｓｅｃ１ｉｖｅｌ．Ｈｏｗｅｖｅｒｔｈｅｃｏｌｏｒａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｈａｄｇｇ，，ｐｙｙｌｉｔｔｌｅｃｈａｎｇｅ．３．Ｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ：ｒｅｆｉ打ｅｄｈｏｎｅｙｓａｍｐｌｅｓｏｎｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：Ｋｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅｗｅｒｅｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（ＭＴＸ）口ｍｇ／ｋｇｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ１：０ｉｎｄｕｃｅｉ打ｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓｉｔｉ义ＵｓｉｎＧＳＨ０．１３／ｋｂｏｄｙ）ｇ（ｇｇｗｅ＊ｉｈｔａｓｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｒｅｖｅｎｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｒｏｕｓｗｅｒｅｉｅｓｅｃｔｉｖｅｌｉｖｅｎＨｇ）ｐ，ｐｇｐｐｙｇ，－－－ｗａｓｆｏｕｎｄ民ｈＧＲｈａｎｄＦＧＲｈ．６／ｋｂｏｄｗｅｉｈｔ．Ｉｔｔｈａｔ化ｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｒｏｕｓ，口ｇｇｙｇ）ｇｐ－ｗｅｅｘｃｅｐｔＲｈｄｉｓｌａｅｄｉｍｒｏｖｅｄａｓｐｅｃｔｓｉｎｂｏｄｉｇｈｔｆｏｏｄｉｎｔａｋｅａｎｄｗｈｉｔｅｂｌｏｏｄｐｙｐｙ，ｃｅｌｌｃｏｕ打ｔｓｄｅｃｒｅｍｅｎｔｓｔｏｔａｌａｃｔｉｖｉｔｉ打ｏｅ打打ｅｌｄ化Ｓｔｓｌｅｅｎｉｎｄｅｘａｎｄｔｈｅ，ｙｐ，ｐ５ 山东大学硕±学位论文ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｄｕｏｄｅｎｕｍｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＭＴＸｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．ＡｍｏｎｇａｌｌｔｈｅｔｒｅｔｍｅｎｔｒｏｕｓＦＧＲ－ｈｓｈｏｗｅｄ化ｅｂ的ａｇｐｔｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｅｆｆｅｃｔ．Ａｓｆａｒａｓｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ，ＭＴＸｍｏｄｅｌｍｉｃｅｈａｄｈｉｇｈｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＭＰＯ）ａｎｄｉｎｄｕｅ化ｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅｉＮＯＳ）＜０．００１，＜０．００ａｎｄｈｉｈｅｒｌｅｖｅｌｓｏｆ（（ｐｐ。ｇｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅＭＤＡａｎｄｒｏｔｅｉｎｃａｒｂｏｎｌ＜０．００１，ｐ＜０．００１ｔｈａｎｎｏｒｍａｌ（）ｐｙ（ｐ）ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＣ）ｍｉｃｅ．Ａｌｌｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｓｈｏｗｅｄｉｍｐｒｏｖｅｄｅｆｆｅｃｔｓａｍｏｎｇｗｈｉｃｈ－＜０ＦＧＲｈｈａｄｔｈｅｍｏｓｔｓｉｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔｗｉｔｈａｌｌｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅ．００１ｇｎｇ．ｐ４．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ出ｆｅｒｅｎｔ巧巧ｎｅｄｈｏｎｅｙｓａｍｌ的ｏｎ出６ｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｐｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｌｉｎｅＫ％２：ＢｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆＭＴＴ化Ｓｔ，ｔｈｅｅ祗ｃｔｓｏｆＭＴＸｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｍｉｘｔｕｒｅｏｆＭＴＸａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｏｎｅｙｓａｍｐｌｅｓｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｈｕｍａｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｌｉ打ｅＫ５６２ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｇｔｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｒａｄｕａｌｌｄｅｃｌｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＭＴＸｉｎｃｒｅａｓｅｄ．ＷｈｅｎｇｙｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＭＴＸａｌｏｎｅｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＭＴＸａｔ，ｐｐ－ｌ／Ｇｈ－ｈａ／ｍＬｓｉｉｆｉｉｆｆ０．０５ｘｍｏＬａｎｄＲｏｒＦＧＲｔ０．５ｍｅｘｅｒｔｅｄｎｃａｎｔｎｈｉｂｉｔｏｒｅｅｃｔｏｎ｜ｇｇｙ＜０－ｍｔｈｅｒｏｗｔｈｏｆｃｅｌｌｌｉｎｅＫ５６２．０１，＜０．０１．ＨｏｗｅｖｅｒＨａｎｄ民ｈａｔｔｈｅｓａｅｇ（ｐｐ），ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｌｉ伯６ｅｆｆｅｃｔ．Ｗｈｅｎａｔ０．１ｍｇ／ｍＬａｌｌｈｏｎｅｙｓａｍｐｌｅｓｄｉｄｎｏｔｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ．虹ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｍａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎｒｅａｔｌｃｏｎｔｒｉｂ山ｅｓ化ｔｈｅｃｈａｎｅｓｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｇｙｇｃｏｍｏｎｅｎｔｓａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅ．ＴｈｅａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＭａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｐｙｐｐｙｅａｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃａｎｉｍｒｏｖｅｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｏｆｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｒａｉｓｉｎｉｔｓａｌｉｃａｔｉｏｎｐｙｙ，ｇｐｐｖａｌｕｅｉｎａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓ化５ｉｎｄｕｃｅｄｂｃｈｅｍｏｔｈｅａｒｈ．ｙｐｙＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎ；ｃａｒａｍｅｌｉｚａｔｉｏｎ；ｒｅ行ｎｅｄｈｏｎｅｙ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；ｔｉｎｔｅｓｉｎａｌｍｕｃｏｓｉｔｉｓ．５ 山东大学硕±学位论文符号说明英文缩写英文全称中文全称ＨＭＦｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌ哲甲基様醒ＲＯＳｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ活性氧族－ｃｅａ－ＮＦ浊ｎｕｌｒｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ姐ｐ核转录因子－ＴＮＦ－ａｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａ肿瘤坏死因子ＭＴＸｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ甲氨蝶吟２２－ｄｈｅｎ－－ＤＰＰＨｉｌ１ｉｃｒｌｈｄｒａｚｌ２－－－，ｐｙｐｙｙｙ式二苯基１苦基苯餅Ｈｈｏｎｅｙ生蜜Ｒ－ｈｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎｅｙ炼蜜－ＡＲｈａｍｔ－ｉｎｏａｃｉｄｓａｌｆｏｒｔｉ巧ｅｄｒｅｆｉｎｅｄｈｏｎ巧氨基酸盐催化炼蜜ＦＡＲ－ｈｆｅｒｍ－ｅｎｔｅｄＡＲｈ发酵氨基酸盐催化炼蜜ＧＳＨｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ还原型谷脱甘肤ＭＰＯｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ髓过氧化物酶一ｉＮＯＳｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ诱导型氧化氮合酶８０Ｓｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ十二烧基横酸納－ＴＢＡ２ｈｉｏｂａｒｂｉｕｒｉｃａｃｉｄ－ｔｔ２硫代己比妥酸－ＤＮＰＨ２４ｄｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅｈｄｒａｚｉｎｅ－二，ｙ２４硝基苯化，ＭＤＡｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ丙二酵ＷＢＣｗｈｈｅｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｕｎｔ白细胞计数ＲＢＣｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｕｎｔ红细胞计数ＨＧＢｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ血红蛋白ＨＣＴｈｅｍａｔｏｃｒｉｔ红细胞比容ＭＣＶｍｅａｎｃｏｒｐｕｓｃｕｌａｒｖｏｌｕｍｅ平均红细胞体积ＭＣＨｍｅａｎｃｏｒｐｕｓｃｕｌａｒｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ平均红细胞血红蛋白量ＭＣＨＣｍｅａｎｃｏｒｐｕｓｃｕｌａｒｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ平均红细胞血红蛋白浓度－－ＲＤＷＣＶｒｅｄｂ－ｌｏｏｄｃｅｌｌ出ｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｗｉｄｔｈＣＶ红细胞分布宽度ＣＶ－－ＲＤＷＳＤｒｅｄ－ｂｌｏｏｄｃｅｌｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｗｉｄｔｈＳＤ红细胞分布宽度ＳＤＰＬＴｂｌｏｏｄｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｕｎｔ血小板计数Ｐ－ＬＣ民ａｔｅｅ－ａｒｔｐｌｌｔｌｇｅｃｅｌｌｒａｉｏ大血小板比率ＭＰＶｍｅａｎｐｌａｔｅｌｅｔｖｏｌｕｍｅ血小板平均体积ＰＤＷｐｌａｔｅｌｅｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｗｉｄｔｈ血小板分布宽度ＰＣＴｐｌａｔｅｌｅｔｏｃｒｉｔ血小板比积７ 山东大学硕±学位论文第一章前言１．１美投德反应一。美拉德反应为自然界中类非酶褐变反应，通常于食品加工过程中发生美拉德反应主要是还原性糖与含氨基的化合物（主要指氨基酸、蛋白质或中药中的生物碱）之间发生化学反应并最终生成褐色物质类黑素的复杂过程。１１１．．美拉德反应机制Ｗ目前对于美拉德反应化制普遍公认的是Ｈｏｄｇｅ１９５３提出的，分为Ｈ个主要反应阶段：－起始阶段：体系中氨基进攻幾基形成哲基胺（Ｎ葡萄糖基胺），随后脱水ｒ－－ｉ重排反应后＾形成席夫碱，席夫碱经Ａｍａｄｏ，最终形成爾式果糖胺（１氨基－２－厕糖）脱氧。一－－－－Ｈ《。（１中级阶段；＾氨基１脱氧２爾糖通过Ｈ条途径进步反应）在ｐ－－－７时－－，＾氨基１脱氧２醜糖发生１２婦醇化反应，再经过脱氨、脱水等过程最，－－－－２－终形成ＨＭＦ。（２）在阳＞７并且温度相对比较低的情况下，１氨基１脱氧厕糖通常可发生２３－婦醇化而产生还原爾类，此类物质并不稳定，可异构形，－成邻二幾基化合物３）Ｈ＞７＾氨基１－－２－。（在ｐ并且温度相对高的时候，脱氧一一二丽糖会发生裂解，形成些中间体，这些中间体可进步参与反应，如毅基化合物易使氨基酸发生脱幾一反应成为斯特勒克、脱氨反应，形成酸类等，这降解反应。一终级阶段：这阶段发生的化学变化过程相对比较复杂，机理尚不明确，一主要是两分子醒发生径酸缩合或中间产物与胺类进步缩合、聚合等生成复杂的大分子产物，称为类黑素。１．１．２美投德反应的影响因素Ｕ’＂。：在美拉德反应中温度与酸度，温度对反应历程有重要影响随着温ｄｉ重排产物的－度的升高，反应速度加快。提高酸度有利于Ａｍａｏｒ１，２蹄醇化过Ｗ程的进行，从而促进中间产物ＨＭＦ的生成。但是在碱性条件下，随着ｐＨ的８ 山东大学硕±学位论文増加，体系褐变程度也加深，碱性条件下美拉德反应进行的速度比酸性条件下Ｗ更快。水分活度：有文献证明随着水分活度的升高美拉德反应进行的速率也随之？加快，当水分活度到达０．５０．８的范围内时，反应速率达到最大，之后水分活度继续升高反应速率反而下降。可能的解释是随着水分活度的升高，溶质流动性加强．８，促进了反应的进行，当水分活度超过０时，溶质稀释作用显著反而一不利于反应的进行，另外水作为种反应产物可能抑制了反应的进行。一其他因素：些阳离子的存在也会影响美拉德反应的进行。访化ｍｅｎ和２＋２＋３＋Ｓｅｎｕｖａ通过－天冬醜胺反应体系证实ＭＦｅ葡萄糖，Ｃａ，ｙ，ｇ能有效的促进美拉Ｗ德反应的进行。Ｏｌｉｖｉｅｒｏ等人也发现儿茶酸能抑制美拉德反应的进行，可能ｉｔ＂ｔｉ＂原因是磯基捕获效应。另外，发酵试剂也可能通过影响葡萄糖的降解从而影响美拉德反应的进行。１．１．３美拉德反应产物的生物活性一类黑素是美拉德反应后期的终产物，化学式组成极其复杂，多是些含氮的大分子聚合物。近年来关于类黑素的生物活性研巧报道较多。１．１．３．１基因專性和细胞奉牲类黑素可能存在一定的基因毒性和细胞毒性，但目前对于技些毒性作用的一研究结果并未形成致定论。Ｂａｒｔｌｉｎｇ等人证明从咖啡中得到的类黑素在高剂量时对肺上皮细胞Ｈ３５８具有一定的毒性作用ｕｍｍａＳ等人研巧发现无论是高浓度还是低浓度的类黑素成分对鼠伤寒沙口民菌株均没有致突变作用。另ｆｗ夕ｈ类黑素对巧细胞Ｗ及Ｃａｃｏ－２细胞亦没有明显的毒性作用。总而言之，含有类黑素的褐色美拉德反应产物在高浓度时可能具有一定的基因毒性巧细胞。毒性，但是低浓度或中浓度并未表现出毒性作用１．１．３．２抗复化活性一美拉德反应产物具有较好的体内和体外抗氧化活性，这活性可能源自缩合反应产生的各种还原性基团。有文献报道在体外实验中，美拉德反应产物能ＵＷ＂ｉｔ＂保护脂质、肝细胞、淋己细胞等免受氧化应激引起的损伤。ｓｏｍｏｚａ等人通过体内实验证明美拉德反应产物能够降低大鼠血浆内脂质过氧化产物ＭＤＡ，。此外的水平同时增加生育酪（维生素Ｅ）的含量，美拉德反应产物的自由基清除活性也被广泛证实。９ 山东大学硕±学位论文１．１义３．抗高血压活性体外血管紧张素转换酶抑制活性的测定证明了美拉德反应产物类黑素可能？一Ｗ－－Ｍｏ证明由葡萄糖具有定的抗高血压作用。民加ａｎＨｅｎａｒｅｓ和ｒａｌｅｓ氨基酸体系得到的美拉德反应产物具有血管紧张素转换酶抑制作用，且这种作用的。产生与产物类黑素的结构有关，其中发色基团并未参与此作用１．１．３．４抗菌活性ＵＷ－ＨｅｎａｒｅｓＲｕｆｉａｎ等人研究表明美拉德反应产物类黑素对致病微生物具有抑制作用。高分子量的类黑素抗大肠杆菌的活性比低分子量类黑素强。低浓度类黑素对微生物有抑制作用，而高浓度的类黑素对微生物则有杀灭作用，类黑素的抗菌活性机理可能是其对金属离子的塾合作用。比如在能够产生含铁细胞ｆ％３的致病菌中，类黑素对铁离子的塾合作用使致病菌的毒为大大减弱。１．１．３．５抗肿瘦活性ｗ一－Ｍａｒｋｃ／等人从葡萄糖脯氨酸体系中成功鉴定出种美拉德反应产物，并证明它能够有效地抑制转录因子Ｅ－１ｌｋ的磯酸化从而影响人类肿瘤细胞的生长－７。并且此美拉德反应产物对微管骨架结构有影响，能使乳腺癌细胞系ＭＣＦ一的微管组织大大减少一。此外，些美拉德反应产物对胃癌细胞的増殖亦有定Ｕ＂的干扰作用，引起细胞周期阻滞Ｗ及诱发细胞调亡。１．１．４美拉德反应中间产物ＨＭＦ的生物活性研究ＨＭＦ为美拉德反一应在酸性条件下产生的种中间阶段的产物。由于ＨＭＦ最常在食品加工过程中产生，故其生物活性引起了广泛关注。究竟ＨＭＦ对人类一有益还是有害目前仍是个争论不休的话题。国内外研巧者对ＨＭＦ不同的生物活性做了广泛的研巧和报道。１．１．４．１抗氧化活性有研巧报道ＨＭＦ能通过保持正常血脂、ＭＤＡ水平及过氧化氨酶、谷脱甘肋过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性等来缓解高脂饮食对小鼠肝脏造成的氧ｔ＂３Ｕ＂化损伤。顾海等人研究发现ＨＭＦ能减轻过氧化氨导致的海马神经元损伤，其作用机制可能是通过降低乳酸脱氨酶的活性而増强超氧化物歧化酶的活性。Ｃａｏ等人发现ＨＭＦ对高浓度葡萄糖导致的人麻静脉内皮细胞氧化应激具有缓解作用，主要是通过影响与细胞调亡有关的酶、细胞因子等，这说明ＨＭＦ对氧化应激引起的细胞调亡具有抑制作用。１０ 山东大学硕±学位论文１１４．２．．抗缺氧性损伤当机体或机体的某一部分的氧气供应不足时即发生缺氧性损伤。严重的缺Ｕ６３一氧可导致系列危险的症状如昏迷、意识不清甚至死亡。Ｌｉ等人证明ＨＭＦ能够缓解急性缺氧环境引起的血脑屏障通透性增加及海马和大脑皮质细胞损伤程度，从而使急性缺氧环境中小鼠的存活时间延长、存活比例增加。此外，低氧能够导致线粒体膜电位下降、细胞坏死或调亡Ｗ及细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）的激活，ＨＭＦ能够有效地抑制线粒体膜电位下降Ｗ及ＥＲＫ的磯酸化阿过程。１４．１．．３抑制镶刀形红细胞生成嫌刀形红细胞是血红蛋白基因变异引起的血液性疾病。Ａｂｄｕｌｍａｌ化等人预先给予镶刀形红细胞转基因小鼠ＨＭＦ之后，发现ＨＭＦ能显著抑制镶刀形红。ＨＭＦ细胞的生成，并且对红细胞没有其他副作用抗嫌刀红细胞生成的作用机制可能是其五元杂环酵结构易与血红蛋白氮端的额氨酸形成席夫碱从而使ＨＭＦ与血红蛋白结合而引起氧解离曲线左移。ＨＭＦ与血红蛋白的结合不仅能够增加正常细胞及嫌刀形细胞的氧吸附性，而且能够抑制鎌刀形血红蛋白的聚合Ｗ？及纤维沉淀的形成。１．１．４．４致癌作用ＨＭＦ作为食品药品中时常存在的物质，对人类健康造成的负面影响也是值一得关注的重要方面＞的焦点之。。ＨＭＦ的致癌作用是长期１＾１来科学界争论ＷＡｃｈｅｒ等人认为ＨＭＦ的摄入与大鼠结肠中微腺瘤的出现和扩散密切相关。＾Ｓｖｅｎｄｓｅｎ等人也发现ＨＭＦ能使ＭＶ＋小鼠肠道内的小腺瘤数目显著増加。＾＂另一方面，Ｍｉｚｕｓｈｉｎａ等通过体外实验证实ＨＭＦ能够选择性抑制哺乳动物ＤＮＡ多聚酶和末端脱氧核巧酸转移酶的活性。因此，ＨＭＦ的致癌作用目前仍一。存在争议，需要进步的研巧１．１．４．５基因韋性一近年来有关ＨＭＦ的基因毒性研究较多，但是结果并不致。有研究证实ＨＭＦ的基因毒性主要是由横基转移酶激活的，该酶主要在肝脏中表达，能够促进ＨＭＦ向ＳＭＦ的转化，而ＳＭＦ能够通过与ＤＮＡ形成加合物而诱导基因突变Ｗ＂＂一。Ｍｏｎｉｅｎ等人进步确证了导致基因突变的ＤＮＡ加合物的结构，但是＾３当ＨＭＦ的浓度低于２００ｍＭ时并未检测到该致突变物质。然而，Ｃｈｅｒｉｏｔ等１１ 山东大学硕－上学位论文人研巧证明ＨＭＦ对鼠伤寒沙口菌属ＴＡ９８和ＴＡ１０２菌株并没有明显的致突变ｇ效应。Ｓｅｖｅｒｉｎ等人测定了不同浓度ＨＭＦ对人肝脏肿瘤细胞的基因毒化发现ＨＭＦ浓度高于７．８７ｍＭ时对肝癌细胞具有毒性作用，可能是由于肝细胞内横基转移酶的表达导致的。１．１．４．６致炎作用Ｚｈｏｕ等人从蒜枝中分离出ＨＭＦ，并研究发现ＨＭＦ能够适度地刺激小一鼠Ｊ７７４巨睡细胞内前列腺素Ｅ２和氧化氮的释放，这两种物质是促进炎症反、造成致热效应的基础性物质应发生。ＨＭＦ发挥作用的机制可能是通过激活核一ＮＦ－ｋＢ－２转录因子，进而促进环氧合酶及诱导型氧化氮合酶的表达，导致前Ｅ２和一一。ＨＭＦ列腺素氧化氮的合成及释放增加目前，对于致炎作用的进步研究尚未见更多的报道。１．２焦糖化反应焦糖他反应是糖类在高湿条件下自身经裂解或脱水、缩合等生成焦糖或酱色产物的过程。焦糖化反应在酸性和碱性条件下均可Ｗ进行，但是在碱性条件下反应速度比在酸性条件下快。对于多糖，高温条件下主要进行水解形成还原一一性单糖果糖和葡萄糖，单糖可进步发生脱水，形成系列脱水产物，或者一高温条件下发生裂解反应，产生易挥发的醇或丽类化合物，再经过进步的反应最后形成颜色较深的物质。对焦糖化反应产生影响的主要内部因素是糖的种类。通常情况下薦糖的反’Ｃ应速率低于单糖如果糖和葡萄糖，但是在混度达到２５０时，庶糖的反应速率’５０Ｃ又明显高于单糖，可能由于温度低于２时庶糖结构尚趋向于稳定状态，而’当温度超过２５０Ｃ时薦糖可发生完全水解，释放出来的游离果糖和葡萄糖比体系中原来存在的果糖或葡萄糖的活性更高，主要原因是高湿条件下庶糖糖巧键断裂易于直接形成巧喃果糖阳离子，此阳离子是焦糖化反应进行过程中形成中间产物ＨＭＦ的重要前体一。对于单糖来说，果糖的反应速率比葡萄糖快。方面一，葡萄糖的六元环结构相对稳定。另方面，葡萄糖缩合产生带有还原性基团的低聚糖一，这些低聚糖会进步与中间产物如ＨＭＦ反应从而导致交叉聚合ｔｗ。，影响整个反应的进行另外，在酸性条件时，果糖中巧喃环占多数，易形成巧喃果糖阳离子，而葡萄糖中巧喃环结构很少，需要通过异构化过程由化１２ 山东大学硕±学位论文喃型荀萄糖转化成巧喃型果糖，再形成巧喃果糖阳离子。除通过异构化过程形－３３－ＤＧ成中间产物外，葡萄糖还可Ｗ通过脱氧葡萄糖（）参与焦糖化反应，而这…很少中间产物的形成主要依赖于葡萄糖的开环结构，由于葡萄糖｜＾开环结Ｗ构存在，所Ｗ此过程亦受到限制。同美拉德反应相似，温度和酸碱度是影响焦糖化反应进行的主要外部因素。温度越高，焦糖化反应进行越快。至于酸碱Ｗ性，焦糖化反应在更极端的条件下容易进行，如阳＜３或ｐＨ＞ｇ时比中性条件下反应更迅速。焦糖化反应的产物为不含氮的焦糖或大分子聚合物，焦糖化反应产物具有。较好的抗氧化能力，关于其他方面的活性报道相对比较少，需要深入的研究ＨＭＦ亦是焦糖化反应中糖脱水形成的重要中间产物，其生物活性的研巧如１．１．４中所述。１．３炼蜜简介蜂蜜是蜜蜂科中华蜜蜂Ａｐｉｓｃｅｒａｎａｆａｂｒｉｃｉｕｓ或意大利蜂ＡｍｅｌｌｉｆｅｒａＬ义集花一粉酿成的天然甜味食品，具有很高的营养价值，蜂蜜除作为食品外，还是种重要的天然药物，《神农本草经》将蜂蜜列为上品，《本草纲目》中也有关于蜂蜜的记载一，由此可知蜂蜜作为种药用材料的应用历史由来己久。蜂蜜含有多种物质－，成分复杂，主要含有单糖如葡萄糖和果糖，大约占７０％８０％，藤糖％左右：、较少，约５，其他成分包括氨基酸蛋白质、维生素、生物酶、酪类化合物、有机酸类、矿物质等这些成分中的部分成分可能是蜂蜜发挥营养一。价值和药用活性的基础物质除作为食品和天然药物外，蜂蜜还是种重要一一的中药材药用辅料，般经炼制后应用，称之为炼蜜。炼蜜作为种珍贵的中药炮制用的辅料，在中药的加工炮制中应用普遍。１．３．１炼蜜的目的＂＂炼蜜最早见于南北朝时期的《本草经集注》，称之为炼或煎。《本草经Ｗ＂＂＂’……集注》日：仙方亦单炼服之，致长生不老也，则丸经久不取。可见早期的炼蜜目的是为了长生不老和确保丸剂的质量。蜜蜂采集有毒花粉酿出一＂＂的蜜不可避免的带有定毒性，《本草汇言》曾言蜂蜜生者有毒，《本草纲＂＂》……目则曰；炼过则无毒矣，可见，炼蜜具有去毒作用。现代研究证明１３ 山东大学硕±学位论文ｈ＂，炼蜜用于炮制中药饮片后可缓和药性，降低毒性，炼蜜中的糖可加快药材中巧元的溶解一，促进吸收。炼蜜与中药饮片起炮制后，能增加药物润肺止一咳、益气补脾的作用，同时也是种重要的矫味剂。除此之外，炼蜜的目的亦包括除去杂质和微生物、破坏酶类及增加粗合力。１２．义炼蜜工芝研巧炼蜜可分为嫩、中和老蜜。Ｈ者的划分主要依据炼蜜所采用的温度，嫩‘°‘？？？：１０５１１５Ｃ：１１６１１８Ｃ：１１９１２２Ｃ。但蜜，中蜜，老蜜实际上，各地炼‘一〇蜜标准不，炼蜜的温度也参差不齐＾１致，有的在７０１下，有的稍加热便过滤’？后应用，也有的采用１００１２２Ｃ的高温，炼制的程度也由刚好沸腾到持续加热一一不等。由于各地没有统的炼蜜标准，所对于蜂蜜炼制何种程度最佳直未。有定论，因此有不少研究者报道了关于炼蜜的工艺优化结果吴国瑞等人采用常压加热与减压加热方法炼蜜，通过测定含水量、相对密度与粘度的关系，认为应该采用水分含量作为炼蜜的炼制标准Ｗ’Ｃ。刘晓秋等人采用８０到Ｉ２０、等不同温度进行炼蜜，通过测定水分、色泽淀粉酶值、还原糖及ＨＭＦ含量＂８’＂３等，认为炼蜜应该按照用途＾＾不同的温度进。冯立彬等人采用沸水［行区分’Ｃ恒湿加热的浴ｌＯＯ方法炼蜜，探究了恒温条件下含水量与加热时间的关系，认为可Ｗ通过炼蜜时间来控制炼蜜的标准。同时，他们还研究了相同温度下，气体流速与含水量变化的关系，认为控制气体流速也是优化炼蜜工艺的重要手段。１．义３炼蜜在中药炮制中的应用一炼蜜作为种重要的炮制应用辅料在中药加工炮制过程中应用广泛。应用＂＂炼蜜的炮制方法称为蜜炙。早在唐代有记载蜜炙的方法即把挑选好并洗净或者切制Ｗ后的中药材放入适量的炼蜜中进行炒制。现在常用的蜜炙方法包括先拌蜜然后再炒制、先炒制然后再加蜜、蜜烘和蜜煮最符合中药炮制传统也是临床应用最多的方法是先拌蜜后炒药，但是此方法不易控制温度而易造成。焦化，相比而言蜜烘可控制温度、时间，受热均匀，更易于药材质量控制中药经蜜炙后通常能增强止咳润肺一起炮制后可、益气补脾之功效，与中药饮片起到协同作用，Ｗ增强药物疗效，降低毒副作用。百部经过蜜炙レッ后増强了润肺止咳的功能，。减轻了药物对消化道的不良刺激黄芭为补气良药，经蜜炙后可增强补中益气的作用，并且増加了润肺作用。可见，中药蜜炙后可充分发挥１４ 山东大学硕±学位论文一蜂蜜的功效同时增强中药本身的疗效。除用于蜜炙中药外，炼蜜的另个重要用途即制作中药蜜丸，解决了普通粘合剂粘合度较差的问题，同时也起到了增强疗效和矫味的作用。１．义４炼蜜中相关成分和活性变化研究炼蜜过程实质是蜂蜜受热发生变化的过程。尽管各地炼蜜采取的工艺方法不同，相应的温度选择、炼制时间等参差不齐，但是蜂蜜在加热过程中发生化一学变化的实质是样的。由于蜂蜜中含有大量的果糖和葡萄糖，受热可能导致糖脱水引起焦糖化反应的发生，另外，氨基酸和蛋白质的存在也导致糖与氨基。化合物之间发生美拉德反应李先瑞等人测定了不同炼蜜温度和时间下，葡萄糖、果糖及庶糖的含量，发现温度越高、时间越长则Ｈ种糖含量越低，可见炼蜜加热的过程，部分葡萄糖和果糖可能参与了焦糖化反应和美拉德反应从而＂７１。导致含量下降，导致，另外庶糖也可能发生了水解其含量下降刘晓秋等人采用不同温度炼蜜，测定了酸度、ＨＭＦ、还原糖及庶糖的含量，发现炼蜜导致、ＨＭＦ、还原糖及藤糖含量下降，此蜂蜜酸度增强含量增加，且温度越高庭势，越明显，说明蜂蜜在炼制过程中处于酸性环境而糖参与美拉德反应和焦糖化反应导致了ＨＭＦ的生成。ＫＺ３目前关于蜂蜜的药理活性研究结果表明，蜂蜜具有润肠、护肝、保护也脏一些抗氧化物、抗菌、抗炎等作用。蜂蜜本身含有的多酷类化合物Ｗ及其他质使其具有一定的抗氧化能力，在炼蜜过程中蜂蜜受热使这些有效成分受到破坏而减少，但是同时美拉德反应与焦糖化反应的发生可能又产生了新的活性成Ｋ＂°、Ｃ加热分，使得炼蜜的抗氧化活性变的复杂。Ｔｕｒｋｍｅｎ等人采用５０、６０７０蜂蜜，考察其颜色和抗氧化活性，结果发现蜂蜜的颜色随着温度和时间的增加－而逐渐变深，并且抗氧化活性也逐渐提高。Ｗａｎｇ等人于６０Ｃ下加热蜂蜜１２到１４小时却发现蜂蜜的抗氧化活性下降了。有关炼蜜其他方面的药理活性研究则相对较少。１．４微生物发巧技术与中药炮制中药发酵炮制方法起源于我国古代的酿酒行业《？。书经说命篇》曾记载：１５ 山东大学硕上学位论文＂＂若作酒體，尔惟曲薬。在这里曲葉指的便是最早的酒曲，含有酵母菌和发芽。的谷物发酵的方法正式应用于中药材加工炮制过程是在汉晋前后，陆续产生了药曲。微生物发酵炮制中药能够转化原料中化合物从而产生新的活性成分、降低毒性、增加疗效等。如大豆经微生物发酵炮制后，，其中的糖基被脱去糖巧含量下降，增加了有效成分染料木素和大豆巧元等游离巧元的含量。半夏辛温有毒，但是经过发酵过程形成曲之后的半夏毒性则显著下降。大黄经酵母菌发酵后，胃肠道刺激作用得到缓和，泻下作用降低。地黄丸的发酵液对小鼠的ｔｓ＂免疫调节作用优于单纯的煎液。１．５化疗与黏膜炎１．５．１化巧副作用优疗是利用化学药物来控制肿瘤细胞增殖、浸润、转移，从而达到杀灭肿瘤细胞目的的治疗方法。化疗可能Ｗ治疗癌症为目的，但也可能只是为了延长生命或减轻症状。传统的化疗试剂通常具有细胞毒性，即在杀灭癌细胞的同时一些増殖较快的正常细胞也损伤了，如骨髓、消化道和毛囊的细胞，送就导致了化疗常见的一些副作用如骨髓抑制、塘化道黏膜炎和脱发。几乎所有的化疗试剂都能引起免疫系统的抑制，通常是通过抑制骨髓导致白细胞、红细胞Ｗ及血小板的减少。消化道黏膜炎包括口腔黏膜炎化及肠道熟膜炎，炎症发生时，营养物质吸收减少导致体重严重下降。除Ｗ上割作用外，化疗通常还引起眩ｔｓ＂晕、呕吐、腹泻、疲劳等症状。１．５．２黏膜炎发病机制一种副作用黏膜炎是化疗中常见的。黏膜炎的发展过程通常经历五个不同的阶段：引发阶段、主要损伤反应、信号放大阶段、溃瘍阶段及修复阶段脚〇引发阶段；化疗后姐织损伤即迅速出现，化疗通常伴随着非ＤＮＡ和ＤＮＡ损伤。ＤＮＡ链的断裂损伤将直接导致基底上皮细胞和熟膜下层细胞的损伤，在ｅｎｈａｍｅｒ－此过程中释放出大量活性氧。Ｄ和ＨａｕＪｅｎｓｅｎ报道称，基底上皮细胞的死亡并不是最严重的，潜在的黏膜下层细胞的破坏是导致损伤的最大因素［５８］〇１６ 山东大学硕止学位论文Ａ一、ＤＮＡ０Ｓ引主要的损伤反应：非ＤＮ损伤Ｗ及民发了系列复杂的生理一－过程。ＤＮＡ链的断裂导致些转录通道的激活，激活转录因子如ｐ５３和ＮＦＫｕｗ一ｂ。脂质过氧化过程中释放出的细胞膜结合分子导致些敏感的基因如编码ＬＷ＇Ｗ－Ｃ－ＪＵＮＣＪＵＮＪＮＫ和氨基末端激酶的基因活性增强，（）能够使其他得转录一因子如ＮＲＦ２表达增加。所有这切变化发生在所有构成粘膜的细胞和组织上，而不仅仅发生于上皮细胞。在所有被放疗、化疗和民０Ｓ激活的转录因子４２１－－中，ＮＦＫＢ对于顽固耐药性肿瘤的治疗至关重要。ＮＦＫＢ的激活可导致多达２００个基因的转录增多，其中很多基因对黏膜毒性具有重要影响。由放疗或－ａ－化疗引起的转录因子活化可促进大量促炎性因子的表达，包括ＴＮＦ、比ＩＰ－６和忙。这些增加的蛋白质因子作用于黏膜，这些刺激早期作用于结缔组织和内皮细胞造成损伤，进而启动细胞间质信号通路，最终导致基底细胞的死亡和一些化疗药物可能通过銷稱损伤，放疗及。同时非ＤＮＡ损伤加快黏膜损伤程度脂酶或者神经醜胺合酶水解细胞膜上的銷礎脂。虽然现在福射激活銷憐脂酶Ｗ（酸性或中性，。）还不是很明确但结果显示神经酷胺浓度会导致细胞调亡黏膜下层的纤维母细胞是放化疗损伤的祀细胞。它可能直接受放化疗的影响，Ｗ＂－－也可能由激活核转录因子激活蛋白１（ＡＰ１）介导，从而促进基质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）分泌。ＭＭＰ３（也称基质溶解素１）可破坏上皮细胞的基底膜，促进其他破坏性信号的传递。一，信号放大阶段：转录因子激活导致基因表达上调其结果是导致系列生物活性蛋白的积累并攻击黏膜下层组织一。在送些活性蛋白中有些尤其是促炎一细胞因子，，，不仅导致组织损伤而且也提供个正反馈链使由放疗或化疗引－发的主要损伤反应扩大化，Ｆａ受体家族成员的活化，它导致细。另外通过ＴＮ胞分裂素激活的蛋白激酶ＭＡＰＫ信号的活化，从而导致ＪＮＫ的活化，反过来又－调节ＡＰ１的转录活性。送个途径最终导致了细胞潤亡蛋白酶３的激活Ｗ及细胞＂＂－ａ。调ｔ。黏膜细胞靴点除了上皮细胞外还包括黏膜下层的细胞ＴＮＦ也活化神经銷磯脂酶，因此它在组织中的増加使神经醜胺途径介导的促调亡信号扩大ｈｉ＇６５－－ＭＰ＾化，ＴＮＦａｉ。另外和比ｐ都可Ｗ导致Ｍ３的活化，溃瘍阶段：黏膜完整性的破坏可Ｗ导致极其严重的身体组织器官的损害其易于被表面细菌所侵染。对于白细胞减少症的病人来说，这些黏膜的损伤将成为数多的微生物进入消化道定居生存的入口。并且经常导致茜血症与腺毒１７ 山东大学硕±学位论文症。并且这些细菌的细胞壁产物将穿过黏膜下层，激活浸滴性单核细胞Ｗ产生和释放更多的促炎细胞因子。这很有可能促进促调ｔ基因的表法而加重组织损伤。之后炎症细胞在趋化作用下迁移至损伤部位的基部，在那里产生具有损伤性作用的酶。一修复阶段：大多数情况下，黏膜炎是种急性症状，化疗结束后即可自行消失。黏膜炎诱导的溃瘍与其他类型的黏膜损伤的修复过程有相似之处，来自黏膜下层细胞外基质和间质的信号控制着上皮细胞的迁移速度Ｗ及愈合组织的増殖与分化速度。狙织愈合的过程都由癌症治疗手段、选择的药物、给药剂量及治疗时间等来调控。１５．５．氧化应激与黏膜炎当机体内活性氧的产生与清除么间的平衡被打破时即发生氧化应激。体内细胞发生氧化应激时可通过产生自由基而造成严重的损害效应，损伤构成细胞的一切物质（如蛋白质等）。并且某些活性氧自由基可破坏正常细胞信号通。路从化学角度讲，氧化应激与活性氧自由基的增加和抗氧化物质如谷脫甘狀的减少息息相关，氧化应激的效应大小取决于自由基和抗氧化物质变化的多少及细胞恢复原来正常状态的能力。严重的氧化应激可引起细胞死亡，甚至适。度的氧化效应即可激发细胞渦亡，严重的氧化应激则导致细胞坏死活性氧ＲＯＳ一（）的产生是氧化应激的个重要的方面。民０Ｓ的一Ｗ＂。化巧过程中，产生是导致黏膜炎发生的第步某些化疗药物的应用可直接导致ＲＯＳ的产生，如蔥环类药物阿霉素，由于对也磯脂的高度亲和性，使其在线粒体内膜大量累巧，在ＮＡＤＰＨ的作用下，完整的廳结构被转化成半酿结构一，半酿结构与分子氧反应即生成超氧自由基，超氧自由基进步形成各类ＲＯＳ。又如甲氨蝶吟（ＭＴＸ）的应用可通过两个途径致使ＲＯＳ的増加一，方面ＭＴＸ抑制二氨叶酸还原为四氨叶酸，致使四氨生物蝶岭减少，而四氨生物蝶吟是内皮型一氧化氮合酶的辅因子，故它的减少直接导致了内皮型一一ＷＷ氧化氮合酶催化的氧化氮合成的减少，从而导致体内ＲＯＳ的堆积。另一ＭＴＸ也可通过降方面，低抗氧化物质间接导致氧自由基的积累增加，例如减ｔｗ少还原性谷脫甘狀，，降低超氧化物歧化酪等与抗氧化相关的酶的活性使得机体自由基清除能力下降而导致活性氧自由基的大量累积。１８ 山东大学硕±学位论文ＲＯＳ引。很多ＲＯＳ可；１发的黏膜炎通过多种方式造成组织损伤［＾直接进攻ＤＮＡ链造成损伤此外，民０Ｓ也能够经过各种不同的方式诱导细胞的调亡＂３Ｅ一。０Ｓ进蛋白质作为构成生物系统的主要物质之，也是民攻的主要目标，通过改变对氧化还原反应敏感的蛋白质的结构造成蛋白质的水解。除上述损一伤途径外，民０Ｓ在黏膜炎发生过程中个最重要的作用可能是有效地激活核转一购－－录因子ＮＦＫＢ－。有文献报道ＮＦＫＢ是ＲＯＳ进攻的範点么。ＮＦＫＢ在调节促炎因子释放Ｗ及促进细胞调亡方面发挥着重要作用。１５．．４抗氧化剂在化疗诱导的肪道黏腹炎治疗中的应用一种消化道副作用肠道熟膜炎是应用化疗药治巧癌症过程中常见的。到目前为止，基于抗氧化应激作用机制的抗氧化剂在厥道黏膜炎治疗中的应用己见较多文献报道ｅｄａ－。Ｍａ等证明Ｎ乙酷半腕氨酸能通过减少民０Ｓ的产生而抑剌ＭＴＸ导致的肠道细胞通透性的增加。Ｇｕｌｇｕｎ等证明ＭＴＸ能够显著减少某些抗氧化酶的含量并且增加丙二酸的含量，而原花色素则能够有效的抑制上述变化从而减轻厥道黏膜炎。Ｖａｒｄｉ等人也研究发现杏可能通过抗氧化途狂改＂＂善ＭＴＸ导致的肠道熟膜破坏。此外，维生素Ａ和蜂王浆对化疗诱导的肠道黏膜炎的缓解作用也己被研巧报道。这些研巧报道均己证明抗氧化物质对于化疗诱导的肠道黏膜炎具有一定的缓解作用一，这作用主要基于抗氧化机理。１．６立题依据与研究思路１．６．１立题依据炼蜜是一种应用历史悠久的中药辅料，应用炼蜜炮制中药材多能增强其疗效，增加润肺止咳、益气补脾的功效。炼蜜的实质为蜂蜜受热发生物理、化学性质变化的过程。由于蜂蜜中含有大量的还原性糖（主要为果糖和葡萄糖）及少量氨基化合物如氨基酸和蛋白质，加热过程可能导致美拉德反应和焦糖化反应的发生一竖研究者采用不同温度处理蜂蜜来研究其糖。目前国内外己有类、ＨＭＦ及抗氧化活性的变化。但是具体蜂蜜中主要还原糖果糖和葡萄糖在酸性条件下受热或与各类氨基酸共同反应后发生焦糖化反应与美拉德反应的规律Ｗ及反应后期ＨＭＦ与各类氨基酸之间进一步反应的规律研究甚少。１９ 山东大学硕±学位论文由于各地采用的炼蜜标准不统一工艺方法的报道大部分Ｗ保证，关于炼蜜糖类成分的含量、降低ＨＭＦ生成量为重点，至于炼蜜的抗氧化活性和抗炎活性研究较少一。另外，微生物发酵是中药炮制中种重要的炮制手段，发酵后多能降低药物毒副作用、增加疗效。微生物发酵对炼蜜糖类成分的影响化及体内抗氧化抗炎活性的影响更是鲜有报道。基于此，本论文对蜂蜜中两种还原糖果糖和葡萄糖在酸性条件下发生美拉德反应和焦糖化反应的规律进行了深入的研巧，另外，采用添加氨基酸盐的方法炼蜜！＾促进美拉德反应的进行，同时采用酵母菌发酵促进有害产物的转化降解，通过建立化疗药ＭＴＸ诱导的肠道戴膜炎小贏模型，研究美拉德反应和微生物发酵对炼蜜巧化疗副作用的影响，为深入揭示炼蜜过程的化学变化化理、探巧采用美拉德反应催化炼蜜的药理活性及可能的活性成分、评价微生物发酵对炼蜜药理活性的影响奠定基础。１．６－２研究思路根据上理论依据，本论文研巧思路整理如下：（１）；［＾１蜂蜜中两种含量最多的单糖葡萄糖和果糖为研究对象，模拟蜂蜜的酸‘性条件，采取１００Ｃ单独加热和与１９种不同氨基酸反应的方法研巧反应过程中反应液褐变吸收、ＨＭＦ生成量及ＤＰＰＨ自由基清除活性的变化规律。Ｗ中间产物ＨＭ一Ｆ为研究对象，探索其与１９种氨基酸么间进步反应的规律。（２）采用添加谷氨酸钢炼蜜レ义及酵母菌发酵炼蜜的方法，探巧美拉德反应和微生物发酵对炼蜜ＨＭＦ、糖含量及体外抗氧化活性变化的影响。（３）建立ＭＴＸ诱导的肠道黏膜炎小鼠模型，评价美拉德反应及酵母菌发酵对炼蜜抗化疗致消化道黏膜炎作用的影响。（４）＾＾／？人白血病细胞＆５拍为研巧对象，考察不同处理方法的炼蜜与的株联合应用对肿瘤细胞生长的影响，Ｗ验证美拉德反应和酵母菌发酵在炼蜜应用于化疗辅助治疗中的合理性。２０ 山东大学硕±学位论文第二章蜡蜜中两种主要还原牲单糖的美拉德与焦糖化反应规律研究一蜂蜜是种珍贵的中药药用辅料，多用于制作蜜丸或炮制饮片，可起到增强药物疗效、降低毒副反应的作用。中药炮制所用的蜂蜜多指经过炼制的蜂蜜即炼蜜。尽管各地炼蜜采取的工艺标准不同，，所选温度及炼制时间参差不齐但是炼蜜过程发生化学反应的机理相同。由于蜂蜜中含有大量的还原性糖及少量的庶糖、氨基酸、蛋白质等成分，在受热过程中不可避免的会发生美拉德反应和焦糖化反应，从而导致蜂蜜的颜色及相关的成分发生变化。美拉德反应和焦糖化反应在酸性和碱性条件下均可进行，生成的中间产物ＨＭＦ、反应液褐变程度及抗氧化活性的变化均体现了反应进行的程度。国内外的研究者曾报道蜂蜜经不同温度加热后，ＨＭＦ生成量及体外抗氧化。活性的变化情况，证明蜂蜜受热后ＨＭＦ含量增加，体外抗氧化活性增强在本章的研究中将蜂蜜中两种主要还原性单糖果糖和葡萄糖为研究对象，模拟蜂’蜜的酸性环境，探巧两种糖在ｌＯＯＣ条件下单独反应及分别与巧种不同氨基酸（由于酪氨酸水溶解度较低，故本实验研究将其排除）反应的规律，并对中间Ｆ与一产物ＨＭ各氨基酸之间的进步反应做了初步研究，深入揭示蜂蜜热处理过程发生美拉德反应与焦糖化反应的规律及产物抗氧化活性的变化情况。２．１仪器与试剂２．１．１仪器－－ＡＹ１２０型电子分析天平（岛津制造所）；ＨＨＳＹ１１电热恒温水浴锅（北京市长风仪器仪表公司）－１８８０型；ＴＵ紫外可见分光光度计（北京普析通用仪－－器有限责任公司）；ＬＣ１０ＡＴ高效液相色谱仪（日本岛津，配ＳＰＤ１０Ａ紫外检测器）。２．１．２试剂２二苯基－－果糖、葡萄糖、ＨＭＦ、２１苦基苯耕（ＤＰＰＨ）为Ｓｉｍａ公司产品；，ｇ其他试剂为国产色谱纯或分析纯。２１ 山东大学硕主？学位论文２．２实验方法和结果２．２．１酸性条件下果巧和葡萄巧体系的焦糖化反应规律２．２．１．１试剂配制０．２ＭｐＨ４．０憐酸盐缓冲溶液：称取磯酸二氨钢Ｉ５．６０１ｇ，溶于适量蒸健水后Ｗ磯酸调节ｐＨ至４．０，转移至容量瓶定容到５００ｍＬ。０．２Ｍ稱酸氨二钢溶液：称取磯酸氨二钢３５．８ｇ，精密称定，溶于适量蒸馈５００。水后，转移定容到ｍＬ，作为反应终止液０．５ｇ／ｍＬ糖溶液；分别称取果糖、葡萄糖５ｇ，Ｗ０．２ＭｐＨ４．０磯酸盐缓冲溶。液溶解，定容至ｌＯｍＬ〇口？１１无水乙醇溶液：称取ＤＰＰＨ０．０１２ｇ，精密称定，［＾无水石醇溶解定容至２５０ｍＬ（避光放置，现配现用）。２．２．１．２反应不同时间果糖与葡萄糖溶液的制备反应液与终止液体积比的确定：取０．２ＭＨ４．０憐酸盐ｌＯｍＬｐ缓冲溶液，依…ｍＬ次加入０．２Ｍ憐酸氨二钢溶液１０、１１、１２、１３Ｈ，混匀后测定各混合液ｐ二．０。值，加入磯酸氨钢体积为１５ｍＬ时，溶液ｐＨ值为７１由于焦糖化反应在强碱和强酸条件下巧可迅速进行，本课题主要研巧ｐＨ，中性条件下反应较慢＝为４．０的酸性条件下的反应，故欲选择ｐＨ７．０的中性条件作为终止反应的条件：１．５，由此确定反应液与终止液的体积比为１最佳。反应不同时间糖溶液的制备：分别取两种不同糖溶液各５００叫置于２ｍＬ’的冻存管，于ｌＯＯＣ水浴加热０、１、２、４、８、１６、２０、２４、３２、４０、４８、６４、７２小时。各时间点分别取出相应反应液后加入７５０叫＾预冷的０．２Ｍ磯酸氨二钢溶液终止反应，４０００ｒ／ｍｉｎ离也１０分钟取上清备用。每组Ｈ个重复。２．２．１．３反应不同时间果糖与葡萄糖溶液的巧变吸收、ＨＭＦ含呈及ＤＰＰＨ自由基清除率测定２．２．１．３．１巧变吸收測定终止反应后的反应液Ｗ蒸馈水稀释适当倍数后，于４２０ｎｍ波长处测定吸光度值来反应褐变吸收情况。２．２．１．义２ＨＭＦ含量測定２２ 山东大学硕±学位论文色谱条件；ｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ５ｕＣｌ８色２５０Ｘ４．６０ｍｍ）：乙ｐ谱柱（；流动相－０ｍｎｍＬ腊．１％磯酸（１５８５）：２８４Ｉ／ｍｉｎ溶液：，检测波长，流速理论塔板数Ｗ，ＨＭＦ计不低于５０００。ＨＭＦ标准溶液配制：称取ＨＭＦ标准品Ｏ．Ｏｌｇ，精密称定，用甲醇溶解，然后定容到体积为ｌＯＯｍＬ，即得浓度为１００Ｌｉ／ｍＬ的ＨＭＦ标准溶液。｜ｇＨＭＦ标准曲线测定：分别取１００惦／ｍＬ的ＨＭＦ标准溶液０．０５、０．１、０．２、０．４、０．８ｍＬ，依次加入甲醇化％、化９、０．８、０．６、化２ｍＬ，混匀即得浓度依次为５、１０、２０、４０、８０／ｍＬ的标准溶液。按照上述色谱条件分别进样２０ｉｉＬ，根据惦｜ＨＭＦ峰面积Ｙ与浓度Ｘ（＾ｌｇ／ｍＬ）的关系得到标准曲线，其线性回归方程：＝４２０－＝Ｙ１０Ｘ１５０８１８Ｒ２０．９９９３。，４０００ｒ／ｍｈ１０，样品测定：将待测液Ｗ甲醇稀释适当倍数后，于ｉ离也分钟然后取上清液，过滤后进样２〇ｎＬ测定，ＨＭＦ含量测定结果Ｗｍｇ／ｇ糖表示。２．２．１．３．３ＤＰＰＨ自由基清除率測定＂Ｗ参考本实验室前期建立的方法，反应液Ｗ蒸箱水稀释适当倍数后，取０．５ｍＬ与等体积的ＤＰＰＨ溶液混匀，暗反应３０分钟，于５１７ｎｍ波长处测定吸光度值。Ｗ无水乙醇替代ＤＰＰＨ做样品对照，Ｗ蒸馈水替代样品做ＤＰ閒对照。ＤＰＰＨ清除率公式如下：Ｓ〇／〇＝ＡｄＡｚＡ）ｘｉ〇〇（）Ａ。Ｓ表示清除率，如为ＤＰＰＨ对照吸光度，＾表示样品吸光度，如表示样品对照吸光度。２．２．１．４实验结果么２．１．４．１巧变吸收还原性单糖在酸性及碱性环境下加热均可１＾；发生焦糖化反应。在蜂蜜炼制ｈｗ过程中体系的酸度发生小幅度变化，基本维持在ｐＨ４．０左右，将果糖和葡萄一＞糖于９１１４．０、１００＾加热不同时间，均发生了定程度的焦糖化反应，＾１１心２〇表示褐色反应产物的含量，继而反映焦糖化反应进行的程度。加热不同时间果糖与葡萄糖溶液的颜色变化及褐变吸收如图２－。１由图可知，随着加热时间的延长，果糖和葡萄糖溶液褐变程度均加深，果糖溶液的褐变程度远远强于荀萄２３ 山东大学硕－上学位论文Ｈ’４０ＯＯＣ的糖，说明在ｐ．、ｌ条件下果糖进行焦糖化反应的速度远远快于葡萄糖。２．０８？果糖１＋葡娜＾．１／■１．４－ｆ１．２Ｊ＊°■．０１／Ｓ０８．Ｊ．０．．６Ｊ■０．４ｒ０６１２１８２４３０３６４２４８５４巨０６６巧巧加热时巧（ｈ）－图２１两种糖分别反应不同时间反应液褐变吸收（反应液稀释２０倍测定）见实（验记录－－０００４９２４Ｐ１２）２．２．１．４．２野含量ＨＭＦ为焦糖化反应中还原性糖脱水形成的五元杂环化合物，属于焦糖化反一应的中间产物之，其生成量反映焦糖化反应进行的程度。果糖和葡萄糖加热２－２。由过程中，ＨＭＦ的含量变化情况如图图可知，随着反应时间的延长，果糖与葡萄糖反应体系中ＨＭＦ的含量逐渐上升，且果糖体系的ＨＭＦ的含量远远高于葡萄糖体系，反应７２小时时两者ＨＭＦ含量分别为１０２．７８和５．５９ｍｇ／ｇ糖。Ｈ’Ｃ的说明在ｐ４．０、ｌＯＯ条件下两种糖都发生了脱水反应，且果糖的脱水速度更快。１２０１？一？巧糖一＊—＊．誦萄糖１００晏削．６０／咖堂４。．養２０－Ｖ＂＂＊Ｗ－０ＭＢｆ■■ｆｔ．７？Ｉｉ，？，？０６１２１８２４３０３６４２４８５４６０６６７２７８加热时间化）２４ 山东大学硕±学位论文－－图２２两种糖分别反应不同时间反应液ＨＭＦ合量变化见实验记录０００４９２４－３（Ｐ４）２．２．１．４．３ＤＰ州巧除活性随着焦糖化反应的进行，反应液抗氧化活性发生变化。ＷＤＰＰＨ自由基清除率的变化表示反应液抗氧化能力的变化，从而反映焦糖化反应进行的程度。－可知两种糖随着加热时间的延长，其ＤＰＰＨ清除活性的变化如图２３，由图，０到４小时内果糖反应液的ＤＰＰＨ清除率迅速上升，由２％上升到４３％，随后上升幅度减小，葡萄糖反应液ＤＰＰＨ清除率随着反应时间的延长逐渐小幅度升高，反应相同时间时，果糖反应液的ＤＰＰＨ清除活性强于葡萄糖反应液。７Ｄ—果糖１＋葡萄糖６０Ｉ＾轴广墨Ａ＾一■３０蜜＾０６１２１８２４３０３６４２４８５４６０摊巧巧加热时巧化）图２－３两种糖分别反应不同时间反应液ＤＰＰＨ清除活性变化３倍（反应液稀释１测定〇４９２４－４－）（见实验记录〇〇ｐ＾２．２．２酸牲条件下果巧和葡萄糖与不同氨基酸之间的美拉德反应规律２．么２．１试剂配制０．２ＭＨ４．０憐０．２Ｍ二ＤＰＰＨｐ酸盐缓冲溶液、磯酸氨钢溶液及无水乙醇溶液的配制同２．３丄１。３．７５Ｍ糖溶液：分别称取果糖、葡萄糖各６．７５ｇ，Ｗ〇．２ＭｐＨ４．０磯酸盐缓冲溶液溶解，定容至ｌＯｍＬ。０．０７５Ｍ氨基酸溶液：分别称取甘氨酸、丙氨酸、半脱氛酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、精氨酸、丝氨酸、额氨酸、色氨酸、谷氨醜胺、天冬醜胺０．１４０６、０．１６的、化２２７２、０２９０６、０．２４９６、０．２７６１、０．２４巧、０．３０９７、０．２７４１、０．２７９８、０．２４６０、０．３２６６、巧 山东大学硕±学位论文０．１９７０、０．２４７７、０．２１９７、０．３８２９、０．２７４０、０．２１巧ｇ，加入约１５ｍＬ０．２ＭｐＨ４．０憐酸盐缓冲溶液溶解，Ｗ憐酸或化２Ｍ磯酸氨二钢溶液调节ｐＨ至４．０，转入２５ｍＬ化２ＭＨ４．０憐酸盐缓冲溶。容量瓶，Ｗｐ液定容２．２．２．２果糖、葡萄糖分别与１９种不同氨基酸反应分别取两种糖溶液２５０ｌＬ，依次加入，混匀后于＾等体积的各氨基酸溶液’＝ｌＯＯＣ水浴反应１２小时，取出。参考２．２丄２，选择ｐＨ７．０的条件作为美拉德反应的终止反应条件，向取出的各实验管中加入７５０＾１１＾终止液终止反应，４０００ｒ／ｍｉｎ１０５０＾离也分钟取上清备用。每组兰个重复。２：１１４．０憐酸盐缓冲溶液替代，叫口，同时５０１４．０糖溶液做氨基酸空白对照｛＾２曲９１磯酸盐缓冲溶液替代氨基酸做糖对照。２．２．２．３果箱、葡萄糖分别与不同浓度甘氨酸反应选取结构最简单的甘氨酸为代表，研巧两种糖与不同浓度氨基酸的反应。０一．２ＭｐＨ４．０的憐酸盐缓冲溶液将０．０７５Ｍ的甘氨酸溶液稀释倍使其浓度为化０３７５Ｍ。取两种糖溶液２５０叫分别依次加入等体积化０３＾Ｍ和化０７５Ｍ的甘氨‘１００Ｃ０、４、８、１２、１６酸溶液，混匀后于分别反应小时后，于各时间点分别取出，加入７５０终止液，离也后留上清备用。每组Ｈ个重复。ｔ＾２５〇ｎＬｐＨ４．０磯酸盐缓冲溶液替代甘氨酸做糖对照。２．２．２．４反应液巧变吸收、ＨＭＦ含量及ＤＰ州演除率測定、ＨＭＦＤＰＰＨ２２丄３。各反应液的褐变吸收含量及清除率测定方法同．２．２．么５实验结果２．２．２．５．１酸性条件下果糖和葡萄糖与不同氨基酸么间的美拉德反应规律２．２．２．５．１．１褐变吸收，在蜂蜜炼制过程中蜂蜜中存在少量氨基酸，蜂蜜中的果糖和葡萄糖与氨基酸之间发生美拉德反应导致蜂蜜颜色加深。在本实验中，果糖和葡萄糖分别与１９种不同氨基酸反应后，Ａ４２０值较两种糖单独反应时都有不同程度的増加，并且果－－糖氨基酸体系的褐变程度远远强于葡萄糖氨基酸体系。除色氨酸外各氨基酸对－４所示照组未发生明显褐变现象。如图２。２６ 山东大学硕击学位论文０．８１－＋０．７ｎ口果糖氨基酸■氨基酸对照口．－０．６１［０■．５ｎ＿Ｓ０ＡＪ■ｎｎｎ．４＾ｎ－。ｎｎ口ｎ■０．３■０－．２０－．１■＿■而营—ｏｎ？．—＿＿＿？ＩＲＬｍｍＩＢ■——ＩＰ＾ＨＬＢｆ—＾＾尸冊——■—■掃＾ＭＬｍｍＩｆ果甲绝精赖脯甘半谷氮丙亮類苯丙天异色天胺苏丝谷１．０１０■．９ｎ□葡萄糖＋氨基酸０’８■氮基酸对照０？．７－０．６０■Ｊ．５０＇．４ｎ０■．３０－－２￣￣口－■－■ｌＬＦＬｌＬＦＴ－１－－ＦＬ１－■＿－－ＦＬｎｎ葡甲组精赖脯甘半谷気丙亮顯苯两天异色天胺苏经谷图２－４（反应液稀释２０倍测定两种糖与１９种氨基酸反应后褐变吸收变化）（见００４９２４－实验记录０，１３１４）２．２．２．５．１．２ＨＭＦ含呈一果糖和葡萄糖分别与１９种不同氨基酸反应后，体系内ＨＭＦ含量均发生了定的变化。对于果糖，，除脯氨酸、半脱氨酸和色氨酸之外其他氨基酸的加入均使体系ＨＭＦ的含量小幅度增加，但氨基酸影响并不明显；对于葡萄糖，除半脫氨酸外，，其他氯基酸也都使体系ＨＭＦ的含量增加，尤其组氨酸最为明显与果糖相比，氨基酸对葡萄糖体系ＨＭＦ的含量影响更显著；另外，除组氨酸外，－氨基酸体系的ＨＭＦ含量明显高于葡萄糖－－５）果糖氨基酸体系（图２。２７ 山东大学硕±学位论文３０１１巧２５－２〇ｎｉｎｎｎｎｎｎｎｎｎ長曲－１１５口如？Ｘ１０口－５果甲组精赖脯甘半谷氨丙亮缀苯丙天异色天胺苏丝答４０１３５－０３０－慧２５－复刺２０－如厂１ｔｕ＂－巧Ｓ左－１０口口口——１１＿，，，Ｉ５－口ｎｎｎｎｎｎｉＩ■Ｉ■ｌｎ■■ｎｉｌ＂Ｉｌｉｉｌ１１■ｌｌｌｌＩ’ｉ’ｉｎｉｉｌ—Ｄ—ｉｉ—＂Ｉ■ｌｌ■■■ｌｉｌ０，ｌｌｉｌｉｉＬｉ，ｉＪｌｌＩｉ，｜‘ｌ，，ｉＪＵ，Ｕ｜ＵＵ｜ｊ葡甲组精赖脯甘半谷氨两亮缴苯丙天异色天按苏丝谷－－图２５两种糖与００４９２４－７９１９种氨基酸反应后ＨＭＦ含量变化（见实验记录０Ｐ）２．２．２．５．１．３ＤＰＰＨ清除活性美拉德反应的发生导致褐色产物堆积，随着反应体系褐变吸收的増加，反应一－液ＤＰＰＨ清除活性也发生了定的变化，如图２６所示，除脯氨酸和色氨酸之外，，其他各种氨基酸的加入均使果糖体系的ＤＰＰＨ清除活性增强但与不加氨基酸的体系相比变化幅度不大。１９种氨基酸均使葡萄糖体系的ＤＰＰＨ清除活性显著提高。除半脫氨酸和色氨酸外，其他氨基酸对照组ＤＰＰＨ清除率均５５％。２８ 山东大学硕上学位论文７０１１□巧糖＋氨基酸６０．■錶基酸对照口５０．ｎ［｜［１｜〇ｎｎｎｎｎ。ｎ。。ｌ受４０－１渣－３Ｗ０池舌色２０？？〇｜。１１￡１■占■Ｅｊｃｉｌ■匯占薩ｎ■■■１■，果甲組精赖脯甘半巧氯丙亮额巧两天异色天胺苏丝谷７０□葡萄糖＋氨基酸■＇６０■ｎ站基酸对照５０－含ｆｌｆｋｎｆｉｎｓｎｓｆｉ円ｎｎ一Ｘ口ｎｎ骄４０－ｎ円抵Ｓｉ３０－￡円０－己－２０■…Ｉｎ１ｊＬｉＨｉｉ■＿Ｅ＿■＿Ｃ＿｜■ＢＪＬＩＩｉ．．＿＿葡中组精赖脯甘半巧氯两亮额苯丙天掉色天胺巧丝咨图２－６两种糖与８１９种氨基酸反应后ＤＰＰＨ清除活性变化（反应液稀释倍测定）０００４９２４－－２（见实验记录Ｐ１０１）２．２．２．５．２两种糖分别与不同浓度甘氨酸反应２．２．２．５．２．１巧变吸收果糖、葡萄糖（３．７５Ｍ）分别与等体积浓度为化０３パ和０．０パＭ的甘氨酸レ义孽尔浓度比５０：１和１００：１反应不同时间，其反应液褐变吸收均强于不添加甘氨酸的糖溶液。且氨基酸浓度越高，体系褐变吸收也越强，与果糖相比，氨基酸浓度对２－７）葡萄糖体系的褐变吸收影响更大（图。２９ 山东大学硕古学位论文。３〇．－＊－果糖葡萄糖己實［ｆ主．。巧．＝：＝二瓢：？１識Ａ；甚！Ｉ哉：＼／？ｏ．．：ａ０２０Ａ．／．１５ｌｏ＾：赛／￣￣－－＝＝＾￣－＾Ｔ＇＇？１１？００＇口ｉｔｒ：３ｉｇ．００＊．０４８１２１６２００４８１２１６２０化热时间（ｈ）加热时间（ｈ）－７氨基酸浓度对两种糖反应液褐变吸收的影响１５倍图２（反应液稀释测定）（见－０００４９２４－实验记录１５１６Ｐ）２．２．２．５．么２ＨＭＦ含呈果糖与甘氨酸Ｗ摩尔浓度比５０：１和１０化１分别反应不同时间，其反应液ＨＭＦ含量与不添加甘氨酸的反应液相比变化不明显，说明甘氨酸浓度对果糖体系ＨＭＦ含量影响不大。而葡萄糖与甘氨酸Ｗ摩尔浓度比５０：１和１００：１分别进行反应后，反应液ＨＭＦ含量明显离于不添加甘氨酸的反应液，且氨基酸浓度越大，体系－８）ＨＭＦ含量也越高（图２。３５Ｓｉｎ—３。■：識二》＿；觀較溫；甚》親．＼１：／：＾：ｅＩ：：：ｌ义■■■？００，．．．０４８１２１６２００４８１２１６２０间化）加热时间（ｈ）ｉｌ日热时－－－８ＨＭＦ０００４９２４图２氨基酸浓度对两种糖反应液含量的影响（见实验记录ｌ７１８）ｐ２．２．２．５．２．３ＤＰＰＨ清除活性果糖与甘氨酸摩尔浓度比５０：１和１００：１分别反应不同时间，其反应液ＤＰＰＨ清除活性与不添加甘氨酸的反应液相比变化不明显，说明甘氨酸浓度对果。ＤＰＰＨ清糖体系抗氧化活性影响不大葡萄糖与不同浓度甘氨酸反应后，反应液３０ 山东大学硕±学位论文除活性明显高于不添加甘氨酸的葡萄糖溶液，且氨基酸浓度越大，体系ＤＰＰＨ清２－９）除活性越强。（图７０６０果糖—葡萄糖——■—果糖：０：１＝：６０．甘氯酸巧巧萄糖甘氯酸巧０１ｅｎ＊＊—＝：１００！１＝果森甘急酪畜萄輪：甘氨酸１孤Ｉ１＾如．呈＊差■＾■４０４。．靈３。．｜目ｋＪＩＴ－Ｉ－－Ｉ１．１ＩＩｔ＇＾－Ｉ－－００ＩＪ０４８１２１６２００４８１２１６２０ｉ巧时间（ｈ）化热时闽（ｈ））口－图２９氨基酸浓度对两种糖反应液ＤＰＰＨ清除活性的影响（反应液稀释１３倍测－０４９２４－定）（见实验记录００Ｐ１９２巧２．２．３美拉德反应后期ＨＭＦ与１９种氨基酸之间的反应规律２．２．３．１试剂巧制０２ＭＨ４．０、化２Ｍ二、０．０７５Ｍ．ｐ磯酸盐缓冲溶液磯酸氨钢溶液（终止液）各２丄２２２氨基酸溶液及ＤＰＰＨ无水乙醇溶液的配制如２．１和．．．１。０．．０．０７５ＭＨＭＦ溶液配制：称取ＨＭＦ０．０９４６ｇ，精密称定，ｉｉｉ０２ＭｐＨ４磯酸盐缓冲溶液溶解定容至ｌＯｍＬ。化７５１＾１甘氨酸溶液配制：称取甘氨酸１．４０７３，精密称定，１＾０．２的口１１４．０磯酸盐缓冲溶液约２０ｍＬ溶解，Ｗ磯酸调节ｐＨ至４．０，Ｗ化２ＭｐＨ４．０的憐酸盐缓冲溶液定容至２５ｍＬ。２．２．３．２ＨＭＦ与１９种氨基酸反应液的制备分别取０．０７５Ｍ的ＨＭＦ溶液２５０与等体积等摩尔浓度的各氨基酸溶液混匀５０Ｌ终止后（ＴＣ，．２丄２，加入７，于１０水浴加热反应１２小时取出，参考２ｐ液并离也。每沮Ｈ个重复。同时Ｗ０．２ＭｐＨ４．０磯酸盐缓冲溶液代替氨基酸做ＨＭＦ加热和不加热条件下的两个不同对照组。２．２．义３ＨＭＦ与不同巧度甘氨酸反应巧的制备取０．０７５Ｍ的ＨＭＦ溶液２５０＾ｌＬ分别与等体积０．７５Ｍ和０．０７５Ｍ的甘氨酸缓冲’Ｃ水浴加热反应溶液混匀，于ｌＯＯ０、４、８、１２、１６小时，各时间点取出后加入３１ 山东大学硕尘学位论文７５０ｌＬ终止液，４０００ｒ／ｍｉｎ离也１０分钟取上清备用。每組兰个重复。同时１＾＾＾，０．２ＭｐＨ４．０憐酸盐缓冲溶液代替甘氨酸溶液做ＨＭＦ对照。２．２．３．４反应液巧变吸收及ＤＰ州清除活性測定各反应液的褐变吸收及ＤＰ削清除活性的测定方法参考２．２．１．３。么２．义５实验结果２．２．３．５．１ＨＭＦ分别与１９种不同氯基酸的反应２．２．３．５．１．１巧变吸收在酸性条件下，ＨＭＦ溶液受热后体系颜色加深，说明ＨＭＦ在酸性条件下自身可Ｗ发生缩合反应，生成颜色较深的缩合物；等摩尔浓度氨基酸的加入使ＨＭＦ一Ｆ与一反应体系的褐变吸收进步加强，说明ＨＭ氨基酸之间发生了进步的反－应，生成了有色产物（图２１０）。１４．１－ＤＨＭＦ对照或ＨＭＦ鼓基厳反应液１２．口■氨基酸对照ｎ－１．００８－．口貝０－．６０－．４ｎｎｒｎｎ口ｎ口ｎｎ—ｎ０－ｎ．２ｎＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬＩＬｌｎ，ｎ，０，＾．０＜’＾摆眩喪扭铺拾餐胶椒划簾处ｒＫ取井裝翅把喊Ｉ５輪淹卫图２－１０ＨＭＦ１９４ＨＭＦＡ与种氨基酸反应后褐变吸收变化（反应液稀释倍测定，表示ＨＭＦ单独加热反应）（见实验记录０００４９２４，２３）２．２．３．５．１．２ＤＰＰＨ清除活性ＨＭＦ在酸性条件下单独加热反应１２小时后，反应液ＤＰＰＨ清除活性与加热前相比显著増强，说明在酸性条件下，ＨＭＦ受热发生自身的缩合反应生成了具有自由基清除活性的物质。除色氨酸外，其余１８种氨基酸与ＨＭＦ反应后，体系ＤＰＰＨ清除率比ＨＭＦ单独加热反应的体系提高了化？比不加热的３５１．２２倍，ＨＭＦ？８．８４１５６ＤＰＰＨ清本身提高了．１倍，半脫氨酸与色氨酸对照液的除率均高于单独加热反应的ＨＭＦ（ＨＭＦＡ）溶液，色氨酸与ＨＭＦ反应后其ＤＰＰＨ清除率３２ 山东大学硕王学位论文－反而小于０，可能因为生成了具有强氧化性的物质，这也可能是果糖色氨酸反应一ＤＰＰＨ－液的清除率低于果糖对照液的个主要原因。（图２１１）。抑５０■ｒｔｎｎｎ－－ｎｉｎｎｎｎ１ｎｆｊｉ４０－口口－！ｎ１０－｜Ｊ盤圓｜｜＇ｌＩＥ■ｌＵＩＬＩＬＩＬｌｉＩＬＩＬＩＬＩＬ！■ｌＵｌｌｉＩＬＩＩＩｌｌｌＩ■ＩＬｎ丑」＿＾巧接＝＃Ｅ？沒Ｉ＾＾＊－－Ｓ＊４－１０１達Ｉｇ養碧口ＨＭＦ对照或ＨＭＦ＋気基酸．－３０■氨基酸对照－－４０１－（图２１１ＨＭＦ与１９种氨基酸反应后ＤＰＰＨ清除活性变化反应液稀释４倍测定）０００４９２４－－见实验记录２１２２（Ｐ）２．２．３．５．２ＨＭＦ分别与不同浓度甘氨酸反应为明确氨基酸浓度对ＨＭＦ－氨基酸反应体系的影响，选取甘氨酸为代表进行。实验，得出结果如下２．２．义５．么１巧变吸收ＨＭＦ单独加热反应时体系褐变吸收随着反应时间而逐渐增强；ＨＭＦ分别与０：：．０７５Ｍ和０Ｊ５Ｍ的甘氨酸Ｗ摩尔浓度比１１和１１０反应后，体系褐变吸收较ＨＭＦ对照液增强，随着甘氨酸浓度的増加，体系褐变吸收也随之加强，说明氨基－２－酸浓度对ＨＭＦ氨基酸体系的褐变程度影响较大（图１２）。〇＂＇８－＾ＨＭＦ对照［■０甘氛龄１；１．７＝甘氛酸１：…１疹０１１？．００４８１２１６加热时巧化）３３ 山东大学硕±学位论文－ＨＭＦ反４图２１２氨基酸浓度对应液褐变吸收的影响（反应液稀释倍测定）见实（验记录－２６０００４９２４ｐ）２．２．３．５．２．２ＤＰＰＨ清除活性ＨＭＦ单独加热反应时，ＤＰＰＨ清除活性随着反应时间的延长逐渐增强，如图－６小时后ＨＭＦＤＰＰＨ５２１３所示，反应１体系清除率较反应前提高了１０．倍。甘氨ＤＰＰＨ一ＤＰＰＨ酸的加入使体系清除活性进步提高，且随着甘氨酸浓度的增加，：１０反应１６小时清除活性随之增强。ＨＭＦ与甘氨酸Ｗ摩尔浓度比１后，其反应液ＤＰＰＨ清除率较两者浓度比１：１的体系和ＨＭＦ对照液体系分别提高了化３１和１．０３ＨＭＦ－倍，说明氨基酸浓度对氨基酸体系的抗氧化活性影响较大。抓一一ＨＭＦ对照「－？－．＝１１７０面邸：甘氛胺：—＊甘氛廣＝１：１０＾？？＇＇００４８１２１６加热时间化）图２－ＤＰＰＨ（１３氨基酸浓度对ＨＭＦ反应液清除活性的影响反应液稀释４倍测定－２５）（见实验记录０００４９２４Ｐ）２．３讨论蜂蜜的ｐＨ值偏弱酸性，其中含有的果糖和葡萄糖在受热的条件下主要发生焦糖化反应而使蜂蜜的褐变程度加深，另外由于少量氨基酸的存在，还可能发生了美拉德反应。基于此，本文设计了ｐＨ为４．０的弱酸性条件研巧果糖和葡萄糖两个体系的反应。ＨＭＦ是美拉德反应与焦糖化反应的中间产物，由美拉德反应机理一看，酸性条件下生成的中间产物ＨＭＦ可进步参与反应形成美拉德反应的终产。物，故本文同时研究了酸性条件下ＨＭＦ与１９种氨基酸之间的反应规律’Ｃ果糖和葡萄糖分别于ｌＯＯ，ＰＨ４．０条件下反应，随着反应时间的延长，两体系的褐变程度均加深，，生成的ＨＭＦ含量逐渐增多说明两种糖均发生了焦糖化反应，在酸性条件下糖脱水生成了中间产物ＨＭＦ。两者相比，果糖体系的褐变程３４ 山东大学硕上学位论文度及ＨＭＦ含量均明显高于葡萄糖，说明果糖脱水生成ＨＭＦ的速度快于葡萄糖。果糖中巧喃环结构占较大比重，，易在酸性条件下形成巧喃果糖阳离子巧喃果糖阳离子是糖脱水形成ＨＭＦ的前体，而葡萄糖多Ｗ六元环结构存在，味喃结构很少，需要异构化转变成巧喃型果糖，后形成巧喃果糖阳离子，并且葡萄糖的六元环结构相对稳定，此过程进行巧慢，因此葡萄糖脱水进行焦糖化反应的速度相对果糖较慢。从两体系反应液不同反应时间的ＤＰＰＨ清除活性看，果糖的ＤＰＰＨ清除活性从０小时到４小时迅速升高，４小时之后增长幅度变缓，可见刚开始几个小时内果糖参与反应的速度较快，迅速生成了较多具有自由基清除活性的焦糖化一一反应产物，反应定时间后部分产物可能开始进步聚合形成分子量极大的聚合物，最终形成沉淀，使体系ＤＰＰＨ清除活性的增长幅度变慢。葡萄糖在整个加热过程中的ＤＰＰＨ清除活性缓慢稳定的上升，可能因为其异构化脱水过程速度较慢且稳定，整个反应过程生成沉淀较少。果糖与１９种不同的氨基酸反应后，褐变程度均有不同程度的増加，说明氨基酸的加入促进了美拉德反应的发生。从ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ清除活性看，氨基酸的加入对果糖体系的ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ清除活性影响不大，从果糖与不同浓度的甘氨酸之间的反应也可Ｗ发现无论是低浓度还是高浓度的甘氨酸对果糖体系的ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ清除活性影响均不大。果糖既可脱水形成ＨＭＦ，也可Ｗ与氨基酸首先形成席夫碱，再经帰醇化等过程形成ＨＭＦ，由于后者反应比较复杂，果糖直接脱水的速度可能远远快于美拉德反应进行的速度，在果糖形成巧喃果糖阳离子的过程中可能与美拉德反应过程争夺质子氨导致帰醇化过程进行较慢，对一ＰＰＨ美拉德反应具有定的抑制作用，这可能是氨基酸对果糖体系ＨＭＦ含量及Ｄ一一＞清除活性影响不大的个原因，另外，本文己证明ＨＭＦ可１＾１与氨基酸进步发生反应，果糖脱水生成ＨＭＦ的速度较快，生成的ＨＭＦ与反应溶液中的氨基酸反－ＨＭＦ含量增加不明显的原因应也可能是导致果糖氨基酸。半脫氨酸及色氨酸和果糖反应后体系ＤＰＰＨ清除活性主要表现为氨基酸的活性，并且体系ＨＭＦ的含量比果糖对照液的ＨＭＦ含量低，可能因为送两种氨基酸与果糖反应较慢或容易一与ＨＭＦ反应，从而导致ＨＭＦ的消耗较多，运点在ＨＭＦ与氨基酸反应体系的褐变结果中有所证实。另外，在ＨＭＦ与氨基酸反应的实验结果中己经证实了ＨＭＦ－－色氨酸反应液的ＤＰＰＨ清除率为负值，果糖色氨酸反应液ＤＰＰＨ清除率低于果糖对照液的原因可能是因为ＨＭＦ与色氨酸反应后生成物的氧化性抵消了部３５ 山东大学硕±学位论文－－－分果糖色氨酸反应液的抗氧化活性（图２１０，２１１）。由于葡萄糖体系生成ＨＭＦ的速度很慢ＨＭＦ－。，所＾１总１氨基酸反应对葡萄糖反应体系的影响并不明显之－氨基酸反应体系中主要发生的反应可能是焦糖化反应而不是美拉德反，在果糖一。应，有关氨基酸对果糖体系美拉德反应的影响及原因有待进步深入研究１９ＨＭＦＤＰＰＨ葡萄糖与种氨基酸反应后，体系褐变程度、含量及清除活性均有不同程度的增加，与不同浓度的甘氨酸反应过程中，高浓度甘氨酸导致反应进行的程度更剧烈，氨基酸的添加显著促进了美拉德反应的发生，与葡萄糖对照－液相比体系的各项指标差别较大，说明葡萄糖氨基酸体系中主要发生了美拉德反应，而焦糖化反应进行较慢，所氨基酸对葡萄糖体系的褐变程度、ＨＭＦ生成量及ＤＰＰＨ清除活性影响较大。两种糖与氨基酸反应体系中同时发生了美拉德反应和焦糖化反应。果糖与葡萄糖相比，反应体系褐变程度、ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ清除活性都较高，通过分析可知主要差别在于焦糖化反应。果糖焦糖化反应进行的速度远远快于葡萄糖，从而导致了整个体系的反应进程快于葡萄糖。本文通过对ＨＭＦ与氨基酸反应的研巧发现，ＨＭＦ单独加热即可发生反应使体系颜色加深一，与氨基酸反应后颜色进步加深，相同浓度下ＨＭＦ本身抗氧化活性较弱，而加热后活性增强，与氮基酸反应后活性更强，氨基酸浓度对体系颜色及抗氧化活性影响较大。Ｗ上结果表明ＨＭＦ可自身发生缩合反应生成不含氮的美拉德反应或焦糖化反应产物，同时也可与氨基酸反应生成含氮的美拉德反应产物，这是酸性条件下美拉德反应与焦糖化反应后期生成重要活性产物的关键。＊３６ 山东大学硕±学位论文第Ｈ章美拉德反应及醇母菌发酵对炼蜜的相关成分和体沐抗氧化活性影响蜂蜜中含有丰富的多酷类物质、抗坏血酸、黄爾类等抗氧化物质，使得蜂蜜一直来被广泛用做抗氧化剂。蜂蜜在炼制过程中，由于高温条件可能破坏多齡、类抗坏血酸等抗氧化物质，使蜂蜜中天然存在的抗氧化成分减少；与此同时，由于大量还原糖和少量氨基酸的存在而导致的美拉德与焦糖化反应产生了相应的美拉德与焦糖化反应产物。这些产物可能使蜂蜜具有了炼制前所不具备的新的活性或毒性。另外由于美拉德与焦糖化反应产物具有较强的抗氧化活性，可能使得炼蜜的抗氧化活性也显著不同于新鲜蜂蜜。由于蜂蜜中氨基酸、蛋白质含量较少，在炼制过程中主要发生的是焦糖化反应，其产物的生物活性尚缺乏广泛而深入的研究。传统的炼蜜方法通常Ｗ降低果糖和葡萄糖的消耗，减少ＨＭＦ的生成量为标准，除了考虑ＨＭＦ的毒副作用外，部分原因可能也针对焦糖化反应的其他某竖有害产物。然而美拉德反应产物类黑素的生物活性则己得到广泛的研巧和认可，其抗氧化、抗菌、抗肿瘤、降血压等。活性己见较多报道，因此美拉德反应产物具有较多的有益活性在本章的研究中将利用促进美拉德反应的原理采取添加氨基酸盐的方法炼蜜，研巧美拉德反应对蜂蜜炼制过程中相关成分和抗氧化活性变化的影响。另外，微生物发酵是中药炮制中常用的一种方法，通过微生物自身代谢酶产生的次级代谢产物改变原药材中的化合物，产生新的活性成分，降低毒副作用，增加疗效。本文同时设计利用酵母菌发酵炼蜜，研究酵母菌发醇对炼蜜中糖和ＨＭＦ含量及体外抗氧化活性的影响。谷氨酸钢常用作食品调味剂，考虑到其溶解度较好、安全性较高，并且有研巧证实谷氨酸钢在高温条件下可部分转变为焦谷氨酸钢，是提高记忆为和头脑功能的有益化合物，故本实验选取谷氨酸钢作为賓基酸盐的代表进行炼蜜的相关研巧。３．１仪器与试剂３．１．１仪器３７ 山东大学硕生学位论文ＤＦ－０１Ｓ型）ＡＹ－１２０１恒温加热磁力攒拌器（郑州长城科工贸有限公司；型电子分析天平（岛津制造所）；ＷＦ３２型精密色差仪（深圳威福光电科技有限－公司）ＬＣ－ＳＰＤ１０ＡＴ，１０Ａ紫外；高效液相色谱仪（日本岛津配检测器）；ＨＨ－ＳＹ１１电热恒温水浴锅）。（北京长风仪器仪表公司３．１－２试剂－－２－果糖、ＨＭＦ、２二１ＤＰＰＨＳｉｍａ公司、葡萄糖，苯基苦基苯阱（）为ｇ产品。；谷氨酸钥及安琪酵母购自当地供应商其他试剂为国产色谱纯或分析纯。３．２实验方法与结果３．２．１不同蜂蜜样品的制备化一５ｇ／ｍＬ谷氨酸钢溶液的配制：称取谷氨酸销５ｇ，溶于定量蒸饱水，定ｌＯｍＬ。容至，摇匀备用样品制备：称取新鲜蜂蜜２５ｇ，加蒸饱水稀释定容到ｌＯＯｍＬ，混匀即得生一蜜（Ｈ）样品。另外分别称取Ｈ份蜂蜜各２５ｇ，份加ＩｍＬ蒸饱水，另两份各’加０．５ｇ／ｍＬ的谷氨酸钢溶液ＩｍＬ，将Ｈ份蜜于１２０Ｃ油浴加热炼制２小时，取一出Ｒ－ｈ）样品和两份氨基酸盐，加水稀释定容到ｌＯＯｍＬ，即得份炼蜜（催化一（ＧＲ－ｈ）－ｈ的炼蜜样品，在无菌条件下向其中份ＧＲ样品中加入化０２５ｇ醇巧’菌，于％Ｃ解４８小时去除石醇，混匀后封口育发醇，低温减压浓缩，蒸溜－水重新定容至ｌＯＯｍＬ，ｈ）样品。兰即得发酵炼蜜（ＦＧＲ样品每组做个重复，各蜂蜜样品于４０００ｒ／ｍｉｎ离也１０分钟，取上清用于体外指标测定。３．２．２不同巧蜜样品的颜色、ＨＭＦ含ａ、巧含量、ＤＰＰＨ清除活性及总抗氧化能力測定３．２．么１颜色測定取２０ｍＬ不同的各蜂蜜样品，利用精密色差仪通过Ｌａｂ色彩模型评价不同、。处理方法得到的蜂蜜样品的颜色，记录Ｌａ、ｂ的数值其中数值Ｌ表示照？０１００ａ、ｂ的度，数值范围为，即由黑色到白色的颜色变化范围；数值范围均－？＋－－－－为１２０１２０，分别表示深绿色灰色亮粉红色和亮蓝色灰色黄色的颜色变化范围。义２．２．２ＨＭＦ测定３８ 山东大学硕±学位论文色谱条件同２．２丄３．２，由于更换新的同厂家同品牌Ｃ１８色谱柱，故重新确＝＋２９０＝：Ｙ３０７３９８０．９９９９。０倍后定标准曲线为Ｘ．７Ｒ２１＾＾甲醇稀释５，于，样品４０００ｒ／ｍｉｎ离也１０分钟，过滤后进样２０测定，ＨＭＦ含量测定结果Ｗｍｇ／ｇ蜂蜜样品表示。Ｗ义２．２．３蔥宙比色法巧定＊１＾；称取蔥厕化２ｇ，精密称定８０％蔥丽硫酸试剂配制，加的浓硫酸至体积为ｌＯＯｍＬ，摇匀，避光放置（当日现用现配）葡萄糖标准溶液配制：称取无水葡萄糖标准品化Ｏｌｇ，精密称定，加水定容到体积为ｌＯＯｍＬ即得化Ｉｍｇ／ｍＬ的葡萄糖标准溶液。依次取该溶液０、化１、０．２、０．４、０．６、Ｏ．ＳｍＬ１、０．９、０．８、０．６、０．４、０．２ｍ，依次加入水Ｌ，混匀，即一系列不同浓度的葡萄糖标准溶液得。标准曲线测定；于具塞试管内依次加入上述不同浓度标准溶液各０．１６ｍＬ，各试管内均缓慢加入蔥丽硫酸试剂化６４ｍＬ（此巧程于冰水浴中进行），加完后轻摇混匀，然后将各试管置于ｌＯＣｒＣ水浴锅内煮沸１０分钟，反应结束后取出，放ｎｍ入冰水中降湿，然后取出静置１０分钟后，测定６２４波长处的吸收值，根据葡萄糖浓度与吸光度值的关系绘制标准曲线。样品测定：将各蜂蜜样品液Ｗ蒸馈水稀释适当倍数后，按照上述方法测定吸光度值，根据标准曲线计算得出糖的含量，Ｗｍｇ／ｇ蜂蜜样品表示。３．２．２．４ＤＰＰＨ巧除活性測定ＤＰＰＨ溶液酷制方法同２．２丄１。各蜂蜜样品Ｗ蒸馈水稀释１００倍后测定ＤＰＰＨ清除活性，同时扣除样品颜色吸收。方法同２．２丄３．３。［Ｗ３．２．么５总抗氧化能力測定试剂配制：化２ＭｐＨ６．６的磯酸盐缓冲溶液：称取磯酸二氨纳３．１２ｇ，精密称定．１６，！Ｍ蒸馈水溶解定容至ｌＯＯｍＬ，摇匀。另称取十二水合磯酸氨二钢７ｇ，精密称定，Ｗ蒸馈水溶解定容至ｌＯＯｍＬ，摇匀。取磯酸二氨钢溶液约７５ｍＬ，加入适量十二水合磯酸氨二钢溶液，调节ｐＨ至６．６。１％铁氛化钟溶液：称取铁ｍＬ％Ｈ氯己：氯化钟Ｉｇ，精密称定，Ｗ蒸馈水溶解定容至ｌＯＯ，摇匀。１０酸称ＯＯｍＬ。化１％：取Ｈ氯乙酸１化，精密称定，加水到体积为ｌ，摇匀Ｈ氯化铁称取＾氯化铁０．１，精密称定＾＾１０〇１１１１＾，摇勻。（：£，１＾蒸馈水溶解定容至维生素标３９ 山东大学硕±学位论文ｌｌＬ（准溶液：称取维生素Ｃ标准品化Ｏ，精密称定ＯＯｍ，摇匀ｇ，加水至避光保存，现用现配）即得浓度为化Ｉｍｇ／ｍＬ的维生素Ｃ标准溶液。维生素Ｃ总抗氧化能力标准曲线测定：分别取化Ｉｍｇ／ｍＬ的维生素Ｃ标准溶液０、０．２、０．４、０．６、０．８、ＩｍＬ，依次加入蒸饱水１、０．８、０．６、０．４、０．２、一ＯｍＬ，，即得系列不同浓度的维生素Ｃ标准溶液。取上述各溶液０．２ｍＬ依次加入’０．２Ｍ脚６．６的磯酸盐缓冲溶液和１％铁氯化钟溶液各０．５ｍＬ，于５０Ｃ水浴加热２０分钟、，取出后加入０．５ｍＬ１０％Ｓ氯乙酸终止反应，于３０００ｒ／ｍｉｎ离屯１０分钟，取上清液０．５ｍＬ，加入等体积的蒸溜水稀释，最后加入０．１１１１１＾０．１％；氯，测定７００ｎｍ波长处光吸收值化铁溶液，溜匀后室温放置１０分钟，吸收值的大小与总抗氧化能力大小成正比，根据测定结果绘制标准曲线。样品测定：将样品Ｗ蒸馈水稀释４０倍Ｗ后，取〇，按照上述方法测定．２ｒａＬ吸光度值，根据吸光度值的大小评价样品总抗氧化能力大小。３－２．３实验结果３．２．３．１類色－１Ｈ的Ｌ结合Ｌ化色彩模型示意图３分析测定的结果，样品值接近７０，远－ｈ－－、ＧＲｈ和ＦＧ民ｈ的Ｌ值；者的颜色与Ｈ相比明显偏暗远大于Ｒ，表明后－－－－黑，ＧＲｈ和ＦＧ民ｈ的Ｌ值接近均小于Ｒｈ其中，表明颜色较Ｒｈ偏暗；从ａ，民－和ｂ的值来看，ｈ的ａ、ｂ值均比Ｈ的ａ、ｂ值高，综合ａ、ｂ值表现的颜色可－－－知，与Ｈ相比，Ｒｈ的颜色偏亮红色Ｒｈ和ＦＧ民ｈ的ａ、ｂ；而Ｇ值接化均在０附。Ｈ近，说明两者的颜色偏暗灰色总体分析，与相比，蜂蜜经不同方法炼－ｈ和ＦＧＲ－ｈ－ｈ制后颜色逐渐加深，ＧＲ的颜色相似，接近黑色，均明显比Ｈ和Ｒ的颜色深（图３－２）。．瑪图３－Ｌａｂ色彩模型１示意图４０ 山东大学硕±学位论文８０１１了０－？；ａ圓－－－－ＨＲｈＧＲｈＦＧＲｈ＿１０－Ｉ－２０图３－２不同蜂蜜样品的颜色比较０００４９２４－２７（见实验记录Ｐ）义２．３．２ＨＭＦ测定结果３－３ＨＭＦ含不同蜂蜜样品ＨＭＦ含量如图所示，不经加热处理的生蜜中量４ｍ民－－１１２４１４０８ｍ仅为０．０８／，而ｈ和ＧＲｈ中的ＨＭＦ含量分别为．和．／ｇｇｇｇ，均超，经酵母菌发酵后，过了１ｍｇ／ｇ，大部分的ＨＭＦ被清除含量下降至化巧５ｍｇ／ｇ，说明酵母菌发酵促进了ＨＭＦ的降解转化，起到降低ＨＭＦ含量的作用。１．６１—－１．４—－哥１２口－１．０－０．８Ｓ－＾０．６工－０．４－０．２－￣￣Ｉ—Ｉ￣￣￣—￣￣￣——一￣０．０Ｉ．ＩＩＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈ图３－３不同蜂蜜样品ＨＭＦ含量０００４９２４－２９（见实验记录ｐ）３．２．３．３糖含呈测定结果３．２．３．３．１葡萄糖标准曲线－不同浓度的葡萄糖标准溶液对应测得的吸光度值数据如表３１，绘制标准曲线－＝Ｘ＋＝（图３４），得线性回归方程Ｙ８．３９４７０．１０７５，Ｒ２０．９９９３。４１ 山东大学硕王学位论文３－１０４９２４－表葡萄糖标准曲线浓度与吸光度值（见实验记录００的１）浓度（ｍｇ／ｍＬ）吸光度（Ａ６２４）１００Ｈ３２０．０１０．１９０３０．０２０．；２６８４０．０４０．４４０５０．０６０．６２２６０．０８０．７７４０９１．０－＝．８８Ｙ．３９４７Ｘ＋０．１０７５２＝－民０．９９９３０．７０－．６－望０．５０－Ｉ．４－０－２０．１－０．０Ｉ，，１．０．００００２０４００６０．１０．．０．．０８０浓度（ｍｇ／ｍＬ）图３－４葡萄糖标准曲０００４９２４－３线（见实验记录Ｐ１）３义２．３．．２样品測定结果新鲜蜂蜜中存在大量的还原性糖，主要为果糖和葡萄糖，但在炼蜜过程中３３％尤其添加谷氨酸钢炼制后大约的糖被消耗，说明氨基酸盐的加入促进了美拉德反应的发生；酵母茜的发酵过程极大地促进了果糖和葡萄糖的降解，发酵，ｍ／４８小时后蜂蜜中糖含量低于１００ｇｇ，说明大部分的糖己被酵母菌降解利用３－５。调）４２ 山东大学硕±学位论文９００１８００■－７００－Ｔ１６００．口Ｊ０－５０咖４．００如＾３００■－２００－－１００＾｜－—－０ｉ，）ＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈ３－５９２４－３图不同蜂蜜样品糖含量（见实验记录０００４ｐ１）３．２．３．４ＤＰＰＨ清除活性６．３２倍蜂蜜炼制后ＤＰＰＨ清除率较炼制之前提高了，添加谷氨酸钢炼蜜２３．１９后，其清除率较生蜜提高了倍，说明美拉德反应的发生极大地促进了抗氧化产物的产生；经酵母菌发酵后，ＤＰＰＨ清除率与发酵前相比变化不大，说明酵母菌发酵并未导致抗氧化产物的减少，对炼蜜的抗氧化活性影响不大（图３－６）。８０－７０－６０＾斋５０－盗？４０？－至３０么Ｑ－２０－１０—一＇—￣Ｉ￣￣一＼．０１１ＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈ－６不同蜂蜜样品ＤＰＰＨ清除活图３性（样品稀释１００倍测定）（见实验记录０００４９２４－Ｐ３２）３．２．３．５总抗氧化能力測定结果３．么３．瓦１维生素Ｃ总抗氧化能力标准曲线不同浓度的维生素Ｃ标准溶液对应测得的吸光度值数据如表３－２，绘制标２＝＝３－７）Ｙ６准曲线（图．７０１９Ｘ＋０．０２５８Ｒ０．９Ｗ８。，得线性回归方程，４３ 山东大学硕丈学位论文－表３２维生素Ｃ总抗氧化能力标准曲线浓度与吸光度值见实验记录０００４９２４－（３２ｐ）￣浓度（ｍｇ／ｍＬ）总抗氧化能为（Ａ７００）１０２０．０２０．１５４３０．０４０．２９７４００６０４２８．．５０．０８０．５６５６０．１０．６９３０．８＂０７－Ｙ＝６７０１９Ｘ＋０．０２５８Ａ．＂＝－Ｒ０９９９８０．６．＾０－．５化４－Ｉ化３ｊＴ１ｊ０．２０－．１０．０＾！ｉ１ｉ１０．．．．．．００００２００４００６００８０．１００１２浓度（ｍｇ／ｍＬ）图３－７维生素Ｃ总抗氧化能力标准曲线０００４９２４－３２（见实验记录ｐ）义２．３．５．２样品測定结果３－８如图所示，由Ａ７００值及维生素Ｃ标准曲线可知，在相同浓度下（６．２５ｍｇ／ｍＬ）生蜜总抗氧化能力最低，仅相当于０．００１３ｍｇ／ｍＬ的维生素Ｃ的总抗氧化能力，经高温炼制后，总抗氧化能力较生蜜提高了３倍。而添加谷氨酸納炼制的蜂蜜样品总抗氧化能力大幅度提高，相当于０．０７１９ｍｇ／ｍＬ的维生素Ｃ的总抗氧化能力，酵母菌发酵对样品总抗氧化能为影响不大，结果与３．２．３．４一中致。４４ 山东大学硕±学位论文０．６－－０．５｜＾０＂．４０￣§．３＜－０．２０－．１口－￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣Ｌ＿０．０１＿＿＿＿Ｌ＿＜，，ＨＲ－－ｈＧＲｈ防－ｈＲ－８不同蜂窒样品总抗氧化能力（样品稀释４０图３倍）（见实验记录〇〇〇４９２４－ｐ３２－３３）义３讨论反应和焦糖化反应常见于食＂°］美拉德品加工，随着温度的升高，褐变程度＂Ｉ８’＂ＨＭＦ含量上升。在本实验中，Ｉ２（ｒｃ加深，利用对蜂蜜进行热加工，导致、褐变程度的加铁及ＨＭＦ的大量产生还原糖的大量降解，说明温度对焦糖化反应和美拉德反应具有重要影响。不添加氨基酸盐的炼蜜Ｒ－ｈ颜色较生蜜Ｈ加ＧＲ－ｈ，证深，但是加深的程度远不及明氨基酸盐的加入极大地促进了美拉德反－－。尽管如此，ＧＲｈ与Ｒｈ相比应的进行，ＨＭＦ的含量却仅增加了２５％，在上一一中己证明ＨＭＦ可＾与氨基章的研巧结果＾化合物进步反应使体系颜色加深，ＨＭＦ与勃基酸盐的进一步反应可能造成了在本章研究中ＨＭＦ的消耗，从而使－－ｈｈ相比ＨＭＦ含量增加不明显。从＿得ＧＲ与民抗氧化活性看，艮ｈ的ＤＰ阳清Ｈ的７３倍－除率及总抗氧化能力分别为和４倍，但是ＧＲｈ的ＤＰＰＨ清除率及总２４Ｈ的．３倍和１４５抗氧化能力分則为．倍。氨基酸盐的添加对炼蜜ＨＭＦ的含量影响不大，但是对其颜色和抗氧化活性影响极为显著，这说明美拉德反应的终产物如类黑素等可能是炼蜜抗氧化活性的主要有效成分，而ＨＭＦ并不是主要有－－ＦＧＲｈ，酵母菌发酵使ＧＲｈ效成分。对于中大部分的糖和ＨＭＦ降解，但是对一其颜色和抗氧化活性影响不大，又次证明美拉德反应的终产物才是炼蜜主要且酵母菌的发醉过程并未造成此类有效的抗氧化活性物质，并成分的损失。４５ 山东大学硕±学位论义＿第四章美拉德反应及酵母菌发醇对炼蜜抗ＭＴＸ诱导小鼠肠道黏膜炎的影响。随着医疗技术的发展目前，癌症己成为危害健康的世界性难题，放疗、一＇的重要手段，由放疗和化疗引发的化疗逐渐成为对抗癌症。然而系列副作用＂＂一、枢吐等是对癌症患者的如黏膜炎、恶屯、、腹辑及营养不良大团扰。化疗药ＭＴＸ普遍用于各种恶性肿瘤的治疗。然而由于ＭＴＸ严重的副作用使其巧临一床上的应用受到限制，其中消化道黏膜炎是最主要的副作用么。黏膜炎从轻＂＂。微的炎症发展成严重的溃瘍，导致吸收不良综合征目前已被广泛接受的、、：引发阶段初步损伤反应信号放大黏、溃瘍阶月莫炎发病机制包括五个阶段段及愈合阶段氧化应激在ＭＴＸ诱导的黏膜炎的发展过程中扮演重要角６７一［］ＭＴＸ色，引发熟膜炎的第步即是氧自由基的产生既可Ｗ通过产生自＂＇间接导致氧化损伤心｜］由基造成氧化损伤也可Ｗ通过抑制抗氧化酶的活性。目ＭＴＸ诱导點膜炎的研究己见很多报道前关于应用各类抗氧化物质缓解。一一蜂蜜是种天然食品，亦是种天然药物。有研究证明蜂蜜对放疗引起的一曰腔黏膜炎具有较强的抑制作用，这作用很可能是源于蜂蜜良好的抗氧，由于焦糖化反应和美拉德反应的发生化活性。将蜂蜜经高温炼制过程中，产生焦糖化和美拉德反应产物。美拉德反应产物具有多种生物活性，如抗氧化、＂ＷＦ作为美拉德反应的中间产物，抗炎、抗菌。ＨＭ在蜂蜜炼制过程中也大量｜一ｆ｜Ｆ可能具有３产生。目前有研究证明ＨＭ定的致炎作用。在本实验中，通过建立ＭＴＸ诱导的肠道黏膜炎模型，研充不同炼制方法的蜂蜜样品对化疗引起的黏膜炎的影响，分析十二指肠组织形态变化、血常规指标、空肠内与炎＾症相关的酶活性、氧化损伤指标式及动物行为学等，揭示美拉德反应及酵母菌发酵对炼蜜相关药效活性的影响。４．１仪器与试剂４．１．１仪器、－ＴＧＬ－Ｍ高速冷冻离屯ＡＹ１６机（湘仪有限公司）１２０；型电子分析天平（日本岛津制造所）；玻璃匀浆器（购自当地供应商）；Ｅ２００型电子显微镜４６ 山东大学硕±学位论文－（日本尼康相机制造商）；ＴＵ１８００型紫外分光光度计（北京普析）；旷场实验箱、数据自动采集处理系统（上海欣软信息科技有限公司）。４．１．２试剂甲氨蝶吟（ＭＴＸ）（江苏恒瑞医药股份有限公司）；还原型谷腕甘化（ＧＳＨ）（Ｓｉｇｍａ公司）；考马斯亮蓝说５；牛血清白蛋白；髓过氧化物酶ＭＰＯ一（）测定试剂盒（南京建成生物工程研巧所）氧化氮合酶；诱导型（ｉＮＯＳ）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；甲搭、水合氯酸、生理盐－Ａ艺酸、醋酸钢水、十二烧基橫酸钢（ＳＤＳ））、冰、、２硫代己比妥酸（ＴＢ４－二ＤＮＰＨ）二二Ｈ氯乙酸、２、，硝基苯脱（氯化钢、氯化钟、千水合磯酸氨钢、磯酸二氨钟及盐酸脈均为国产分析纯。４．２实验动物昆明小鼠－，体重２０２５，ｇ，雄性购自山东鲁抗动物药业有限公司，提前适’一应环境周Ｃ？，温度２５±２，湿度４０％６０％。４．３实验方法与结果４．３．１不同蜂蜜样品的制备制备方法同３．２．１。４．义２试剂配制ＭＴＸ注射液配制；于Ｏ．ｌｇ规格的ＭＴＸ干粉安韶瓶中注入灭菌注射用生理盐水ｌＯｍＬ，溶解混匀。用时Ｗ灭菌的生理盐水配制成无菌溶液，浓度为０．５ｍｇ／ｍＬ〇ＧＳＨ配制：称取Ｇ細Ｏ．Ｂ，Ｗ双蒸水定容至ｌＯｍＬｇ，避光保存，每日现配现用，尽量于２小时内用完。ＰＢＳ溶液配制：称取８ｇ氯化钢，化２ｇ氯化钟，３．６３ｇ十二水合憐酸氨二钢，０．４８ｇ磯酸二氨钟，去离子水溶解后定容至ｌＯＯＯｍＬ。１０％水合氯酵溶液配制：称取水合氯酸２．５ｇ，Ｗ生理盐水溶解并定容至２５ｍＬ。，避光５０ｍ福尔马林溶液配制：量取甲酸溶液ＬＰＢＳ１０，，Ｗ溶液稀释倍定容至５００ｍＬ。，摇匀４７ 山东大学硕±学位论文８．１％ＳＤＳ溶液配制；称取ＳＤＳ４．０５ｇ，加去离子水溶解定容至５０ｍＬ。０．６％ＴＢＡ溶液配制；称取ＴＢＡ０．６ｇ，Ｗ少量去离子水溶解后加入ｌＯｍＬ冰醋酸，定容到ｌＯＯｍＬ。化２ＭＨ３－．４醋醋酸钢缓冲溶液配制：称取醋酸钢粉末化１２３适量去ｐ酸ｇ，ＷｍＬ。离子水溶解，Ｗ冰醋酸调节ｐＨ至３．４，Ｗ去离子水定容至ｌＯＯ２０％Ｈ氯己酸溶液配制；称取Ｈ氯己酸２０ｇ，加去离子水溶解定容至ｌＯＯｍＬｏ２Ｍ盐酸配制：取浓盐酸２０ｍＬ，加入去离子水定容至ｌＯＯｍＬ。ｌＯｍＭＤＮ地：称取ＤＮＰＨ０．０９９浓度为２Ｍ的盐酸溶液溶解溶液配制ｇ，并定容到５０ｍＬ。６Ｍ盐酸脈：称取盐酸弧１１４．的６ｇ，用ＰＢＳ稀释定容至２００ｍＬ。考马斯亮蓝Ｇ２５；称取５０ｍｇ考马斯亮蓝Ｇ２５，加入％％石醇２５ｍＬ，溶解后再加入５０ｍＬ８５％的磯酸，然后加水溶解定容至ｌＯＯｍＬ，摇匀。４．义３实验设计昆明小鼠５６只随机分为７组，即正常对照（ＮＣ）、ＭＴＸ损伤模型－－－－（ＭＴＸ－－）、Ｈ、Ｒｈ、ＧＲｈ、ＦＧＲｈ及ＧＳＨ阳性对照。Ｈ、民ｈ、ＧＲｈ及ＦＧＲｈ等组每日Ｗ０．０５２ｇ／２０ｇ小鼠的剂量灌胃给予相应的各蜂蜜样品，ＧＳＨ组０．００２６／２０小鼠的剂量灌胃给予０．０４２３ｍＭ的Ｇ細溶液。ＮＣ和ＭＴＸ组每日ｇｇ灌胃蒸饱水。每天称取并记录小鼠体重。从给巧第六天开始，动物实行单笼饲。／ｋ养，并记录摄食量从给药第八天开始，除ＮＣ组外，其余各姐均按照５ｍｇｇ小鼠的剂量皮下注射ＭＴＸ，连续注射Ｈ天，ＮＣ组注射生理盐水。给药第十二天，进行旷场实验。第十Ｈ天，所有小鼠均Ｗ１０％水合氯酸麻醉后，摘眼球取血做血常规检查；取十二指肠与空肠连接处上方约１ｃｍ长的千二指肠，保存于福尔马林溶液中固定－（Ｈ，用于组织切片和苏木精伊红＆Ｅ）染色，摘取脾脏称重，取约１０ｃｍ长的空肠用于指标测定。４．３．４矿场实验在软件监视屏幕中将旷场实验箱底部，从左上开始划分为面积相等的九个方格，将小鼠放在旷场实验箱正中间的方格开始计时，进行为时３分钟的跟踪观察，采用视频分析系统采集动物行为信息，记录小鼠３分钟内的运动轨迹、运动的总路程及跨越的总方格数。４８ 山东大学硕±学位论文４．３．５组织形态学分析将固定的十二指肠采用横切方法做成组织切片，做Ｈ＆Ｅ染色后用于组织形态学分析（Ｗ上工作由当地医院病理科免疫姐化室协助完成。在显微镜下用测）微尺测量十二指肠绒毛高度（牌），采用半定量法评价肠黏膜损伤程度，０分？表示无损伤，１３分分别表示轻度损伤、中度损伤和严重损伤。４．３．６生化指标測定姐织匀浆制备：取空肠用生理盐水漂洗表面血丝后，吸水纸拭去表面水，分称重，置于小烧杯内加少量冷生理盐水，迅速剪碎，将其转移入玻璃组织一匀浆器内＞，＾１适量生理盐水，，１冲洗烧杯并将洗液并转入匀浆器于冰水浴中研磨组织成匀浆，组织充分研磨均匀，研磨完毕后转移入离，避免块状物存留也、管内，补充缺少的生理盐水，保证整个制备过程加入的生理盐水体积为组织重量的九倍一Ｊ直Ｏ测。取部分组织匀浆（１００叫接用于ＭＰ定，其余的置于冷’Ｃｒｍ－ｒ保存供其他指标测冻离也机４，８０００／ｉｎ离也１０分钟，取上清８〇，于定。ＭＰＯ活性测定；直接按照试剂盒说明书操作。原理是根据ＭＰＯ与过氧化氨反应产生的化合物进一步与邻联茵香胺作用产生黄色产物，该黄色产物在４６０ｎｍ波长处有紫外吸收，通过测定该吸光度来评价ＭＰＯ活性。ｉＮＯＳ活性测定：直接按照试剂盒说明书操作。原理是根据ｉＮＯＳ催化以精氨酸与分子氧反应最终生成于５３０ｎｍ处有紫外吸收的有色物质，通过测定５３０ｎｍ处吸光度来评价ｉＮＯＳ活性。ｂ＂两二醒（ＭＤＡ）测定：参考Ｏｈｋａｗａ等人的方法，依据ＭＤＡ与ＴＢＡ反应产生在巧９ｎｍ处有紫外吸收的粉色物质的原理进行测定。蛋白质叛基测定；参考Ｌｅｖｉｎｅ等人的方法，依据獸基与ＤＮＰＨ反应产生在％５ｎｍ处有紫外吸收的膝类化合物的原理进行测定。［州４．３．７蛋白质測定蛋白质标准溶液配制：称取牛血清白蛋白１２．５ｍｇ，加生理盐水至５０ｍＬ，即得２５０帖／ｍＬ的标准溶液，依次１＾生理盐水稀释得２００、１６０、８０、４０ｔｉｇ／ｍＬ的蛋白质标准溶液。标准曲线测定：测定前紫外分光光度计Ｗ考马斯亮藍Ｇ２５溶液调零，依次取上述不同浓度的标准溶液化ＩｍＬ，加考马斯亮蓝Ｇ２５ＩｍＬ，混匀后反应Ｈ分４９ 山东大学硕±学位论文．钟，于５９５ｎｍ波长处测定吸光度，根据吸光度值与标准洛液浓度的关系绘制标准曲线。；；２０倍１样品测定将组织匀浆上清液用生理盐水稀释，紫外分光光度计！＾考马斯亮蓝Ｇ２５溶液调零后，取稀释后的姐织匀浆上清液Ｏ．ｌｍＬ，加考马斯亮蓝Ｇ２５ＩｍＬ，漏匀后反应Ｈ分钟，于５９５ｍｎ波长处测定吸光度，代入标准曲线计算蛋白质浓度。４．３．８数据处理实验数据利用ＳＰＳＳ１６．０统计软件处理，结果Ｗ均值＋标准差（Ｘ＋Ｓ）表不。４．３．９实验结果４．３．９．１摄食Ｓ与体重变化Ｗ造模第５天即给药第１２天的体重与造模当天体重相比较，来评价造模后４－。１ＮＣ组相比ＭＴＸ组小鼠体重明各组小鼠的体重变化情况如图所示，与，ＣＯ－显下降（．Ｏｌ），各治疗组小鼠的体重下降程度均比模型组轻ｈ组小ｐ，ＦＧＲ。鼠体重下降幅度最小皮＜〇．〇５通过比较小鼠处死前两天与造模前两天的平均）摄食量来反应ＭＴＸ诱导的肠黏膜损伤对小鼠食量变化的影响。与正常小鼠相比，模型组小鼠的摄食量明显下降（ｐ＜０．００１），仅为造模前的６２．９％，各治疗组小鼠的摄食量也都呈现下降趋势，但下降幅度均小于模型狙，各沮与模型组间未呈现显著性差异。＇１０Ｉ５ＡＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ—－０￣￣ｒ￣—￣ｒ—￣—￣ｉｉｉｉ《ｒｎｉｉ｜｜ｗ［｜｜｜ｐｐＮＣｉ．－５ＴＵＴ＃５丄ｍＭ－■ｕ１０．ＬＪＴｓ了１－－１５？孝Ｊ－２０４－图１不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠体重变化的影响（见实验记录０００－－１８１７Ｐ５７）５０ 山东大学硕±学位论文１４０１１－１２０。？ＴＴ－半申夺，＾８０下了广禹－丄王Ｍ酬６０广１？４０－２０－－ＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ图４－２不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠摄食量变化的影响（见实验记录０００８－９－１１７Ｐ１１）＊＊＊表示ＮＣ组与ＭＴＸ姐存在极盈著性差异，且显著性为ｐ＜０．００１；＃表示治疗组与ＭＴＸ组存在显著性差异，且显著性为ｐ＜０．０５。４．３．９．２行为学分析４．３．９．２．１运动轨迹在３分钟的旷场实验中，采用视频跟踪软件监测小鼠的活动情况，并记录－３运动轨迹，得图４。由图可知，ＮＣ小鼠的运动轨迹复杂，说明ＮＣ小鼠的精神状况较好，探索能力强，运动范围大；而ＭＴＸ沮小鼠的运动轨迹与ＮＣ小鼠相比较为简单，运动范围主要集中在Ｈ个方格内，说明ＭＴＸ小鼠精神状况不佳，探索欲望少，运动的范围也很局限。其他治疗组小鼠的运动轨迹均比ＭＴＸ组小鼠复杂－ｈ姐小鼠，运动范围比ＭＴＸ沮小鼠的运动范围大，其中Ｈ和ＦＧＲ的运动轨迹明显比其他治疗组复杂，说明该两组小鼠精神状况良好，小鼠活动能力较强。圓圓圆国―國国Ｉ圓圓隱■圓■隱圏ＨＨＨ隱圓■■圓圏画■■■ＩＩｉｌｉｉＢ国■巧曜５１ 山东大学硕±学位论文－－图４３小鼠Ｉ；、ＭＴＸ、Ｈ、Ｒｈ吐从左到右运动轨迹图（从左到右依次为ＮＣ，Ｒ－ｈ－、ＦＧＲｈ、ＧＳＨ。■表示空间探■依次为Ｇ头监测开始时小鼠的所在位置，８－表示监测结束时小鼠所在位置）（见实验记录０００１１７ｐｌ巧４．３．９．２．２活珊１通过记录小鼠运动的总路程及总共跨越的方格数来评价其活动量的大小，结果如图４－４。由图可知，ＭＴＸ组小鼠运动总路程及跨越方格数较ＮＣ组明显＜化０５）Ｒ－ｈ组减少（ｐ，除外，其他各治疗组小鼠的运动总路程及跨越的方格数均较ＭＴＸ组小鼠有所提高。２－５０Ｉ２００■Ａｒｎ－乐３１５０丄仁厂！ＪＬ醒Ｔｒｎｒｎ１００霉ｒｈ。５０－ＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈ防民－ｈＧＳＨ９０１８０－Ｉ７０－ｎＴ．－＊ｔ苗ＭＡＡＡ蘇－Ｔ－Ｌ－蜜４０ｒ｜丄３０＂Ｓ班２０■－１０ＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ图４－４不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠活动量的影响见实验记录（－０００－１８１７ｌ３２３ｐ）＊表示＜ＮＣ姐与ＭＴＸ姐存在显著性差异，且忌著性为０．０５。ｐ４．义９．３巧脏指５２ 山东大学硕±学位论文脾脏是机体最大的免疫器官，对细胞毒试剂较为敏感，化疗常导致脾脏结。构的改变引起其严重损伤，脾脏指数的大小反映了机体免疫功能的强弱本实＝验中，摘取小鼠脾脏称重，计算脾脏指数。脾脏指数（ｍｇ／ｇ）脾脏重量／体－５＜重。如图４所示，ＭＴＸ组小鼠的脾脏指数显著小于正常对照组（ｐ０，．０５）说明ＭＴＸ严重抑制了小鼠脾脏的生长，导致脾脏受损缩小，引发了免－ｈ组外疫抑制，其他给药组小鼠的脾脏指数均高于ＭＴＸ模型组，说明除；除ＲＲ－ｈ组ＭＴＸ对小鼠脾Ｈ组作用显外各给药组均能缓解脏的损害和抑制，尤其著（＜０．０５）。ｐ３．０１＃Ｔ－本２．５卢１２－．０ｉ＾ｎｎ黯＾帶－１５驾１－５賀■１．００－．５－———－———＂－————Ｊ—Ｌ０ＩＪ）Ｉ．０｛ＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ图４－５不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠脾脏指数的影响（见实验记录０００－１８１７２５Ｐ）？＜０表示ＮＣ姐与ＭＴＸ组存在显著性差异．０５；＃，且显著性为ｐ表示治疗姐与ＭＴＸ组存在显著性差异＜．，且显著性为ｐ００５。４．３．９．４血常规检測结果化疗常伴随骨髓抑制的发生，骨髓抑制最先表现为白细胞的下降，其次伴有血小板的减少１２０天较，而红细胞平均生存时间最长，可达，故受化疗影响－小，下降不明显。血常规的检测结果如表４１。由表可知，ＭＴＸ组小鼠的ＷＢＣＮＣ组小鼠有所下降一，较，其他治疗组药物均表现出定的升白细胞的作用其ＦＧＲ－ｈ升白细胞。中效果最明显，接近正常组与ＭＴＸ组小鼠相比，Ｈ组小鼠的ＨＧＢ、ＲＢＣ及ＨＣＴ均明显降低（ｐ＜０．０５，ｐ＜０．０１，ｐ＜０．０５），其他各组未发现显著性差异。另外，从红细胞相关的其他指标来看，各组与ＮＣ组并未表现出显著性差异，可见化疗对红细胞影响不大。分析血小板的相关指标可５３ 山东大学硕壬学位论文知，ＭＴＸ组小鼠的ＰＬＴ及ＰＣＴ较ＮＣ组明显减少（ｐ＜０．０１，ｐ＜０．０１），Ｈ表一ＭＴＸ组ＰＤＷＮＣ现出定的升血小板的作用其他组药物作用不明显；此外较，－ｈ姐与ＭＴＸ组相比ＰＤＷ明显增加＜组偏低，也提示血小板减少，而ＦＧＲ（ｐ０－．０５）。ＭＴＸ组小鼠的ＰＬＣＲ和ＭＰＶ均比ＮＣ沮小鼠低说明大血小板减，少，由于ＭＴＸ组小鼠的ＰＬＴ也同时减少，故该组小鼠可能存在出血现象，机体正动员大血小板生成小血小板来参与止血反应，推测可能由于ＭＴＸ导致了－小鼠肠道黏膜的损伤，食物与肠道黏膜摩擦时引起肠道出血。ＦＧＲｈ姐小鼠的－ＣＯ＜０ＰＬＣＲ和ＭＰＶＭＴＸ组小鼠明显增加（．Ｏｌ．０５）ＭＰＶ的增加均较ｐ，ｐ，Ｐ－ＬＣＲ提示机体的出血倾向较小。，较高提示骨髓造血功能良好－－－表４１血常规指标数值８１７４１－８００００４９２４－５４６９（见实验记录０００１Ｐ，Ｐ）观ＮＣＭＴＸＨ＾ＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨＩ定项目￣９（４．．．．．．ＷＢＣ‘３３功７７２．５３±０．６１３４６±０５４３．１Ｕ０８４３２１±０．９１４２虹０．６８２．７４±０．６０１〇）口赫．．口．．．．．．．．．９６±０．３２ＲＢＧ（…）１０３４±０１０６４±０６５８．８３±０３３１１６６±０巧１０．０７±０４６９３２±１３５１０＃±．．．±．±６．．±．．．．．．８ＨＧＢ（ｇ／Ｌ）１５４６３±１５３１５９１３６５８１３２．５０２０１７８３８６９０１巧３肚８７９１４４００±２１０１６４．５０５１４＊±±±±±ＨＣＴ（％５０．．．．．．±．．．）．８６０，６５５１５社１８０４４１８１９３５６．４６２１８５０２９２．６６４６７４６．７８巧５６１６０ＭＣＶ（ｆＬ）４９．２０±０．４５４８．５９±０．７６５０．０３±０．９３４８．５９±０．８５４９．８３±０．８０５０．６０±０．７３４８．８９±０．６２±．±±．ＭＣＨ（）１４．９６０．１９１４．９９±０２６１４．９９±０．２６５．３６±０，２６１５．１６±０．２３口．５５１．９５１５．０３０１９１ｐｇＭＣＨＣ３的．８＆Ｕ．８９３０８．５０±４．０８２９９．８８±３．２９３１６．００±４．１２３０４．６３±３．１２２７０．５０±３９．０３０７．２５±３．５４２（ｇ／Ｌ）－ＲＤＷＣＶ１４．２．．．．．．８±０．４３．２１±０３１４２３±０６０１４７６±０９２１４．３４±０．２８１４１０±０．１９１４１９±０．２８１４．５（％）－ＲＤＶ／ＳＤ２４．±．±０．．．．．±０．．±．６８±．１４０３０。．８１７７巧４４±１０９２３．９０±０４９２４３５３８２４３３０．３６２４０８５（ｆＬ）±＊＊－±Ｐ（％）４．８．．±０．．．．．±．ＬＣＲ１０７８４１８７４５．４３±０．４３４．０９±０６３６２３±０８３８３３１０４４．６６０．８４±＊ＭＰＶ（ｆＬ）６．７５０．１５６．５３±０．１６６．７９±０．０９６．６９±０．１２６．９６±０．１７７．１１±０．１２６．６９±０．１７９ＵＰＬＴ（１〇１１１４．８８±４２，７１８．７５±１０５，８２４．２５±８６．１６Ｗ．±６４．８６８２．１３±８４．３６７４．１３±１１５，６７８．２５±６２．８）＊＊２３１９１７９０５８＊．±０±０±０６ＰＤＷ．２化０．２１５．７紅０１６６．０±０．３知０９．８ｔＷ３０６．３８．２０．１６±０．２５（ｆＬ）６１１１．＊＊．．０±０±．．±０．ＰＣＴ０７６±０．０４０４８±０．０８．５６．００．４４０．０４０４８±０．０６０．４８±０．０９０４６０５（％）５＊＊表示ＮＣ组与ＭＴＸ组存在极显著性差异，且显著性为ｐＣＯ．Ｏｌ；＃，＃＃表示治疗组与ＭＴＸ组存在显著性差异，且显著性分别方ｐ＜０．０５，ｐＣＯ．ＯＫ５４ 山东大学硕±学位论文４．３．９．５十二指抵组织形态学分析如图４－６Ａ所示（），ＮＣ组小鼠十二指肠组织切片具有正常的肠道姐织结构，而ＭＴＸ组小鼠组织切片中出现肠绒毛萎缩融合、腺窝丢失及杯状细胞减－６Ｂ）少（图４（）。各治疗组小鼠十二指肠姐织形态较ＭＴＸ组均有改善，其中ＨＦＧＲ－ｈ组作用较明显和。通过测量绒毛高度和评价组织损伤程度可知，ＭＴＸ小鼠绒毛高度较ＮＣ姐明显缩短（ｐ＜化００１），损伤指数接近２．５。各治疗组小－鼠绒毛高度均高于ＭＴＸ组－ｈ和ＦＧＲｈ组与ＭＴＸ组之间，其中Ｈ、ＧＲ存在显＜０＜＜化００－著性差异（ｐ．０１，ｐ０．０１，ｐ１），ＦＧＲｈ纪小鼠绒毛高度最高且损伤指数最低－（图４７）。’講驛：鑽驟。。！纖＾屬邏。－－－Ｂ：ｈｈＡ：ＮＣ：ＭＴＸＣ：ＨＤＲｈＥ：ＧＲＦ：ＦＧＲＧ；ＧＳＨ；；；；；；图４－６不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠十二指肠组织形态影响（见实验记录０００１８－２６１７Ｐ）８００１７００？ｎ麵Ｍ？６００微Ｔ§－５００；Ａ島丄丄ｒ。。．嚴３００－７ｎｎ２００■■１００ＡＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ５５ 山东大学硕±学位论文４．０１３■．５幸？幸３？．０２．搞．５Ａ＊Ｔ＃Ｓ５ＴＴ巧＃了＾ｒＳ驳■１５ＸＴｈＴ－－１．０ｉ＾－０．５…ＡＬ－－Ｊ￣Ｌ－－Ｊ￣￣１——＊￣ｌ——＊■—Ｌ－－Ｊ￣■—￣０１ｒ．０ｔｔ１ＴＢＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ图４－７不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠十二指肠编毛高度）（Ａ和损）的影响－－２９伤程度（Ｂ（见实验记录０００１８１７Ｐ２７）＊＊＊Ｃ．表示ＮＣ组与ＭＴＸ姐存在极显著性差异，且显著性为ＯＯＯｌ＃，＃＃和＃＃＃表示治疗沮与ＭＴＸ组ｐ；存在显著性差异，且显著性分别为＜０．０５，＜０．０１和ｐＣＯ．ＯＯｌ。ｐｐ４．义９．６生化指标巧定结果４．义９．么１蛋白质掠准曲线牛血清白蛋白标准溶液浓度和对应测得的光吸收值数据如表４－２，根据标准－溶液浓度与吸光度的关系得标准曲线（图４８）：，线性回归方程Ｙ＝＝０．００３４Ｘ＋０．００４３，Ｒ２０．９９９７〇－表４２牛血００－清白蛋白标准曲线浓度与吸光度值（见实验记录０１８１７ｐ３２）浓度（［ｉｇ／ｍＬ）吸光度值（Ａ巧５）１００．０１０２４００．１３１３８００．２８０４１６００．５５６５２０００．６８９６２５００．８５８５６ 山东大学硕±学位论文－１０．｜１化９－＝＋Ｙ０．００３４Ｘ０．００４３化８—＾２＝ＴＲ０９９９７ｙ－０．７化６－聪求〇３－’睦０４－．／０—．３０－．２０１—．—０－’０１，！１！０５０１００１５０２００２５０３００浓度（化ｓｓ／ｍＬ）－图４８蛋白０００－质标准曲线（见实验记录１８１７ｐ３２）４３．９－么２ＭＰ０活性ＭＰＯ主要在中性粒细胞中表达，少数在单核细胞和巨隨细胞内表达。炎症发生时，激活的中性粒细胞在ＮＡＤＰＨ氧化，中性粒细胞迁移至炎症部位ｗ’９？ＭＰ〇。酶作用下大量利用氧产生氧自由基，同时释放出目前，ＭＰＯ己被＂＂广泛用于中性粒细胞浸润和炎症发生的重要标识性指标，肠道ＭＰＯ活性越－高，表示该部位中性粒细胞数目越多，如图４９，ＭＴＸ小鼠空肠ＭＰＯ活性明显高于ＮＣ小鼠（ｐ＜０．００１）。各治疗组小鼠空肠ＭＰＯ活性均显著低于ＭＴＸ－姐，ＷＦＧＲｈ组ＰＯ活，ＮＣ姐小鼠的Ｍ性最低接近，说明该组肠道发生中性粒细胞浸涧的程度最低。４．５１４■＊＊＊．０．３５Ｌ一ｐ巧■＃３０或＃＃Ｔｍ？＞２＃＃马．５Ｔｎ．ｉＴ§２．００％？＃＃＃．１５？１．００＇．５—Ｊ￣ＬＪ■＿■—＂ｉ—ＩＩ—＂Ｉ——Ｉ—－１——＊—＂＊—Ｊ￣Ｌ，ｒ…ｒ－０Ｉ．０４ＩＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ图４－９不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠空肠ＭＰＯ活性的影响（见实验－记录０００１８１７Ｐ３０）５７ 山东大学硕出学位论文＊＊＊糾和糾ＣＯ．Ｏ＃表示治疗组与ＭＴＸ组表示ＮＣ组与ＭＴＸ组存在极显著性差异．且显著性为ｐＯｌ；＃，＜＾０＜０Ｃ．ＯＯｌ。存在盈著性差异，且显著性分别为ｐ５，ｐ．０１和ｐＯ４．３．９．６．３ｉＮＯＳ活性、ｉＮＯＳ的病原菌促炎细胞因子都能上调表达，催化产生过量的ｗ’ｗＮＯ。有文献报道过量的ＮＯ可导致肠细胞调亡及肠道屏障功能的损伤。因一。－１０此ｉＮＯＳ的活性是反应炎症的又标志性指标如图４所示，ＭＴＸ小鼠空肠ｉＮＯＳ活性显著高于ＮＣ组（ｐ＜０．００１），各治疗沮小鼠空肠ｉＮＯＳ活性均显著ＭＴＸ紀－ｈ和ＦＧＲ－ｈ的－ｉＮＯＳ活性ＦＧＲｈ小鼠低于，其中ＧＲ低于其他治疗组，的ｉＮＯＳ活性接近ＮＣ组。２．０＊＊？．１８．１，戸＾■長１．４＃，．劇，２ｌｒｎＴ排＃．＾１．０ｈＪ山ｉｍＭ衰ｏＡ广１？０．６０■－４０■．２ＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ－图４１０不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠空肠ｉＮＯＳ活性的影响（见实８－验记录０００１１７的１）＊一表示＜化ＮＣ组与ＭＴＸ组存在极显著性差异，且显著性为ｐ００１；＃，＃＃和＃＃＃表示治疗组与ＭＴＸ姐存在显著性差异，且显著性分别为ｐ＜０．０５，ｐＣＯ．Ｏｌ和ｐＣＯ．ＯＯｌ。４．３．９．１４ＭＤＡ含量ＭＤＡ是评价脂质过氧化的重要指－ＭＴＸ组小鼠肠道ＭＤＡ标。如图４１１，水平明显高于ＮＣ组（ｐ＜０．００１）。所有治疗组药物均能使肠道ＭＤＡ含量思著ＦＧＲ－ｈ下降，说明所有治疗姐药物均能发挥较好的抗脂质过氧化作用，其中作用效果最为显著。５８ 山东大学硕±学位论文５．０１４－＊＊＊．５－焉４．０Ｔ．３．５還晚）占Ａ将３■．０ｍｍＩＴ＇２＊．５糾＃Ｃ丄ｒｉ下厂１２－置．０ｎ广１＿Ｌ．言１．５Ｓ■１．００？．５＂Ｊ．—Ｊ—Ｉ？．１．．ＩＸＩＪ＂Ｉ＂１…ＪＩＩ＂Ｉ０１ＩＩ．０Ｉ）ＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ－图４１１不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠空肠脂质过氧化的影响见实（０－３３验记录００１８１７Ｐ）＊＊＊表示ＮＣ组与ＭＴＸ组存在极显著性差异，且显著性为ｐＣＯ．ＯＯｌ＃，輔和＃＃＃表示治疗组与ＭＴＸ姐；存在显著性差异，且显著性分别为ｐ＜０．０５，ｐ＜化０１和？＜化００１。４．３．９．６．５蛋白质類基含呈蛋白质是氧化应激中自由基进攻的主要目标一，蛋白质藏基化是种不可逆的蛋白质变化－１，反映了各种自由基引发的细胞损伤。如图４２，ＭＴＸ组小鼠空＜０肠蛋白质叛基含量显著高于ＮＣ组（ｐ．００１）。各治疗组空肠蛋白质幾基含量均较ＭＴＸ组显著下降，说明各治疗组药物均能发挥较好的抑制蛋白质幾基－－－化的作用，其中ＧＲｈ和ＦＧＲｈ作用强于其他治疗组，ＦＧＲｈ效果最显著。．１２Ｑ＊＊＊－．０挖１Ｔ＊—ＩＥＬＩ，Ｍ＜ｎＲｂｉ０００＇．８巨ｍ＇％ｕｒｎｍ￡０＇．６ＪＴ丄Ｗ－Ｉ－糾＃地ＩＩ｜｜－？ｇ０．４产＾喝Ｈｈ０－＾．２呀Ｉ—？—＊－＾＾——Ｉ１—Ｉ１——１——Ｉ１——Ｉ１——－—Ｉ—０Ｉ！Ｌ．０Ｉｉｔ！ＩＮＣＭＴＸＨＲ－ｈＧＲ－ｈＦＧＲ－ｈＧＳＨ图４－口不同蜂蜜样品对ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎小鼠空肠蛋白质幾基化的影响（见０００－－实验记录１８１７Ｐ３４３５）５９ 山东大学硕±学位论文？＊＊＜化表示ＮＣ组与ＭＴＸ姐存在极显著性差异，且显著性为００１＃＃和＃＃＃ｐ；衷示治疗组与ＭＴＸ组存在显著性差异，且显著性分别为ｐＣＯ．Ｏｌ和ｐＣＯ．ＯＯｌ。４．４讨论从研巧结果看，ＭＴＸ模型小鼠的摄食量及体重严重下降，可能是因为诱导肠道黏膜炎Ｗ后，小鼠对持续的胃麻道进食的耐受能力下降，从而导致食量及ｗｔｉ＂３ｔ体重的下降。此外，由ＭＴＸ诱导的吸收障碍综合征减少肠熟膜吸收表？面积，也会使营养物质的吸收减少，从而引起体重下降。氧化应激在ＭＴＸ诱导的肠道黏膜损伤中发挥重要作用。ＭＴＸ通过促进氧自由基（ＲＯＳ）的产生或者减少抗氧化物质造成氧化损伤。ＲＯＳ可Ｗ通过诱导调亡途径引起肠道组织损伤，也可增加肠道内皮细胞和上皮细胞通透＂＂性使细茵和内毒素容易穿过肠道屏障而造成炎症的发生。除了直接产生组织ＯＳ还－损伤Ｗ外，Ｒ可能通过激活某些转录因子尤其是核转录因子ＮＦｋＢ上调炎－症相关的细胞因子如ＴＮＦ－ａ正－６及正Ｉ的表达。这些促炎细胞因子在黏，ｐｕｓｉｎ＂’膜炎发展过程中发挥了重要作用。炎症反应是机体主要通过免疫系统发挥的抗病反应。在ＭＴＸ诱导肠道黏膜炎的发展过程中，ＲＯＳ刺激中性粒细胞的聚集被激活的中性粒细胞作为一种专口的吞瞻细胞将细菌摄取进入细胞内形成吞瞻体。随后，中性粒细胞经历呼吸爆发，即通过ＮＡＤＰＨ氧化酶大量消耗氧导致氧自由基ＲＯＳ的大量产５９＂’＂一生，同时释放出些酶如ＭＰＯ、蛋白酶等。ＭＰＯ主要在中性粒细胞中表Ｗ＂达，其次在单核细胞和某些巨晚细胞中表达。到目前为止，ＭＰＯ巧性己广Ｗ泛用于表征中性粒细胞浸润的重要生化指标。由中性粒细胞呼吸爆发产生的大部分的过氧化氨都被ＭＰＯ利用，它是中性粒细胞中促进氧化剂产生的关键酶＂５＾一。ＭＰＯ能够促进氯离子与过氧化氨之间的反应，形成的次氯酸能进步与ｗ’ｉｔｗ胺类反应形成具有杀菌作用的氯胺。一一在胃肠道内同时存在着诱导型氧化氮合酶和结构型氧化氮合酶。通常基本水平的ＮＯ主要由内皮型一氧化氮合酶和神经型一氧化氮合酶催化合成。基本水平的ＮＯ在稳定肥大细胞、保持肠道微血管完整性、调节肠道水一和电解质转运及黏膜通透性等方面具有重要作用然而，由于诱导型氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的上调表法而引起的ＮＯ的过量产生将导致细胞损伤和肠６０ 山东大学硕±学位论文＂４’９８３道屏障功能破坏。促炎细胞因子、病原菌释放的内毒素及受到刺激的巨幢细胞均能上调ｉＮＯＳ的表泣，产生的过量的ＮＯ与超氧阴离子反应形成过氧硝酸盐，过氧硝酸盐可通过诱导肠道细胞调亡引起黏膜损伤和肠道屏障功能ＷＷ破坏。此外，过氧硝酸盐可引发脂质过氧化、琉基氧化，并容易使蛋白质上。特定酪氨酸残基形成硝酸盐，造成炎症与组织损伤的扩大化在本课题研究结果中，通过检测血常规指标发现ＭＴＸ导致了骨髓抑制的发生，使小鼠白细胞和血小板计数下降，白细胞计数的下降是骨髓抑制最先表一－现的特征，各给药组均有定的升白细胞作用，其中ＦＧＲｈ组白细胞下降最少－ｈ组血，说明其对骨髓抑制的缓解作用较好，另外ＦＧＲ小板平均体巧和大血小板比率的増加也说明小鼠的肠道出血倾向较小且骨髓造血功能良好一。另方面，ＭＴＸ，，通过脾脏指数的分析可知导致了严重的免疫抑制损伤了ＭＴＸ小一－鼠的脾脏，致其萎缩变小，而除Ｒｈ组外其他治疗组药物均在定程度上提高了小鼠的脾脏指数，缓解了ＭＴＸ导致的免疫抑制，Ｈ组作用较明显，考虑原因可能是生蜜中本身存在的成分具有增强免疫力Ｒ－，保护脾脏的功能ｈ组，脾脏一指数较其他治疗姐较低，原因可能是部分焦糖化反应产物对免疫器官具有定的毒副作用。ＭＴＸ模型小鼠十二指肠黏膜的组织形态表现为绒毛萎缩融合，腺窝丢失和杯状细胞减少。肠绒毛的萎缩融合表示ＭＴＸ模型小鼠的肠道黏膜发生了溃瘍。模型组小鼠ＭＰＯ和ｉＮＯＳ的活性明显高于正常对照组。这些结果表明ＭＴＸ诱导的氧化应激严重破坏了小鼠的肠道屏障，引起胺道细胞调亡、中性粒细胞浸涧和ｉＮＯＳ的过度表达。由杯状细胞分泌的粘蛋白对上皮细胞具有重要＇ｆｉ＂ｔｉｌ＂保护作用，而ＮＯ在调节粘蛋白分泌方面发挥着重要作用。模型小鼠杯状细胞枯竭可能是由于ＮＯ的过量产生引起粘蛋白过度分泌导致的。此外，绒毛的萎缩融合也导致杯状细胞的减少－ｈ组小鼠十二指。我们发现ＦＧＲ肠组织形一态接近正常，ＭＰＯ与ｉＮＯＳ活性也明显低于模型组，其他治疗沮均显示定的一－熟膜保护效果，但作用不及ＦＧＲｈ组。已有文献报道ＨＭＦ是种毒性产物ＮＦ－ｋＢ上调－－ｉＮＯＳ和环２Ｃ０Ｘ，并且可能通过激活氧合酶（２）的表达，进而导致炎症发生本课题研巧中通过酵母菌发酵的方法去除ＨＭＦ可能是一－－ＦＧＲｈ抗炎活性强于ＧＲ－ｈ和民ｈ的个原因。另外，酵巧菌发酵可能促进了由美拉德反应和焦糖化反应产生的其他毒副产物的降解转化，减轻了副作用。作６１ 山东大学硕±学位论文为美拉德反应的终产物，类黑素的诸多药理活性如抗炎、抗氧化、抗菌等己被研究报道－。这些类黑素可能是ＦＧＲｈ对抗肠道黏膜炎的重要活性物质，酵母菌发酵并未对这些有效成分造成影响。由ＭＴＸ引发的氧化应激产生的艮０Ｓ具有较高活性，能够与细胞膜表面的＂＂多元不饱和脂肪酸反应引致脂质过氧化的发生。模型小鼠空肠ＭＤＡ水平的升高表明了ＲＯＳ引发的脂质过氧化在ＭＴＸ诱导肠道熟膜损伤中的重要作用。，能清除大部分活性自由基蛋白质作为组成生物系统的主要成分，也是ＲＯＳ及Ｕ１Ｗ氧化应激的次级副产物攻击的主要祀点。当ＲＯＳ进攻时，对氧化还原反应敏感的骨骼肌蛋白质如肌原纤维蛋白的结构发生改变，导致肌肉力量的产生削＂Ｗ弱。另外，氧化应激介导的调亡引起细胞调亡蛋白酶激活和蛋白质水解，从＂Ｗ而导致骨骼肌萎缩。在旷场实验中，模型姐小鼠活动能力的下降可能与氧化应激引起的骨骼肌疲劳有关一一。另方面，蛋白质殼基化也是种不可逆的蛋白ｔｉｌ＂质改变，反映不同形式的ＲＯＳ诱导的细胞损伤。叛基基团可通过多种氧化ｉ＇＂Ａｔ途径引入蛋白质，其中包括引用含叛基的氧化性脂质如ＭＤ。ＭＴＸ模型小鼠空肠蛋白质叛基含量的显著增加说明ＭＴＸ导致了严重的蛋白质氧化损伤。与模型组相比，所有治疗组小鼠的ＭＤＡ和蛋白质殻基水平均有所降低，ＦＧＲ－ｈ沮小鼠蛋白质叛基水平和旷场实验中总活动能力均接近正常对照组。这一定的自由基清除活性－－ｈ的些结果表明所有蜂蜜样品都具有，而ＧＲｈ和ＦＧＲ活性较其他样品更强，证明了氨基酸盐的加入极大地促进了美拉德反应的进行。总么，我们的研究结果证明，ＭＴＸ诱导的氧化应激能导致小鼠肠道黏膜的严重损伤，而蜂蜜经炼制Ｗ后，尤其是通过添加氨基酸盐炼制和酵母菌发酵后，使其具有较好的缓解氧化损伤、保护肠道黏膜的作用。在炼蜜过程中发生了美技德反应，其产物类黑素被证实有多种生物活性，。在本课题研究中氨基酸盐的添加促进了美拉德反应的进行，反应产物可能是主要的活性成分。另夕ｈ利用微生物发酵的方法炮制中药能够起到降低药物毒副作用及增加疗效的作用。有研巧证明酵母菌发醇能促进ＨＭＦ的转化本文第云章也证实了酵母菌发酵能够引起ＨＭＦ的降解。可能由ＨＭＦ转化而来的产物对ＭＴＸ诱导的肠道黏膜炎具有更好的缓解作用，至少，ＨＭＦ的转化可１＾减轻它本身可能带来的毒副作用。并且酵母菌的利用还可能促进了其他具有毒副作用的产物的降６２ 山东大学硕±学位论文；－ｈ具有解转化，从而使ＦＧＲ更好的保护肠道黏膜的作用。通过大部分的生化指ＧＲ－ｈ和ＦＧＲ－ｈ的抗Ｒ－ｈ巧Ｈ强标的测定结果可知，氧化活性比，说明美拉德反应和酵母菌发酵的应用对提高蜂蜜抗氧化活性、改善ＭＴＸ导致的肠道黏膜炎具有重要意义－ｈ的治。综合所有的实验结果来看，Ｒ疗作用不佳，效果不及’Ｃ比说明在１２０下单纯的炼蜜可能产生了较多有害的焦糖化反应产物，而添加氨基酸盐炼蜜后，美拉德反应的发生则促进更多有益的美拉德反应产物的生一成，并且酵母菌发酵进步促进了有害产物的转化和降解，提高了炼蜜的应用价值。６３ 山东大学硕±学位论文第五章不同炼蜜与ＭＴＸ联合应用对人白血病细胞Ｋ５６２的影响－第四章中已经证实四种蜂蜜样品，即生蜜（Ｈ）、炼蜜（ＲＨ）、谷氨酸钢－ｈ）Ｗ及发酵谷－炼蜜（ＧＲ氨酸钢炼蜜（ＦＧＲｈ）均能不同程度的缓解化疗用ＭＴＸ导致的肠道黏膜炎，这将有利于寻找和开发抗肿瘤辅助治疗的新型中药制剂，不同的蜂蜜样品在保护正常肠道黏膜细胞的同时，对抑瘤细胞生长的影响亦是决定其应用价值的重要因素，尽管如前言所述美拉德反应产物类黑素可能一具有一定的抗肿瘤活性，但是此结论亦存在些争议，本文中的各种炼蜜对肿一步探究瘤细胞生长的影响有待进。ＭＴＴ法是目前最常用的体外测试药物细胞毒性的实验方法，具有操作简单、敏感性高等将点。本文人白血病细胞Ｋ５的为实验对象，采用ＭＴＴ法考察ＭＴＸ单独应用及与四种不同处理方式的蜂蜜祥品联合应用时对肿瘤细胞生，＾长的影响［＾初步评价各种炼蜜样品作为化疗辅助用药物的合理性。５．１仪器与试剂５．１．１仪器Ｃ０２培养箱３Ｘ显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳ）－０１（Ｔｈｅｒｍｏ１１１）；１５１倒置；ＸＹ型垂直式单人净化工作台苏净集团安泰公司８０－）；Ｍ６型酶标仪（美国ＢＩＯ（ＲＡＤ）；ＹＸＱＧ０２手提式压力蒸汽灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）。５．１．２试剂ｅ改良型ＲＰＭ－（ＨｙＣｌｏｎＩ１６４０培养基赛默飞世尔生物化学制品有限公司）（ＭＴＴ）（Ｓｉｍａ）血清（赛默飞世尔生物化学；四甲基偶氮性蓝ｇ；胎牛－Ｘ双抗）制品有限公司）；青霉素链霉素混合溶液（１００（赛默飞世尔生物化学制品有限公司）；ＭＴＸ注射用粉针剂（化Ｉｇ规格）（江苏恒瑞医药股份有限公司）；灭菌ＰＢＳ（自行配制并高压灭菌）；浓盐酸（北京化工广）；异丙醇（天津市光复精细化工研究所）。６４ 山东大学硕±学位论文５．２人白血病细胞Ｋ５６２的培养细胞培养在含－ｘ１０％胎牛血清及１％青霉素链霉素混合溶液（ｌＯＯ双抗）的’一ＲＰＭＩ－１６４０３７Ｃ５％Ｃ〇培养液中，培养箱中培养，每两天进行，２次细胞传代，取对数生长期的细胞，Ｗ培养液稀释调整细胞密度为８００００个／ｍＬ胞，将细接种于９６孔板，１００叫（每孔８０００个），空白孔（设６个）培养液替代细胞悬浮液，边缘化Ｗ无菌ＰＢＳ替代细胞悬浮液，继续于培养箱中培养过夜后用于ＭＴＴ实验。５．３实验方法和结果５．３．１不同浓度的肌Ｘ对人白血病细胞Ｋ５６２的影响５．３．１．１不同巧度ＭＴＸ溶液的配制于０．１克规格的ＭＴＸ粉末安韶瓶中注入５．５ｍＬ灭菌ＰＢＳ，溶解混匀，得ｘ４；ｌ（ｙｍｏｌ／Ｌ的ＭＴＸ溶，取该溶ｍＬＶ液液Ｉ于无菌操作台下过滤除菌，将除菌后的ＭＴＸ溶液Ｗ细胞培养液依次稀释为浓度分别为２０、２、１、０．２、０．１、０．０２、Ｏｌ／．ＯｌｕｍｏＬ的ＭＴＸ溶液供实验用。５．３．１．２ＭＴＴ和盐巧异丙醇溶液配制－ＭＴＴ溶液配制：称取５０ｍＭＴＴＴｌＯｍＬ，ｇ，溶于无菌ＰＢＳ中分装于’２０Ｃ避光保存；盐酸异丙醇溶液配制：取５３叫浓度为１０Ｍ的浓盐酸，加入５０ｍＬ异两醇中，混匀即得。５．３．１．３ＭＴＴ法检測不同浓度ＭＴＸ对人白血病细胞Ｋ５６２生长的影响预实验结果证明终浓度为ｌＯ＾ｉｍｏｌ／Ｌ的ＭＴＸ本身颜色对ＭＴＴ实验无影响，：故本次实验共设计！＾下几组空白对照组、正常对照组和加药组，每组６。个复孔于细胞培养箱中取出己事先培养过夜的９６孔板，于空白对照组和正常对照组加入１００叫细胞培养液，，边缘孔加入１００山无菌ＰＢＳ于加药组依次加入浓度为２０、２、Ｉ、０．２、０．１、０．〇２、Ｏ．Ｏｌｕｍｏｌ／Ｌ的ＭＴＸ溶液各１００叫，使终浓度为１０、１、０．５、０．１、０．０５、０．０１、０．００５ｎｍｏｌ／Ｌ，继续置于培养箱中培养４８小时。培养结束后，取出９６孔板，于各孔加入２０叫ＭＴＴ溶液后继续培养３小、时，００ｒ／ｍｉｍ５屯，，取出置于平板离也机中２０离也分钟，小吸去上清于各孔００酸异丙醇溶液，加入１叫盐使用移液器反复吹打溶液使孔内沉淀溶解，沉淀溶解后使用酶标仪于５７０ｎｍ处测定吸光度值。按下式计算细胞增殖抑制率，６５ 山东大学硕－上学位论文０＝－／。）［－－Ｘ增殖抑制率（１（０Ｄ加＠ＯＤｓａ）／（０Ｄ正常ＯＤｅｅ）］１００％５．３．１．４数据处理ＳＰＳＳ１６：ｔ．０软实验数据Ｗ件处理系统进行处理分析，结果Ｗ均值标准差（ＪＣ±Ｓ）表巧。５．３．１．５实验结果不同浓度ＭＴＸ对人白血病细胞Ｋ５６２增殖的影响如图５－１，由图可知，随着ＭＴＸ浓度的增加，细胞增殖抑制率逐渐提高。ＭＴＸ浓度为０．００５及－０－．０１叫ｎｏｌ／Ｌ时，对细胞生长影响较小，抑制率分别为３．７％和１．２％。浓度为１０、１、０．５、＾ｌ＾ｉｍｏｌ／Ｌ时对细胞増殖的抑制作用较强，抑制率均超过５０％，浓度为０．０５叫ｎｏｌ／Ｌ时，细胞増殖抑制率为３９．５％，综合考虑，选择０．０５叫ｎｏｌ／Ｌ作为ＭＴＸ与各炼蜜样品联合用药时ＭＴＸ应用的终浓度。８０１７０．６０‘Ａ广１ｎＡ５０－会４０？岳３０■？２０－－１０＊Ｉ■Ｉ＊＊■■■？＊■■■■？０＊１１■丄Ｉ丄０．００５．．．．．００１００５０１０５１１０＿１ＱＭＴＸ（ｉｍｏＩ／Ｌ）｜－５－图１不同浓度ＭＴＸ对人白血病细胞Ｋ５６２増殖的影响（见实验记录０００１８１７３７ｐ）５．３．２不同炼蜜与ＭＴＸ联合应用对人白血病细胞Ｋ５６２生长的影响５．３．２．１炼蜜样品的制备取４．３．１中的四种蜂蜜样品各ＩｍＬ于无菌操作台中过滤除菌レッ细，取适量，胞培养液稀释至浓度分别为２和０．４ｍｇ／ｍＬ的样品溶液后备用。５．３．２．２溶液配制取过滤除菌后的ＭＴＸ溶液适量，细胞培养液稀释至浓度为化２ｎｍｏｌ／Ｌ后备用。５．２．３ＭＴＴＭＴＸＫ５６２．３法检测不同炼蜜与联合应用对人白化病细胞生长的影响６６ 山东大学硕丄＇学位论文如５．２中所示，于％孔板接种细胞并脾育过夜。考虑到各蜂蜜样品的抗氧化物质可能还原部分ＭＴＴ成有色物质从而影响吸光度，故本实验共设计５个组，即空白对照组、正常对照组、ＭＴＸ组、ＭＴＸ＋样品组和ＭＴＸ＋样品对照组（不接种细胞，Ｗ培养液代替），每组６个复孔，于空白对照组和正常对照组加入１００ｊｌ细胞培养液＿ｉｌ＿ｉｍｌ／Ｌ，边缘孔加入１００无菌ＰＢＳ，ＭＴＸ组加入０．２ｏ｜｜｜的ＭＴＸ５０山Ｗ及细胞培养液５０咕ＭＴＸ＋样品组及ＭＴＸ＋样品对照组除加入５０叫０却ｍｏｌ／Ｌ的ＭＴＸ外，另依次加入浓度分别为２ｍｇ／ｍＬ和０．４ｍｇ／ｍＬ的各蜂蜜样品５０叫，于培养箱内培养４８小时，培养结束后按５．３丄３中的方法继续操作并检测。ＭＴＸ组细胞增殖抑制率按５．３丄３中的公式计算，ＭＴＸ＋样品组细胞增殖抑制率按下式计算，〇＝－－’Ｘ００增殖抑制率（％）［１（ＯＤ加巧ＯＤｊｎｉ药对瞄）／（ＯＤ綺ＯＤ空白）］１／〇５．３．２．４数据处理同５．３丄４。５．３．２．５实验结果－如图５２所示，单独应用ＭＴＸ（终浓度为０ｉｍｏｌ／，．０５Ｌ）时细胞増殖抑制｜率为％％，终浓度Ｏ．ｌｍ／ｍＬ的各蜂蜜样品与ＭＴＸ联合应用时ｇ，细胞增殖抑制－－率与单用ＭＴＸ时相比无显著性差异，．５ｍ／ｍＬ时ｈ和ＦＧＲ而终浓度为０ｇ，Ｇ艮ｈ分别与ＭＴＸ合用后，细胞增殖抑制率分别为４５％和４６％，与ＭＴＸ组相比均－有极显著性差异，而ＭＴＸ＋Ｈ和ＭＴＸ＋Ｒｈ组抑制率与ＭＴＸ组相比并无显著性差异。６０１■样品浓度０．５ｍｇ／ｍＬ排＃＃－口５０Ｏ．样品浓度ｌｍｇ／ｍＬＲ１１１１１１１．．．．．．Ｌ１．１Ｈ．．ＩｌｌＭＴＸＭＴＸ＋ＨＭＴＸ＋Ｒ－ｈＭＴＸ＋ＧＲ－ｈＭＴＸ＋ＦＧＲ－ｈ－图５２不同蜂蜜样品对Ｋ５６２增殖的影响０１８１７－３９－４０（见实验记录００ｐ）６７ 山东大学硕±学位论义Ｃ．。ＮＣ表示正常细胞对照组。＃＃表示ＭＴＸ＋样品组与ＭＴＸ组存在极显著性差异，且显著性为ｐＯＯｌ５．４讨论本章采用＾了了法探究了＾了乂单用１＾及与不同的蜂蜜样品联合应用时对人白血病细胞Ｋ５６２增殖的影响。从实验结果看，单用ＭＴＸ时，随着所用浓度的增加，细胞增殖抑制率逐渐升高，浓度为０．１畔ｌｏｌ／Ｌ时，抑制率高于５０％，而浓度为０．０５畔ｏｌ／Ｌ时，抑制率为３９．５％，考虑到ＭＴＸ与蜂蜜样品联合应用时可能导致细施增殖抑制率继０．０５１１１１／：１续升高，为了提高结果的准确性，采用１〇作为的了又联合应用的最佳＾浓度。ＭＴＸ与浓度为Ｏ，细胞増．ｌｍｇ／ｍＬ的四种不同蜂蜜样品分别联合应用后殖抑制率与单用ＭＴＸ时相比并没有显著性差异，而浓度为０．５ｍｇ／ｍＬ时，－ｈ和ＭＴＸ＋ＦＧＲ－ｈ组的抑制ＭＴＸ＋ＧＲ率与单用ＭＴＸ组相比显著增加，而ＭＴＸ＋Ｒ－ｈ组与ＭＴＸ组相比抑制显著性差异ＭＴＸ率有轻微上升，但没有，与姐相比，ＭＴＸ＋Ｈ姐抑制率几乎没有提高。ｙＡ上结果表明浓度为０．５ｍｇ／ｍＬ时，ＧＲ－ｈ与ＦＧＲ－ｈ己表现出明显的抑制肿瘤细胞生长的作用－，而Ｈ与Ｒｈ组在同等浓度下并未表现出明显的抑制作用，但亦未表现出促进肿瘤细胞生长的作用。关于美拉德反应产物的抗肿瘤活性己有较多的文献报道－ｈ与，本章中ＧＲ－ＦＧＲｈ表现出来的抗肿瘤活性可能归结于美拉德反应产物的作用。ＨＭＦ作为美拉德反应的中间产物，其对师瘤细胞生长的影响尚存在争议，而实验结果中－ｈ＋ＦＧＲ－ｈ组细胞增殖抑制率分别为４５％和４６％ＭＴＸ＋ＧＲ和ＭＴＸ，可见两组的－ｈ中酵母菌发酵过程己将ＨＭＦ转化和降解作用效果没有思著差异，而，ＦＧＲＧＲ－ｈ中ＨＭＦ的则没有，由此可知，该两组的抗肿瘤活性与其中存在与否关系不大，主要的活性物质应该是除ＨＭＦＷ外的美拉德反应终极产物。总之，本章的实验结果证明了四种不同的蜂蜜样品与ＭＴＸ联合应用时，Ｒ－－。均不会促进化瘤细胞的生长，并且Ｇｈ与ＦＧＲｈ表现出显著的抗肿瘤活性－ｈ能够明显地减轻应用ＭＴＸ化疗第四章中己证实四种蜂蜜样品，尤其是ＦＧＲ时导致的小鼠肠道熟膜损伤，。综合这两章的研究结果四种蜂蜜样品在保护正常黏膜细胞－ｈ和、缓解化疗副作用的同时并未促进肿瘤细胞的增殖，甚至ＧＲ一ＦＧＲ－ｈ同时起到定的杀伤肿瘤细胞的作用，可见蜂蜜尤其是经过美拉德反应６８ 山东大学硕±学位论文和酵母菌发酵处理的炼蜜，作为癌症化疗的辅助性药物，具有较巧的开发和应用前景。６９ 山东大学硕±学位论文第六章主要结论本文设计了Ｈ４．０的酸性条件下蜂蜜中两种主要还原性单糖果糖和葡萄糖Ｐ单独反应及与１９种不同氨基酸之间的反应，通过对反应液褐变程度、ＨＭＦ生成含量及ＤＰＰＨ清除活性的测定探巧了两种糖进行焦糖化反应与美拉德反应的规律，同时对ＨＭＦ与１９种氨基酸之间的反应进行了初步探索；采用添加氨基酸盐进行炼蜜及酵母菌发酵炼蜜的方法研究美拉德反应及微生物发酵对炼蜜颜色、ＨＭＦ含量、还原糖及抗氧化活性的影响；建立ＭＴＸ诱导的肠道粘膜炎小鼠模型，评价生蜜、炼蜜、添加氨基酸盐炼蜜及酵母菌发酵氨基酸盐炼蜜对化疗副作用的影响；采用ＭＴＴ体外实验方法考察上述各蜂蜜样品在对化疗副作用产生影响的同时对人白血病肿瘤细胞生长的影响。结合实验数据，得出Ｗ下结论：’１．果糖和葡萄糖在ｌＯＯＣ，ＰＨ４．０的弱酸性条件下单独加热时主要发生糖脱水、缩合等反应即焦糖化反应，果糖脱水速度远远快于葡萄糖；除个别氨基酸夕ｈ大部分氨基酸的加入均能通过美拉德反应不同程度的增加果糖与葡萄糖体系的褐变程度、ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ清除活性，且氨基酸对果糖体系的各项指标变化影响不大，对葡萄糖影响较大，两种糖反应体系的褐变程度、ＨＭＦ含量及ＤＰＰＨ清除活性的差别主要是由焦糖化反应速率不同造成的。ＨＭＦ可Ｗ与１９种一步发生反应一一氨基酸进，生成物使反应液进步褐变且ＤＰＰＨ清除活性进步増强。’２．与１２０Ｃ下炼制２小时的普通炼蜜相比，添加谷氨酸钢炼蜜后，蜂蜜的颜色显著增强，ＤＰＰＨ清除活性及总抗氧化能力也显著増强，但是ＨＭＦ含量増加不明显，酵母菌发酵使氨基酸盐傕化的炼蜜还原糖和ＨＭＦ大量降解和转化，但是对颜色和抗氧化活性影响不大。３．生蜜、炼蜜、谷氨酸钢炼蜜及酵母茜发酵谷氨酸铜炼蜜均能缓解化疗药ＭＴＸ引起的小鼠肠道黏膜炎损伤，与模型组相比，主要治疗作用体现在；缓解体重、食量、脾脏指数及白细胞下降的倩况、保持小鼠活动能力、减轻十二指肠绒毛萎缩顧合保持肠道组织正常形态、减少肠道组织的ＭＤＡ、蛋白质叛基含７０ 山东大学硕±学位论文量，降低肠道ＭＰＯ及ｉＮＯＳ活性。在所有的蜂蜜样品中发酵样品的治疗效果最好。４ＭＴＸＴＸ．四种蜂蜜样品与联合应用时，与单用Ｍ相比并未起到保护肿瘤－ｈ与ＦＧＲ－ｈ表现出显细胞的作用，其中ＧＲ著的抑制肿瘤细胞生长的作用。论文创新点１．首次通过模巧酸性条件下果糖与葡萄糖的焦糖化反应Ｗ及和１９种不同氨基酸之间的美拉德反应，深入揭示蜂蜜受热发生化学变化的实质，并初步探索ＨＭＦ与一１９种不同氨基酸的进步反应。２．首次采用添加氨基酸盐炼蜜Ｗ及酵母菌发酵的方式研究美拉德反应和酵母菌发酵对炼蜜相关成分和抗氧化活性的影响。３．ＭＴＸ诱导肠道黏首次采用膜炎模型，评价美拉德反应和酵母菌发酵对炼蜜体内药理活性的影响，并探究其对人白血病肿瘤细胞Ｋ５６２生长的影响。７１ 山东大学硕±学位论文参考女献［１］ＨｏｄｇｅＪＥ．Ｄｅｈｙｄｒａｔｅｄｆｏｏｄｓ，ｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｂｒｏｗｎｉｎｇｒｅａｃｔｉｏ打ＳｉｎｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｓＪｌ－．ＪｏｕｒｎａｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ１％３１：Ｗ８９４３．［］ｇｙ，，ＡａｎｄｏｕｚＥＨＤｅｓｓｅａｕｘＶ了犯至８，ＰｕｉｓｅｒｖｅｒＡ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ化ｍｅｒａｔｕｒｅａｎｄＨＰ］ｊ，，ｇｐｐ－ｏ打ｔｈｅｋｉ打ｅｔｉｃｓｏｆｃａｒａｍｅｌｉｓａｔｉｏ打ｒｏｔｅｉｎｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎａｎｄＭａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎｓｉｎ，ｐｇａｕｅｏｕｓｅｌｓＪｄｈｉ７３２４４－似２ｑｍｏｄｙｓｔｅｍｓ］？ＦｏｏＣｅｍｓｔｒ，２００８１０：１．［ｙ，（）３ＭａｒｔｉｎｓＳＩＶａｎＢｏｅｋｅｌＭＡ．Ａｋｉｎｅｔｉｃｍｏｄｅｌｆｂｒｔｈｅｌｕｃｏｓｅ／ｌｃｉｎｅＭａｉｌｌａｒｄ［］，ｇｇｙｒｅａｃｔｏｏｄｍ－ｉｏｎａｔｈｗａｓＪ．ＦＣｈｅｉｓｔｒ２００５９０１：２５７２６９．ｙ［］ｙ（ｐ，，；）［４］Ｇ６ｋｍｅｎＶ，Ａ？批〇（＾，Ｋ６ｋｓｅｌＨ，ＡｃａｒＪ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｄｏｕｇｈｆｏｒｍｕｌ过ａｎｄｂａｋｉ打ｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎａｃｒｙｌａｍｉｄｅａｎｄｈｙｄｒｏｘｙｍｅ化ｙｌｆＵｒｆｌｉｒａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｃｏｏｋｉｅｓ［Ｊ］？ｃｈｅ－Ｆｏｏｄｍｉｓｔｒ２００７１０４３：１１３６１１４２．ｙ，，（）［５］Ａｊａｎｄｏｕｚ巨Ｈ，ＴｃｈｉａｋｐｅＬＳ，０化，ＦＤ，Ｂｅｎａｊ化ａＡ，ＰｕｉｇｓｅｒｖｅｒＡ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐＨｏｎＣａｒａｍｅａ－ｌｉｚｔｉｏｎａｎｄＭａｉＨａｒｄＲｅａｃｔｉｏ打ＫｉｎｅｔｉｃｓｉｎＦｒｕｃｔｏｓｅＬｙｓｉｎｅＭｏｄｅｌｓｅｍｓＪｏｒｎａｌｏｆ－Ｓｃｉｅｎｃｅ：６％ＳｙｔＪ．ｕＦｏｏｄ２００１６６７９２１．［］，，（）刮ＬａｖｅｌｌｉＶ，ＶａｎｔａｇｇｉＣ．Ｒａｔｅｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｎｄｃｏｌｏｒｖａｒｉａｔｉｏｎｓｉｎ［＾ｄｅｈｄｒａｔｅｄａｐｐｌｅｓａｓｉｅｌａｔｅｄｔ：ｏｗａｔｅｒａｃｔｉｖｉｔｙＪ？Ｊｏｕｒｎａｌｏｆａｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄｙ［］ｇｆｏｏｄ２００９－ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ巧＾１：４７３３４７３８．，，）ｍｎ－７］Ｖａ化ｏｕｓｉＨＫｏｕｔｓｏｕａｉｓＫＢｉｌｉａｄｅｒｉｓＣＯ．Ｋｉｎｅｔｉｃｍｏｄｅｌｌｉｎｏｆ打ｏｎ［，，ｇｅｎｚｍａｔｉｃｂｒｏｗｎｉｎｏｆａｌｅｕｃｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓｄｉｆｆｅｒｉｎｉｎｗａｔｅｒａｃｔｖｉｔｕｎｄｅｒｙｇｉｇｉｐｐｊｙｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｎｄｄｙｎａｍｉｃｈｅａｔｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］？ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１０７。）：７８５－７９６．８ＧｏｔｉｓＦ，ＤｔｉｚｄｅｍｉｒＣＥｒｅｎＳ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｏｍｅｈｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓａｎｄｗａｔｅｒａｃｔｉｖｉｔ［］ｇ，ｙｙｏ打ｎｏ打ｅｎｚｙｍｉｃｂｒｏｗｎｉｎｇｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｏｒａｎｅｕｉｃｅＪ．Ｆｏｏｄ／Ｎａｈｒｕｎｇｊ［］ｇ，２０００４４６－４４２：４３８．，（）巧］Ｇ６ｋｍｅｎＶ，§ｅｎｙｕｖａＨＺ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｏｍｅｃａｔｉｏｎｓ０打ｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｃｒ－ｅａｎｙｌａｍｉｄｅａｎｄｆｕｒｆｉｉｒａｌｓｉｎｇｌｕｃｏｓｅａｓｐａｒａｇｉｎｅｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍ［Ｊ．Ｅｕｒｏ］ｐ－ＦｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２００７２２５：８１５８２０．，，口）７２ 山东大学硕±学位论文１０Ｏｌｉｖｉｅｒｏ了ＣａｕａｎｏＥＣＭｎｕｎｅｒｅｒ良ＦｏｌｉａｎｏＶ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｒｏａｓｔｉｎｏｎ化ｅ，［］，ｐ，ｇｇａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＨＭＦｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｃｏｃｏａｂｅａｎｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．ｕｒｎｕ－ＪｏａｌｏｆＡｒｉｃｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００８巧１：１４７１５２．ｇｙ，，（）１１ＧｏｋｍｅｎＶＡａｒＯＳｅｒｅｎＡＭｏｒａｌｅｓＦＪ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｅａｖｅｎｉｎａｅｎｔｓａｎｄ［］，＾Ｑｐｇ，，ｇｓｕｇａｒｓｏｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌｉｎｃｏｏｋｉｅｓｄｕｒｉｎｇｂａｋｉｎｇｎｄ－ＪｒｏｅａｎＦｏｏｄｅａｈＴｌ０３０３７．ＥｕＲｅｓｒｃａｅｃｈｎｏｏ２００８２２６５：１１１．［］ｐｇｙ，，（）１ＢａｒｔｌｉｎＢＲｅｈｂｅｉｎＧＳｏｍｏｚａＶ，Ｓｉ化知ＲＥＳｉｍｍＡ．Ｍａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎ［巧ｇ，，，ｄｕ－ｒｉｆｒｏｃｔｃｈｏｏｄｉｍａｉｒｃｅｌｌｒｏ化ｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｄｕｃｅｃｅｌｌｄｅａｔｈｉ打ｖｉｔｒｏＪ？ｐｐｐ［］Ｓ－ｉｎａｌＴｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ２００５５；３０３３１３．ｇ，，［１３］ＳｕｉｒｎｎａＣ，ＭｃＣｏｕｒｔＪ，ＣａｍｍｅｒｅｒＢ，ＦｉａｌａＡ，Ｐｒｏｂ巧Ｍ，ＫｕｎＳ．，ｅｔａｌ？民ａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎ－ｉｎａｃｔｉｖｉｔａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｎｄｍｕｔａｅｎｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｃｏａｂｅａｎＭａｉｌｌａｒｄｇｇｙ，ｇＫａｃｔｉｏ打ｒｏｄｕｃｔｓｗｉｔｈｄｅｒｅｅｏｆｒｏａｓｔｉｎ［Ｊ］？ＭｏｌｅｃｕｌａｒＮｕｔｒｉｔｉｏｎ足ＦｏｏｄｐｇｇＲｅｓｅａｒｃｈ２００８５２－：３４２３５１．，，ＭｓＭ民ａｎ－ａｒｅｓｒ［Ｍａｒｔｉ打ＭＡＲａｍｏＳａｔｅｏｓＲｕｆｉＨｅｎＪＡＭｏａｌｅｓＦＪＢｒａｖｏＬ．ｅｔ］，，，，，，ａｌ．Ｂｉｓｃｕｉｔｍｅｌａｎｏｉｄｉｎｓｏｆ出ｆｆｅｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｅｓｐｒｏｔｅｃｔｈｕｍａ打ＨＥＰＧ２ｃｅｌｌｓａｇａｉｎｓｔｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓＪ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ，［］ｇｙ２００９－５７：７２５０７２５８．，［１５］ＢｏｒｒｅｌｌｉＲＣ，ＶｉｓｃｏｎｔｉＡ，ＭｅｎｎｅｌｌａＣ，ＡｎｅｓｅＭ，ＦｏｇｌｉａｎｏＶ．ＣｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃｏｆｅｅｍｅｌａｎｏｉｄｉｎｓＪ？Ｊｏｕｒｎａｌ［］ｎｄ－ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２００２５０：６５２７６５３３．，，［１６］ＬｉｎｄｅｎｍｅｉｅｒＭ，ＦａｉｓｔＶ，ＨｏｆｍａｎｎＴ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｒｏｎ－ｌｌｓｉｎｅａｎｏｖｅｒｏｅｎｍｏｄｉｆｉｃａｏｎｉｎｂｒｅａｄｃｒｕｓｅａｎｏｄｉｎｓｐｙｙｌｔｉｔｉｔｍｌｉ，ｐｓｈｏｗｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅａｎｄｈａｓｅ１１１１ｅｎｚｍｅｍｏｄｕｌａｔｉｎａｃｔｉｖｉｔＪ．ｐｙｇｙ［］ＪｏｕｒｎａＦ－ｌｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２００２５０：６９９７７００６．ｇ，，［１７］ＷａｎｇＨＹ，ＹｕＸＹ，巧舶Ｈ，ＹａｏＷＲ．Ｓｔｕｄｙｏｎｓ巧ａｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉ打ｍｅａｔ打ａｖｏｕｒｉｎｇａｎｄｔｈｅｉｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄｃｅ－Ｓｃｉｅｎ２０１０３１：５１６２．，，［１ＳｏｍｏｚａＶＷｅｎｚｅｌＥＬｉｎｄｅｎｍｅｉｅｒＭＧｒｏｔｈｅＤＥｒｂｅｒｓｄｏｂｌｅｒＨＦＨｏｆｉｎａｎｎＴ．巧，，，，，Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｆｅｅｄｉｎｇｍａｌｔ，ｂｒｅａｄｃｒｕｓｔ，ａｎｄａｒｏｎｌａｔｅｄｒｏｔｅｉｎｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｐｙｐｙ巧 山东大学硕丈学位论文ｏｆｃｈｅｍｏｒｅｖｅｎｔｉｖｅｅｎｚｍｅｓａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｄｅｆｅｎｓｅａｒａｍｅｔｅｒｓｈｉｖｉｖｏ［Ｊ］？ｐｙｐｏｕｒｎａｌｏｆ－ＪＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００５５３ｇｙ：８１７６８１８２．，，ｆｉａｎ－ｅｎａｒｅｓｒａｕｎｃ１９ＲｕＨＪＡＭｏｌｅｓＦＪ．Ｆｔｉｏｎａｌｒｏｅｒｔｉｅｓｏｆｍｅｌａｎｏｉｄｉｎｓ：Ｉｎｖｉｔｒｏ，ｐｐ［］ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ，ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｎｄａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈｎｅｒｎａ—Ｉｔｔｉｏｎａｌ２００７４０：９９５１００２．，，０ｆ－口ＲｕｉａｎＨｅｎａｒｅｓＪＡｄｅ１过ＣｕｅｖａＳＰ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃｏｆｆｅｅ］，ｍｅ—ｌａｎｏｉｄｉｎｓａｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｉｒｍｅｔａ＾ｃｈｅｌａｔｉ打ｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｎｄ－ＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００９５７：４３２４３８．ｇｙ，，口。ＭａｒｋｏＤ，ＫｅｍｅｎｙＭ，ＢｅｍａｄｙＥ，ＨａｂｅｒｍｅｙｅｒＭ，ＷｅｙａｎｄＵ，ＭｅｉｅｒｓＳ，Ｆｒａｎｋ０ＨｏｆｉｎａｉｍＴ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏ打ｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｒｏｗｔｈａｎｄｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ，ｇ－－－－－－－ｍｅ－ａｓｓｅｍｂｌｙｂ３ｈｄｒｏｘ４￡２ｆｌｉｒｌｍｅｔｈｌｉｄｅｎｅｔｈｌ３ｃｃｌｏｅｎｔｅｎｅｌｙｙｙ［（）（ｙ）ｙ］ｙｙｐ，２－ｄＭｉｏｎｅａｎｉｎｔｅｎｓｉｖｅｌｃｏｌｏｕｒｅｄａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎｒｏｄｕｃｔ［Ｊ．Ｆｏｏｄａｎｄ，ｙｐ］ｃｈｅｍ－ｉｃａｌｔｏｘｉｃｏｌｏ２００２４０１：９巧．ｇｙ，，（）２引ＭａｒｋｏＤ，ＨａｂｅｒｍｅｙｅｒＭ，Ｋｅｍ細ｙＭ，ＷｅｙａｎｄＵ，ＮｉｅｄｅｒｂｅｒｇｅｒＥ，Ｆｒａｎｋ０，［Ｈｏｆｉｎａｎｎ了？Ｍａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ化ｅｇｒｏｗｔｈｏｆｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｃｅｅｍｓｅａｒｃｃｏ－ｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｃｈｉｃａｌｒｅｈｉｎ１：ｏｘｉｌｏｇｙ，２００３，１６＾）：４８５５．［２；３］ＳｏｎｇＹＲ，ＬｉｕＹ，ＬｅＧＷ，Ｚｈａｎｇ民５ＳｈｉＹ吐Ｓｔｕｄｙｏｎａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｃａｐａｂｉｌｉｔｙ￣－ｏｆｆｒｕｃｔｏｓｅＯｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｎｄ５ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｉｉｒｆｉｉｒａｌ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏ－ｌｏｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒ２０１０４：３４２３４５．ｇｙｙ，，（）－ＷａｎＭＹ－ｕ吐：ＨａｎＺＱ＜ＩｉａｎＨＹＤｉｎＺｈａｎＺ．５ＨｄｒｏｘｌＭｅＡｌ口叫Ｇ，ｇ，ｇ，ｇ又ｇｙｙｙＦｕｒｆｉｉｒａｒｓＥｆｆｅｃｔａｎｄＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｎＲａｔｗｉ也Ｈ２〇ＩｎｄｕｃｅｄＨｉｏｃａｍａｌ２ｐｐｐＮｅｕｒｏｎｓＩｎｕｒｉｅｓ。－］？ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎＪｉｎＴＣＭｕｎｉｖｅｒｓｉｔ２０１１２７４３７：ｊｇｙ，，口）４４０．ｆｆｅｃｏｆ５－ｒｏｘｆｕｒｕｒａｅｒ２５ＣａｏＧＣａｉＨ，ＣａｉＢ，ＴｕＳ．Ｅｔｈｙｄｍｅｔｈｌｆｌｄｉｖｅｄｆｒｏｍ］，ｙｙ［ｒｃｅｓｅｄｆｆｉｃｎｏ－ｐｏｓＣｏｍｕｓｏｉｎａｌｉｓ０打ｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｆｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅｉｎｄｕｃｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅ巧ｉ打ｈｕｍａｎｕｍｂＵｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｏｄｅｍｉｓｔｒ－：［Ｊ］．ＦＣｈｙ２０１３１４０２７３２７乂，，［２６］ＬｉＭＭ，ＷｕＬＹ，ＺｈａｏＹ，ＷｕＫＷ，ＸｉｏｎｇＬ，ＺｈｕＬＬ，ＦａｎＭ．Ｔｈｅｐｒｏａｃｔｉｖｅ－－ｒｏ－－ｌｅｏｆ５ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｄ２ｆｌｉｒｆＵｒａｌ５ＨＭＦ）ａａｉｎｓｔａｃｕｔｅｈｏｂａｒｉｃｈｏｘｉａｊ（ｇｙｐｙｐＣｅ－ｌｌｒｅｓｓａｎｄＣｈａｅｒｏｎｅｓ１６：［ｊ］．Ｓｔｐ２０１１５２９５３７．，，７４ 山东大学硕±学位论文［２７］ＬｉＭＭ，ＷｕＬＹ，ＺｈａｏＴ，巧饥巧Ｌ，ＨｕａｎｇＸ，ＬｉｕＺＨ，ＦａｎＸＬＸｉａｏＣ氏ＧａｏＹ，ＭａＹＢＣｈｅｎＸＪＺｈｕＬＬａｎｄＦａｒｏｔｅｃｒ－ａｉｎｓｎＭ．Ｔｈｅｔｉｖｅｏｌｅｏｆ５ＨＭＦａｔ，，ｐｇｈｏｘｔ－ｙｐｉｃｉｎｕｒｙ［Ｊ］．ＣｅｌｌＳｒｅｓｓａｎｄＣｈａｅｒｏｎｅｓ，２０１１，１６；２６７２７３．ｊｐｂｄｕｌｍａｌ化ＯＳａｆｏＭＫＣｈｅｎＹａｎＪＢｒｕａｒａｈｅｎｅ－ＦｒｅｍｏｎＫ口引Ａ，，Ｑ，ｇ。Ｇ，，ｇｎｐｇ－－ＡｂｒａｈａｍＤＪＡｓａｋｕｒａ了－ｒｏｘｍｅｆｕｒａｌｍｏｄｉｓｒａｃｅｕｌａｒ．５ｈｙｄｙｔｈｌ２ｆＵｒｆｉｅｉｎｔｌｌ，ｙｓｉｃｋｌｅｈａｅ说ｏｇｌｏｂｉ打ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓｓｉｃｋｌｉｎｇｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄｃｄｋｔＪ］，Ｂｒｉｔｉｓｈ，Ｊ［ｏｕｒｎａ－ｌｏｆｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ２００５１２８：巧２５６１．ｊ，，組－２ＬｉｎＡＳＫＵｓａｍｉＹＬｉｎＬＩｔｏｋａｗａＨＨｓｕＣＭｏｒｒｉｓＮａｔｓｃｈｋｅＳＬａｎｄ［，叫，巧，，，，－ＬＫＨ－ｍ－ｅｅ．５Ｈｄｒｏｘｅｔｈｌ２ｆＵｒｆｉｉｒａｌａｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓａｅｎｔｆｏｒｓｉｃｋｌｅｃｅｌｌｙｙｙ，ｇｍ－ａｎｅｉａａｎｄｉｔｓｍｏｎｏ／ｄｉｌｕｃｏｓｉｄｅｓｆｒｏｍｃｌａｓｓｉｃａｌｌｒｏｃｅｓ化ｄｓｔｅａｍｅｄ，ｇｙｐｅｈｍａｎｎ－ＲｉａｅＲａｄｉｘ［Ｊ］．ＪｏｍｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ２００８６２：１６４１６７．，，［３０］ＡｒｃｈｅｒＭＣ，ＢｒｕｃｅＷＲ，ＣｈａｎＣＣ，ＣｏｒｐｅｔＤＥ，ＭｅｄｌｉｎｅＡ，ＲｏｎｃｕｃｃｉＬ，ＳｔａｍｐＤａｎｄＺｈａｎｇＸＭ．ＡｂｅｒｒａｎｔｃｒｙｐｔｆｏｃｉａｎｄｍｉｃｒｏａｄｅｎｏｍａａｓｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｃｏｌｏｎｃａｒＪ］－ｎｃｅ［．ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈＰｅｒｓｅｃｔｉｖｅｓ１９９２９８１９５１９７．：ｐ，，３ｅ－１ＳｖｅｎｄｓｅｎＣＨｕｓ０ＧｌａｔｔＨＰａｕｌｓｎＪＥＡｌｅｘａｎｄｅｒＪ．５［］，，ｙＴ，，＊ｄｒｏｘ－ＨｙｙｍｅｔｈｙｌｆＵｒｆｉｉｒａｌａｎｄ５ｓｕｌｆｏｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆＵｒｆｕｒａｌｉｎｃｉｅａｓｅａｄｅｎｏｍａａｎｄ幻ａｔＡＣＦｎｕｍｂｅｒｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅｏｆＭｉｎ／＋ｍｉｃｅ［ｊ］．ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，２００９，２９１９－２６：２１１９．３２Ｍｉｚｕｓｈｉｎａ￥ＹａｉｔａＥＫｕｒａｍｏｃＷＫＫｕｒｉａｍ泣ＩＳｈｉｍ犯ａｋｉＮＫｏｉｗａｉ０［］，ｇ，，ｙ，，，ＵｃｈｉｙａｍａＹ，ＹｏｍｅｚａｗａＹ，ＳｕｇａｗａｒａＦ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＳ，ＳａｋａｇｕｃｈｉＫ，Ｙｏｓｈｉｄａ－Ｈ－ｍ－ｍｅｒａｓｅＸ．５Ｈｄｒｏｘｅｔｈｌ２ｆｕｒｆｕｒａｌ：ＡｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＤＮＡｏｌ（ｙｙｙ）ｐｙａｎｄｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｍｉｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ［ｊ］．Ａｒｃｈｉｖｅｓｏｆｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｂｉｃｓ－ｉｏｐｈｙｓ２００６４４６：６９７６．，，３３ＭｏｎｉｅｎＢＨＦｒａｎｋＨＳｅｉｄｅｌＡＧｌａｔＨ．Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏ打ｏｆｔｈｅｃｏｍｍｏｎｆｂｏｄ［］，，，－ｉｒＣＯ打ｓｔｉｔｕｅｎｔ５ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｉｆｉｉｒａｌｉｎｔｏ江ｍｕｔａｇｅｎｉｃａｎｄｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｓｕｌｆｉｉｒｉｃａｃｉｄｅｓｔｅｒｉ。出ｅｍｏｕｓｅｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］？ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈｉ打Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００９，２２－：１１２３１１２８．３４ＢＨ巧ｒｋｎ－ＭｏｎｉｅｎＥｎＷＢａｏｗｉｔｚＧＳｅｉｄｅｌＡＧｌａｔ吐Ｍｕｔａｅｎｉｃｉｔｏｆ５［］，ｇ，，，ｇｙＨｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌｉｎＶ７９ＣｅｌｌｓＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＨｕｍａｎＳＵＬ了ｌＡｌ：ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ打ｏｆＤＮＡＡｄｄｕｃｔｓＦｏｒｍｅｄＱｍ－［ｊ］．ＣｈｅｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈｉｎＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ２０１２２５７：１４８４１４９２．，，（）５ＣｈｅｒｉｏｔＳＢＵｌａｕｄＣＰ６ｃｈｔｒａｅｒＳＷａｎｅｒＫＨＮｉｃｏｌａｓＪ．Ａｃｏｍａｒｉｓｏ打ｓｔｕｄ口］，，ｇ，ｇ，ｐｙｂ－ｅｔｗｅｅｎａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄｍｕｔａｇｅｎｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃｙｓｔｅｉｎｅｇｌｕｃｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄ巧 山东大学硕±学位论文Ｍａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｎｅｏｆｏｒｍｅｄｒｏｄｕｃｔｓｆｒｏｍｈｅａｔｅｄｃｓｔｅｉｎｅａｎｄｐｐｙｍｅ－ｈｄｒｏｘｙｔｈｌｆｉｉｒｆｌｉｒａｌ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ，２００９１１４１：１３２１３８．ｙｙｙ，（）６Ｓｅｖｅｒｏｎｄｅａｕ－ｅｎｏｉｃ口ｉｎＩＤｕｍｏｎｔＣＪＣａｂａｔｏｎＡＧｒａｉｌｌｏｔＶＣｈａｎｏｎＭＣ．Ｇｔｏｘ］，，，，ｇａｃｉｉｉｔｆｏｏｄｃｏｎｉ－ｈｄｍｕｒｆｔｉｆｔｖｔｅｓｏｆｈｅｔａｍｎａｎｔ５ｙｒｏｘｙｅｔｈｌｆｉｒａｌｕｓｉｎｇｄｆｅｒｅｎｔｉｎｙｖ－ｚＶｒｏｂｉｏａｓｓａｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｌｅｔｔｅｒｓ２０１０，１９２２：１８９１９４．ｙｇｙ，（）３７ＺｈｏｕＹＷａｎＨＹａｎ民ＨｕａｎＨＳｕｎＹＳｈｅｎＹＬｅｉＨＧａｏ吐Ｅ瓶ｃｔｓｏｆ［］，，ｇ，ｇ，ｇ，，，Ｌｉｔｃｈｉｃｈｉｎｅｎｓｉｓｆｒｕｉｔｉｓｏｌａｔｅｓｏｎｒｏｓｔａｌａｎｄｉｎ￡２ａ打ｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｐｇｐＪ７７４ｍｕｒｉｎｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢＭＣｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙａｎｄａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ２０１２口。：１２．，，）８Ａｍｅｕｒ－口ＬＡＭａｔｈｉｅｕＯＬａｌａｎｎｅＶＴｒｓｔｒａｍＧＢｉｒｌｏｕｅｚＡｒａｏｎＩ．Ｃｏｍａｒｉｓｏｎ］，，，ｙ，ｇｐｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｕｃｒｏｓｅａｎｄｈｅｘｏｓｅｏｎｆｕｒｆｕｒａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｂｒｏｗｎｉｎｉｎｇｃｏｏｋｉ的ｂａｋｅｄａｔｄｉｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，１０１（４）：－１４０７１４１６．３９ＰｅｒｅｚＬｏｃａｓＣＹａ－］ｌａａｎＶＡ．Ｉｓｏｔｏｅｌａｂｅｌｉｎｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ５［，ｙｙｐｇ－－ｈｄｒｏｘｍｅｔｈｌ２ｆｔｒａｌｄｅｈｄｅＨＭＦｆｒｏｍｓｕｃｒｏ化ｂｌｓｉｓ－（ｙｙｙ）ｉ（）ｙｒｏｙＧＣ／ＭＳＪ］．ｙｐｙ［ｕｒｎａ－Ｊｏｌｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄｆｏｏｄｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２００８％１５：６７１７６７２３．，，（）Ｌｗｋｏｗｋ－４０ｅｓｉＪ．Ｓｎｔｈｅｓｉｓｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄａｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ５ｈｄｒｏｘｅｔｈｌｆｕｒｆｕｒａｌ［］ｙ，ｙｐｐｙｙｍｙａｎ－ｃＨｄｅｒｉｖａｉｖｅｓｒｃ：ｔｓｔ［Ｊ］．Ａｋｉｖｏ２００１１１７５４．，，＂４ＫｒｏｈＬＷ．ＧａｒａｍｅｌｉｓａｔｉｏｎｉｎｆｏｏｄａｎｄｂｅｖｅｒａｇｅｓＪ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ１９９４［。［］ｙ，，５－１４：３７３３７９．（）［４２］董蕊．粮树蜜、苔子蜜和刺槐蜜红外指纹图谱及抗氧化研巧［Ｄ］．吉林：吉林农业大学，２０１１．［４３］ＹｉｉｃｅｌＹ，Ｓｕｌｔａｎｏ封ＵＰ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙｓｆｒｏｍＨａｔａｙＲｅｇｉｏｎｂｙｔｈｅｉｒｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，２０－１３１：１６２５．，４４－张泰，２００８３０５７４９７５０．，孙立么张军炮制用炼蜜商兑化中成药，（）；［］４５－谢明．中药蜜炙法的探讨［Ｊ．海峡药学，２０１４２６（５）：１９２０．［］］，４，巧吴国瑞，鲜洁晨林晓外，冯怡，洪燕龙．中药辅料炼蜜物理性状参数表［Ｊ－征及参数问相关关系分析．，２０１４２０（６）：１４．［］中国实验方剂学杂志，７６ ■山东大学硕±学位论文４７刘晓秋，崔春花，白志宏．蜂蜜在炼制过程中成分变化的初步研究［Ｊ］．黑龙［］－２０００１３（２）．江医药杂志：７８７９，，［４８冯立彬，严斌，李陆军．蜂蜜炼制工艺的研究［Ｊ］．中医药信息，２００５，２２］（３）－；６２６３．［４９］冯立彬，武生，王艺．蜂蜜炼制方法的研巧［可中医药信息，２０００，（４）：２４－２５．张庆平．００４３５．５０．浅谈蜜炙法［Ｊ］中草药，２（４）：４７６［］：５．、［Ｕ李先端，钟银燕，顾雪竹，毛淑杰中药炮制辅料蜂蜜中葡萄糖果糖、薦糖的含量测定町中草药－，２００８３０（６）：８８５８８８．，顾雪竹．．［５２］，李先端，钟银燕，毛淑杰蜂蜜的现代研巧及应用阴中国实验方－剂学杂志，２００７１３（６）：７０７３．，［５３］ＴｕｒｋｍｅｎＮＳａｒｉＦ，ＰｏｙｒａｚｏｌｕＥＳ，ＶｅｌｉｏｌｕＹＳ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｒｏｌｏｎｇｅｄｈｅａｔｉｎ，ｇｇｇ０口ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉａｎｄｃｏｌｏｕｒｏｆｈｏｎｅ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００６９５４：ｔｙｙ口］ｙ，，（）６５３－６５７．口４ＷａｎＸＨ，ＧｈｅｌｄｏｆＮ，ＥｎｇｅｓｅｔｈＮＪ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｒｏｃｅｓｓｉｎｇａｎｄｓｔｏｒａｇｅｏｎ］ｇｐａｎｔａｃＪｏｔ－ｉｏｘｉｄａｎｔｃａｉｔｏｆｈｏｎｅＪ．ｘｒａｉａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ２００４６９２；ｆｃ９６ｐｙｙ［］，，（）ｆｃｔｌＯｌ．［５５］张丽霞，高文远，王海泮．微生物技术在中药炮制中的应用．中圉中药杂志，２０－３６９５１２，３７（２４）：％９５．［５６］ＭｃＣｕｌｌｏｃｈＲ，ＨｅｍｓｌｅｙＪ，ＫｅｌｌｙＰ．Ｓｙｍｐｔｏｍｍａｎａｇｅｍｅｎｔｄｕｒｉｎｇｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｅｄ－ＰａｉａｔｒｉｃｓａｎｄＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈ２０１４２４４；１６６１７１．［叮，，（）［５７］ＳｏｎｉｓＳＴ．ＴｈｅＰａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙｏｆＭｕｃｏｓｉｔｉｓ［Ｊ］．ＮａｔｕｒａｌＲｅｖｉｅｗ（Ｃａｎｃｅｒ），２００４，４；２７７－２８４．ｅｎａｍ－ｎｎｅ—５８ＤｈＪＷＨａｕｅｒＪｅｓｅＭ．Ｔｈｒａｄｉｏｔｈｅｒａｅｕｔｉｃｉｎｕｒａｃｏｍｌｅｘｗｏｕｎｄ［］，ｐｊｙｐａｄｉｏ化ｅｒａ－：．Ｒａｎｄ．Ｏｎｃｏｌｏ２００２６３１２９１４５．饥ｐｙｇｙ，，５９Ｃｒｉｓｗｅｌｌ了ＬｅｓｋｏｖＫＭｉｙａｍｏｔｏＳＬｕｏＧＢｏｏｔｈｍａｎＤＡ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎ［］，ｐ，，，ｆａｃｏ＾＊ｔｉｓａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｃｌｉｎｉｃａｌｌｙｉｅｌｅｖａｎｔｄｏｓｅｓｏｆｉｏｎｉｚｉｎｇｒａｄ－ｉａｔｉｏｎ？Ｏｎｃｏｅｎｅ２００３２２３７：５８１３５８２７．阴ｇ，，（）［６０］Ｄａｖｉｓ，民？Ｊ．ＳｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｂｙｔｈｅＪＮＫｇｒｏｕｐｏｆＭＡＰｋｉｎａｓｅｓ口］？Ｃｅｌｌ，２０００－１０３：２３９２５２．，６１ＢｒａｕｍＳＨａｎｓｅ－ＢｌｍａｎｎＣＧａｓｓｍａｉｍＭＧａｕｆｄｅｍＫｅｌｌｅｒＵＢｏｍｅｒｃｌａｚＣ［］，，，，，ＣｈａｎＫＷｅｍｅｒＳｅｔａｌ．Ｎｒｆ２ｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒａｎｏｖｅｌｔａｒｅｔｏｆｋｅｒａｔｉｎｏｃｔｅ，ｐ，ｇｙ７７ 山东大学硕±学位论文ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒａｃｔｉｏ打ｗｈｉｃｈｒｅｇｕｌａｔｅｓｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｈｅａｌｉｎｋｉｎｗｏｕｎｄ２００２２２－ｓＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏ：５４９２５５０５．．ｇ阴ｇｙ，，Ｓｏｎ－６２ｉｓＳ．Ｔ．ＴｈｅｂｉｏｌｏｉｃｒｏｌｅｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒＫＢｉｎｄｉｓｅａｓｅａｎｄｉｔｓｏｈｎｔｉａｌ［］，ｇｐｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｉｎｍｕｃｏｓａｌｉｎｕｒｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉｎｅｏｌａｓｔｉｃｔｈｅｒａ．ｊｐｐｙ口］Ｃｒｉ—ｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓｉｎＯｒａｌＢｉｏｌｏａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００２１３：３００３０９．ｇｙ，６３ＣｈｍｕｒａＳＪＮｏｄｚｅｎｓｋＥ，ＢｅｃｋｅｔｔＭＡＫｕｆｅＤＷｕｉｎｔａｎｓＪＷｅｉｃｈｓｅｌｂａｕｍ［］，，，Ｑ，ＲＲ－．Ｌｏｓｓｏｆｃｅｒａｍｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｆｅｒｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄ化ｓ－ａｏｉｓＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１９９７５７：１２７０１２７５．ｐｐ［］，，６４巧ａｍｂ泣８ＡｎｄｏｔｉＡＹａｓｕｉＨＡｒａｋｉＹ，Ｓａｍｂａ了，ＦｕｉａｍａＹ．Ｍａｔｒｉｘ［］，，，ｊｙｒｅａ－ａｓｔｓｍｅｔａｌｌｏｐｃｒｔｉｎｓｅ３ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｆｒｏｍｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｉｃｓｕｂｅｐｉｔｈｄｉｌｍｙｏ员ｂｒｏｂｌａ：ｒｏｎ－－ｌｅｏｆｉｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１７．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ２００３３８：５４８５５４．阴ｇｙ，，６５ＳｅｓａｋｉＭＫａｓｈｉｍａＭＩｔｏＴＷａｔａｎａｂｅＡＩｚｕｍｉａｍａＮＳａｎｏＭ．．．ＭｉｕｒａＭ］，，，［，，，ｙｅｔａｌｉｆｆｉａｌｒｅｌａｉｏｆｍｅｔｌｌｏｒｏｅｉｎａｓｅｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａ．Ｄｅｒｅｎｔｇｕｔｏｎａｐｔｐｎｄ，ｐｃｈｅｍｏｔａｘ－－ｉｓｏｆｈｕｍａｎｌｕｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｂＤＧＦｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎＩａｎｄＴＮＦａＪｇｙＰ，ｐ］．［Ｍｅｄ—ｉａｔｏｒｓｏｆＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ２０００９：１５５１６０．，，６６Ｅｎｅ－ｌｓＤｅｕｔｓｃｈＭＡ巧ａｌ．ＩｎｓｅｒｔｉｎａｌｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｃａｎｄｒｍＫＢｅｎｅｓ［］ｇｐｇｄｕｃｅｓ－－ｒｅｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａ，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ａｎｄｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ８ｂｙＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓｉｎｍｏｎｏｃｙｔｉｃｄｅｎｔａｌｕｌａｎｄｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉａｍｅｎｔ，ｐｐｐｇｃｅｓｆｅｃｉｏｉ２００３－ｌｌＵ．ｌｎｔｎａｎｄｌｍｍｕｎｔｙ，７１：５１６９５１７７．］，６７ＭａｅｄａＴＭｉｙａｚｏｎｏＹＩｔｏＫＨａｍａｄａＫＳｅｋｉｎｅＳＨｏｒｉｅＴ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［］，，，，，ａｎｄｅｎｈａｎｃｅｄａｒａｃｅ－ｐｌｌｕｌａｒｐｅｒｍｅａＷｌｉｔｙｉｎ化６ｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅｏｆｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｔｒｅａｔｅｄｒｎｄ－ａｔｓ口．Ｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａａｈａｒｍａｃｏｌｏ２０１０６５：１１１７］ｐｙｐｇｙ，，（巧１１２３．６８ＣｈｅｎＹＪｕｎｓｕｗａｄｅｅＰＹｏｒｅＭＢｕｔｅｒｆｉｅｌｄＤＡＳｔＣｌａｉｒＤＫ．Ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ［］，，，ｇ，ｔｄａｍａｇｅｉｎｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏ化ｅｒａ：ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｎｏｎｔａｒｇｅｔｅｄｉｓｓｕｅｓＪ．ｐｙ［］ｅｃｕａ－Ｍｏｌｌｒｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ２００７７３：１４７１５６．，，（）［６９］ＳｐｉｒｉｏｃｋＩＩＩＣＦ，ＡｕｎｅＺＴ，Ｔｏｓ沈ｅｒｇＪＴ，ＣｏｌｌｉｎｓＰＬ，ＡｕｎｅＪＰ，ＨｕｓｔｏｎＪＷｅｔａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏａｐｏｐ化ｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｍｅ化ｏｔｒｅｘａｔｅｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙＪｕｎ－ｅｒ—Ｎｔｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ阴．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍａｔｉｓｍ２０１１６３：２６０６２６１６．，巧），［７０］ＢａｂｉａｋＲＭＶ，ＣａｍｐｅｌｌｏＡＰ，ＣａｒｎｉｅｒｉＥＧＳ，ＯｌｉｖｅｉｒａＭＢＭ，Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ：ＰｅｎｔｏｓｅＣｙｃｌｅａｎｄＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓ［Ｊ］，ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎ，１９９８，－１６：２８３２９３．７８ 山东大学硕±学位论文［７。ＷｉｓｅｍａｎＨ，ＨａｌｌｉｗｅｌｌＳ．Ｄａｍａｇｅ化ＤＮＡｂｙＫａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｓｅｃｉ的ｒｏｌｅｉｎｉｎｆｌａａｔｏｒ出旅ａｎｄｒｅｓｓｉＪ．ｐ：ｍｍｙｓｅａｐｒｏｇｏｎ化ｃａｎｃｅｒ［］Ｂ－ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒＪｏｕｒｎａｌ１９９６３１３：１７２９．ｙ，，－７２Ｓ－ｉｍｏｎＨＵＨａＹｅｈｉａＡＬｅｖｉＳｃｈａｆｆｅｒＦ．Ｒｏｌｅｏｆｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｅｎｓｅｃｉｅｓ［］，ｊ，ｇｐＲＯＳｉｎａｉｉｉｏｎｏｉ２０００－ｏｔｏｓｓｎｄｕｃｔ：４（．Ａｔｏｓｓ５５１５４化）ｐｐ机ｐｐ，（，）－７３ＧｉｌｌｉａｍＬＡＡＣｌａｉｒＤＫ．Ｓｔ．ＣｈｅｍｏｔｈｅｒａＩｎｄｕｃｅｄＷｅａｋｎｅｓｓａｎｄＦａｔｉｕｅｉｎ［］，ｐｙｇＳｋｅｌｅｔａｌＭｕｓｃｌｅ：ＴｈｅＲｏｌｅｏｆＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓＪ．ＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓａｎｄＲｅｄｏｘ［］Ｓ－ｉｇｎａｌｉｎｇ２０１１１５：２５４３２％３．，，巧）ＧｕｌｇｕｎａＭ，Ｅｒｄｅｍｂ０，ＯｚｔａｓｃＥ，ＫｅｓｉｋｄＶ，ＳａｌａｍｔｅｋｉｎａＮ，ＶｕｒｕｃｕａＳ，巧ａｌ．Ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｐｒｅｖｅｎｔｓｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｄａｍａｅａｎｄｇｏｘ－ｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓＪ．ＥｘｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｉｃＰａｔｈｏｌｏ，２０１０６２：１０９１１５．［］ｐｇｇｙ，７引ＶａｒｄｉＮＰａｒｌａｋｉｎａｒＨＯｚｔｕｒｋＦＡｔｅｓＢＧｕｌＭＣｅｔｉｎＡｅｔａｌ．Ｐｏｔｅｎｔ［：ｐ，，，，，ｒｏ－ｐｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆａｐｒｉｃｏｔ地ｄｌ＞ｃａｒｏ化ｎｅｏｎｍｅ化ｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｏｘ—ｉｄａｔｉｖｅｄａｍａｅｉｎｒａｔｓ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏ２００８４６：３０１５ｙ，．ｇ［ｎｇｙ，３０２２．７６Ｙｉｉｎｃ社ＭＥｒａｌＡＫｏｒｕｋＭＳａｒｉＩＢａｃｉＣＩｎａ化ｚＳ．Ｅ瓶ｃｔｏｆｖｉｔａｍｉｎＡ［］，，ｐ，，，ｇ－ａｇａｉｎ巧ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｄａｍａｇｅ化ｔｈｅｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＭｅｄｉｃａｌＰｒ－ｉｎｃｉｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ２００４１３６：３４６；３５２．ｐ，，（）７７ＫａｎａｒＬＣｅｔｉｎＡＨａｃｉｏｌｕＳＫＥｓｅｒＢＫ〇ｉｉｔＩＣａｎ６ｚ０幻ａｌ．Ｅｆｆｉｃａｃｏｆ［］ｙ，，ｇ，，９ｙｇ，ｙｒｏ－ｙａｌｅｌｌｏｎｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｓｓｔｅｍｉｃｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｄａｍａｅ化ｊｙｙｇｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅｉｎｒａｔｓ［Ｊ．ＡｆｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｏｍｌｅｍｅｎｔａｒａｎｄ］，ｐｙＡ－ｌｔｅｒｎａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓ２０１２９３：４１２４１７．，，（），７８］朱宝萌．炼蜜炮制规律及其机理研究Ｄ．济南：山东大学２０１４．［［］７９文赤夫，雷蛛．蔥酬［，董爱文李国章霄勇比色法测定紫花地下中总糖及还原］，，Ｊ３－．现代食品科技糖含量［］，２００５，２１（）；１２２１２３．［８０］ＭａｎｚｏｃｃｏＬ，Ｃ組ｉｇａｒｉｓＳ，ＭａｓｔｒｏｃｏｌａＤ，ＮｉｃｏｌｉＭＣ，ＬｅｒｉｃｉＣＲ．Ｒｅｖｉｅｗｏｆ打ｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｂｒｏｗｎｉｎｇａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａａｃｉｔｉｎｒｏｃｅｓｓｅｄｆｏｏｄｓ，Ｔｒｅｎｄｓｐｙｐ［巧－ｉｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ２００１１１：３４０３４６．ｇｙ，，８１ＡａｎｄｏｕｚＥＨＶＤｅｓｓｅａｕｘＳ．ＴａｚｉＰｕｉｓｅｒｖｅｒＡ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ化ｍｅｒａｔｕｒｅａｎｄＨ［］ｊ，，ｇｐｐ－ｏｎｔｈｅｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｃａｒａｍｄｉｓａｔｉｏｎｒｏ化ｉｎｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎａｎｄＭａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎｓｉｎ，ｐｇｍｏｄｍ－ａｑｕｅｏｕｓｅｌｓｙｓｔｅｍｓＪ］．ＦｏｏｄＣｈｅｉｓｔｒ２００８１０７：１２４４１２５２．［ｙ，，［８２］ＭａｒｔｉｎｓＳＩ，ＶａｎＢｏｅｋｅｌＭＡ．Ａｋｉｎｅｔｉｃｍｏｄｅｌｆｏｒｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅ／ｇｌｙｃｉｎｅＭａｉｌｌａｒｄ化ａｃ￣ｔｉｏｎａｔｈｗａｙｓ口？ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２００５９０：２５７２６９．ｐ］，，７９ 山东大学硕尘学位论文８３ＭｃＣｕｌｌｏｃｈ民ＨｅｍｓｌｅＪＫｅｌｌ？？Ｓｍｔｏｍｍａｎａｅｍｅｎｔｄｕｒｉｎｃｈｅｍｏｔｈｅｒａ［］，ｙ，ｙｙｐｇｇｐｙＪ－．Ｐ化ｄｉａｔｒｉｃｓａｎｄＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈ２０１４４２４：１６６１７１．［］，，（）—８４ＪａｈｏｖｉｃＮＳｅｎｅｒＧＣｅｖ化ＨＥｒｓｏＹＡｒｂａｋＳＣＹｅｅｎＢ．Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｏｆ［］，，，，，，，ｙ＊ｇ－ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｅｎｔｅｒｉｔｉｓｂｙｍｅｌａｔｏｎｉｎｉｎｒａｔｓＪ．Ｃｅｌｌ目ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄ［］ｙｉ２００４２２９—１Ｆｕｎｃｔｏｎ．：１６７８，，－ｍ巧５ＬｏａｎＲＭＳｔｒｉｎｇｅｒＡＭＢｏｗｅ打ＪＭＹｅｏｈＡＳ．ＪＧ化ｓｏ打民ＪＳｅｉｓＳＴｅｔａｌ．］ｇ，，，，，ｅ－－Ｔｈｒｏｌｅｏｆｒｏｉ打。ａｍｍａｔｏｒｃｔｏｋｉｎｅｓｉｎｃａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎｄｕｃｅｄａｌｉｍｅｎｔａｒｐｙｙｙｔｒａｃｔｍｕｃｏｓｉｔｉｓ：ＰａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓａｎｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃｄｒｕｓＪ．Ｃａｎｃｅｒ，ｇ［］Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ－Ｒｅｖｉｅｗ２００７３３：４４８４６０．，，８６ＫｈａｎａｌＢＢａｌｉａＭＵａｌＮ．Ｅｆｅｃｔｏｆ化ｉｃａｌｈｏｎｅｏｎｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｏｆ［］，ｇ，ｐｐｐｙｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｏｒａｌｍｕｃｏｓｉｔｉｓ：ａｎｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓｔｕｄｙＪ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ［］－ｏｆＯｒａｌＭａｘｉｌｌｏｆａｃｉａｌＳｕｒｅｒ２０１０３９１１８１１１８５．：ｇｙ，，［８７］ＣｈａｒａｌａｍｂｏｕｓＭ，ＲａｆｔｏｐｏｕｌｏｓＶ，ＬａｍｂｒｉｎｏｕＥ，ＣｈａｒａｌａｍｂｏｕｓＡ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔ－ｉｖｅｎｅｓｓｏｆｈｏｎｅｙｆｏｒｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｄｕｃｅｄｏｒａｌｍｕｃｏｓｉｔｉｓｉｎｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋｃａｎｃｅｒａｔｉｅｎｔｓ：ＡｓｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓｐｙＪ－．ＥｕｒｏｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｒａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１３５２１７２２５．［］：ｐｇ，，巧叫ＷａｎｇＨＹＱｉａｎＨＹａｏＷ民．Ｍｅｌａｎｏｉｄｉ打ｓｒｏｄｕｃｅｄｂｔｈｅＭａｉＵａｒｄｉｒｅａｃｔｉｏｎ：，，ｐｙｔｒｔｕｒ－ｓｕｃｅａｎｄｂｉｏｌｏｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔＪ．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２０１１１２８：５７３５８４．ｇｙ［］ｙ，，８ＦａＵｉｃｏＢＺａａｌａＭＡｒｅｎａＥＶｅｒｚｅｒａＡ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｏｎＨＭＦ［叫，ｐｐ，，ｇｃｏｎｅｎ－ｔｔｉｎｕｎｉｆｌｏｒａｌｈｏｎｅｙｓ？ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒ２００４８５：３０５３１３．口］ｙ，，口）ＳＪｅ－ＺｈｏｎＹＹＭａｏＧｕＸＺＺｈｕＪＮＭａＺＪＬｉＸＤ．Ｄｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ５ＨＭＦ口別ｇ，，，，，ｃｏｎｔｅｎｔｉ打ｈｏｎｅｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｅｘｃｉｐｉｅｎｔ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆｅ－ＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｒｉａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ２００７３２０：２２０３２２０６．，，口）９１ＯｈｋａｗａＨＯｈｉｓｈｉＮ，ＹａｉＫ．Ａｓｓａｆｏｒｌｉｉｄｅｒｏｘｉｄｅｓｉｎａｎｉｍａｌｔｉｓｓｕｅｓｂ［］，ｇｙｐｐｙｉｉｒｅｉｎａｃａｌｃ％－ｔｈｏｂａｒｂｉｔｕｒｃａｃｉｄａｃｔｏｎＪ．ＡｌｔｉＢｉｏｈｅｍｉｓｔｒ１９７９：３５１３５８．ｙｙ，［］，９２ＬｅｖｉｎｅＲＬ，ＷｉｌｌｉａｍｓＪＡ，ＳｔａｄｔｍａｎＥＲ，Ｓｈａｃ化ｒＥ．Ｃａｒｂｏｎｙｌａｓｓａｙｓｆｂｒ［］ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｌｍ〇（ｉｉｆｉｅｄｒｏｔｅｉｎｓＪ．Ｍｅｔｈｏｄｓｉ打Ｅｎｚｙｍｏｌｏｙｐ［］ｇｙ，－１９９４２３３３４６３巧．：，９３ＬｏｗｒＯＨＲｏ化ｂｒｏｕｈＮＪＦａｒｒＡＩＲａｎｄａｌｌＲＪ．Ｐｒｏｔｅｉｎｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓｗｉ化［］ｙ，ｇ，，ｍ－ｔｈｅｆｏｌｉｎｈｅｎｏｌｒｅａｅｎｔＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ目ｉｏｌｏｉｃａｌＣｈｅｉｓｔｒ，１９５１，１９３：２６５ｐｇ［ｇｙ２７５．Ｋｏ－ｍａｌｌｉＶＫＡｂｒａｈａｍＰＲａｂｉＳ．Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｎｉｔｒｏｓａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｌａ口叫，，ｙｐｙａｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｉｎｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｎａｌｄａｍａｅｉ打ｔｈｅｒａｔ？！．ｈｉｖｅｓｏｆＴｏｘｉｃｏｌｏｉｇ［］Ａｒｃｇｙ，２００８８２－：７６３７７０．，８０ 山东大学硕±学位论文巧５］ＨａｍｐｔｏｎＭＢ，ＫｅｔｔｌｅＡＪ，ＷｉｎｔｅｒｂｏｕｍＣＣ．Ｉｎｓｉｄｅｔｈｅｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｈａｇｏｓｏｍｅ：ｐｏｘａｎｔｓｅｅｒｏｘａｓｅａｎｄａｃｅ－ｉｄｍｙｌｏｉｄｂｔｒｉａｌｋｉｌｌｉｎ？Ｂｌｏｏｄ１９９８９２９：３００７，，ｐ，ｇ口］，（）３０１７．９６ＳｕｌｌｉｖａｎＧＷＳａｒｅｍｂｏｃｋＩＪＬｉｎｄｅ打Ｊ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｖａｓｃｕｌａｒ［］，，ｄ－ｉｓｅａｓｅｓＪ．ＪｏｕｍａｌｏｆＬｅｕｋｏｃｔｅＢｉｏｌｏ２０００６７５：５９１６０２．［］，ｙｇｙ，（）７ＳｏａｒｅｓＰＭＭｏ化ＪＭＳＧｏｍｅｓＡＳＯｌｉｖｅｉｒａＲＢＡｓｓｒｅｕＡＭＳＢｒｉｔｏＧＡＣｅｔ巧，，，］，ｙ，，－＂ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｄｙｓｍｃｒｔｉｌｉｔｙｉ打５ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃＵｉ打ｄｕｃｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓｉｔｉｓ＊ｏｕｔｌａｓｔｓｉ打ｆｌａｍｍａｔｏｒｒｏｃｅｓｓｉｃｓｏｈｒｔｉｏｎ．ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｃｒ＆ａｎｄｙｐＵ］ｐｙＰｈａｒｍａｃｏ－ｌｏ２００８６３１：９１９８．ｇｙ，，（）９ＰｏｔｏｋａＤＡＮａｄｉ知ＥＰＵｅｒｍａｎＪＳＦｏｒｄＨＲ．Ｒｏｌｅｏｆ打ｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅａｎｄ［別，，ｐｐ，ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅｉｎｇｕｔｂａｒｒｉｅｒｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｕｒｇｅｒｙ，２００２，２６（７）：８０６－８１１．９Ｌ－ｉｍａＪｉｉｎｉｏｒＲＣＰＦｉｕｅｉｒｅｄｏＡＡＦｒｅｉｔａｓＨＣＭｌｏＭＬＰＷｏｎＤＶＴＬｅｉｔｅ］，ｅ口ｇ，，，ｇ，巧ａ－ＣＡＶｌ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｏｎｔｈｅａｔｈｏｅｓｉｓｏｆｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ，ｐｇｅｎｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓｉｔｉｓ：ｒｏｌｅｏｆｃｙｔｏｋｉ打ｅｓｏｎｉｎｄｕ加ｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅＳｙｂａｓｅｔ？ａｃｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ．ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒａａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏ２０１２６９４：９３１９４２．］ｐｙｇｙ，，（）＊１００ＦｉｌｓｔＴｉｓｓｉｎＷＪＶｅｒｋａｄｅＨＪＲｉｎＥＨ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｆｅｅｄｉｎｄｕｒｉｎ［ｒａＭ，，ｓ］ｊ，ｇｇｇｇａｅ－ｔｒｅｏｍｅｔｈｏｔｒｅｘｔｉｎｄｕｃｅｄａｓｏｉｎｔｓｔｉｎａｌｍｕｃｓｉｔｉｓｒｅｖｅｎｔｓｗｅｉｈｔｌｏｓｓｉｎｔｈｅｒａｔｇｐｇ－－．ＥＳＰＥＮＪｏｕｍ吐２０１３８：９５９９？阴，ｌ（ＨＮａｒｕｈａｓｈｉＫＮａｄａｉＭＮａｋａｏＭＳｕｚｕｋｉＮＮａｂｅｓｈｉｍａＴＨａｓｅａｗａＴ．［］，，，，，ｇＣｈａｎｇｅｓｉｎａｂｓｏｒｐｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｒａｔｉｎｔｅｓｔｉｎｅｉｎｕｒｅｄｂｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅＪ．ｊｙ［］Ｃｅｒｍａｎｄ－ｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｒｉｍｅｎｔａｌＰｈａａｃｏｌｏｇｙＰｈｓｉｏｌｏ２０００２７：９８０９８６．ｙｇｙ，，１０ｌａｍｆｅｒＬ．Ｃｔｏｋｉｎｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏ打ａｎｄｃｌｏｎｃａｎｃｅｒＪ．ＣｒｒｅｎｔＣａｎｃｅｒ［巧Ｋｐｙ，ｏ［］ｕＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ，２０１１，１１（４）：４５Ｌ［１（Ｂ］ＫｏｔｈａｒｉＮ，ＫｅｓｈａｒｉＲＳ，ＢｏｇｒａＪ，ＫｏｈｌｉＭ，ＡｂｂａｓＨ，ＭａｌｉｋＡ，ｅｔａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｍｙｅｌｏｅｒｏｘｉｄａｓｅｅｎｚｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｎｌａｓｍａｉｓａｎｉｎ出ｃａｔｏｒｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏ打ａｎｄｐｙｙｐｏｎ－ｓｅｔｏｆｓｅｓｉｓＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｃｒｉｔｉｃａｌｃａｒｅ２０１１，２６：４３５．ｅｌ４３５．ｅ７ｐ［，１０４ＳｃｈｗａｒｚＢＣｖａｎｄｅｎＨｏｖｅｎＲＳｃｈｗｅｎｄｅｎｗｅｉｎＩ．Ｄｉａｎｏｓｔｉｃｖａｌｕｅｏｆｔｈｅ［］，，ｇｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｉｎｄｅｘｉｎｈｏｒｓｅｓｗｉ化ｓｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎＪ］．［Ｔｈｅ－ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＪｏｕｒｎａｌ２０１２１９１：７２７８．，，１０５ＫｕｂｅｓＰＭｃＣａｆｆｅｒｔＤＭ．Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅａｎｄｉｎｔｅｓｔｉｎｌｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏ打．［，ａ阴］ｙＡｍｅｒｉ－ｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ２０００１０９：１５０１５８．，，口）８１ 山东大学硕±学位论文－１０巧ｕｔｃｈｅｓｏ打ＩＲＷｈｉｔｔｌｅＢＪＢｏｕｈｔｏｎＳｍｉｔｈＮＫ．Ｒｏｌｅｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｉｎ［Ｈ，，ｇ－ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｖａｓｃｕｌａｒｉｎｔｅｒｉｔｙｉｎｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｄａｍａｇｅｉｎｇｈｅＢｒｉｔｉＪｌ－ｔｒａｔＪａｎｏｕｒｎａｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏ１９９０１０１４８１８２０．（：５．［］ｇｙ，，）１０７Ｂ批ｒＭＫＡｌｏｉｓｉＪＤＰｉｃｋｅｒｉｎＳＰＹｅｏＣＪ．Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｍｏｄｕｌａｔｅｓｗａｔｅｒａｎｄ［］ｙ，，ｇ，ｅｌｅｃｔｒｏｌｔｅ化ａｎｓｏｒｔｉｎｔｈｅｉｌｅｕｍ．Ａｎｎａｌｓｏｆｓｕｒｅｒ１９９４２１９４：３８２．ｙｐ机ｇｙ，，（）１０８ＫｕｂｅｓＰ．Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｍｏｄｕｌａｔｅｓｅｉｔｈｅｌｉａｌｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｉｎｔｈｅｆｅｌｉｎｅｓｍａｌｌ［］ｐｐｙＡｍｅｒｉｃｓｏ－ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．ａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｉｏｌｇｙ１９９２２６２６巧１：Ｇ１１３８Ｇｌ１４２．阴ｙ，，（）ｒ－ｅ１０＾ＬｅｉｔａｏＲＦＢｒｉｔｏＧＡＧｉｄＲＢＢ化ａＮｅｔｏＭＢ目ｅｌｌａｕ班ｄａＥＡＳｉｌｖａＪＶｔａｌ．［，，，ｇ，ｇ，，Ｒｏ－ｌｅｏｆｉｎｄｕｅ化ｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅｐａｔｈｗａｙｏｎｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓｉｔｉｓｉｎｒｏｄｅｎｔｓＪ．ＢＭＣＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ２０１１１１１：９０．［］ｇｙ，，（）１１０］ＫｏｎＳＫＹｉｍＭＢＳｔａｄｔｍａ打ＥＲＣｈｏｃｋＰＢ．Ｐｅｒｏｘｎｉｔｒｉｔｅｄｉｓａｂｌｅｓ化ｅ［ｇ，，，ｙｔｍｅｃｈａｎ－ｔｔｙｒｏｓｉｎｅｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｉｓｍ：Ｌｙｍｈｏｃｙｔｅｓｅｄ扫ｃｙｒｏｓｉｎｅｐｐｐｔｒ－ｋｉｎａｓｅｆａｉｌｓ化ｈｏｓｈｏｒｌａｔｅｎｉａｔｅｄｃｄｃ２６２０ＮＨ２ｅｔｉｄｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｓｐｐｙ（）ｐｐ口］ｇ－ｏｆ化ｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ１９９６％８：３３７７３３８２？ｙ，，（）１１ＲａｄｉＲＢＪＳＢｅｃｋｍａｎＪＳＢｕｓｈＫＭＦｒｅｅｍａｎＢＡ．Ｐｅｒｏｘｎｉｔｒｉｔｅｏｘｉｄａｔｉｏ打ｏｆ［。，，，ｙｓｕｌｆｈｄｒｌｓ．ＴｈｅｃｔｏｔｏｘｉｃｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｓｕｅｒｏｘｉｄｅａｎｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅＪ．Ｊｏｕｒｎａｌｙｙｙｐｐ［］ｏｆｃａ－ＢｉｏｌｏｉｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９１２６６７：４２４４４２５０．ｇ，，（）Ｍａｔｒ－１１２ＧｏｗＡＪＤｕｒａｎＤｌｃｏｌｍＳＩｓｃｈｉｒｏｏｕｌｏｓＨ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｒｏｘｎｉｋｅ［］，，，ｐｐｙｒｉｎｄｕｃｅｄｏｔｅｉｎｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｎｔｒｏｓｉｎｅｈｏｓｈｏｒｌａｔｉｏｎａｎｄｄｅｒａｄａｔｉｏ打．ｐｙｐｐｙｇ阴ＦＥＥＳｅｅｒｓ－ｌｔｔ１９９６３８５１：６３６６．，，（）１１３ＴｈｏｒｅＤＳｔｒ－ＴｈｉｎｅｒＡＢｕｔｌｅｒＲ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｉｎｄｕｃｅｄｍｕｃｏｓｉｔｉｓ：ｅｒｏｌｅｏｆ［］ｐ，ｇ，ｐｙｍｕｃｉｎ化ｃｒｅｔｉｏｎａｎｄＫｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｅｎｔｅｒｉｃｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ口］？ＮｅｕｒｏＴｏｘ－ｉｃｏｌｏ２０１３３８：１０１１０５．ｇｙ，，－１１４ＣａｕａｎｏＥＦｏｌｉａｎｏＶ，Ａｃｒｌａｍｉｄｅａｎｄ５ｈｄｒｏｘｍｅｔｈｌｆｔｉｒｆｕｒａｌＡ［］ｐ，ｇｙｙｙｙｒｅｖｉｅｗｏｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，化ｘｉｃｉｔｙ，ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｉｎｆｏｏｄａｎｄｍｉｔｉｇａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｉ巧［Ｊ，］－ＬＷＴ－ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ２０１１４４：７％８１０．ｇｙ，，１１５ＷａｎｇＨＹｉａｎＨＹａｏＷＲ．ＭｅｌａｎｏｉｄｉｎｓｒｏｄｕｃｅｄｂｔｈｅＭａｉｌｌａｒｄｒｅａｃｔｉｏｎ：［］，Ｑ，ｐｙｍ－ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙ？ＦｏｏｄＣｈｅｉｓｔｒ，２０１１，１２８：５７３５８４．…ｙ１１ＤａｖｉｅｓＭＪＦｕＳＷＨＤｅａｎＲＴ．Ｓｔａｂｌｅｍａｒｋｅｒｓｏｆｏｘｉｄａｎｔｄａｍａｅ化［，ａｎ，巧，ｇｇｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｔｈｅｉｒａｌｉｃａｔｉｏ打ｉ。ｔｈｅｓｔｕｄｏｆｈｕｍａｎｄｉ化ａｓｅ？！？ＦＶｅｅ民ａ姐ｃａｌｐｐｐｙ［］Ｂ－ｉｏｌｏａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ１９９９，２７１１：１１５１１１６３？ｇｙ，（）８２ ？山东大学硕±学位论文－Ｍ［１１７］ＤａｌｌｅＤｏｎｎｅＩＡｌｄｉｎｉＧ，ＣａｒｉｎｉＭＣｏｌｏｍｂｏＲＲｏｓｓｉ民ｉｌｚａｎｉＡ．Ｐｒｏ化ｉｎ，，，，ｃａｒｂｏｎｙｌａｔｉｏｎ，ｃｅｌｌｕｌａｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄｄｉｓｅａｓｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ［Ｃｅ－ｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅ２００６１０２：３８９４０６．，，（）１１８］ＲｅｆｓａａｒｄＨＨ，ＴｓａｉＬ，ＳｔａｄｔｍａｎＥＲ．Ｍｏ出ｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｒｏｔｅｉｎｓｂｙ［ｇｐｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．ＰｗｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔ－ｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｏｆＳｃｉｅ打ｃｅｓ２０００９７：６１１６１６．ｙ，，口）［１１別ＴａｈｅｒｚａｄｅｈＭＪ，ＧｕｓｔａｆｓｓｏｎＬ，ＮｉｋｌａｓｓｏｎＣ，Ｌｉｄ細Ｇ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｅ游ｃｔｓｏｆ－ｍｅ５ｈｄｒｏｘｔｈｌｆｕｒｆｕｒａｌｏｎＳａｃｃｈａｒｏｍｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＪ．Ａｌｉｅｄｙｙｙｙ［］ｐｐ－ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ２０００５３：７０１７０８．ｇｙｇｙ，，－［１２０Ａｋｉｌｌｉｏ山ＨＧＭｏｏｌＢＡＧｏｋｍｅｎＶ．Ｄｅｒａｄａｔｉｏｎｏｆ５］ｇ，ｇ，ｇｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌｄｕｒｉｎｇｙｅａｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄＡｄｄｉｔｉｖｅｓ＆Ｃｏｎ－ｔａｍｉｎａｎｔｓ：ＰａｒｔＡ２０１１２８；１６２９１６３５．，，８３ 山东大学硕－上学位论文致谢时光飞逝，转眼研究生Ｈ年的科研生活即将结束，在接近Ｈ年的研究生生，活中我顺利完成了自己的课题研究，在此，我首先要感谢我的导师温学森教授。我的课题研究是在温老师的悉也指导下完成的。温老师学识渊博，为人谦虚，态度认真，教会我独立思考和发现科研问题，帮助，在科研方面思维灵活我顺利完成了课题研巧。我要感谢生药学研究所所有帮助过我的老师和同口师兄、师弟、师妹、师姐。感谢向兰老师、沈涛老师对我实验工作的指点帮助，感谢赵宇师兄给予实验器材的支持，感谢魏国栋师兄、朱宝萌师姐、孙玉静师姐、陈萍师姐、王培培师姐在科研、生活中给予我的帮助和支持，感谢同口刘治华、焦泽昭，师弟孙红祥、金天云、师妹恃成锦、李利芬、尹雪、贾小晴在实验中给予的帮助，感谢省中医孙萍老师给予实验仪器方面的支持帮助！最后，我要感谢我的家人、朋友，谢谢他们给予我生活上的照顾Ｗ及精神上的支持和鼓励！，使我愉快充实地度过Ｈ年研究生生活，谢谢你们８４ 山东大学硕±学位论文攻读硕±学位期间发表文章目录－－［１］ＨｕｉｆｅｎｓＧａｏ，Ｘｕｅｓｅ打ＷｅｎＣｏｒＪ．Ｘｉａｎ．Ｈｄｒｏｘｍｅｔｈｌｆｉｉｒｆｕｒａｌｉ打Ｃｈｉ打ｅｓｅｈｅｒｂａｌ，ｙｙｙｙｍｅｄ＊ｍ约ａｂｏｉｓ：ｉｆｏｒｍｔｉｏｎｅｓｅｎｃｅｌｉｓｍｂｉｏａｉｉｔｉｅａｎｄｉｍｌｉｃｔｉｏＪｉｃｎｅｔｓａｉｃｔｖｓａｎｓ．．，ｐ，ｐ［］，ＡｆｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｉｌｌｌｉｉｉｌｏｆＴｒａ出ｔｏｎａＣｏｍｅｍｅｎｔａｒａ打ｄＡｔｅｒｎａｔｖｅｍｅｄｃｎｅｓ２０１５１２２：，ｐｙ，，（）４３－５４．［２］ＳｕｎＹＪ，ＷｅｎＸＳ，ＺｈａｏＹ，ＳｈｅｎＴ，ＬｉｕＺ比ＧａｏＨＦ．ＯｉｕＳＢ，ＣｈｅｎＹ．Ｙｅａｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｍｆｎ－ｉｎｔｈｅｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆｓｔｅａｍｅｄｒｅｈａｎｎｉ过ｒｏｏｔｉｍｒｏｖｉｎｉｔｓｅｅｃｔｓｏｎａｌｌｏｘａｐｐｐｇｕｃ－ｉｎｄｅｄｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ．Ｊ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｎｏｈａｒｍａｃｏｌｏ２０１３１５０２：５１４５２０．Ｅｐｇｙ，，（）［］８５ 学位论文评阅及答辩情况表业技总体价姓名所在单位ｔ职务钟Ｉ？Ｘ（硕导）Ａ论Ｓ■名Ｉ■名Ａ畫阅人专业技术晏否悚再姓名所在单位二１置ＴＭ务（硕导）主席姚！赫做■如括化巧Ｍ１１４山《大掌巧骑＾答辩枚姚教辕Ｉ微瞻委向圭蔡控Ｉ菊学ｉｆｅＩ德金霞香袭德Ｉ药曾私Ｊ１员员答辩秘书浑诚答辩日期銳＇八ｆ織鸦ｇ声备注＂＂＂＂＂＂＂＂＾＾＾优秀为ＡＢ格为ＣＤ。；良好为；合；不合格为