GBT22941-2008-蜂蜜中林可霉素红霉素螺旋霉素替米考星泰乐霉素交沙霉素吉他霉素竹桃霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法.pdf 12页

中华人民共和国国家标准-2008GB/T2294⒈冖罗卸y蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定-串液相色谱联质谱法DeterΠlinationof】incomycin,erythromycin,spiramycin,tilInicosin,tylosin,josamycin,kitasamycin,oIeandomycinresiduesinhoneyˉˉLC-Ms-rˇΙsmeth。d20O8-1⒉31发布2009-05-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检总布中国国家标准化管理嫖垦发食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T2294⒈-2008目刂舀本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本标准主要起草人:曹彦忠、张艳梅、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T2294⒈-2008蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定-串液相色谱联质谱法1范围本标准规定了蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃-串霉素残留量液相色谱联质谱测定方法。本标准适用于蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定。本标准的方法检出限均为2.0uykg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文仵,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义-2004,ISo5725-1:1994,IDT)(GB/T6379.⒈GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.22004,IsO5725乇:1994,IDT)GWT6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—⒛08,ISo3696:1987,MOD)3原理蜂蜜中残留的林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素用D或三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液(pH=9)提取,过滤后,经OasisHLB固相萃取柱相当的固相萃取柱净化,用甲醇洗脱并蒸干,残渣用乙腈0.01mol/L乙酸铵溶液溶解,过0.2um滤膜后,样品溶液-串供液相色谱联质谱仪测定,内标法定量。4试剂和材料4.1水:GB/T6682,一级。4.2甲醇:色谱纯。4.3乙腈:色谱纯。4.4三羟甲基氨基甲烷(Tris):优级纯。4.5氯化钙(Cac12·2H20):优级纯。4.6乙酸铵:优级纯。l)OasisHI"B固相萃取柱是Watcrs公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T22941-—20084.7盐酸:优级纯。4.8淋洗液:甲醇溶液(2+3)。量取40mL甲醇(4.2)与60mL水混合。4.90.01m°l/L乙酸铵溶液:称取0.77g乙酸铵(4,6)溶于1000mL水中。4.100.2mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tos)缓冲溶液:称取12.0g三羟甲基氨基甲烷(4,4)和7.35g氯化钙(4.5),放入1000mL烧杯中,加人800mL水溶解,用盐酸(4.7)调至pH值为9.0,再用水定容至1000mL。4.11定容液:乙腈o.01mol/L乙酸铵溶液(3+17)。量取15mL乙腈(4.3)和85mL乙酸铵溶液(4.9)混合均匀。4.12标准物质:林可霉素(CAS:7179499)、红霉素(CAS:5931972△)、螺旋霉素(CAS:8025鹉1胡)、替米考星(CAS:10805O-540)、泰乐菌素(CAs:7461⒍552)、交沙霉素(CAS:16846-245)、吉他霉素(CAS:13922⒈8)、竹桃霉素(CAS:7060彳44),纯度≥99%。4.130.1mg/mL标准储备溶液:准确称取适量的各标准物质(在.12),用甲醇分别配成0.1mg/mL的标准储各溶液。该溶液在4℃保存。4.141,0ug/mL混合标准工作溶液:吸取各标准储各溶液(4.13)0.lmI"移至10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。该溶液在4℃保存。4.15内标物质:罗红霉素(CAS:8021483△)、克林霉素(CAS:2146239-5),纯度≥99%。4.160.1mymL罗红霉素、克林霉素内标储各溶液:准确称取适量的罗红霉素、克林霉素标准物质(4.15),用甲醇配成0.lmg/mL的内标储备溶液。该溶液在座℃保存。4.171.0ug/mL混合内标工作溶液:分别吸取罗红霉素和克林霉素内标储备溶液(4.16)0.1mL移至10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。该溶液在4℃保存。4.18基质标准工作溶液:吸取不同体积混合标准工作溶液(4.14)和20uL混合内标工作溶液(4.17),用空白样品提取液配成2.0ng/mL、5.Ong/mL、10.0n酽mL、zO.0ng/mL、50.0ng/mL不同浓度的基质标准工作溶液。当天配制。4.190asisHLB固相萃取柱或相当者:⒛0mg,6mL。使用前依次用5mL甲醇(4.2)和10mL水活化,保持柱体湿润。4.20滤膜:0.2um。5仪器5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2分析天平:感量0.1mg和0.Olg。5.3氮气浓缩仪。5.4液体混匀器。5,5贮液器:50mL。5.6真空泵:最大负压80kPa。5.7固相萃取装置。5.8吹干管:10mL。6试样的制备与保存6.1试样的制备对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀。对有结品的样品,在密闭情况下,置于不超过60℃的水浴中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶2食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T2294⒈-2008中,密封,并做上标记。6.2试样保存将试样于常温下保存。7测定步骤7.1提取称取2g试样,精确至0.01g。置于150mL三角瓶中,加入20uL混合内标工作溶液(4.17),加人25mLT⒒s缓冲溶液(4.10),于液体混匀器(5.4)上快速混匀1min,使试样完全溶解。7.2净化将塞有玻璃棉的玻璃贮液器(5.5)连到0asisHLB固相萃取柱(4.19)上,把样液倒人玻璃贮液器中,调节流速小于3mL/min,待样液完全流出后,依次用5mL水和5mL淋洗液(4.8)洗柱,弃去全部流出液。减压抽干20min,然后用5mL甲醇(4.2)洗脱,收集洗脱液于10mL吹干管(5.8)中。用氮气浓缩仪(5.3)于50℃吹干。准确加人1.0mL定容液(4.11)溶解残渣,过0.2um滤膜后,供液相色谱-串联质谱仪测定。按上述操作步骤,制备用于配制系列基质标准工作溶液的样品空白提取液。7.3测定条件7.3.1液相色谱参考条件a)色谱柱:AtlantisC1:,3um,150mm×2。lmm(内径)或相当者;b)流速:0.2mL/min;c)柱温:30℃;d)进样量:20uL;e)流动相:A:乙腈,B:0.1%甲酸溶液,C:甲醇。梯度洗脱条件见表l。表1梯度洗脱条件时间/minΛ/%B/%C/%0.0090.05.05.05.05.09~005.05.09~1090.05.05.017.o5.07.3,2质谱参考条件a)离子源:电喷雾离子源;b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应监测;d)电喷雾电压:5500V;e)雾化气压力:0.069MPa;f)气帘气压力:0.069MPa;g)辅助气流速:7L/min;h)离子源温度:450℃;i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2。食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T2294⒈-2008表2定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压定性离子对定量离子对碰撞气能量/去簇电压/化合物中文名称化合物英文名称(m/z)(乃n/z)VV407/12637林可霉素lincomycin407/126407/35924688/15842红霉素erythromycin688/158688/5座423734/15842螺旋霉素sp1ramycln734/158734/57628869/17462替米考星tilmicosin869/174869/13270916/17454泰乐菌素tylosin916/174916/14555425/1264553交沙霉素Josarnycln425/126425/3772553843/14248吉他霉素kitasamycin8衽3/142843/17衽50772/21542竹桃霉素oleandomycin772/215772/109707.4液相色谱-串联质谱测定7.4.1定性测定被测组分选择1个母离子,2个以上子离子,在相同的试验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时问偏差在±2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表3规定的范围,则可判定样品中存在对应的待测物。′表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差以%表示相对离子丰度ΚΚ)>5020(∶Κ<(5010<(K(20Κ≤10允许最大偏差±20±25±30±507.4.2定量测定在仪器的最佳工作条件下,用基质标准工作溶液(4.18)分别进样,以各标准溶液中被测组分峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标,以各标准溶液被测组分浓度与内标物浓度的比值为横坐标,绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液屮林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下,林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的参考保留时间见表4。林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图Λ.1。本方法的添加平均回收率数据参见附录B中的表B。1。表4林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉参考保留时间化合物名称保留时闸/min食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T2294⒈-2008表4(续)化合物名称保留时间/mln螺旋霉素替米考星9.56泰乐菌素10.04交沙霉素11.33吉他霉素10.62竹桃霉素9.727.5平行试验一按以上步骤,对同试样进行平行试验测定。7.6空白试验除不称取试样外,均按上述步骤进行。8结果计算蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定结果按式(1)计算:⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯x=虫×××××(1)券扦嚣⋯麦舟争式中:X——试样中被测物残留量,单位为微克每干克(ug/kg);cs——基质标准工作溶液中被测物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);A——试样溶液中被测物的色谱峰面积;As——基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积;ci——试样溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);c∮——基质标准工作溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);A“——基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积;A氵——试样溶液中内标物的色谱峰面积;V——样液最终定容体积,单位为毫升(mL);勿——试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度9.1一般规定本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。9.2重复性在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限",蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素添加浓度范围及重复性方程见表5。食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T22941—2008表5添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克化合物名称添加浓度范围重复性限"再现性限R林可霉素ˉ-o.65202.0"~50~0lgr:1.0510lgm-I.2650lgR==0.8656Ig勿红霉素2.0"~50.olgr:1.0335lgrz1.2251lgR:1.1108lgm-0.9907螺旋霉素2.0-ˉ50.olgr:0.8702lgml.10141gR:1.i028Igm-1.0160替米考星2.0-50.olgr-I.O934lgm1.349IlgR==0.96211g多n——0.8070泰乐菌素2.0"~50.0Igr:0.9707lgm-1.1463lgR:0.8157Igzr-0.680I交沙霉素2~0-50~olg"==0.93791g多nˉ-1.1770lgR:0.857Ilgm*0.7565吉他霉素2.0"~50~0lgr:1.02Q8lgm1.3386lgR==0.95981g〃-ˉo.9004竹桃霉素2.0冖ˇ50.0lg"==0.97571gmˉˉ1.2742lgR==0.88631g仞ˉ-0.58/t9注:9,为两次测定值的算术平均值。如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的添加浓度范围及再现性方程见表5。食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T22941-—2008附录A(资料性附录)标准物质多反应监测(MRM)色谱图林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图见图A。1。响扛搬g响1·se51·4e5‘立9~ooe4应值800C4值l700c4红霉素10c56~00c480c45~00e44~00c460c4300c440c4200c4100c42~Oc4o00oo121416`/min810121416`/min25c4畔捱啕应1sc4应20c衽值14c4值12c41.5c衽替米考星1~Oc48000010c460000‘00005000020000o.ooo810121416∥246810121416`/minmin10~04⒌οc狁l丬8~Oc4响⒋咱ll亻⒋ο70c.4应c⒌应⒊60c4值ll丬⒊ο勺乏c5c0c5cο50c45⒉40c4⒉{l丬30c4⒈2~Oc4⒈Ll丬c⒍10c4οοL⒍o0121416〃246810121‘16〃minmin1:C呐14C4响2C4应1ˉ应:∶:∶饣乏10c4值12e8000010c吉他霉素600008.Oc46~0c4400004~Oc4200002~0c4oooo2468I0121416〃16`/minmin图A.1标准物质多反应监测(MRM)色谱图食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T22941-—2008附录B(资料性附录)回收率本方法中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素添加浓度及平均回收率的试验数据见表B.l。表B.1林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素添加浓度及平均回收率的试验数据化合物名称裼孓力Ⅱ冫皮￡窆/(ug/kg)平均回收率/%2.0100.05.099.4林可霉素10.095.750.094.92.085~75.086.2红霉素10.087.750.090.82.083.95.083.7螺旋霉素10.082.850.087.72.084.95.087.6替米考星10.090.450.089.32.086.45.o84.4泰乐菌素10.086.750.088.82.080.65.086.0交沙霉素10.077.750084.02.079.35083.4吉他霉素10079.350~083~08食品伙伴网http://www.foodmate.net GB/T22941-—2008表B,1(续)化合物名称闳民力口冫农￡芰/(llg/kg)平均回收率/%2.083.05.083.8竹桃霉素10.084.650.083.0食品伙伴网http://www.foodmate.net ∞OOΝ丨亠寸OΝΝ卜臼0中华人民共和国国家标准蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定-串液相色谱联质谱法GB/T22941—2008中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址www.spC.net.cn电讶弓:685239/1668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本880×12301/16印张1字数17千字—一2009年4月4月第版2009年第次印刷ⅡⅢⅡⅢⅡ洲书号:155066·136404定价16.00元Ⅱ刚Ⅱ刖Ⅱ刚ⅡⅢ如有印装差错由本社发行中心调换ⅡⅢⅡ刚硼版权专有侵权必究GB/T2纠卜举报电话:(010)68533533打印日期:⒛09年4月28H食品伙伴网http://www.foodmate.net