一氧化氮的生物效应及其作用机制的研究——1998年诺贝尔生理学或医学奖工作介绍及研究进展 (1) 8页

万方数据生理型堂连屋塑!笙筮塑鲞筮!翅·诺贝尔奖工作回顾·编者按从本期开始，我们将在“诺贝尔奖工作回顾”一栏中，介绍近十年来诺贝尔生理学或医学奖获奖工作及重要进展情况，目的是为有兴趣的读者提供相关知识。希望有助于推动教学和科学研究工作。一氧化氮的生物效应及其作用机制的研究——1998年诺贝尔生理学或医学奖工作介绍及研究进展杨学礼‘冯娟”(北京大学医学部生理学与病理生理学系，北京100083)20世纪70年代以前，人们普遍认为，一氧化氮(nitricoxide，NO)只是大气中的一种污染物。随后20多年的研究，人们对NO的认识发生了根本的变化。特别是1998年的诺贝尔生理学或医学奖授予了美国的三位药理学家RobertF．Furchgott、LouisJ．Ignarro和FetidMurad(图1)，表彰他们在“一氧化氮作为心血管系统的信号分子”上的发现。这引起了生命科学领域对NO的生物效应及其作用机制的高度关注。NO可以由多种类型的细胞产生，透过生物膜，发挥广泛的生物作用。深入的研究证实，NO是心血管系统中至关重要的信号分子。它由动脉内皮细胞产生，扩散至血管平滑肌，引起动脉舒张，以此来调节血流分配和血压。除此之外，NO也参与神经细胞间的信号转导、免疫系统的炎症反应等等。NO性质活泼，10秒之内即可转变为硝酸盐或亚硝酸盐类物质而失活。如此结构简单、稳定性差的气体分子却在体内发挥着至关重要的作用!本文将重点介绍1998年三位诺贝尔生理学或医学奖得主，在发现内源性NO的生物效应及其对心血管系统的作用机制中所作出的卓越贡献，并简要介绍近几年关于NO的临床应用及其研究进展。图11998年诺贝尔生理学或医学奖获奖者一、内皮依赖性血管舒张现象的发现和内皮来源的舒张因子的早期研究Furchgott长期从事血管活性药物与受体相互作用方面的研究。1978年，他和同事在动脉离体标本的研究中意外发现，乙酰胆碱(aeetylcholine，ACh)、卡巴胆碱(earbaehol，Cch)等M受体激动剂没有像往常一样引起动脉血管收缩，而是引起了动脉血管舒张。这一“意外的发现”引起了他们的注意uJ。研究人员仔细分析了这些实验的条件，发现前后实验所用的动脉样本有所不同。虽然都来自家兔胸主动脉，但引起动脉舒张的标本是动脉环(trans—versering)，而此前的实验一直采用动脉条(helicalstrip)。在样本制作过程中，动脉条的内膜表面常会被严重磨损；而动脉环则不会⋯。为了进一步了解动脉内膜在其中的作用，实验者在动脉条的制作过程中，尽量保持动脉内膜的完整。结果表明，ACh也能引起动脉条的舒张，而不是收缩。银染显微镜形态学的观察也证明，在动脉条制作过程中的机械摩擦，会清除动脉内膜表面的内皮细胞。如果用胶原酶处理样本，以化学方法彻底清除大动脉的内皮细胞后，ACh完全不能引发动脉血管的舒张心J。应用家兔其它部位的大动脉或其它动物的动脉样本，只要内皮细胞存在，ACh都将引起血管舒张。由此可见，ACh引起的血管舒张作用，是以血管内皮的完整为前提的。这种血管舒张现象被称为“内皮依赖性血管舒张”(theendothelium—de·pendentrelaxation)。(--)内皮来源的舒张因子的早期研究为了解释新发现的内皮依赖性血管舒张，Furchgott提出：ACh首先作用于血管内皮细胞的M受体，引起内皮细胞释放一种物质，该物质扩散至内皮下的平滑肌细胞，引起血管舒张。Furchgott设计了“三明治实验”(sandwichex一(一)内皮依赖性血管舒张现象的发现RF．’北京大学医学部公共卫生学院本科学生一通讯作者 万方数据periment)(图2)，验证了上述假说n】。其操作方法大致为：如图2的左图所示，使用清除了内皮细胞的动脉条为动脉标本，将其与压力记录仪相连，应用去甲肾上腺素(noradrenaline，NA)使动脉标本产生预收缩，收缩幅度由压力记录仪描记。当NA使动脉标本收缩到一定程度后加入ACh，由于动脉条没有内皮细胞，ACh会使动脉条的收缩幅度进一步增大。图2的右图是将左图中动脉条的内膜面，对接到另一个保留了完好内皮细胞的动脉条上，使动脉条的平滑肌组织在两边，中间夹有一层内皮细胞，组成“三明治模型”。保留有完好内皮的动脉条，经过预处理已不能再收缩或舒张，排除了其张力变化对无内皮动脉条的影响。再重复左图的步骤，于左图相同的实验条件下，ACh的刺激引发了无内皮动脉条的舒张。这说明，在内皮细胞存在时，ACh能引起血管舒张。而且证明在ACh的作用下，内皮细胞产生了可扩散的物质，作用于无内皮动脉条的平滑肌，引发血管舒张。这种物质后来被称为内皮来源的舒张因子，简称EDRF(endothelium—derivedrelaxingfac-tor)o图2“三明治实验”示意图二、确定EDRF的化学结构是NO首先，一系列研究结果提示EDRF和NO生物学性质相似。EDRF能够激活鸟苷酸环化酶(guany-lylcyclase，Gc)，引起血管平滑肌中环磷酸鸟苷(cy—clicGMP，cGMP)水平的升高，产生内皮依赖性血管舒张效应。而且EDRF激活GC的过程是亚铁血红素依赖的过程，该过程可以被亚甲基兰(methyleneblue，MB)、氧基血红蛋白(oxyhemoglobin)和氧基肌红蛋白(oxymyoglobin)抑制旧’4J。这些特点与NO引起血管舒张的过程相同。其次，利用灌流-生物鉴定法(perfusion—bioassayprocedures)，证明EDRF和NO的化学性质十分相似，如EDRF性质不稳定，半衰期约是3—5秒，可以被超氧阴离子(Of)灭活，超氧化物歧化酶(superox．idedismutase，SOD)能使EDRF的半衰期延长到30垒堡型堂进屋塑!生笠塑鲞筮!翅一40秒Ⅲ】。最后，实验证明，EDRF和NO激活GC的过程都具有亚铁血红素依赖性。EDRF与血红蛋白(he—moglobin，Hb)相互作用前，Hb的最大吸收峰在433nm。EDRF和Hb相互作用后，反应产物的最大吸收峰移动到406nm。NO和Hb反应时也同样具有上述变化垆’61。以上实验结果从不同侧面证明，EDRF就是NO。1986年夏季，在美国明尼苏达州的Rochester举行研讨会，Ignarro和Furchgott独立报告了他们各自的结果，都证明EDRF的化学结构就是NO。两个独立的研究得出相同结果，使这一结论更为人信服。当时Murad也提出，EDRF可能不仅仅是NO一种物质，也可以包括能释放NO的复合物"J。三、No的合成及其信号转导的分子机制(一)一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)的发现及NO的合成体内NO的合成需要NOS的催化。人体内有三种不同形式的NOS：内皮型NOS(endothelialNOS，eNOS)，存在于多种类型的细胞中，负责正常血管内皮中NO的产生；神经型NOS(neuronalNOS，nNOS)，是分布于神经系统的特殊形式的eNOS；诱导型NOS(inducibleNOS，iNOS)，分布于巨噬细胞和内皮细胞，在免疫应答时才被激活LsJ。在氧的参与下，NOS作为催化剂，催化L．精氨酸转化为L-羟基精氨酸，最终转化为NO和L一胍氨酸，从而实现内源性NO的合成。eNOS和nNOS平时可在组织内持续地、低水平表达，而且这种表达是钙离子依赖的[9’l01。当内皮细胞受到某些神经递质(如：ACh)或机械刺激时，eNOS和nNOS的表达上调，加快NO的合成和释放¨¨。与eNOS和nNOS不同，iNOS的表达不依赖钙离子。而且，只有当体内出现致炎因子或内毒素时[7，9]，或是机体处于低氧甚至休克状态时[9】，iNOS才大量表达，合成大量的NO。(二)NO激活GC的分子机制GC是结合有亚铁血红素的含铁蛋白质¨21。Ignarro的实验证明：只有NO与GC中的亚铁血红素结合后，GC才能被激活，促进GTP转变为cGMP[12，13】，说明在NO激活GC的过程中，亚铁血红素是必需物质。在空间位置上，亚铁血红素与GC的结合位点邻近GC的催化位点(catalyticsite，CS)。如图3左所示，此种空间构型妨碍了GC与底物GTP的结合。因此，GC在没有与NO结合前会处于失活状态。当NO与GC冲的亚铁血红素共价结合后，生成亚硝酰 万方数据生堡型堂蕉屋呈盟!生筮!!鲞筮!翅基-亚铁复合物(nitrosyl-heinecomplex)，造成亚铁血红素的结构发生变化，形成新的立体构型(如图3右所示)，GC转变为活化状态。这种亚硝酰基一亚铁复合物的构型变化，更好地暴露了GC的催化位点，增强了GC与底物GTP的亲和力，使催化反应的速率提高近400倍，大量GrIT转变为cGMP，使cGMP水平升高，引发下游的信号级联反应¨41(图3)。圈3NO激活GC的不惹图(Heine：亚铁血红素)(三)L一精氨酸-NO·cGMP信号转导通路内皮细胞中的L一精氨酸在NOS的催化下，经两步反应转化为L．胍氨酸和NO。NO激活GC，引起血管平滑肌中cGMP水平升高。cGMP进而激活cGMP依赖的蛋白激酶(proteinkinase)，引起相关蛋白磷酸化，最终使得细胞内钙离子水平降低，肌球蛋白轻链去磷酸化，导致平滑肌舒张¨5|。整个反应过程中，环化核苷磷酸二酯酶(cyclicnucleotidephosphodiester-鹊e)能水解合成的cGMP，来维持细胞内GTP和cGMP的代谢平衡¨o(图4)。r⋯⋯⋯一：：⋯⋯⋯磊虿⋯一i；；盯，一参s⋯MeGMPlI一即41．rb·uP●IolP———_一：：／蛋譬酶lI●／一。’|L爱葛N。f辜血管内皮血管平滑肌图4L-精氨酸-NO—eGMP信号转导通路四、NO的生物学作用及其临床应用随着1998年诺贝尔生理学或医学奖的颁布，科研工作者对NO开展了大量的研究，取得了很大进展。下面仅就NO的生理作用、与疾病的关系和药物开发等方面予以简要介绍。(一)NO的生理作用NO参与维持循环系统的稳态平衡。eNOS催化合成NO，通过cGMP介导的内皮依赖性血管舒张作用，调节血管张力。血管张力的变化可以有效地调节组织的血流。因此，NO对维持微循环的灌注具有十分重要的作用。另外，NO能清除细胞内的氧自由基，发挥细胞保护作用[9】，并且通过抑制血管平滑肌增殖，抑制血小板的聚集，抑制粘附分子和内皮素的表达n鲥等途径来维持血管的稳态平衡。NO具有抑制血小板聚集的作用。首先，人类的血小板中富含GC，NO通过激活GC，由cGMP介导的途径发挥抗血小板聚集的效应[17|。其次，P选择素(P—selectin)是血小板表面的一种细胞粘附分子，NO可以降低血小板表面P．selectin的表达，抑制血小板聚集。此外，NO也能抑制vW因子(yonwil．1ebrandfactor)与血小板表面GPIIb／IIIa(glycopro-teinIIb／IIIa)的相互作用，进而抑制活化的血小板与纤维蛋白原的结合，最终抑制血小板聚集【11|。NO间接参与体内的糖代谢。胰岛素是具有降血糖作用的激素，其信号转导机制中，胰岛素通过磷脂酰肌醇3一激酶(phosphatidylinosit013-kinase)途径，既能直接促进骨骼肌对血液中葡萄糖的摄取和利用，又能促进血管内皮中eNOS表达继而合成NO。NO能使骨骼肌的血管舒张，增加骨骼肌的血流量，间接促进骨骼肌对葡萄糖的摄取和利用¨8|。在免疫系统，NO通过影响白细胞的游走和聚集，间接调控炎症反应。巨噬细胞可以产生大量NO，利用其细胞毒效应，参与人体的非特异性免疫反应[10|。另外，NO作为信号分子，能够影响线粒体超极化(mitochondrialhyperpolarization，MHP)，进而调控T淋巴细胞的活化和凋亡¨91。在中枢神经系统，NO作为神经递质参与记忆的形成；在外周神经系统，部分神经通过NO依赖的机制调节呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统的血管扩张‘10]。总之，NO参与众多生理功能的调节作用，成为机体正常生理功能的重要调节物质。(二)NO与心血管疾病的关系血管内皮功能紊乱，导致NO的合成障碍，是心血管系统中很多疾病发生发展的关键一步。内皮功能紊乱(endothelialdysfunction)，是指内皮依赖性血管舒张缺陷，血管内皮活性不足，并发血管内皮抗凝、抗炎功能障碍的一种综合征。L．精氨酸不足，NOS抑制物的存在(如：非对称性二甲基精氨酸)，血管内膜增厚致NO扩散受限，NO合成反应中的辅助因子缺乏(如：四氢生物喋呤)，都直接或间接地造成NO的合成不足或者扩散障碍，NO的生物利用度下降，成为内皮功能紊乱发生的机理。心力衰竭、高血压、动脉粥样硬化、血脂异常等心血管疾病的发生，都与血管内皮功帕一席莶帕勘绺l|彩骜～簪 万方数据能紊乱有密切的关系[B】。心力衰竭时，病人的氧化应激状态使iNOS的表达增加，合成过多的NO，产生含过氧亚硝基的代谢产物，引起心肌收缩功能障碍呻】，说明NO是心力衰竭病情发展的重要因素之一。另一方面，有文献报道，口服L一精氨酸6个月的心衰患者，血浆中内皮素浓度降低且心衰的症状得到明显缓解。说明提高体内NO的浓度，能够通过cGMP途径抑制内皮素的产生，进而抑制内皮素收缩血管的作用，缓解心衰的症状【l6J。由于至今还无法确定NO在心衰过程中的详细作用机制，因此NO的表达对心衰患者的利弊仍待探讨。急性冠状动脉综合征(AcuteCoronarySyn—drome，ACS)是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂(rup-ture)或糜烂(erosion)，继发血栓形成为病理基础的一组临床综合征。在动脉粥样硬化的斑块及血栓形成的研究中，血小板来源的NO减少，导致血小板聚集和活化，是重要的致病因素之一¨1|。在高血压病发生发展过程中，NO也有重要作用。高血压病人，血管紧张素II(angiotensinII)的产生增多、活性增强，诱导血管内皮产生的超氧阴离子、氧自由基增加，加快NO合成反应中辅助因子——四氢生物喋呤的消耗，进而抑制NO的产生。动物实验研究结果表明，在高血压大鼠模型体内，NO的合成减少，NOS的抑制物——非对称性二甲基精氨酸(asymmetricaldimethylarginine，ADMA)含量增加，提示高血压伴随有内皮功能紊乱，但目前尚无法确定这些现象与高血压病之间的因果关系悼J。总之，在心衰、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病的发生发展中，NO起有重要作用。但心血管系统疾病的发生发展非常复杂，影响因素众多，要彻底阐明NO在心血管系统的生物效应，明确NO与各种疾病发生发展的因果关系，尚需进一步研究。(三)NO与其他疾病的关系NO生物利用度的受损与胰岛素抵抗和糖尿病的发生有密切关系。一项调查以840名绝经后体健的妇女为研究对象，在6年的随访过程中发现，其中102名妇女患II型糖尿病，与没有患糖尿病的妇女相比，其内皮依赖性血管舒张现象明显减少。因为氧化应激状态和血管炎症是高血糖和糖尿病的重要特征，故此推论：氧化应激造成的超氧阴离子水平增高，加速了NO的氧化失活；NADPH(NO合成中传递电子流的辅酶)氧化酶的增加，使NO合成减少，造成II型糖尿病患者NO的生物利用度下降，加重了胰岛素抵抗【l¨。除生理叠堂迸屋!塑§生筮!!鲞筮!翅氧化应激状态致NO生物利用度下降之外，糖基化终末产物(advancedglycationendproducts，AGEs)和氨基己糖的生物合成过多，也是产生胰岛素抵抗的重要因素¨“。在血液循环系统，NO的过量表达可以破坏循环系统的稳态平衡，参与败血症性休克的病程进展。炎症因子(IL．1、IL-6、rINF、INF一1)和内毒素，导致体内iNOS表达上调，NO合成增加。过量的NO引起血管过度舒张，降低了血管张力，不能维持一定的外周阻力，使血压下降，同时血液渗出增加，最终导致败血症性休克归J。(四)围绕NO的药物研发以上介绍表明，NO既是维持生理条件下稳态平衡的重要物质，又是很多疾病发病机制中的关键因素。在目前研究较为深入的心血管疾病的发病机制中，多数疾病的发生发展都与内皮功能紊乱、NO相对不足或NO的生物利用度下降有关。因此与NO相关的药物研发，多是以外源性补充NO为研究方向。早在19世纪，硝酸甘油和其他有机硝酸酯类药物就用于治疗心绞痛，但当时并不知其外源性补充NO的药理机制。直到20世纪70年代，随着对NO研究的逐步深入，科研工作者才揭示了硝酸甘油治疗心绞痛的药理机制。有机硝酸酯类(包括硝酸甘油)通过与硫醇类物质结合，形成亚硝基硫醇，亚硝基硫醇再分解释放出NO，NO激活鸟苷酸环化酶，从而发挥舒张血管的作用¨引。“直接型NO供体”药物与有机硝酸酯的作用机制不同。它们是一组含亚硝基或亚硝酰基的药物，无需在体内代谢即可自发释放NO，发挥生物活性。硝普钠即属此类药物，但硝普钠释放NO是需氧过程，会受氧分压的限制，长期用药易使血管细胞产生耐受。新研制的直接型NO供体药物，比如S一亚硝基硫醇(S-nitrosothiols)克服了硝普钠的上述缺点，小规模临床研究说明，它有可能对多种心血管疾病的治疗有效ⅢJ。与NO供体药物不同，磷酸二酯酶(phosphodi-esterase，PDE)抑制剂，通过抑制PDE，减少cGMP降解，使组织内cGMP水平升高，血管平滑肌舒张，相当于增加了NO的生物活性。Sildenafil，是临床上常用的一种选择性PDE的抑制剂。另外，一些营养保健类药物，含有L一精氨酸及具有抗氧化作用的维生素，也可能有促进体内NO生成的作用¨6|。总之，L一精氨酸一NO—cGMP信号通路上的任何一环，包括催化反应中的底物、催化酶、辅助因子，当 万方数据然也包括NO本身，都可能成为新药开发的靶点，给心血管疾病的干预和治疗带来希望，相关药物的开发潜力巨大。此外，前文述及iNOS合成大量的NO可以导致败血症休克归]，说明体内高浓度的NO对机体有时会产生不利作用。在这种情况下，通常需要NOS抑制剂来抑制NO的过量产生，而且这种抑制剂需要有组织特异性，以免造成全身性副作用。遗憾的是，临床试验发现，目前的NOS抑制剂或者根本无效，或者药物的副作用很大[16|。所以，此类药物要真正应用于临床，还有待更加深入的研究。五、结语综上所述，距1998年诺贝尔生理学或医学奖的颁布，已9年余，这期间发表的有关NO的生物效应及作用机制的文章达6万余篇。NO对血管舒张作用的早期研究，无疑是今天深入认识NO生物效应的基础。生物医学的各个领域，包括心血管功能、神经传导、组织修复、癌症、感染和机体的免疫功能等等，很难找到哪一个领域和NO没有关系¨6|。正如诺贝尔委员会(theNobelCommittee)的StenLindahl教授在当年颁奖词中所说：“有关NO作为心血管系统信号分子的发现，不仅仅揭示了硝酸甘油等血管舒张药的作用机制，而且将为诸多疾病的诊断和治疗开辟广阔的前景”。参考文献lFurchgouRF．Endothelium—derivedrelaxingfactor：discov-ery，earlystudies，andidentificationasnitricoxide．BiosciRep，1999，19：235—251．2FurchgottRF，ZawadzkiJV．Theobligatoryroleofendothe-lialceilsintherelaxationofarterialsmoothmusclebyact}-tylcholine．Nature，1980，288：373～376．3GmetterCA，GruetterDY，LyonJE，eta1．Relationshipbe—tweencychcguanosine3’：5’-monophosphateformationandrelaxationofcoronaryarterialsmoothmusclebyglyceryltrinitrate，nitropmsside，nitriteandnitricoxide：effectsofmethyleneblueandmethemoglobin．JPharmacolExpTher，1981，219：181—186．4I印arroLJ，HarbisonRG，WoodKS，eta1．ActivationofpurifiedsolubleguanyfatecycLasebyendothelium-derivedrelaxingfactorfromintrapulmonaryarteryandvein：stimula-tionbyacetylchohne，bradykininandarachidonicacid．JPharmacolExpTher，1986，237：893—900．5IgnarroLI，BugaGM，WoodKS，etal。Endothelium—de—rivedrelaxingfactorproducedandreleasedfromarteryandveinisnitricoxide．ProcNatlAcadSciUSA。1987。84：·95·9265—9269．6IgnarmLJ，ByrmRE，BugaGM，eta1．Endothelium--de-rivedrelaxingfactorfrompulmonaryarteryandveinposses-sespharmacologicandchemicalpropertiesidenticaltothoseofnitricoxideradical．CircRes。1987。61：866～879．7MuradF．Discoveryofsomeofthebiologicaleffectsofnitric商deanditsroleincellsignaling．BiosciRep，1999，19：133—154．8CengelA，SahinarslanA．Nitricoxideandcardiovascularsystem．AnadoluKardiyolDerg，2006，6：364—368．9LevyRM，PrinceJM，BiHiarTR．Nitricoxide：aclinicalprimer．CritCareMed。2005，33：S492一s495．10GarciaX，SteinF．Nitricoxide．Sew_inPediatrInfectDis，2006．17：55—57．1RaijL．Nitrico)【ideinthepathogenesisofcardiacdisease．JClinHypertens(Greenwich)，2006，8：30—39．12IgnarroLJ，DegnanJN，BarieosWH，eta1．Activationofpurifiedguanylatecyclasebynitricoxiderequiresheme．Comparisonofheine．deficient。heine-reconstitutedandheine—containingformsofsolubleenzymefrombovinelung．BieehimBiophysActa。1982，718：49—59．13IgnarroLJ，WoodKS，BallotB，eta1．GuanyLatecyclasefmmbovinelung．Evidencethatenzymeactivationbyphe’nylhydrazineismediatedbyiron··phenylhemopmteincorn··plexes．JBiolChem，1984，259：5923～5931．14Ignarro【J．Nitric伪dde：auniqueendogenoussignalingmoleculeinvascularbiology．BioseiRep，1999，19：51—71．15MuradF．ShattuckLecture．NitricoxideandcychcGMPincellsignalinganddrugdevelopment．NEnglJMed，2006，355：2003—2011．16Yetik．AnacakG．CatravasJD．Nitricoxideandtheendo-thelium：historyandimpactoncardiovasculardisease．VasculPharmacol。2006，45：268—276．17MellionBT，IgnarroLJ，OhlsteinEH，eta1．EvidencefortheinhibitoryroleofgIlanosine3：5’-monophosphateinADP·inducedhumanpLateletaggregationinthepresenceofnitricoxideandrelatedvaaodiLators．Blood，1981。57：946—955．18KimJA，MontagnaniM，KohKK，eta1．ReciprocalreLa·tionshipsbetweeninsulinresistanceandendothelial由s·function：molecularandpathophysiologicalmechanisms．Circulation．2006．113：1888—1904．19NagyG，KonczA，FernandezD，eta1．Nitricoxide，mito-chondrialhyperpolarization，andTcellactivation．FreeRadicBiolMed．2007．42：1625—1631．20IgnarroLJ，Napo]iC，l_oscalzoJ．Nitricoxidedonorsandcardiovascularagentsmodulatingthebioactivityofnitricox-ide：anoverview，CircRes。2002，90：21—28． 一氧化氮的生物效应及其作用机制的研究——1998年诺贝尔生理学或医学奖工作介绍及研究进展作者：杨学礼，冯娟作者单位：北京大学医学部生理学与病理生理学系,北京,100083刊名：生理科学进展英文刊名：PROGRESSINPHYSIOLOGICALSCIENCES年，卷(期)：2008,39(1)被引用次数：9次参考文献(20条)1.IgnarroLJ;NapoliC;LoscalzoJNitricoxidedonorsandcardiovascularagentsmodulatingthebioactivityofnitricox-ide:anoverview[外文期刊]20022.FurchgottRF;ZawadzkiJVTheobligatoryroleofendothe-lialcellsintherelaxationofarterialsmoothmusclebyace-tylcholine[外文期刊]19803.NagyG;KonczA;FernandezDNitricoxide,mito-chondrialhyperpolarization,andTcellactivation[外文期刊]2007(11)4.IgnarroLJ;ByrnsBE;BugaGMEndothelium-de-rivedrelaxingfactorfrompulmonaryarteryandveinposses-sespharmacologicandchemicalpropertiesidenticaltothoseofnitricoxideradical19875.IgnarroLJ;BugaGM;WoodKSEndothelium-de-rivedrelaxingfactorproducedandreleasedfromarteryandveinisnitricoxide[外文期刊]19876.IgnarroLJ;HarbisonRG;WoodKSActivationofpurifiedsolubleguanylatecyclasebyendothelium-derivedrelaxingfactorfromintrapulmonaryarteryandvein:stimula-tionbyacetylcholine,bradykininandarachidonicacid19867.GruetterCA;GruetterDY;LyonJERelationshipbe-tweencyclicguanosine3":5"-monophosphateformationandrelaxationofcoronaryarterialsmoothmusclebyglyceryltrinitrate,nitroprasside,nitriteandnitricoxide:effectsofmethyleneblueandmethemoglobin19818.RaijLNitricoxideinthepathogenesisofcardiacdisease20069.GarciaX;SteinFNitricoxide[外文期刊]2006(2)10.FurchgottRFEndothelium-derivedrelaxingfactor:discov-ery,earlystudies,andidentificationasnitricoxide[外文期刊]1999(4)11.LevyRM;PrinceJM;BilliarTRNitricoxide:aclinicalprimer[外文期刊]200512.CengelA;SahinarslanANitricoxideandcardiovascularsystem200613.MuradFDiscoveryofsomeofthebiologicaleffectsofnitricoxideanditsroleincellsignaling[外文期刊]1999(3)14.KimJA;MontagnaniM;KohKKReciprocalrela-tionshipsbetweeninsulinresistanceandendothelialdys-function:molecularandpathophysiologicalmechanisms[外文期刊]200615.MellionBT;IgnarroLJ;OhlsteinEHEvidencefortheinhibitoryroleofguanosine3",5"-monophosphateinADP-inducedhumanplateletaggregationinthepresenceofnitricoxideandrelatedvasodilators198116.Yetik-AnacakG;CatravasJDNitricoxideandtheendo-thelium:historyandimpactoncardiovascular 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