编织状蚕丝—胶原海绵支架对前交叉韧带重建和骨关节炎预防长期效果的研究 62页

分类号：：单位代码密级学号：“一“冲人讀硕士专业学位论文临床医学）中文论文题目：编织状蚕丝一胶原海锦支架对前交叉韧带重建和骨关节炎预防长期效果的研究英文论文题目：申请人姓名：胡叶君指导教师：徐侃专业学位类别：骨科专业学位领域：骨科所在学院：医学院论文提交日期年月 编织状蚕丝一胶原海绵支架对前交又韧带重建和骨关节炎预防长期效果的研究论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人评阅人评阅人评阅人评阅人答辩委员会主席委员委员委员委员委员答辩日期月？日 浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人巳经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均巳在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签々签判期日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权倮留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书）签字日期签字日期：；年竹月』日 浙江大学硕士学位论文致谢致谢岁月匆匆，转逝七年，尚未参透竺公主持风尚，转移国运之奥义，也未邂逅紫金志趣相投，聪明贤惠之佳人，便要作揖道别。所谓“七年之痒”，人的细胞七年会完成一次整体的新陈代谢。对我而言，是磨砺青春、健全人格、挥洒激情的七年，也是承受师恩、拓展眼界、打造技能的七年。非常感谢母校浙江大学医学院给予我如此优越的平台，让我有充分的时间和精力去探究我的人生，我的梦想。回首过往，当感谢之人，需感激之情，岂墨笔所能尽述。谨借此文向所有关心和支持过我的前辈和挚友表达最真诚的谢意，传递最美好的祝愿。首先，衷心感谢我的导师徐侃主任在我硕士两年的淳淳教诲和悉心关怀，导师渊博的学识才干，精湛的学术造诣，严谨的治学风格让我受益匪浅，在学习、工作和日常生活中无微不至的关怀使我终身难忘，谨此向我的导师致以衷心的谢意和诚挚的敬意！衷心感谢陈维善教授、李万里老师、钱胜君师兄、赵腾飞师兄在临床上的指导与关怀照顾，让我最终选择了骨科学这个专业。感谢燕海潮老师一直默默的支持。衷心感谢欧阳宏伟教授、沈炜亮师兄、陈晓师兄、茵梓师姐等在科研上的耐心指导和生活上的热情指引。让我对人生有了全新认知。特别感谢我的弟兄们冉季升、郑泽峰、朱汀、乐辉辉、颜瑞俊在我们最艰难的时候执手前行。感谢王俊娟博士、刘欢欢博士、胡嘉洁博士、张璨博士、吴兵兵博士、杨龙博士在实验上的指导与帮助。感谢王亚菲博士、吴岩博士、张晓磊博士、兪冬升博士、任浩博士、张显著博士、戴俊硕士、蔡红霞硕士、熊思硕士等在实验条件上的帮助。感谢林俊鑫、朱滢洁、谢煜彬等本科生的帮助。感谢浙江大学基础医学院科研中心平台的老师们，医学院动物房王冲老师， 浙江大学硕士学位论文致谢谢鸣老师等的帮助和实验动物们所作出的贡献和牺牲以及环境与资源学院电镜室的黎老师等人在实验中给我提供的帮助。感谢伴随七年成长的仇婷婷、王炜芳、刘博、王黎芳等辅导员在生活中的勉励；胡珉豪、叶清煌、施杰、王威、应汉宁、陈力等室友的照顾与包容；以及薛星河、姚徐明、胡莹、柯婷、徐宇晴、王扬懿、董美均等拉丁队队友，刘茂科、叶栋、李鹏飞等双节棍棍友在训练中的相互督促与进步。衷心感谢父母的养育之恩，给予我广阔的发展空间和无尽的精神关怀，我的成功离不开您们的支持。也十分感谢我们浙二科教科各位老师三年来的帮助。最后感谢参与论文评审和答辩的各位老师，你们给了我一个对自己进行总结的机会，使我更加明确未来的道路。但凡过去，皆为序曲，我将在今后的学习工作中“不负使命、不辱师门、不忘初心“让我和我身边的人大放光彩。七年春秋，不过长河一瞬，然却从此将我历史改写，追忆往昔一路走来，所所遇之人皆为良人，所思之人尽天涯咫尺。再次感谢各位前辈与挚友，祝你们一生家庭幸福、生活安康！胡叶君年月 浙江大学硕士学位论文中文摘要编织状蚕丝一肢原海绵支架对前交叉韧带重建和骨关节炎预防长期效果的研究浙江大学医学院外科学（骨外科）硕士研究生胡叶君导师徐侃主任医师中文摘要背景和目的随着我国国民对品质生活和健康体魄需求的提升，运动健身巳逐渐成为日常生活中的重要组成部分，国人参加体育锻炼和竞技运动的数量明显增加，运动损伤也随之增加。近十年来，作为关节腔内维持膝关节稳定和功能运动的重要韧带，前交叉初带（损伤后的组织学重建和生物力学功能恢复越来越受到骨科医生的极大关注。由于相对缺乏血供，种子细胞不足以及关节腔恶劣的液态环境，再生能力非常有限，因此其损伤后的功能性修复在临床治疗中仍然面临巨大挑战。当前，自体移植、同种异体移植一直是修复的金标准。然而，这些手术重建再生技术有不同的弊端，例如供体部位并发症、疾病传播、免疫排斥、较差整合性和较高的复发率。近年来，人工韧带的出现为提高等软组织的修复质量带来了全新的希望。巳经面市的商业化产品大多为不可降解的合成材料。他们虽然克服自体和异体移植的弊端，在短期内产生令人满意的效果，然而长期随访发现依然会引起包括移植物破裂，骨关节炎发生，慢性滑膜炎和异物反应等不良事件。近来，基于蚕丝的生物材料由于其良好的生物相容性和较大的力学强度被广泛应用于各种软组织的修复。有研究显示单纯捆绑型蚕丝支架用于修复取得 浙江大学硕士学位论文中文摘要了一定效果，我们先前运用“内部空间预占”理论原创性的设计了一种编织状蚕丝胶原海绵支架用于皮下肌腱韧带再生取得了满意效果。本研究将进一步探索其用于关节腔恶劣液态环境中的前交叉韧带重建的长期效果，并评估其对骨关节炎的预防效果。方法和结果、编织状蚕丝胶原海绵材料的制备和性能检测：复合蚕丝胶原材料的制备是通过在模具中加入胶原溶液和编织状蚕丝，经过冷冻真空干燥法和真空干热交联法。最后制得的复合材料通过力学测试仪检测其力学性能。、运用兔间充质干细胞（进行体外相容性实验：将蚕丝胶原复合材料与共培养，、、天之后，运用扫描电镜（观察材料表面细胞形态，、、、、天之后，通过细胞计数试剂盒方法检测细胞的增殖情况并评估材料的体外相容性。、单纯蚕丝组和蚕丝胶原组分别与共培养，、天之后，通过转录因子（检测型胶原（、黏蛋白（、双糖链蛋白多糖（、核心蛋白多糖（并完成统计分析，评估实验组对成腱分化的影响。、前交叉韧带（重建模型复合支架体内移植评估修复能力：将实验组蚕丝胶原复合支架和对照组单纯蚕丝支架分别植入建立的兔前交叉韧带重建模型。术后个月、个月、个月分别进行俎织学染色及评分、三色染色、腱系因子表迖检测、型胶原（、型胶原（免疫组化以及偏正光评估腱性部位修复情况。并对个月和个月进行胶原含量检测。同时运用染色和对腱骨交界处进行评估。、骨关节炎（预防的疗效评估：通过对关节面进行墨汁染色、染色组织学评分、半月板染色以及关节线评估进程。结果显示蚕丝胶原支架相比单纯蚕丝支架拥有更好的力学性能，体外细胞共培养有效促进了的粘附、增殖和腱性因子的表迖，体内移植个月蚕丝胶 浙江大学硕士学位论文中文摘要原支架組显著提高了迁移和粘附的梭形细胞，并于术后个月发现再生组织可表达更多的腱系因子和表现出更自然的韧带微结构表型，进一步在术后个月，编织状蚕丝胶原海绵支架呈现出具有更成熟的韧带结构和相对较好的骨腱愈合。同时关节腔内蚕丝胶原支架相比皮下降解更慢，而且在术后个月可以看到蚕丝胶原支架组有效得保护了关节软骨面以及关节间隙维持在较理想宽度。结论本研究显示编织状蚕丝一胶原海绵支架可以促进功能再生并在远期有效预防骨关节炎的发生，提示其可以作为一种功能性生物支架用于的重建，为其临床转化奠定了实验基础。关键词编织状蚕丝一胶原海绵支架；前交叉韧带；再生；长期效果；骨关节炎 浙江大学硕士学位论文英文摘要 浙江大学硕士学位论文英文摘要，，， 浙江大学硕士学位论文英文摘要 浙江大学硕士学位论文缩略词缩略词前交叉韧带二聚糖骨髓间充质干细胞细胞计数试剂盒型胶原型胶原核心蛋白多糖迖尔伯克（氏）改良伊格尔氏培养基细胞外基质胎牛血清苏木精伊红染色新西兰大白兔骨性关节炎磷酸盐缓冲盐水聚合酶链式反应扫描电镜番红染色透射电镜粘蛋白腱调蛋白 中文摘要英文摘要缩略词目录正文绪论材料与方法实验结果讨论结论参考文献综述个人简历 浙江大学硕士学位论文正文绪论编织状蚕丝一胺原海绵支架对前交叉辆带重建和骨关节炎预防长期效果的研究浙江大学医学院外科学（骨外科）硕士研究生胡叶君导师徐侃主任医师绪论前交叉初带（在维持膝关节稳定和功能运动中扮演重要角色⑴。鉴于其生物力学功能，在超负荷剧烈运动中极易受损。美国每年有近例损伤报告，有限的自愈能力为临床治疗带来巨大挑战。目前外科治疗手段包括：自体肌腱转移和异体、异种肌腱移植，虽获一定疗效，尚存不足，如供体发病，初带松池，疾病传染和免疫排斥等，。更重要的是，据报道有的损伤患者会继发骨关节炎（，，很多治疗并不能延缓这一进程，相反会加速进展，。因此更有效的修复技术亟待开发。人工铜带是近年来兴起的具有潜力的新选择，目前市面巳有相关商品，如和等。这些产品研发于上世纪年代到年代，采用的是非降解合成材料。尽管人工初带克服了自体、异体移植的缺陷，短期内表现出较满意的效果，然而长期随访发现，依然存在替代体破裂，，慢性滑膜炎和异物反应等远期并发症，。所以研发一种完美的生物材料用于重建仍在不断进展中。近年来，基于蚕丝的生物材料较好生物相容性和优异的力学性能使其在软组织工程中得到广泛应用。前期研究中，通过研发一种蚕丝胶原复合支架用于治 浙江大学硕士学位论文正文绪论疗小鼠跟腱，兔内侧副初带和肩袖肌腱缺损，获得了较满意的效果。编织状蚕丝支架联合胶原提升了修复肌腱初带的胶原沉积、力学性能，并形成了更粗大的胶原纤维。然而其对的修复效果如何尚未知。尽管顿带与肌腱组织本质相似，但处于关节腔恶劣液态环境，缺乏血供和种子细胞，使其治疗更为棘手。因此使用编织状蚕丝复合胶原海绵支架用于重建的效果有待进一步研究。在年，及其同事使用蚕丝支架复合间充质干细胞用于体内再生，周后显示出相比单纯蚕丝支架更好的修复效果。这提示单纯蚕丝支架用于重建尚需进一步改进。除此之外，通过生物材料重建对关节软骨的远期影响从未评价过。因此，本研究旨对编织状蚕丝复合胶原海绵支架用于再生和骨关节炎预防的长期效果进行研究。内容包括三个方面：检测蚕丝胶原支架的性能；研究蚕丝胶原支架对的作用；构建重建模型进行组织工程支架修复，评估其在重建中的效果。 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法材料与方法实验试剂与仪器材料和试剂（如无特殊说明均为产品）抗体（抗体（试剂盒猪肌腱杭州三墩农贸市场）胃蛋白酶（乙酸（上海生工）蚕丝（杭州凯喜雅公司）胶原含量测定试剂盒（南京建成生物工程公司）细胞培养试刻：细胞培养基维生素胎牛血清；胰酶；混合胶原酶；抗生素：链霉素、青霉素；包埋试剂（上海生工）：甲醛、无水乙醇、二甲苯、中性树脂、石蜡、染料、三色染液、锇酸、戊二醛、丙酮、透射电镜组织块包埋剂。实验仪器及材料、、离心管；细胞培养皿（公司）。低温冻干机（；二氧化碳培养箱；生物安全柜；透射电子显微镜；医用净化工作台（苏州医疗器械七厂）；数码相机（，离心机（德国公司）；仪；照相机（，倒置显微镜、低温冷冻离心机（，影像系统（。实验动物新西兰大白兔购自浙江大学实验动物中心，雌，十五只，体重—千 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法克左右常规手术器材，无菌手术间、手术台由浙江大学动物中心提供。相关溶液的配置完全培养液胎牛血清，青霉素，链霉素，溶剂为低糖。培养液粉末，溶解于三蒸水中，定容前加并调节值，定容至过滤除菌用的微孔滤器，°保存。溶液将和用双蒸水充分溶解后，定容至。高压蒸汽榜灭菌达分钟。保存于°。伊红染液先将伊红染料粉末容于双蒸饱水中，用坡璃棒揽拌至伊红完全溶解后再加入蒸個水继续挽匀，液体呈深红色。加入乙醇并揽句，此时液体将由深红色转变成荧光绿色。再加入冰醋酸并揽勾，密封室温保存备用。三色染液丽春红品红溶液：丽春红粉末，酸性品红粉末，冰醋酸。淡绿溶液：淡绿粉末冰醋酸双蒸水。苯胺蓝水溶液：苯胺蓝粉末，双蒸水。醇溶性伊红将伊红溶解于乙醇溶液中，檢拌均匀。染液融于双蒸水中，即得溶液；番红，融于双蒸水中，即得溶液。戊二酸溶液戊二酸溶液用溶液稀释十倍使用。 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法细胞冻存液血清培养基，含。实验方法番丝股原海绵复合支架制作胶原提取：本实验采用酸抽提方法从猪肌腱中提取胶原：新鲜猪肌腱去除脂肪、肌肉、筋膜等，灭菌三蒸水反复清洗；低温状态下，手术刀将猪肌键削为薄碎片，然后用剪刀剪碎；称取约肌腱，加入含的为的的缓冲液浸泡置°冰箱内小时，每隔小时振摇一次；蒸馏水反复冲洗肌腱加入的乙酸和胃蛋白酶胃蛋白酶肌腱，°冰箱内充分消化，放置，定时震荡；低温离心（°，转分，分钟，弃沉淀，上清加入盐析，使终浓度，°过夜；低温离心（°，转分，分钟，弃上清，得型胶原沉淀进一步溶于的乙酸，于透析袋中蒸饱水透析天，勤换水，最终所得溶液即为型胶原水溶液；透析后的胶原溶液于°条件下倮存。网状蚕丝支架制作网状蚕丝支架是针织经编模式，针织机丝纤维纱线（丝纱）编织。平面网状支架密度达每厘来针，孔的大小则是平方毫来；网状支架抽提丝胶，在碳酸钠水溶液中和°之间分钟，中间要求换液三次；支架物理性能检测：扫描电子显微镜（检测蚕丝脱胶程度，力学检 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法测材料力学性能。复合胶原支架的制备用离心管配的胶原溶液，配完后离心（除气泡；取网状蚕丝支架，剪成宽度，长的条状；于亚克力玻璃模具底部铺一层胶原，冻半小时左右，然后铺上蚕丝拉一定张力），再铺一层胶原，°冷冻。锡猪纸包住，°冻小时，真空冷冻干燥机中冻干；取出置于真空干燥箱中干热交联，°—天，三天，°—天。电镜扫描在支架表面喷金后进行电镜扫描，观察蚕丝脱胶前后表面形态。力学测试在力学测试之前，样本（放于中室温静置使其充分平衡。力学测试是用来评价材料的拉伸性能，首先将材料固定于力学测试仪，的拉力固定器上，调整方向使标本竖直向下。当拉伸到材料断裂时停止拉伸，此时的应力为最大拉伸力（。兔的分离和培养于无菌条件下股骨抽取骨髓；离心弃上清，加入培养基重悬，种植于培养皿上，于°，条件下培养；小时候全量换液，后每隔天换一次液。待姑壁细胞融合度达以上，传代；多次传代，反复贴壁纯化。第代的细胞用于相关的实验。细胞在支架上种植和培养支架被剪成大小，酒精浸泡分钟，酒精处理小时， 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法清洗，紫外灯下照射半小时，置于°培养箱小时。随后将换成含胎牛血清的过夜脬育，取出置于新培养皿。另取接近长满的直径培养皿的细胞，胰酶消化，下离心分钟。取出，弃上清，吸的低糖培养基混句细胞，加到支架上支架。°培养箱中培养，天换液，培养天，培养期间分别于第天，第天检测细胞增殖和肌腱相关基因表达检测，表面细胞形态观察。实时焚光定量用在上运行。包括个循环放大模板，引物在°退火。每个把基因的相对表达水平用的方法来计算。引物对的增效率先进行证实，以与内参基因增效率差别以内则用于定量比较。所有的引物用来设计，引物总结在表格中。每个至少用个不同的样本；代表性结果显示为乾基因标准化后的表达水平。误差线反应了技术性重复后均值的变异度。反应体系（：上游引物下游引物模板浓度反应条件：。。“提取取约组织或细胞，放到管中，加入德碎； 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法轻轻震荡加氯仿，剧烈摇动约室温分钟；°离心，分钟；吸上层无色水相，将其移入另一管中（约；加等体积异丙醇，分钟；离心，分钟。在管底部可见微量沉淀；弃上清，再規，控干，加乙醇。离心，分钟；弃上清，再鬼，控干，室温干燥分钟；沉淀溶于水，测浓度；计算其浓度与纯度，°保存或逆转录。逆转录合成反应体系（：°分钟°分钟°分钟°分钟，离心°保存。引物设计：查询得到兔相关基因序列号，使用引物设计软件加拿大 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法公司设计各基因的特异引物，并委托公司合成。引物合成情况见下表。表兔定量引物（，’细胞增殖检测在每孔加入的检测试剂，于°、湿度培养箱中温育小时；前交叉顿带损伤模型动物分组只新西兰大白免左右腿对照，随机分为两组；实验组：前交叉顿带重建处植入蚕丝胶原支架；对照组：前交叉顿带重建处植入单纯蚕丝支架。 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法前交叉初带缺损动物模型的建立术前水合氯酸体重腹腔注射麻醉，成功后，将兔子仰卧在手术台上，四肢固定。备皮，常规消毒，铺无菌洞中。取膝关节前内侧切口，切开皮肤、皮下筋膜，暴露前交叉物带，切断初带。按照上述分组情况，分别植入不同的支架图。严密缝合肌肉筋膜组织，缝合皮肤切口，简单包扎。分笼饲养，自由活动，标准动物祠料噴养，洁净饮水，室温保持于，术后抗生素处理，肌注青霉素万单位，每天一次，连续天。观察指标术后每日观察动物饮食情况，活动，步态，伤口愈合情况，有无感染征象等。修复大体观察术后个月，个月和个月，处死兔子，取材修复的前交叉軔带标本，做力学测试的标本要包括股骨和胜骨。大体观察缺损修复情况：包括缺损修复程度，表面平整度，颜色改变与用围边界是否清楚，有无裂隙。组织学检测标本的制备取标本，润洗，用福尔马林固定小时，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋盒中纵向石蜡包埋。厚连续切片，染色、三色染色。梯度酒精脱水干燥，二曱苯透明，中性树股封固。染色取材组织块，经固定脱水后，常规石蜡包埋，切片；切片烤片后常规用二曱苯脱蜡，经逐级乙醇水化：二甲苯（分钟—二曱苯（分钟—乙醇分钟—的乙醇分钟—乙醇分钟—乙醇分钟—蒸馏水洗分钟；苏木素染色分钟，单蒸水冲洗；盐酸乙醇分化秒，镜检染色情况； 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法自来水浸泡分钟；伊红液染色秒；常规脱水，透明，封片：乙醇（分钟—乙醇（分钟—乙醇（分钟—乙醇（分钟—二甲苯酒精（分钟二甲苯（分钟—二甲苯（分钟—中性树脂封片。三色染色法切片常规脱蜡至水单蒸水洗；氏苏木素液染核分钟；自来水洗分钟；盐酸分化秒；单蒸水洗三次；丽春红一品红溶液洗分钟；单蒸水水洗；碟销酸分化直到各种成分被染清晰分钟；苯胺蓝水溶液染分钟；醋酸水溶液洗分钟；水洗分钟；常规脱水透明和封片。染色；自来水洗，吸去多余水分；酷酸中分色，水洗；水洗伊红染色；常规组织学切片封片。 浙江大学硕士学位论文；正文材料与方法肢原含量测定样本前处理精确称取组织湿重放入离心管中，冻干天，准确加入水解液，混匀。加盖后沸水浴水解分钟；调节值至左右；将各离心管流水冷却后各管加指示刻滴，摇匈；各管准确加入调甲液混勻，此时溶液应为红色；用的加样器吸取调乙液向各管内逐滴小心加入，每滴加入后要混句，直至液体中指示剂的颜色变为黄绿色。此时值在左右；加入单蒸水至混勾；取稀释的水解液加少量活性炭（约左右，以上清液离心后潜清无色为准），混匀，转分离心分钟，小心取上清作为检测样本。样本检测表操作流程空白管标准管测定管蒸德水（标准应用液（检测液（试劑一混句，静置分钟试刻二（混句，静置分钟试剂三（混句，。水浴分钟，冷却后，转分离心分钟，取上清加入到孔扳里，处，单蒸水调零，酶标仪测各管液体吸光度。 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法计算公式经脯氨酸含量（湿重）测定管的吸光度空白管的吸光度）标准管的吸光度空白管的吸光度）标准管含量（水解液总体积（组织湿重（免疫组化常规脱蜡和水化擦干，置于湿盒上；用双氧水灭活内源性过氧化物酶；单蒸水洗次，次；抗原修复，胃蛋白酶滴加覆盖，°烘箱单蒸水洗次，次；加封闭液，室温封闭稀释一抗。加入一抗，覆盖标本，置于湿盒中°过夜；双蒸水洗次，次；稀释二抗。加入二抗，覆盖标本，室温，显色；常规树脂封片，镜下观察。透射电镜检测胶原纤维傲观结构标本用冲洗后，加入事先配制好的戊二酸固定冲洗分钟次；饿酸固定冲洗分钟次；醋酸袖水溶液染色分钟次；使用，酒精依次脱水，各分钟次；酒精脱水，各分钟次；丙酮脱水分钟次；渗透，将无水两酮与包埋剂体积混合，渗透组织块，震荡纯包埋剖渗透组织块，震荡 浙江大学硕士学位论文正文材料与方法纯包埋刻包埋，然后置于烘箱内聚合，°；°；°；修组织块边界和超薄切片，约将超薄切片染色；醋酸铀染色分钟；枸橼酸银染色分钟；电镜观察：透射电镜，。腱骨结合处使用小动物观察腱骨结合处的修复情况。关节样本回收后，多聚甲酷固定小时，小动物影像系统（扫描，由上海舜百生物公司提供。从每组的样本中随机选取一个样本的逐层扫描厚度，的扫描电压对两组样本进行扫描。获取扫描断层图像。关节间隙线投影膝关节线正位片（使用体内成像。统计学分析定量结果采用单因素方差分析，数值以士表示，以表示差异有统计学意义。 浙江大学硕士学位论文正文实验结果实验结果支架特性通过扫描电镜观察脱胶前后蚕丝可以发现脱胶处理后，蚕丝表面丝胶蛋白被除去，裸露出丝素蛋白，使得其表面更加光滑（图随后通过光学显微镜和扫描电镜比较观察单纯蚕丝和蚕丝胶原海绵支架，显示后者表面和内部均有胶原填充（图，。为了检测支架力学性能，将支架卷起，两端固定，从而形成表型，也便于移植（图，用拉力压缩系统测试了其力学，发现脱胶前后和复合胶原后的蚕丝力学上无显著性差异（图。■上重、，产■巧‘“⋯、广、■■‘‘身产■：，、图蚕丝肢原支架形态特征，（脱胶前后蚕丝透射电镜结构，（光镜下单纯蚕丝和蚕丝胶原支架结构，（大体形态 浙江大学硕士学位论文正文实验结果—‘—图脱胶前后及蚕丝肢原支架力学特性在蚕丝胶原支架上的生长形态及肌腱相关基因表达兔子种植两种材料上均显示出较好生物相容性，种植在蚕丝胶原支架上的细胞，呈梭形，广分布；而种植在单纯蚕丝支架上的细胞，则呈星型，稀分布（图。实验检测显示天时蚕丝胶原支架相比单纯蛋丝支架细胞数量更多，说明蚕丝胶原支架更益于细胞增殖（图。通过检测比较了培养在两种支架上的在第天和第天型胶原、双糖链蛋白多糖、站蛋白（和核心蛋白聚糖（的基因转录水平（图。数据显示肌腱相关基因在蚕丝胶原支架上的细胞表达水平普遍高于单纯蚕丝上细胞，且在第天时，枯蛋白（表达有显著性升高，到第天，双糖链蛋白多糖表达有显著性升高。这些数据提示体内移植蚕丝胶原支架可能会促进修复过程中的细胞外基质沉积。 浙江大学硕士学位论文正文实验结果議』一紛纖；容—，】■■■图两种材料对细胞增殖分化的影响体内前交叉初带修复再生前交叉顿带的大体形态和组织学和免疫组化表现动物实验中我们未检测到免疫并发症进一步验证了支架较好的生物相容性。术后个月，大体形态显示蚕丝胶原支架表面覆盖了一层再生纤维组织，已无法看清蚕丝纤维。相反，单纯蛋丝上显示出较少的纤维组织长入（图。染色显示蚕丝胶原实验组含有更多成纤维细胞，更多新生血管，而炎症细胞未见明显增加（图，同时染色显示有跟多细胞外基质沉积，然而对照单纯蚕丝组仅有很少的细胞外基质沉积（图。提示蚕丝胶原实验组一定程度上提升了组织的修复。术后个月的实验组大体形态显示出有光泽的白色外观，组织充实，类似于自然，表现出强劲的再生趋势。相反对照组中的新生组织 浙江大学硕士学位论文正文实验结果相对较松软纤细（图。组织学进一步显示实验组丰富的细胞外基质沉积及对照组稀疏，淡染的修复组织（图。随后在长期时间点个月，可以观察到新生组织在两组均有出现，而在实验组则表现得更加完整，对照单纯蚕丝组的新长入组织主要聚集在支架的下半部分，再生效果类似于实验组两周的水平（图。随后从组织学染色进一步证实了实验组具有更加丰富和有序的细胞外基质沉积相比对照组（图。术后个月和个月的组织学评分也表明与对照组相比蚕丝胶原实验组再生制带更接近于正常前交叉带生理结构（图。另外，从免疫组化结果来看，蚕丝胶原实验组呈现出更多更密的胶原，胶原沉积，而单纯蚕丝对照组仅少量初带基质（图，。論議琴隨：：臂鐵、威图术后月两组大体，组织学及成纤维细胞淋巴细胞比例，血管数量情况 浙江大学硕士学位论文正文实验结果隊腿气制、：二，、”衡，七々⋯？⋯”乂丄￡、“■廣办、處■如九磷輸職口穩■■■图术后、月两组大体，组织学情况■■？：—：：：！”，‘’》，’遂、⋯了：今二翁十』”，”上《七产？人⋯，’、—⋯，一“、二”“口“七‘、““：？‘：图术后、、月两组免疫组化情况 浙江大学硕士学位论文正文实验结果胶原含量本研究采用胶原测定试剂盒来确定植入支架里所储存的胶原数量，结果显示在植入各时间点，蚕丝胶原实验组相比单纯蚕丝对照组平均胶原含量高，特别是远期结果有显著性差异（图。■丨丨畏厂丄一另—。⋯——」⋯■」图术后、、月两组胶原含量情况胶原纤维形成评估胶原纤维的形成是再生前交叉带重建成熟的标志，因此采用偏正光（图和透射电镜（图捡测了胶原纤维的形成。从偏正光看，在单纯蚕丝对照组即使在个月依然仅有较少的，不均匀纤维可以观察到（图相反蚕丝胶原实验组只要个月便可检测到胶原纤维（图并在个月呈现出更加连续和透明（图，而个月时则形态上更加成熟（图基于连续性和颜色）。同时，采用透射电镜观察，可以发现，实验组新生胶原纤维横截面较对照组更加致密和粗大（图且从纵截面看实验组新生胶原纤维排列也更紧密和有序（图。 浙江大学硕士学位论文正文实验结果■幽■■图术后、、月两组偏正光结果。■適醒■圓》【“：“￡■幽■■■图术后、月两组胶原形成情况 浙江大学硕士学位论文正文实验结果腱骨界面修复除了再生之外，我们进一步检测了编织状蚕丝胶原海绵支架对腱骨界面修复的效果。在术后个月，实验组表现出较致密组织形成将支架和骨组织连接起来（图，而对照组新生组织较稀疏（图。术后个月和个月，可以观察到实验组具有典型的纤维软骨层和化软骨层形成（图，提示腱骨交界愈合较满意。相反，对照组则无典型的腱骨止点过渡结构形成（图。进一步从分析，实验组在骨道可以看到更多明显的增强信号，提示蚕丝胶原支架促进了隨道内部更多新生矿化组织形成（图然而对照单纯蚕丝组的骨隧道内未见明显矿化组织形成（图。：’、，图术后、、月两组腱骨界面的组织学形态及月结果 浙江大学硕士学位论文正文实验结果骨关节炎预防损伤常常会引起远期软骨退行性病变，继而导致并进一步增加社会经济负担。故对的有效治疗不仅仅要提升腱性和腱骨界面修复效果，有效的软骨保护，避免软骨层侵烛，延缓进程也是重建成功的重要指标，决定了其远期疗效。软骨保护支架植入术后个月，个月，个月取兔子膝关节软骨进行大体观察，显示术后个月即可观察到对照组内侧股骨賺内侧关节面存在明显的侵蚀现象，而实验组相应部位关节表面则无明显裂痕。并且在术后个月和个月，对照组其关节表面墨汁染色强阳性，表明严重的磨损，而实验组磨损较轻微（图。组织学结果进一步观察，术后个月的实验组关节保持平滑和规则的表面结构；而对照组与大体形态一致，表现出明显的裂纹，且在术后个月和个月，表现为更广泛的软骨表面结构紊乱和软骨基质成分缺失（组织淡染），相对应时期的实验组则表现为软骨表面微小的粗链变化（图。根据评分，蚕丝胶原组的评分结果在每个时间点均明显低于单纯蚕丝组的评分，且有统计学差异（图提示实验组延缓了退行性改变。腻务考■■■■■■■■■■■■■■■■■■■￡■■■■■■丨函术后、月两组关节面大体及组织学情况 浙江大学硕士学位论文正文实验结果关节退行性改变为了进一步评价和验证蚕丝胶原支架对于膝关节退行性病变的延缓作用，我们在术后个月和个月分别采用影像学分析，从影像学结果来看，蚕丝胶原实验组有效维持了正常关节间隙和较光整的关节表面，而对照组可见关节间隙相对变窄，以及关节表面一定程度的骨赘形成（图。提示蚕丝胶原支架实验组相比单纯蚕丝组有效的延缓了进程。图术后、月两组关节间隙改变 浙江大学硕士学位论文正文讨论讨论尽管到目前为止巳有大量的关于修复和再生的治疗策略，然而在临床实践中依然面临巨大挑战。本研究基于前期实验结果，编织状蚕丝胶原海绵支架在修复其他肌肉骨豁缺损中表现出令人鼓舞的成果，包括跟腱】、内侧副耕带和肩袖损伤。进一步探索该支架对于的修复效力，是否适用于这一更加具有挑战的临床肌肉骨路损伤。从结果可以看到编织状蚕丝胶原海绵支架不但提升了和腱骨结合处的再生，同时也在短期和长期修复中起到了阻碍软骨退变和进展的作用，从而保证了一个整体强健和功能稳定的关节系统。因此，证明了编织状蚕丝胶原海绵支架可以作为一种用于初带组织工程和临床治疗损伤的极具潜力的生物材料。蚕丝和胶原是被认可的材料，并广泛应用与组织工程策略蚕丝生物材料优越的力学性能可以在再生过程中提供较高的张力，弥补修复早期新生组织力学不足的缺陷，，】。胶原生物材料，尽管力学性能较差，然而作为细胞外基质的主要成分，其完美的生物特性十分有益于细胞的枯附，生长，增殖和分化。在本研究中，丝素通过针织制作成一种具有强劲力学特性的编织网，胶原复合在蚕丝网上，以便提升表面积和促进细胞牲附，从而营造一种益于组织再生的修复环境。当体内移植后，蚕丝胶原复合支架显著提升了再生，明显优于单纯蚕丝支架。肤原基质经过加工形成徼孔海绵外形，通过复合在编织状蚕丝支架上，有效维持了蚕丝支架的内部空间】。这可以提供一个合适的微环境促进细胞增殖和新生组织长入，并可以诱导股骨碟和腔骨平台的间充质干细胞、关节腔面上的滑膜细胞和成纤维细胞向支架迁移。蚕丝和胶原纤维其广阔的表面积促进了这些迁移细胞的枯附和增殖，随后经历分化并产生细胞外基质，最后利于的再生。除此之外，我们发现到在蚕丝胶原支架组新生组织上具有更多的血管，这可能也促进了更好的再生，。值得关注的是本研究中我们使用的蚕丝支架在术后个月依然近乎完整。我们的前期实验报道蚕丝材料用 浙江大学硕士学位论文正文讨论于内侧副初带修复术后年并未出现显著的降解，并有效支持了内侧副顿带的再生。对于大多数组织工程的应用来说，植入支架的降解速率与新生组织的生长速率相匹配将十分有益于组织再生。然而，对于受力组织如初带和肌腱，要经常受到力学刺激，强劲和长久的力学支持是非常必要的。因此本研究中蚕丝材料在长时间点表现出的降解性能或许反而有益于这类组织的再生。在以前及其同事的研究中，他们使用蚕丝网状支架复合间充质干细胞体外培养形成组织工程铜带，进而应用于重建兔前交叉初带，以及随后猪的大动物实验】，均显示蚕丝间充质干细胞复合组织工程初带提升了的修复与再生；而单纯蚕丝支架则表现出较差的修复效能。由于关节腔内有限的传统的组织工程治疗方法常常采用细胞生物材料体外培养形成组织工程初带以提升体内组织再生能力。而这种二次移植的细胞往往表现出增殖能力低下和非定向分化，并受供者免疫相容性限制】。相对于前期的及其同事，采用外源性修复的研究，本研究通过进一步将蚕丝复合胶原基质，从而营造更有益体内细胞迀移，柏附和生长的微环境，分别表现为蚕丝材料长期稳定提供了强劲的力学支持，胶原材料优异的生物相容性提升了细胞枯附和增殖。另外，唯一的针织结构蚕丝支架复合胶原海绵提供了“内部空间预”，促进了更多细胞枯附和新生血管形成。细胞迁移和血管形成在物带修复早期阶段很有必要。因此，蚕丝胶原支架提供了有益的修复微环境，大幅度提升了细胞材料相互作用，有效促进了的修复和再生。等】报道将胶原添加到纤维蛋白血小板支架中可以有效抵御纤维蛋白血小板被纤溶酶降解。从而形成临时支架支持基质沉积。这可能可以用于解释本研究中观察到的胶原蚕丝支架相比单纯蚕丝支架更有益于的再生。本研究和及其同事，的研究获得了类似的在结构和功能上的修复效果。因此采用外源性细胞联合细胞外基质复合体可以被认为是一种简单和具有前景的未来组织工程研究和临床转化的策略。另一方面，不论是修复的远期效果还是关节软骨面的组织改变以及损伤相关进程的评估均未在及其同事之前的研究中涉及到。在本研究中，我们特别关注于这两方面。观察时间点为术后个月，个月和个月，分别代 浙江大学硕士学位论文正文讨论表了支架植入受损部位进行修复的近期效果和远期效果。重点关注关节表面情况和关机间隙，包括关节间隙宽度和骨锥形成情况，这些部位常在损伤后出现退变，并加速了进程。从实验结果可以观察到，编织状蚕丝胶原海绵支架促进了宿主和腱骨结合处的再生，并且在长时间点并无明显的关节退变发生。且术后个月，再生的特性，包括大体形态，细胞表型，胞外基质沉积和胶原微结构均近乎类似天然。更重要的是，编织状蚕丝胶原海绵支架保护了关节软骨，避免了远期损坏，也维持了正常关节间隙，延缓了进程。这些数据表明通过促进有效再生，增加关节稳定性和减少关节软骨破坏，编织状蚕丝胶原海绵支架阻碍了进程。因此本研究为编织状蚕丝胶原海绵文架作为一种极具潜力的生物支架用于再生提供了多角度的数据和强有力的证据。然而，本研究依然存在一些不足。首先，兔重建模型并不能完全模拟人体生理环境。其次，缺乏修复的力学评估。未来的研究将进一步在大动物模型上对蚕丝胶原支架的功能进行评估。 浙江大学硕士学位论文正文结论结论总的来说，本研究沿用了实验室前期基础，将编织状蚕丝胶原海绵支架用于修复再生，不但提升了的修复与再生，也保护了关节软骨防止退变，延缓了进程。本研究再次强调了“内部空间预占”支架的重要性，营造了一种有益于内源性细胞的修复环境，同时提出了不依赖于外源性细胞的组织工程治疗策略。这些结果为编织状蚕丝胶原海绵支架的临床转化奠定了实验基础。也为未来韦刃带组织工程研究和临床实践提供了具有一定价值的建议 浙江大学硕士学位论文正文参考文献参考文献，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文正文参考文献，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文正文参考文献，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，狂，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文正文参考文献，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文综述基于蚕丝支架的肌腱顿带组织工程应用胡叶君综述审校徐侃近年来，在再生医学领域，以蚕丝支架为基础的，以各种临床需求为导向的基础应用研究日益引起人们重视。这是基于蚕丝这一材料优越的生物枯附性，生物可降解性和生物相容性。更重要的是，经过一定处理的蚕丝具有较强的生物力学性能。现在已有很多以蚕丝为基础的生物材料成功应用于心血管、胃烟道重建等临床外科手术中。目前，使用蚕丝材料进行组织工程肌腱铜带修复引起了极大兴趣。近期数据表明蚕丝未来应用于修复肌腱初带具有极大潜力。在本综述中，我们对蚕丝应用于各种组织工程与再生医学的特性进行简要介绍，探讨其用于肌腱初带再生的可行性，并提供未来其用于肌腱物带再生需要改进之处。肌腱初带的修复亟需提升肌腱初带损伤在临床上十分常见，不仅仅运动员，在普通人群中也有发生。仅在美国，每年有，到，例肩袖损伤手术报道；将近，例前交叉韦刃带损伤患者，如此之高的发病率也带来了严重的临床和社会经济负担。据估计，每年美国肌腱带损伤造成的医疗负担达亿美元。肌腱初带的自然损伤修复主要通过纤维癥痕形成，而不是再生过程，由于相对较少的血管和较低的代谢率，常导致组织形成质量较差，力学低下。目前临床治疗措施包括保守治疗和手术治持，这些治疗措施虽然在短期内获得了较好的疗效，然而长期预后显示尚未达到完全功能再生。保守治疗常常出现再次撕裂，手术治疗又会出现自体肌腱初带转移导致的供体发病，异体移植有潜 浙江大学硕士学位论文在疾病传染风险，假体移植又存在移植物无法与周围机体组织有效融合，结果往往不甚理想。为了实现肌腱初带的功能修复，组织工程提供了一种潜在的选择来满足这一临床需求。近年来组织工程发展进入了“组织工程三要素”概念阶段，即：支架提供空间诱导细胞长入；细胞作为“元组织”启动组织“发生；生物化学因素或生物物理因素，单独或联合影响细胞的自我跟新、分化的启动和表型维持因此支架、生物分子和细胞如何有机相组合决定了最终的组织修复再生【更重要的是，支架可以促进内源性细胞迁移到损伤区域，而不依赖于细胞种植，这样可以使得手术更加方便，临床应用更为简便。目前用于肌腱初带组织工程的支架大致可以分为三类：（天然生物支架，如股原，、蚕丝，海讓酸钠和壳聚糖合成材料，如异种移植材料，如自然肌腱韧带脱细胞基质合成材料的使用引起诸多问题，体外实验显示较差的肌腱细胞牲附体内实验显示不满意的组织整合程度，可能和其疏水性质，缺乏细胞识别位点相关。因此，天然生物材料更加有望用于临床。然而大多数天然生物材料无法满足肌腱初带的力学要求。常常会在修复过程中断裂，影响机体组织再生【。幸运的是，蚕丝作为从蚕蛹中提取出来的天然蛋白质，其为完美的力学性能、较好的生物相容性，和可控的生物降解性提供了良好的平衡。此外，丝素蛋白可以被加工成为各种形态，如：凝胶、管道、海绵、微球、薄膜等，预示着其广阔的应用空间蚕丝支架用于再生医学早在上世纪年代晚期，天然和再生丝素巳经被证实是一种适合培养动物细胞的物质从此以后，大量研究将丝素制作成各种形态（丝素膜、丝素海绵、丝素凝胶，蚕丝网，蚕丝纤维等）成功应用于于各种不同组织的再生，如骨膀胱，、半月板【、软骨，、神经、皮肤、心脏【、食管、血管组织、角膜、 浙江大学硕士学位论文牙髓】等。（图牙齿血管图蚕丝应用于各种组织再生蚕丝支架作为如此普遍使用的支架的主要优势在于其易于加工，优越的生物相容性和生物可降解性以及卓越的力学性能。然而其具体内在机制并未完全揭示，可能的一些机制将作一介绍：首先，蚕丝蛋白，蚕丝是一种蛋白多聚物，由蚕的腺体上皮细胞分泌生物合成物，经过喷射在空气中形成的纤维其具有两种蛋白，分别是丝素蛋白和丝胶蛋白。其氨基酸成分的为甘象酸、丙氨酸和丝氨酸它们同时也是丝素蛋白的重要结构据我们所致，细胞物质相互作用枯附是依赖于整合素的，它通过与基质分子结合，如，等序列在胶原广泛存在，其绑定位点为细胞表面表达的序列分布在纤维蛋白中，主要綁定整合素。对于丝素蛋白来说，它不像胶原具有序列，然而它具有和，这与序列十分相似，可能可以解释可以绑定到丝素膜上的原因，进而促进了细胞在材料表面的枯附和生长。除了蚕丝表面的氧 浙江大学硕士学位论文基酸直接与细胞相互作用，蚕丝降解产物也会影响细胞行为。关于降解蚕丝和细胞代谢的研究较少。在年，等发现降解较快的蚕丝支架使得细胞对葡萄糖消耗更高，乳酸合成更多，并进一步促进成骨分化他们同时提出物质依赖代谢机制，即蚕丝降解产物使得细胞微环境中富集大量氧基酸，特别是和为胶原合成的主要原料其次，蚕丝的力学性能。等使用蚕丝网在鼠体内进行油修复的实验，在修复过程中，蚕丝网生物降解在一个近乎完美的速率，支持了力学传导，促进宿主组织修复，个月后最终的力学为牛，将长期并发症降为最低。等利用丝素蛋白合适的力学性能，将其与人毛发来源角质混合作为损伤修复物质，促进了成纤维细胞的枯附和增殖。第三，蚕丝表面的硬度和表面拓扑结构同样在细胞材料相互作用中扮演重要角色，称之为“接触导向”蚕丝易于加工，硬度和拓扑结构可以通过调节适应于跑向组织结构。对于拓扑结构，其表面微来级和纳来级特性诱导了细胞的排列，伸长，迁移和基因表达使用微图案丝素膜，体外实验显示细胞根据拓扑结构其丝状伪足向板状伪足转换，促进细胞骨架发育，调节细胞分布、形态和迁移并且新沉积的细胞外基质中的胶原平行于平行蚕丝结构对于香丝刚度，，等使用不同刚度但拓扑结构类似的纳米凝胶与细胞作用，发现细胞在和神经刚度相似的凝胶上阻碍了其向肢质细胞的分化，可以用于潜在的神经疾病修复。另外，据报道，香丝为基础的复合支架相对于单纯蚕丝来说在组织再生中可能具有更为广阔的前景。这些令人鼓舞的基于香丝支架的在各个领域体内外实验中的应用为其在肌腱栖带组织工程中的应用带来了广阔前景。蚕丝支架用于治疗肌腚初带缺损的应用顿带和肌腱是致密结缔组织，主要由性胶原组成的有序结构，初带用于连接骨与骨，肌腱用于连接肌肉与骨。他们均介导关节正常运动和保持稳定。目前， 浙江大学硕士学位论文综述许多生物材料被研发尝试用于肌腱勒带重建。但是许多材料降解太快以至于新生组织尚未长入，导致较高的在断裂率，不过蚕丝体内降解较缓慢，这是使用蚕丝作为支架进行体内肌腱初带组织工程的主要优势。第一种成功应用于修复的蚕丝纤维基质于本世纪初设计，为修复带来了新的希望】。之后陆续有许多体外实验显示这种材料可以克服目前合成材料和其他天然材料的缺陷，用于多种肌腱初带组织再生。研究显示，蚕丝纤维支架支持细胞枯附，扩增和促进腱系分化，表现为腱系相关因子表达上调且研究显示修饰的蚕丝表面更利于细胞附着，增殖和胶原沉积】。进一步，增加一系列生长因子和力学刺激共同促进了细胞长入，胶原沉积和细胞外基质平行排列，。随后，越来越多的体内实验使用蚕丝为基础的支架用于肌腱初带重建均强调了蚕丝为基础的支架的该领域的潜在临床应用价值。前交叉初带重建前交叉初带损伤在运动医学损伤中十分常见，其自愈能力十分有限，且损伤后会导致软件软骨破坏和远期出现骨性关节炎，。因此，其治疗引起高度重视。等做了重建的第一个体内实验，术中采用蚕丝网复合蚕丝海绵支架。实验结果显示关键初带部分的主要含有胶原，胶原和。然后，等显示相比于成纤维细胞，复合蚕丝支架体内植入表现出更优的细胞生长、增殖，表型和腱系沉积此后，研究者们开始使用丝素和其他材料混合的复合支架。等使用蚕丝胶原透明质酸复合支架显示支架有效促进血管形成、细胞长入和胶原合成修复成功与否不仅仅依赖于腱性部分，腱骨结合处的修复情况更不能忽视，缺乏在支架和骨组织之间形成纤维软骨层往往是导致重建失败的主要原因。等在混合蚕丝网蚕丝海绵上种植细胞体外培育成组织工程顿带，随后体内移植重建，术后个月腱骨结合处形成直接止点的典型四层结构（骨、矿化纤维软骨、纤维软骨和制带），类似于天然腱骨结合处的结构，类似于天然骨接合结构随后他们进一步研发了修 浙江大学硕士学位论文饰蚕丝缆线加固的硫酸软骨素透明质酸丝素复合支架，其具有支持细胞增殖，体外促进细胞在交界面形成软骨层的能力等也研发了一种支架用于腱骨修复，显示出再生的纤维软骨，形成了从香丝移植物到骨的过度结构，近似与天然初带到骨的结构尽管这些研究的结果证实蚕丝支架应用的可能性，仍需长期观察数据等的研究应用编织状蚕丝胶原海绵支架用于兔修复，术后个月显示该支架能够促进初带结构更加成熟，介导腱骨愈合处直接止点，更令人鼓舞的是其有效预防了骨性关节炎提示其作为一种重建功能性支架的临床应用前景。，，『—『】，，， 浙江大学硕士学位论文展望综上所述，由于良好的机械性能、生物相容性、细胞亲和力、长期生物可降解性等，丝素材料可以克服现有材料局限性。同时随着生命技术、生物材料领域的快速发展，基因修饰，细胞移植与生长因子调节技术的结合，有望进一步获得改进，更好的将各种性能发挥极致，为前交叉初带损伤患者带来新的希望。 浙江大学硕士学位论文综述参考文献，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文综述，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文综述，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文综述，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文综述，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，—，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，， 浙江大学硕士学位论文个人简历个人筒历基本信息姓名：胡叶君性别：男出生年月：年月民族：汉族户籍：浙江宁波专业：临床医学七年制）教育背景年月至今就读于浙江大学医学院。科研经历及发表文章，，，，，，，，，，临床实践年月至年月于浙江大学附属第二医院实习。曾获奖励年军训二等功、校级优秀团干、浙江大学社会工作奖学金；年获浙江大学优秀学生干部、浙江大学文体活动奖学金；年获浙江大学医学生第二届创新实验设计竞赛三等奖、浙江大学文体活动奖学金； 浙江大学硕士学位论文个人简历年获浙江大学文体活动奖学金；年获浙江大学文体活动奖学金；年获浙江大学研究生一等奖学金、三好研究生、优秀研究生；年获浙江大学校级优秀毕业研究生。参与演出拉丁舞年月浙江大学运动会开幕式（牛仔集体舞），年月浙江大学经济学院迎新晚会《》（伦巴）、年月浙江大学玉泉登山节开幕式《长夜之恋》（伦巴）、年月浙江大学附属第二医院元旦晚会《》（伦巴）、年月浙江大学体育舞蹈协会舞协十周年”《拉丁串烧》（伦巴，交谊舞年月浙江大学站花站草评选大赛舞蹈表演《》（交谊舞）、年月医学部首届“医学艺术节“开幕式暨社团组织风采展示（交谊舞），双节棍年月浙江大学坛庆表演（双节棍）、年月浙江大学首届“紫金新生达人秀”《我就是李小龙》（双节棍）、年月浙江大学三农协会“感恩后勤，心系工友”慰问演出（双节棍）、年月全国李小龙快闪活动暨杭州大型双节棍交流活动、年月浙江大学社团之夜”演出（双节棍），其他集体演出年月浙江大学“党在我心中永远跟党走”建党周年歌咏比赛大合唱（紫金港赛区冠军）、年月浙江大学周年创意校园宣传片《》（华家池校区主演）