《GBT18932.17-2003_蜂蜜中16-种磺胺残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法》.pdf 9页

GB/T18932.17-2003月四吕GB/T18932的本部分修改采用加拿大标准ACC-056-V2.0(蜂蜜中磺胺残留量测定方法—高效液相色谱一质谱测定法》，修改的主要内容是:—测定品种有所调整;—增加了苯磺酸型阳离子交换柱和OasisHLB柱净化步骤;—使用的液相色谱柱和流动相不同;—单四极杆质谱检测器换成串联四极杆质谱检测器。本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本部分主要起草人:庞国芳、曹彦忠、张进杰、贾光群、范春林、李学民、刘永明、石玉秋。本部分系首次发布的国家标准。 GB/T18932.17-2003蜂蜜中16种磺胺残留量的测定方法液相色谱一串联质谱法范围GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中16种磺胺残留量液相色谱一串联质谱测定方法。本部分适用于蜂蜜中16种磺胺残留量的测定。本部分的方法检出限:磺胺甲唾=哩为1.0拜9/kg;磺胺醋酞、磺胺喀pj}、磺胺毗pr+f.磺胺二甲异R,哇、磺胺甲基啼吮、磺胺氯哒嚓、磺胺一6一甲氧啼吮、磺胺邻二甲氧啼吮、磺胺甲基异嗯哇为2.0pg/kg;磺胺唾哇、磺胺甲氧哒嚼、磺胺间二甲氧哦陡为4.0pg/kg;磺胺甲氧嗜陡、磺胺二甲嗜吮为8.0pg/kg;磺胺苯毗哇为12.0pg/kgo2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间实验确定标准测试方法的重复性和再现性((;B/T6379-1986,neqISO5725:1981)GB/T6682分析实验室用水规格和试骑方法(GB/T6682-1992,neaISO3696.1987)3原理蜂蜜中磺胺类药物残留用磷酸溶液(pH-2)提取，过滤后，经阳离子交换柱和()asisHLB或相当的固相萃取柱净化，用甲醇洗脱并蒸干，残渣用乙睛+乙酸钱溶液(0.1mot/L)溶解。样品溶液供液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1甲醇:色谱纯。4.2乙睛:色谱纯。4.3磷酸:优级纯。4.4庚烷磺酸钠(C7H,,SO,Na·HBO):色谱纯。4.5乙酸钱4.6磷酸二氢钾:优级纯。4.7磷酸氢二钾:优级纯。4.8磷酸溶液:pH-2.1000mL水中加人1mL磷酸(4.3)，在pH计上再滴加磷酸以调节溶液pH=2,4.9磷酸盐缓冲溶液:0.2mol/L,pH=8。分别称取1.05g磷酸二氢钾(4.6)和33.46g磷酸氢二钾(4.7)，用水溶解，定容至1000mLe4.10庚烷磺酸钠溶液:0.5mol/L。称取11R庚烷磺酸钠(4.4)，用水溶解，定容至100m1 GB/T18932.17-20034.11阳离子交换柱:苯磺酸型,500mg,3mL。用前分别用5mL甲醇和10mL水处理。保持柱体湿润。4.12OasisHLB柱或相当者:60mg,3mL。用前分别用3mL甲醇和6mL水处理。保持柱体湿润。4.13磺胺醋酞、磺胺甲噬二哇、磺胺二甲异嗯哇、磺胺氛哒嚓、磺胺啼陡、磺胺甲基异蟋哇、磺胺唾哇、磺胺一6一甲氧R}咤.磺胺甲基啥吮、磺胺邻二甲氧晦吮、磺胺毗吮.磺胺对甲氧咯吮.磺胺甲氧哒嗓、磺胺二甲嗜吮、磺胺苯毗哇、磺胺间二甲氧啥吮标准物质:纯度)9900,4.1416种磺胺标准储备溶液:0.1mg/mL。准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成。.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存可使用两个月。4.巧磺胺混合标准工作溶液:根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取液配成不同浓度(ng/mL)的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在4℃保存，可使用一周。5仪器5.1液相色谱一串联质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2固相萃取真空装置。5，3旋转蒸发器5.4液体混匀器。5.5分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。5.6真空泵5.7移液器:1mL,2ml。5.8鸡心瓶:150mL,5.9样品瓶:2mL，带聚四氟乙烯旋盖。5.10玻璃贮液器:50mL,5.11pH计:测量精度士。.02,6试样制备与保存6.1试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出。.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。3.2试样的保存将试样于常温下保存。7测定步骤7.1提取称取5g试样，精确至。.01g。置于150mL三角瓶中，加人25mL磷酸溶液(4.8)，于液体混匀器上快速混匀1min，使试样完全溶解。7.2净化将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器连到苯磺酸型阳离子交换柱(4.11)上，把样液(7.”倒人玻璃贮液器中，在减压情况下使样液以小于等于3mL/min的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱，待样液完全流出后，分别用5ml.磷酸溶液和5mL水洗柱，弃去全部流出液。最后用40mL磷酸盐缓冲溶液(4.9)洗脱，收集洗脱液于100m工_平底烧瓶中。在洗脱液中加人1.5ML庚烷磺酸钠溶液(4.10)，然后用磷酸(4.3)调至pH=6e按上述方法将调好pH的洗脱液过OasisHLB或相当的固相萃取柱(4.12),调节流速小于等于 GB/T18932.17-20033mL/min，待洗脱液完全流出后，再用3mL水洗柱，弃去全部流出液。在65kPa负压下，减压抽干5min,最后用10mL甲醇(4.1)洗脱，洗脱液收集于150mL鸡心瓶中用旋转蒸发器于45℃水浴中减压蒸发至干。准确加人1.0mL流动相溶解残渣，供液相色谱一串联质谱仪测定。7.3色漪测定7.3.1液相色谱条件a)色谱柱:Lichrospher.100RP-185pm250mmX4.6mm(i.d)或相当者;b)流动相:乙睛+乙酸按溶液(0.01mol/L)(12+88);c)流速:0.8mL/min;d)柱温:350C;e)进样量:40pL;f)分流比:113,7.3.2质谱条件a)离子源:电喷雾离子源;b)扫描方式:正离子扫描;C检测方式:多反应检测;d)电喷雾电压:5500V;e)雾化气压力:0.076MPa;f)气帘气压力:0.069MPa;9)辅助气流速:6L/min;h)离子源温度:350,c;i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表1.表116种磺胺的定性离子对、定f离子对、碰撞气能f和去簇电压名称定性离子对/(m/a)定量离子对/(m/z)碰撞气能量/V去簇电压/V215/156磺肢醋酸215/156215/108;:::271/156磺胺甲唾二哇271/156::::271/107268/156磺胺二甲异u,哇268/156::::268/113285门56磺胺抓哒嗓285/156::::285/108251/156磺胺呛吮251/156:一::251/185254/156磺胺甲基异U"s哇254/156::::254/147」256/156磺胺唆哇256/156::::256/107281/15625磺肢6一甲氧啥吮281/156281/21525:: GB/T18932.17-2003表1(续)名称定性离子对/(m/z)定量离子对/(mlz)碰撞气能量/V去簇电压/V265/156磺胺甲基@1PIT265/156::::265/172311/156磺胺邻二甲氧峡吮311!156::::311/108250/156磺胺毗呢250/156::::250/184281八56磺胺对甲氧嗯吮281/156::::281/215281/156磺胺甲氧哒臻281/156:::一281/215一}一磺胺_甲it吮::279/2041279/156一315/56磺胺苯毗吐315/156::::3巧厂160311%156磺胺间二甲氧嗜POE311/156::::311/2187.3.3液相色谙一串联质语测足用混合标准工作溶液(4.15)分别进样，以峰面积为纵坐标，T作溶液浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中16种磺胺的响应值均应在仪器测定的线性范围内在土述色谱条件和质谱条件下，16种磺胺的参考保留时间见表L16种磺胺的标准总离子流图参见附录A中的图A.1、图A.2表216种磺胺参考保留时间!保留时间/min}药物名称保留时间{min磺胺，、，_2.6‘一磺胺甲基喀陡9.93一-一1磺胺甲唆三哩魂541磺胺邻二甲氧嗜陡11.29_l磺胺二甲异P:FW4一4.91磺胺P比咙11.62仁—_____磺胺啼吃磺肢对甲氧呛PIT12.661____5.20厂一一磺胺氯哒唉一6.54磺胺甲氧哒嗓17.28一磺胺甲基异P1挫8.41磺胺二甲嚓咙17.959.13磺胺苯毗哇22.29磺胺唾哇一l磺胺间二甲氧at,PIT28.97Bar(-6甲_eV,}{7.4平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行 CB/T18932.17一20038结果计算试样中每种磺胺残留量利用数据处理系统计算或v按式(1)计一算:X.?嘿························⋯⋯(1)式中:X一一试样中被测组分残留量.单位为微克每千克(阴/kg);‘一一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng厂m工);V—试样溶液定容体积，单位为毫升(ml_);m—试样溶液所代表试样的质量，单位为克(9)注计算结果应扣除空白值9精密度本部分的精密度数据是按照Gl夕T6379的规定确定的，其重复性和再现性的值是以蚝环的可信度来计算。9.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(厂)，蜂蜜中16种磺胺含量范围及重复性方程见表3。如果差值超过重复性限(，一)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中16种磺胺的含量范围及再现性方程见表3。表3含量范围及重复性和再限性方程名称含量范围/(邵9/kg)重复性限r再现性限尺磺胺醋酞2.0~500lgr=0.935819阴一1.0259lgR=。.153919阴上。.o561磺胺甲唾二哇2.0~500lgr=1.084119阴一1.0704lgR二1.074419朋一。.6765-!磺胺二甲异嗯哇2卜50·。一lgr=0.842819阴一。，87601只R=。.73〔)219”7一0.5488磺胺氮哒嘴20~50.0;9二一。.97。:;‘，。一1.。0。。一}、一。.川、丽万J飞。。、磺胺嗜吱20~500lgr=1.271219阴一1.232，馆尺=。吕1()ll只升尸。.5495磺胺甲基异蟋哩20~50.0lgr=1，062419阴一1.0368lgR=咬).981919阴一0.7392磺胺唾哩4.0~王00.0lgr=1.091819阴一1.08马219尺=0.，10719，扮一。.6扭砚2磺胺6甲氧喀嘴2‘0~50.().lgr=1.0931]9，月一1.]69319尺=]0980!帐劝一。.85乃8磺胺甲基心咤纽一洲一。妙一‘·‘53‘咖一1几丽丁一味尺一0.7‘)之吕叹，)J。石!02———一一一一一一一一州磺胺邻二甲氧心咙2.0~5001lgr二0.，14719”才一0.86o6伙尺。.7”1曰9阴一。斗748一磺胺毗陡2.0~50.0lgr=0.894319从一0.81‘，。磺胺对甲氧嗜绽8、0~200.0匕___磺胺甲氧哒嗦40~1O00一1只r一11270191一j127，1磺胺二甲峨陡8t0~200.0lgr?1.037919，刀一1.o612咏尺二，1.Od‘)吕城阴一7143磺胺苯砒哇12.0~3000lgr=1142119阴一1.2255磺胺间二甲氧嗜陡40~1000注:阴为两次测定值的平均值 GB/T18932.17-2003附录A(资料性附录)标准物质总离子流图A.111种磺胺标准物质总离子流图，见图A.14e12.660e4徽胺哈院2.61min0e4翻胺甲晚二哇4.54-m翻胺啥健5.20min17.28确胺抓哒嗦6.54mm4.0,4成胶甲墓异呀哇8.41min确胺甲基啥咤9.93mm3.0e45.}2011.62-22.29破胺毗吮11.62min砚胺对甲权咄呢12.66min6_542.0,42.614.54破膝甲暇哒嚓I7.28mm9.9328.97翻胺笨哒哇22.29min1.0e428.65翻胺间二甲暇心咤28.97minn.0/min24681012141618202224262830图A1A.25种磺胺标准物质总离子流图，见图A.2。9.13暇胶二甲异00哇4.91min5.05.4欲胺.哇9.13min砚胺-6-甲权啥咤9.48min11.294.0.4徽胺邻二甲暇咄旋11.四。I1.劲俄胺二甲，咤17.95min3.0.417.952.N49.484.9118.191.0.41了710_012248810141618图A，‘. GB/T18932.17-2003附录B(资料性附录)回收率本方法中16种磺胺添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表13.1.裹B_，药物名称添加浓度/(“9/kg)平均回收率/(%)2.077.15O77.?磺胺醋酞10.077.350.078.7一1.02.5一7880..70磺胺甲窿_哇5.025.02.084.75.086.6磺胺嗜吮86.4一510..077.52.082.15.085.7磺胺饭哒嗓10.077.250.078.6}一83。一磺胺甲基异w.哇2.081"s5.083.3磺胺甲基嗜咙10.089.450.081.62.08795.085.0磺胺毗咤10.084.150.077.9 GB/T18932.17-2003表B.1(续)药物名称添加浓度/(Pg/kg)平均回收率/(%)8.091.320.084.2磺胺对甲氧略咤40.088.9200.076.44.089.810.092.0磺胺甲氧哒喷20.080.2100.075.212.085.030.083.8磺胺苯毗哇60.086.4300.077.64.090.410.081.9磺胺间二甲氧喻呢20.089.8100.074.42.090.25.075.5磺胺二甲异n#哇10.076.950.087.52.095.65.088.9磺胺一6一甲氧呛喧10.094.850.0102.54.085.310.070.9磺胺唾哇20.076.5100.086.72.097.45.086.5磺胺邻二甲氧心吮10.092.150.095.48.095.020.082.4磺胺二甲嚓q40.092.4200.094.8