nmda受体抑制剂mk-801抑制大鼠蜜蜂毒炎性痛所致脊髓后角小胶质细胞的激活 42页

河北医科大学硕士学位论文NMDA受体抑制剂MK--801抑制大鼠蜜蜂毒炎性痛所致脊髓后角小胶质细胞的激活姓名：白志峰申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：李文斌201203 中文摘要NMDA受体抑制剂MK．801抑制大鼠蜜蜂毒炎性痛所致脊髓后角小胶质细胞的激活摘要目的：脊髓是躯体感觉信息传入和整合的初级中枢。近年研究表明，脊髓后角小胶质细胞在病理性疼痛的产生和维持中发挥重要的作用。研究结果显示，多种伤害性刺激都可以使脊髓后角的小胶质细胞激活，使之释放白介素。1p、肿瘤坏死因子。0【等多种细胞因子，对传导病理性疼痛和产生痛觉过敏起到促进作用。给予P2X4受体阻断剂TNP．ATP(2’，3’．O．(2，4，6．trini．trophenyl)ATP)、米诺环素等抑制小胶质细胞功能的药物，可明显抑制病理性疼痛和痛过敏的产生。这些研究成果表明在病理性疼痛和痛过敏的产生和维持中，脊髓小胶质细胞的活化发挥了重要作用。但脊髓小胶质细胞被伤害性传入信息激活的机制尚不完全清楚。N．甲基．D．天门冬氨酸(N．methyl．D—aspartate，NMDA)是脊髓后角中重要的神经递质，其受体在脊髓后角，包括小胶质细胞上广泛分布。NMDA及其受体系统在向中枢传递外周伤害性信息，诱导痛觉中枢敏感化方面发挥重要作用。蜜蜂毒(beevenom，BV)疼痛模型是研究炎性病理性痛的良好模型。此模型是将蜜蜂毒溶液注入大鼠足底皮下中心部位，导致足底组织发炎红肿，并引起单相自发痛反应，在注射部位还可以产生原发性的痛过敏，持续时间长达数天。我室既往应用免疫印迹分析(westernblotanalysis)技术，初步观察了蜜蜂毒炎性疼痛模型中脊髓后角小胶质细胞的激活、以及NMDA受体在其中所发挥的作用。本实验则应用免疫组化技术，进一步研究蜜蜂毒炎性痛引起的脊髓后角小胶质细胞的激活情况、以及NMDA受体在此过程中的作用，为阐明病理性痛过程中小胶质细胞的激活机制提供进一步的实验依据。1蜜蜂毒炎性痛大鼠脊髓后角小胶质细胞激活的动态过程方法：雄性Sprague．Dawley大鼠30只，体重230-270g，随机分为6组：shamlh组、sham1d组、蜜蜂毒1h组、蜜蜂毒1d组、蜜蜂毒3d组和蜜蜂毒7d组(每组n=5)。分别将50m生理盐水或50“l蜜蜂毒溶液(49·L。1)注入sham组和蜜蜂毒组大鼠右后足底皮下。Sham1h组和蜜 中文摘要蜂毒1h组动物在测定足底注射后60min内的自发痛反应后取材，其它各组于相应时间点测定注射部位的热痛敏和机械痛敏后取材。取材部位为腰5(L5)脊髓节段。将L5脊髓节段经多聚甲醛固定后，常规冰冻切片，应用免疫组化技术，观察脊髓后角OX．42蛋白的表达情况，评价小胶质细胞的激活状态。实验数据用均数土标准差(i士s)表示。用社会科学统计程序(StatisticalProgramforSocialSciences13．0)对实验数据进行单因素方差分析(One．WayANOVA)，比较组间差异。有显著差异者用最小显著差法进行两两比较，判断差异显著性的标准为PO．05)．Thecellbodyofmicrogliabecamelarger，andthecellularprocessesbecamethickerandshorterin1dgroupafterinjectionofbeevenom．TheexpressionofOX·42wasincreasedsignificantly(P。“2015105O囱Snam戮缀蘸攀戮糕乒E：sham+MK801group木囱BVqvIK80IgroupBYBV+MK801BV+NSsham+MK801Fig．2-4ImmunohistochemicalmicrophotographsshowtheeffectofMK一801ontheOX··42expressioninthespinaldorsalhornduringbeevenom-·inducedperipheralinflammatorypainandhyperalgesia．ItcanbefoundthatintrathecalinjectionofMK一801intheBV+MK一801groupinhibitedtheup—regulationintheexpressionofOX一42normallyinducedbybeevenominjection，whileMK一801hadnoeffectontheOX一42expressioninshamrats．半P<0．05VSshamgroup，厶P<0．05VSBV+NSgroup．26熟 研究论文讨论小胶质细胞占中枢神经系统中胶质细胞总数的5％～10％，具有多种功能，如吞噬、参与一般性炎性反应调节及基本的免疫反应，并在病理性疼痛的形成和传导过程中起非常重要的作用【l】。非活化状态时呈分级分枝状，受到一定外界刺激后分支可缩回细胞内，随后产生新突起和相邻的细胞相接【2】。此时，活化的小胶质细胞开始释放多种细胞因子，如一氧化氮、IL．1、兴奋性氨基酸、前列腺素E2等。这些细胞因子作用于传递痛觉的神经元，提高神经元反应的敏感性。神经元激活释放细胞因子再刺激小胶质细胞，同时小胶质细胞也在用自分泌和旁分泌方式刺激自身释放细胞因子，如此形成正反馈环路，使小胶质细胞激活程度增加，激活时间延长。这也解释了本实验中大鼠足底注射蜜蜂毒后，注射足产生60min以上的自发痛和注射部位长达7d的热和机械痛觉过敏现象【341。蜜蜂毒模型首次建立是在1996年，创建者是Lariviere和Melzack。该模型使用浓度4g．L以的蜜蜂毒50m，注射大鼠右后足底皮下引起组织发炎。炎症导致的自发痛与热和机械痛觉过敏现象只发生在注射足，未注射足无炎性痛反应【5】。对比甲醛模型发现，足底注射甲醛后引起注射部位痛觉减退，甚至对很强的刺激也无反应16]。而非注射足则出现了痛过敏。这说明蜜蜂毒导致的炎性痛反应更接近临床病理性炎性痛的表现。NMDA受体是与疼痛有关的兴奋性神经递质Glu的离子型受体，在中枢神经系统内含量高、分布广。脊髓传入神经末梢被外周痛觉信息刺激，释放大量Glu，激活NMDA受体。NMDA受体激活后，可以导致正反馈性神经元兴奋性升高，传递外周伤害性信息，诱导痛觉中枢敏感化。而应用NMDA受体拮抗剂则能抑制脊髓中枢疼痛正反馈性调节，从而减轻痛觉过敏。这说明NMDA受体系统是产生和维持痛觉过敏的重要环节【7。o】。本实验中，应用NMDA受体拮抗剂MK．801(50nm01)的大鼠再足底注射蜜蜂毒，其自发痛评分明显降低；热痛敏和机械痛敏也明显受到抑制。这些结果有力的证明了NMDA受体抑制剂MK．801可显著减轻大鼠的外周炎性痛行为。在用免疫组化染色小胶质细胞的方法上，目前常用的技术方法是采取连续冰冻切片，效果优于石蜡切片。在灌注方法上，多数采取首先生理盐 研究论文水快速冲洗血液，紧接着用4％多聚甲醛(PH7．4)灌注固定后取材。由于灌注效果好坏直接影响最终结果，所以在具体操作细节上需要注意以下环节：灌注液不必添加蔗糖，但要保证4。C低温，防止温度过高影响灌注效果；生理盐水冲洗血液要充分，消除血液成分对结果的干扰；4％多聚甲醛溶液(PH7．4)灌注时先快速，直到全身肌颤消失后调速到每分60～100滴，持续13～15rain，时间不易再延长；取材后将组织放入4℃的4％多聚甲醛溶液(PH7．4)中浸泡2h，保证组织充分固定；再将组织放入4℃的25％蔗糖溶液中10～12h，保证组织充分脱水。通过观察免疫组化结果和积分光密度分析，足底注射蜜蜂毒引起的炎症疼痛刺激可诱导同侧脊髓后角小胶质细胞增殖活化，小胶质细胞的特异性标记蛋白OX．42表达随之增多；增多趋势为1d开始，3d达到高峰，7d时略有减退。低倍镜(×100)下观察注射蜂毒后3d时激活的小胶质细胞分布，可见在脊髓后角I～II板层甚至III-IV板层密集出现。高倍镜(x400)下观察此时小胶质细胞形态，可见小胶质细胞胞体变大，细胞突起粗而短，整体形状犹如阿米巴滋养体。该结果与足底注射甲醛导致的脊髓后角小胶质细胞激活趋势有所不同。Fu等人的研究报道足底注射甲醛后，激活的小胶质细胞在1d开始增多，3d比较明显，7d达到高峰，14d时开始消退【11-13】。经分析，可能是甲醛导致外周组织损伤较重，引起的炎症反应比较持久，导致小胶质细胞激活持续时间明显延长。低倍镜(x100)下观察MK．801+蜜蜂毒组大鼠3d时的变化，可见脊髓后角I—II板层激活小胶质细胞数量明显减少，积分光密度显示OX．42表达显著下降。这些结果表明NMDA受体抑制剂MK．801可有效抑制蜜蜂毒炎性痛引起的脊髓小胶质细胞的激活；反映了NMDA受体在小胶质细胞激活过程中发挥了重要作用。但应用了MK．801后，小胶质细胞激活没有被完全抑制，与sham组相比，OX．42还有一定的表达。这也提示在小胶质细胞激活过程中，其表面其他的神经受体和神经递质也可能发挥作用；比如PGE2可通过降低K+外流机制阻止小胶质细胞的激活【1¨8】。小胶质细胞激活的机制还有待进一步研究。 研究论文结论本研究应用免疫组化方法发现，蜜蜂毒引起的炎性痛导致脊髓后角小胶质细胞呈现动态变化；NMDA受体抑制剂MK．801可明显抑制小胶质细胞的活化，并有效抑制了炎性痛和痛过敏的产生。这些结果提示，NMDA受体在外周性炎性痛所致脊髓后角小胶质细胞的活化中发挥重要作用。参考文献1BiggsJE，LuVB，StebbingMJ，eta1．IsBDNFsufficientforinformationtransferbetweenmicrogliaanddorsalhornneuronsduringtheonsetofcentralsensitization?M01．Pain，2010，6：44—452MoonDO，ParkSY,LeeKJ，eta1．Beevenomandmelittinreduceproinflammatorymediatorsinlipopolysaccharide—stimulatedBV2microglia．InternationalImmunopharmacology,2007，7：1092-11013SmithHS．Activatedmicrogliainnociception．PainPhysician，2010，13：295．3044WerryEL，LiuGJ，LovelaceMD，eta1．Lipopolysaccharide-stimulatedinterleukin一10releasefromneonatalspinalcordmicrogliaispotentiatedbyglutamate．Neuroscience，2011，175：93—1035ChenHS，LeiJ，HeX，eta1．PeripheralinvolvementofPKAandPKCinsubcutaneousbeevenom-inducedpersistentnociception，mechanicalhyperalgesia，andinflammationinrats．Pain，2008，135：31—366BiberK，TsudaM，Tozaki—Saitoh，eta1．NeuronalCCL21up—regulatesmicrogliaP2X4expressionandinitiatesneuropathicpaindevelopment．EMB0，2011，30：1864-18737林三瑜，张德仁．脊髓胶质细胞的激活及其信号传递．国际麻醉学与复苏杂志，2010，3l：450．4538冯继英，杨建平，王丽娜等．脊髓胶质细胞在大鼠炎性痛形成中的作用．中华麻醉学杂志，2010，30：36．399SURui-bin．Theroleofglialactivationinthedevelopmentofpathological29 研究论文pain：implicationfornewdrugdiscovery．InternationalJournalofPharmaceuticalResearch，2011，38：169．17610江伟．神经病理性疼痛中枢敏化重要参与者：胶质细胞．上海医学，2010，33：2951lMikaJ，Wawrzczak-BargielaA，OsikowiczM，eta1．Attenuationofmorphinetolerancebyminocyclineandpentoxifyllineinnaiveandneuropathicmice．Brain，Behavior,andImmunity,2009，23：75．8412MaoloodN，MeisterB．Proteincomponentsoftheblood．brain．barrier(aBa)inthebrainstemareapostrema-nucleustractussolitariusregion．JournalofChemicalNeuroanatomy,2009．37：182．19513JiangYH，WangQS，MaH，eta1．EffectofMicrogliaActivationonNeuropathicPaininRatSNIModel．JournalofChinaMedicalUniversity,2008，37：589—59214SinghalS，LawrenceJM，SaltTE，eta1．Triamcinoloneattenuatesmacrophage／mierogliaaccumulationassociatedwithNN正)A—inducedRGCdeathandfacilitatessurvivalofMfillerstemcellgraftsOriginalResearchArticle．ExperimentalEyeResearch，2010，90：308—31515ZhangX，XuYWangJ，eta1．TheeffectofintrathecaladministrationofglialactivationinhibitorsondorsalhomBDNFoverexpressionandhindpawmechanicalallodyniainspinalnerveligatedrats．Neural，2011，10：702．71316BiggsJE，LuVB，StebbingMJ，eta1．IsBDNFsufficientforinformationtransferbetweenmicrogliaanddorsalhornneuronsduringtheonsetofcentralsensitization?M01．Pain，2010，6：44．4517HorvathRJ，Romero．SandovalEA，DeLeoJA．eta1．InhibitionofmicroglialP2X4receptorsattenuatesmorphinetolerance，Ibal，GFAPand“opioidreceptorproteinexpressionwhileenhancingperivascularmicroglialED2．Pain，2010，150：401-41318UlmannL，HirbecH，RassendrenF’eta1．P2X4receptorsmediatePGE2releasebytissue—residentmacrophagesandinitiateinflammatorypain．EMBO，2010，29：2290．2300 综述综述小胶质细胞参与疼痛调节机制的研究现状一般研究均认为小胶质细胞来源于间充质的中胚层，其功能类似于巨噬细胞，具有吞噬等功能、参与一般性炎性反应调节及基本的免疫反应。随着研究工作的逐步深入，研究者们发现由激活的小胶质细胞释放的一系列化学因子及与之相作用的小胶质细胞上的受体在与神经元之间形成交互的信号传递，影响着病理性疼痛的传导及形成。1小胶质细胞1．1小胶质细胞生理特性小胶质细胞和巨噬细胞功能上有很多的相似性，之前均认为主要起免疫吞噬作用，正常情况下在中枢神经系统中占胶质细胞总数的百分比是50／o,--10％。其他的胶质细胞主要有星形胶质细胞和少突胶质细胞。小胶质细胞主要有两种状态：静息型和活化型。静息型小胶质细胞胞突呈分级分枝状，胞体较小；受到一定外界刺激后分支可缩回细胞内，随后产生新突起和相邻的细胞相接，此时的小胶质细胞即为活化型，胞体较大，胞突粗短【11。小胶质细胞平时多处于分枝状态，当中枢神经系统遭受损害或发生炎症时，可迅速对局部刺激做出反应，会在形态、功能、合成、释放、移行、基因表达等方面发生应激改变。活化的小胶质细胞可以分泌肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)、白介素1(interleukin．1，IL．1)、白介素6(interleukin．6，IL．6)和神经生长因子(nervegrowthfactor，NGF)等多种细胞因子，参与机体异常痛觉的产生及维持(2】。这种活化状态可以维持较长的时间，当外界刺激消失后逐渐恢复到静息状态。通过电镜观察发现，激活的小胶质细胞内有较多的高尔基体和丰富的分泌颗粒【3】。小胶质细胞的细胞膜可以形成类似“神经元突触”的结构在神经元的轴突附近，这可能是其和神经元进行信息交换的解剖基础【4】。在神经相关细胞共同培养实验中，发现相对于邻近神经元胞体的小胶质细胞，远离神经元胞体的小胶质细胞活化程度要小得多。1．2小胶质细胞基本功能1．2．1保护功能 综述小胶质细胞具有一定的吞噬功能，且其在中枢神经系统广泛而规律的分布，可清除细胞代谢产物，消除损伤神经组织产生的有害物质，起到了一定的净化作用。小胶质细胞可清除胞体外的氧化变性蛋白，吞噬变性细胞碎片和崩解的神经髓鞘，吞噬凋亡的细胞和其他坏死物质。小胶质细胞内存在各种抗氧化酶可以催化还原反应，如谷胱甘肽过氧化物酶可特异性地催化还原型谷胱甘肽和过氧化氢的还原反应，通过抗氧化酶可清除氧自由基，减轻氧化反应，从而防止细胞内重要的功能结构被破坏。小胶质细胞生成释放的神经营养因子能营养神经，对轴突的再生和再髓鞘化起关键作用，还可与脑源性神经营养因子协同诱导轴突向损伤方向生长，并且使神经元的抵御损害能力增强。1．2．2免疫功能中枢神经系统中起免疫作用的细胞主要是小胶质细胞，其参与机体的自然免疫和获得性免疫。自然免疫特点是免疫细胞早期物理性的吞噬病原微生物或变性组织碎屑，同时释放非特异性促炎症因子诱导炎症反应。获得性免疫具有精确调控的，具有抗原特异性的免疫应答反应，在中枢神经系统中，这种免疫反应主要作用是让变性的神经在机体精确调控下得到清除，但自身正常神经不会被损害。直接刺激作用于小胶质细胞后产生相应抗原，或者产生伪足式直接接触神经细胞产生作用。间接作用是指其分泌各种因子激活神经系统其他细胞，进行细胞间免疫调节，平衡神经系统免疫内分泌网络。小胶质细胞的另一个更重要免疫特征是其可以表达MHC．II类抗原，可与血液循环中的T细胞表面的相应受体产生相互作用，共同发挥抗原特异性免疫反应。2小胶质细胞参与疼痛调制的机制2．1p38MAPK信号通路与疼痛关系细胞受到刺激后，相应刺激信号可通过细胞内相应的激酶或者磷酸化酶激活相应的级联反应来传递，有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase，MAPK)是其中之一。p38MAPK属于MAPK家族中4个亚群之一，p38MAPK再分4种亚型：仪、p、丫和6。其中Q和p两个亚型的激活在病理性疼痛中起重要作用。p38MAPK经有丝分裂原蛋白激酶激活后成为P．p38MAPK，被激活后可以磷酸化一些转录因子丝氨酸位点，从而使这些转录因子启动而使目的基因得以表达。从而产生一 综述系列调节效果。例如，p38MAPK可以激活MAPK蛋白激酶一2(MAPKAP．2)，MAPKAP．2进一步激活磷脂酶A2(PI。A2)，PLA2在炎症反应中起重要作用可以引起花生四烯酸合成前列腺素，从而最终引起强烈的痛觉增敏作用【5】。如果阻止p38MAPK的活化，是否可以抑制异常性疼痛的产生呢?Mei等【6】研究发现鞘内注射ketamine抑制了触觉异常疼痛的发展和小胶质细胞的激活，并且呈剂量依赖性关系，另外发现ketamine可以逆转toll样受体3(TLR3)激动剂引起的触觉异常性疼痛。进一步通过免疫印迹方法发现ketamine减弱了只在小胶质细胞中产生的P．p38MAPK的表达。Tsuda等【7。8】的研究发现外周神经遭到损害后也可通过激活p38MAPK途径产生异常触觉痛敏，同时发现P．p38MAPK只存在于脊髓背角处的小胶质细胞内。如果鞘内注射抑制剂SB203580抑制p38MAPK激活，神经损害后的异常触觉痛敏可以得到明显抑制。研究发现p38MAPK有两种亚型存在于脊髓中，其中p380【亚型存在于神经元上，p38p亚型存在于小胶质细胞上。通过采用鞘内分别注入此两种亚型的反义寡核苷酸的实验研究，发现随着p38p的水平降低，福尔马林注射大鼠后足引起的疼痛缩足反应得到抑制，同时也发现P物质鞘内给药诱导的脊髓神经缓激肽受体激活产生的痛觉异常反应也得到抑制，而p38仅含量水平高低不会对上述实验结果有影响。用布比卡因长时间阻滞坐骨神经，发现自发性电活动也是触发小胶质细胞内p38MAPK活化所需要的，但神经损伤后再用神经传导阻滞剂并不能逆转p38MAPK的活化[91。这也许表明，小胶质细胞合成的多种介质可以通过自分泌或者旁分泌方式反馈作用于自身，活化后的小胶质细胞，可以自身维持这种活化状态。2．2P2X受体与疼痛关系ATP的受体分为两个亚型即P2X和P2Y受体。P2X受体(P2X1．P2X7)是非选择性受体【Ⅻ。P2Y受体(p2yl，2，4，6，11，12，13，14)是G蛋白藕联受体。在小胶质细胞，刺激P2X或者P2Y受体可以产生电流反应，增加阳离子内流，产生信号分子影响神经元功能【ll】。P2X受体在小胶质细胞主要表达P2X4和P2X7亚型【12】。2．2．1P2X4受体与疼痛Tsuda等【13】通过动物实验发现，给予鞘内注射P2X1、2、3、4、5、7 综述受体抑制剂TNP．ATP后，外周炎症或神经损伤引起的触觉疼敏得到抑制，而鞘内给予另外一种P2X受体阻滞剂PPADS没有出现抑制效果。PPADS是P2X1、2、3、5、7抑制剂，对受体P2X4无抑制作用。神经受到损害后P2X4受体在小胶质细胞表面表达水平逐渐升高。如果在神经没有受到损伤的情况下，让P2X4受体在小胶质细胞表面的表达水平升高可使动物出现痛觉异常。BiberK等【141实验发现单纯的鞘内注射趋化因子CCL21可以引起CCL21缺失的小鼠持久的触觉异常性疼痛，而产生这些疼痛反应是严格的依赖P2X4受体的功能。BeggsS等【15】认为小胶质细胞对外周神经损伤引起的痛觉过敏起关键作用的核心信号通道是：p38MAPK通路介导P2X4受体激活，诱导小胶质细胞释放脑源性神经营养因子116l。药理学和生物化学的研究发现P2X4受体的钙内流激活p38MAPK通路，进而促进小胶质细胞合成和释放脑源性生长因子。脑源性神经营养因子通过升高脊髓后角神经元内的氯离子水平来解除疼痛反应的相关抑制，从而引起疼痛。这种疼痛去抑制作用和外周伤害性刺激通过相应的信号网络引起的脊髓后角突触的兴奋有协同作用。随着去抑制作用的逐渐增强，即使一些外周神经传入的非伤害性电信号和神经元自发的正常电信号也会引起疼痛异常。这样用胶质细胞一神经元之间的信号通路理论可能更好的解释人病理性疼痛症状。Coull等【171解释P2X4受体引起触觉疼痛异常的机制是各种因子、因素如纤维连接蛋白、TLRs和核苷酸结合寡聚蛋白2(NOD2)、蛋白酪氨酸激酶等在神经病理性疼痛时诱导P2X4受体上调并被神经元释放的ATP激活，引起细胞内钙离子的增加，随后导致小胶质细胞释放出神经营养因子(BⅨ盯)，然后BDNF经过KCC2信号通路减弱GABA和甘氨酸等神经递质的作用，导致神经病理性疼痛的产生。在神经损伤和炎症后产生的痛觉过敏中识别P2X4受体信号通路的上游区和下游区对研究其机制提供了重要的信息。2．2．2P2X7受体与疼痛P2X7受体在小胶质细胞的增值和促炎细胞因子的释放过程中发挥了作用【18。9】。在P2X7受体缺乏的小鼠，神经源性痛的敏感性下降，这一点在应用P2X7受体拮抗剂的实验中也得到了验证[20-21】。Chessell等实验证实，损伤外周神经后脊髓后角小胶质细胞的P2X7表达增多并激活，释放IL．1p和组织蛋白酶s，这些物质引发并维持了脊髓的机械性痛过敏反应 综述【22之31。Kobayashi等【241最新研究发现周围神经的损伤引起小胶质细胞持续性的一系列形态改变，证实了伴随着外周神经末梢的损伤，P2X7明显的表达。在损伤的第7天，双标实验显示表达P2X7mRNA和蛋白的小胶质细胞明显增多，鞘内注射P2X7阻滞剂(A438079hydrochloride)可以抑制疼痛过敏现象。2．3趋化因子受体与疼痛关系2．3．1CX3CRl受体与疼痛趋化因子CX3CLl为一种混合型趋化因子，其特异性结合的受体是CX3CRl。脊髓中注入CX3CLl可以引起疼痛的易化扩大，提示了它能影响神经痛敏。通过细胞形态学和小胶质细胞特异性表达蛋白OX．42和CD4着色反应实验证实受体CX3CRl只存在于小胶质细胞表面，但CX3CLl只有在神经元细胞内表达生成。Milligan等【25】通过研究发现CX3CLl可产生和剂量相关的机械或热诱发的痛觉过敏反应，且CX3CLl的长时间缓慢释放导致神经性疼痛也能得到缓解。Clark等【26】实验证实小胶质细胞被激活后可以产生一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶，这种蛋白酶可以让神经元细胞膜上的CX3CLl容易脱落下来。使用溶酶体半胱氨酸蛋白酶的阻滞剂可使慢性疼痛得到抑制并可以抑制小胶质细胞的激活。Kawasaki掣27】研究发现鞘内给予CX3CLl引起疼痛易化扩大的同时，导致小胶质细胞内p38MAPK信号通道激活。鞘内注射CX3CRl中和抗体能减轻疼痛易化扩大，也能抑制小胶质细胞内p38MAPK信号通道的激活。因此认为CX3CRl参与的神经病理性疼痛实质上是CX3CLl．CX3CRl-p38MAPK信号通路引起的。2．3．2CCR2受体与疼痛在中枢神经系统中，神经元细胞合成释放CCL2，但它的受体CCR2多存在于小胶质细胞膜表面【2引。鞘内给予外源性的CCL2或者外周神经受到慢性炎症性损伤时可诱导脊髓小胶质细胞的活化，其表面的CCR2明显增多并导致迅速并持续的痛觉异常。而CCR2基因缺失的小鼠却没有出现小胶质细胞的激活和疼痛现象【291。同时还发现CCR2缺失或使用CCR2抑制剂小鼠对炎症性刺激引发的疼痛反应明显减弱，但是不能减弱急性疼痛，提示CCR2只在慢性疼痛中起作用。其影响疼痛机制可能为：外周神经损伤或者炎症反应使CCL2通过与CCR2结合后通过细胞信号传导系统 综述激活小胶质细胞，小胶质细胞又反作用于神经元，所以说在慢性疼痛发生和发展中CCL2．CCR2信号通路中扮演了重要角色。2．3．3CXCR3受体与疼痛研究发现神经元一小胶质细胞之间一种新的信号传导机制，是由CCL21参与的。CCL21是一种新的小胶质细胞形态快速转变活化调节剂，可与小胶质细胞膜上的CXCR3受体结合。在背根神经节神经元损伤后CCL21被上调，进而转运到脊髓的感觉终端。CCL21引导小胶质细胞向趋化因子上调的损伤部位转移，并和CXCR3受体结合，从而激活小胶质细胞，促进疼痛时相的诱发【30】。3总结目前疼痛的治疗药物主要是作用于神经元的阿片类药物，但镇痛效果总是不理想，且副作用严重。随着各项研究的逐渐深入，人们发现疼痛的机制是复杂的，只研究神经元是远远不够的，因此许多研究者把研究方向转变到神经元周围的神经胶质细胞上来，不单纯的只研究神经元及其产生的介质，并且取得了很多成绩。但通过以上叙述我们发现，小胶质细胞在病理性疼痛中起重要作用是毋庸置疑的，但发现小胶质细胞表面的许多受体和信号通路都参与了病理性疼痛反应，他们之间哪个受体激活后对疼痛的影响最大?各个受体之间是否有协同或者相互抑制作用?他们之间有没有一条影响病理性疼痛的最终通路?各受体影响疼痛的具体完整的分子关联机制等重要的问题还没有得到解决。因此，解决疼痛问题还有很多复杂的工作要做，但可以预言，随着小胶质细胞参与疼痛的机制研究的逐渐深入，围绕其开发新药将对疼痛治疗产生深远影响。参考文献lChoiHK。RyuHJ，KimJE，eta1．TherolesofP2X7receptorinregional—specificmicroglialresponsesintheratbrainfollowingstatusepilepticus．Neur01．Sci．2011．10：1072．10742AbbadieC，BhangooS，DeKoninckYeta1．Chemokinesandpainmechanisms．BrainResRev,2009．60：125．1343GraeberMB，W．eiL，Rodriguez，eta1．RoleofmicrogliainCNS 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致谢在本课题的研究过程中，始终得到导师李文斌教授的严谨指导、悉心关怀和真诚鼓励。恩师渊博的知识、严谨的科研态度、一丝不苟、兢兢业业的工作精神，激励着学生，使学生受益终生。感谢张敏教授、孙晓彩副教授、李淑琴副教授、胡玉燕副教授、羡晓辉老师给予的多方指导。感谢王秋红老师、刘丽哲老师给予的多方面支持。感谢生理教研室刘宜先副教授，在免疫组化方面给予的指导。感谢王春国老师在冰冻切片技术上给予的指导和帮助。感谢病理生理研究室和教研室的全体老师和同学给予的大力支持和热心帮助。感谢研究生学院的各位老师及工作者的辛勤培养。谨此一并致以最诚挚的谢意! 个人简历一、一般情况姓名：白志峰性别：男民族：汉族出生日期：1979年3月29日籍贯：河北省赞皇县二、个人经历1999年9月_2005年7月河北医科大学临床医学系学习，获学士学位2005年7月至今邢台医专I临床系工作2009年9月至今河北医科大学病理生理学教研室在职研究生学习三、获奖情况2006年2008年2010年邢台医专先进个人邢台医专先进个人、优秀共产党员邢台医专优秀个人、优秀共产党员四、承担研究课题NMDA受体抑制剂MK．801对大鼠蜜蜂毒炎性痛所致脊髓后角小胶质细胞激活的影响