油菜花蜜氨基酸及糖含量分析 19页

河南农业大学本科生毕业论文（设计）题目油菜花蜜氨基酸及糖含量分析学院植物保护学院专业班级植物科学与技术1班学生姓名梁正指导教师王高平撰写日期：2009年5月19 油菜花蜜氨基酸及糖含量分析梁正河南农业大学植物保护学院05级植物科学与技术专业1班摘要在Baker和Baker(1973)发现花蜜成分中氨基酸浓度与传粉者的类型有紧密联系之后,花蜜化学成分的研究才引起传粉生物学家的关注。相对于花的颜色、形状、大小和花粉等的研究,但有关花蜜的生物学研究还很缺乏。本文拟采用折光仪测定糖类、滤纸条茚三酮着色法估测氨基酸的方法比较油菜花蜜主要组分的变化，为进一步开展植物花蜜与昆虫关系研究奠定基础。本文采用的微型喷雾器法制作滤纸条，是一项独创性的技术。关键词花蜜；毛细管；花蜜采集；糖含量测定；便携式折光仪；氨基酸测定RapehoneyandsugarcontentofaminoacidanalysisLIANGZHENGPlantProtectionCollege，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002,ChinaAbstractInBakerandBaker(1973)foundthatconcentrationsofnectaraminoacidcompositionandthetypeofpollinatorsarecloselylinked,thestudyofthechemicalconstituentsofnectaronlycausedconcernpollinationbiologists.Comparedwiththeflowercolor,shape,size,andpollenstudies,etc.,butthenectarisstillalackofbiologicalresearch。Inthispaper,thedeterminationtobeadoptedRefractometersugar,filterpaperarticleNinhydrincoloringmethodstoestimateaminoacidcomponentsofrapeseedhoneymajorchangesinnectarplantsforfurtherstudyandlaythefoundationfortherelationshipbetweeninsects.Inthispaper,micro-spraymethod,filterpaper,itisauniquetechnology.KeywordsNectar；Capillary；Collectingnectar；Determinationofsugarcontent；PortableRefractometer；Determinationofaminoacids油菜是十字花科植物油菜的嫩茎叶，原产我国，颜色深绿，梆如白菜，属十字花科白菜变种。南北广为栽培，四季均有供产。花蜜的研究是花生物学中的一个重要内容，花蜜是陆生植物提供给食蜜动物(nectarivore)的一种独特的资源。长期以来,人们对花蜜的生物学意义的理解停留在花蜜是传粉者的食物报酬这一层面。在Baker和Baker(1973)发现花蜜成分中氨基酸浓度与传粉者的类型有紧密联系之后,19 花蜜化学成分的研究才引起传粉生物学家的关注。相对于花的颜色、形状、大小和花粉等的研究,但有关花蜜的生物学研究还很缺乏。其中一个重要原因是由于花蜜特征(包括分泌速率和组成成分等)的易变性。花蜜的特征不仅在开花的不同时期和一天内不同时段不同,而且随生物和非生物的环境发生变化。另外,花蜜成分的复杂性需要精密的仪器来分析,也在一定程度上阻碍了花蜜研究工作的开展。然而,最近的一些研究表明,花蜜与传粉者之外的多种访花者发生相互作用。花蜜可能被一些非传粉的动物消耗,使植物面临两难的境地,即防御非传粉的动物同时不伤害传粉者(Adler,2000)。如许多植物产生有毒的花蜜来防御植食动物,非传粉的访花者给植物带来的选择将可能与传粉者的选择相冲突。花蜜的进化生态学和群落生态学为动植物相互作用的研究提供了一个广阔的天地(Irwinetal.,2004)。但有关花蜜的进化生态学研究在我国还几乎是空白。蜜源植物花蜜是蜜蜂等传粉昆虫的食物来源，同时也是夜蛾类害虫补充营养的重要物质。油菜是人类栽培的春季主要蜜源植物，分布于重要农业害虫——粘虫春季迁飞的路径上，其开花泌蜜期均与粘虫的春季迁飞时期相吻合；油菜与粘虫没有密切的关系（王高平，2006）。开展这种春季主要蜜源植物花蜜组分的比较研究，有助于进一步揭示粘虫的种群动态机制。花蜜中的糖类和氨基酸对昆虫的取食和发育有重要作用，糖类提供了昆虫生命活动所需的能量，氨基酸的存在可促进昆虫的取食（Reillyetal.,1995）。国内描述植物花蜜采集方法的文献较多，但关于花蜜组分研究的报道很少。李左栋等（2006）比较了4种花蜜采集方法，认为毛细管法是最易操作和适用性最强的采集方法，滤纸条法则适用于泌蜜量少的蜜源植物，他们的研究结果显示，便携式折光仪检测花蜜糖含量的方法比较方便和准确，适于野外工作。国内未见花蜜中氨基酸测定的文献，而据外文资料记载，滤纸条茚三酮着色法具有快速、简便的特点，虽然不能得出精确的结果，但可用于花蜜中总氨基酸含量的初步测定（Reillyetal.,1995）。本项目拟采用折光仪测定糖类、滤纸条茚三酮着色法估测氨基酸的方法比较油菜花蜜主要组分的变化，为进一步开展植物花蜜与昆虫关系研究奠定基础。1材料与方法1.1实验所需材料的制备1.1.1实验药剂19 表1实验所需药品实验所需药品纯度生产厂家四硼酸钠AR天津市科密欧化学试剂开发中心蔗糖AR湖南湘中地质实验研究所硼酸AR天津市科密欧化学试剂有限公司茚三铜AR上海灵锦精细化工有限公司L-组氨酸AR中国惠兴生化试剂有限公司1.1.2实验器材100ml容量瓶10个，表面皿10个，100ml量筒1个，10ml量筒1个，100ml烧杯1个，500ml烧杯1个，玻璃棒，酒精灯，滤纸，温度计，WZ101、WZ103和WZ108便携式折射仪（北京万成北增精密仪器有限公司），20ml微型喷雾器（浙江玉环县微型喷雾器厂）6个等。1.1.3溶液配制1.1.3.12%茚三酮溶液取蒸馏水约30ml放入烧杯中，称取2.0g茚三酮固体加入到蒸馏水中。在酒精灯上加热，玻璃棒搅拌使之溶解。冷却后，定容至100ml容量瓶保存备用。1.1.3.2组氨酸溶液由于实验所需的组氨酸浓度为0.3～30mmol/L,所以暂时确定试验所用的5个组氨酸浓度梯度分别为0.3mmol/L,7.5mmol/L,15mmol/L,22.5mmol/L,30mmol/L。对应以上浓度分别称取组氨酸0.0047g,0.1164g,0.2327g,0.3491g,0.4655g.放入烧杯中溶解，将溶液导入容量瓶，洗涤烧杯和玻璃棒2～3次，将洗涤液导入容量瓶，并定容至100ml.在各个容量瓶上用标签注明各组氨酸溶液的浓度。1.1.3.3硼酸盐缓冲液的配制称取十水四硼酸钠0.3814g，硼酸0.06183g分别加入到煮沸过的蒸馏水中溶解，分别定容至100ml容量瓶中。制得0.01mol/L的四硼酸钠溶液和0.01mol/L的硼酸溶液。取50ml左右的硼酸溶液在大烧杯中，并不断向大烧杯中加入四硼酸钠溶液，边加入四硼酸钠溶液边调整PH值，直至PH值为8.5。将配好的缓冲液保存于试剂瓶中备用。19 1.1.3.4滤纸条的制备带上一次性塑胶手套，将滤纸裁剪成边长约4cm的正方形滤纸条。避免与其他可能造成滤纸条污染的物品接触，保存备用。1.2花蜜氨基酸分析操作方法的研究花蜜氨基酸分析采用滤纸条茚三酮比色法，氨基酸与茚三酮溶液反应可以生成紫色的水合茚三酮。不同浓度的氨基酸与同样浓度的茚三酮溶液在滤纸条上反应，显现颜色深浅不同。将不同的颜色深浅的滤纸条与事先做好的标准浓度的滤纸条进行比较，就可以确定实际的氨基酸浓度。由于蜜源植物单花花蜜量只有0.1-2.0微升，常规的茚三酮比色法无法用于花蜜氨基酸的测定，本文首先探索了花蜜氨基酸测定的操作方法。考虑到实际测定时会用毛细管采集花蜜，所以在实验中自然要用毛细管来滴加组氨酸溶液。操作方法的探索实际上是缓冲液和茚三酮溶液滴加方法的筛选。1.2.1定量毛细管-滴管滴加法将以上5个浓度的组氨酸溶液分别移加到5个表面皿中，并按照浓度由低到高的顺序对应排列。将PH8.5的硼酸盐缓冲液和2%的茚三酮溶液分别加入两个表面皿。考虑到实际测定时会用毛细管采集花蜜，所以在预备实验中也用毛细管来滴加组氨酸溶液。首先，用5微升的毛细管按照浓度由低到高的顺序分别吸取5个浓度的组氨酸。将毛细管的一端垂直接触滤纸中心，组氨酸会从毛细管流出到滤纸上。这样就得到含有5个不同浓度组氨酸的滤纸条。然后，用胶头滴管吸取PH8.5的硼酸盐缓冲液，滴加到滤纸条中心。待溶液稍微晾干时，再用胶头滴管滴加2%的茚三酮水溶液。每次最多滴加一滴。将以上处理好的滤纸条放入烘箱105°C烘干5分钟。1.2.2定量毛细管-定量毛细管法将以上5个浓度的组氨酸溶液分别移加到5个表面皿中，并按照浓度由低到高的顺序对应排列。将PH8.5的硼酸盐缓冲液和2%的茚三酮溶液分别加入两个表面皿。用5微升的毛细管吸取0.3mmol/L的组氨酸溶液，将毛细管口与滤纸条垂直接触就可以使毛细管内的组氨酸溶液加到滤纸条上。注意溶液要加到滤纸条的正中央。再用5微升的毛细管吸取PH8.5的硼酸盐缓冲溶液加到滤纸中央，使之与组氨酸的印迹重合，以便反应。然后，用5微升的毛细管吸取2%的茚三酮加到滤纸中央，印迹也要重合。在滤纸上标明浓度。同样的方法处理其他4个浓度的滤纸条。将处理过的滤纸条放入烘箱105°C烘干5分钟后取出。1.2.3定量毛细管-微型喷雾器喷雾法19 将配制好的PH8.5的硼酸盐缓冲液和2%的茚三酮溶液分别加入两个微型喷雾器。将以上5个浓度的组氨酸溶液分别移加到10个表面皿中，并按照浓度由低到高的顺序对应排列。用5微升的毛细管吸取0.3mmol/L的组氨酸溶液，将毛细管口与滤纸条垂直接触就可以使毛细管内的组氨酸溶液加到滤纸条上。注意溶液要加到滤纸条的正中央。将溶液在室温下晾干，再用装有硼酸盐缓冲液的微型喷雾器对准滤纸条中心位置，距离5cm喷施硼酸盐缓冲液。将滤纸条在室温下放置2-3分钟，晾干。再用装有2%茚三酮溶液的微型喷雾器对准滤纸条中心位置，距离5cm喷施茚三酮溶液。在滤纸条上标明组氨酸的浓度为0.3mmol/L。将处理好的滤纸条放入105°C的烘箱中烘干5分钟，取出观察显色。即为0.3mmol/L的标准滤纸条。按照以上步骤，分别制作其他4个浓度的组氨酸标准滤纸条。将5个浓度的标准滤纸条装订在一起，它们显色的深浅程度就可以作为实际氨基酸测定时的对照标准。1.2.4操作注意事项注意以上操作都应戴上一次性的塑胶手套，以避免手上汗液中的氨基酸对滤纸条的污染。操作过程还应该尽量避免试验台对标准滤纸条的污染，必要时可以在实验台上铺一层新滤纸。之所以用微型喷雾器喷施硼酸盐缓冲液和2%的茚三酮溶液，是为了避免两种溶液对非常微量的组氨酸的稀释作用，以保证实验的准确性。1.3单花泌蜜量1.3.1花蜜的采集毛细管法是一种很方便同时实用性很强的方法，同时结合油菜花蜜的分布特点以及国内外的研究表明，此方法比较适宜对油菜花蜜的提取。使用毛细管测量体积的计算公式为：花蜜体积=（毛细管中液柱长／毛细管总长）×毛细管的总体积（Cruden&Hermann,1983）。我们使用的毛细管是德国HirschmannLaborgerate生产的，规格1和5μl。花蜜的采集主要使用5微升的毛细管。戴上塑胶手套，将油菜花的花瓣撕开，使它们的蜜腺露出。然后，将毛细管的一端插入蜜腺附近吸取花蜜。注意油菜的蜜腺外露，容易观察到。将采集好的含有花蜜的毛细管用标签纸包裹好，标签纸上要提前注明采集的时间和花期。注意不要让标签纸接触毛细管的两端，以避免花蜜流出。为了探索一天中花蜜糖含量以及氨基酸含量是否发生变化，特意选取早上、中午和晚上三个时间段分别采集花蜜。19 将包裹好的标签纸夹在笔记本中间，笔记本平行放置，避免花蜜流出。最后将毛细管带回实验室检测。1.3.2单花泌蜜量所谓单花泌蜜量是指采集到的定量花蜜除以采集到那么多花蜜所需要的花朵数。1.4氨基酸含量的测定1.4.1初次测定戴上一次性塑胶手套。按照标准滤纸条的制备流程，首先将毛细管中的花蜜挤出到正方形滤纸条的中心位置。（挤出时要使用专用的乳胶头。先将毛细管一端插入乳胶头，再缓缓挤压乳胶头，使花蜜流出。）待花蜜稍微晾干时，用装有PH8.5硼酸盐缓冲溶液的微型喷雾器，距离5cm，向滤纸条中心位置喷施硼酸盐缓冲液。（一般情况下，每张滤纸条只喷施一次，但要保证硼酸盐缓冲液能均匀覆盖花蜜的印迹）室温下放置2-3分钟，使滤纸条晾干。然后，用装有2%茚三酮溶液的微型喷雾器，距离5cm，向滤纸条中心位置喷施茚三酮溶液。（同样每张滤纸条只喷施一次，还要保证茚三酮溶液能够覆盖花蜜的印迹）室温下晾干。最后，将滤纸条放入烘箱105°C烘干5分钟。取出滤纸条，观察显色深浅，并与标准滤纸条对照，以确定花蜜中氨基酸的浓度所处的区间范围。记录对比所得的数据。1.4.2标准比色滤纸条浓度的重新调整由初次测定得出的结果可以看出，标准滤纸条的浓度梯度设置过大，需要增加几个浓度梯度，这样可以保证测定结果更加精确。由初次测定结果可以得出，油菜花蜜中氨基酸的浓度主要集中在0~7.5mmol/L。所以暂时增加的几个浓度梯度是1.25mmol/L,2.5mmol/L,3.75mmol/L,5.0mmol/L,6.25mmol/L。新的浓度梯度是0.3mmol/L,1.25mmol/L,2.5mmol/L,3.75mmol/L,5.0mmol/L,6.25mmol/L,7.5mmol/L,15mmol/L,22.5mmol/L,30mmol/L共10个浓度梯度。对应每个浓度分别称取0.0047g,0.0194g,0.0388g,0.0582g,0.0776g,0.0970g,0.1164g,0.2327g,0.3491g,0.4655g组氨酸，配制成100ml标准溶液。按照1.2.3中提到的方法，制作标准比色滤纸条。作为实际测定时的对比标准。1.5糖含量测定19 1.5.1花蜜采集花蜜的采集与氨基酸测定时采用的方法一样，主要使用5微升的毛细管。戴上塑胶手套，将油菜花的花瓣撕开，使它们的蜜腺露出。然后，将毛细管的一端插入蜜腺附近吸取花蜜。1.5.2糖含量的测定糖含量的测定比较简单，可以在花蜜采集现场完成。折射仪使用前要进行调零。在20℃下，用折射仪专用的滴管吸取蒸馏水，在镜头上滴加2滴蒸馏水，盖上镜头盖，将镜头对准光线较强的方向，观察目镜。调节调零旋钮，使目镜视野中的明暗分界线与零刻度线重合。调零成功。用擦镜布将镜头擦拭干净，即可进行实际测定。将花蜜转移到折射仪镜头上。将采集满花蜜的毛细管一端插入乳胶头，另一端对准折射仪镜头中央位置，缓慢挤压乳胶头，使花蜜缓慢流出到折射仪镜头上。连续转移3~5管即可。然后，缓缓盖上折射仪镜头盖。最后将折射仪镜头对准光线明亮的地方，用目镜观察读出数据，并记录，同时还要记录当时的温度。因为便携式折光仪读取的数据是在20℃调零的基础上读取的，所以花蜜的糖浓度应该是读取的数据和外界温度引起的误差之和。注意在转移过程中，挤压乳胶头的力度一定要缓慢，如果力度过大或过猛，会造成花蜜从毛细管中喷出或者流不出来。花蜜一定要加在镜头的中央位置，这样观察最有效。连续加3~5管花蜜，尽量使几次转移的花蜜在镜头上聚集在一起，以减少下一步操作中气泡的产生。盖上镜头盖的时候动作要轻缓，否则会使花蜜液层中产生气泡，影响观察效果。在测量花蜜糖浓度的过程中，发现加样后随着时间的推移仪器的读数都会上升,而测量蔗糖则没有这种情况。原因可能是水分蒸发或花蜜中某些酶的作用所致，故加样后应该迅速读数。2.结果与分析2.1氨基酸测定方法的结果比较2.1.1定量毛细管-滴管滴加法取出后观察结果，显色印迹中间空白，外围紫色不均匀，呈中空圆形。不同浓度之间显色差异不明显。分析原因是加入的硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液量太大，对组氨酸的稀释作用太强，改变了组氨酸原来的浓度。所以，此方法虽然原理正确，但显色结果并不符合要求。19 虽然加入的硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液都只有1滴，但是相对于组氨酸5微升的体积和低至毫摩尔每升的浓度，它们对组氨酸的稀释作用仍显得太大。为了减小硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液对组氨酸的稀释作用，我们改用毛细管来加入以上两种溶液，这样可以大大降低一次性加入的硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液的量，从而减小对组氨酸溶液的稀释作用，使显色结果更精确。观察结果，显色印迹中间空白，外围紫色不均匀，呈中空圆形。不同浓度之间显色差异不明显。说明虽然方法原理正确，但实际操作中不能达到需要的效果。虽然加入的硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液都只有1滴，但是相对于组氨酸5微升的体积和低至毫摩尔每升的浓度，它们对组氨酸的稀释作用仍显得太大。方法不可行。图1定量毛细管-滴管滴加法制作的比色滤纸条2.1.2定量毛细管-定量毛细管法观察显色结果，比直接用胶头滴管来滴加硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液显色效果好，稀释问题有所减小但没有从根本上解决，不同浓度之间的显色差异仍不明显，还存在显色不均匀的现象。这样一来，我们所选取的5个组氨酸浓度梯度就失去了意义。19 为了在避免稀释作用的前提下，使硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液均匀地与组氨酸接触反应，我们必须探索新的途径来加入以上两种溶液。经过反复讨论，我们准备采用微型喷雾器来喷施PH8.5的硼酸盐缓冲液和2%茚三酮溶液，使它们与组氨酸接触反应。观察显色结果，比直接用胶头滴管来滴加硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液显色效果好，稀释作用有所减小但没有从根本上解决，不同浓度之间的显色差异仍不明显，还存在显色不均匀的现象。方法不可行。图2定量毛细管-定量毛细管法制作的比色滤纸条2.1.3定量毛细管-微型喷雾器喷雾法观察显色结果，每个滤纸条上的显色都均匀的呈现圆形，不同浓度的组氨酸之间显色差异明显。结果证明用微型喷雾器喷施硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液能够避免对组氨酸的稀释作用，还能保证它们与组氨酸均匀地接触反应。将5个浓度的组氨酸溶液的显色结果装订在一起，作为实际氨基酸浓度测量时的对照标准。至此，标准滤纸条的制备成功完成。19 观察显色结果，每个滤纸条上的显色都均匀的呈现圆形，不同浓度的组氨酸之间显色差异明显。结果证明用微型喷雾器喷施硼酸盐缓冲液和茚三酮溶液能够避免对组氨酸的稀释作用，还能保证它们与组氨酸均匀地接触反应。效果良好，方法可行。5个浓度梯度之间的显色差异比较大，可能使测定结果精确度下降。针对这个问题，可以等实际测定结果出来之后，根据实际测定结果调整浓度梯度。图3定量毛细管-微型喷雾器喷雾法制作的比色滤纸条2.2单花泌蜜量为了探索不同时间段花泌蜜量的变化，特意选取不同地点同一天早上、中午和晚上的花，然后分别采集花蜜，测得数据如下：19 表2油菜单花泌蜜量（μl）（毛庄）早上中午晚上初花期000000000盛花期0.330.210.330.420.280.250.360.190.27凋零期0.030.240.200.040.200.200.030.210.21表3单花泌蜜量（μl）(贾鲁河)早上中午晚上初花期000000000盛花期2.501.672.501.671.002.502.501.671.25凋零期2.502.501.251.671.251.671.671.251.67从表2和表3中列举的几组采集数据可以看出：不同地点生长的油菜由于生长环境的不同，花蜜量有很大的差异，贾鲁河的油菜由于生长环境比较适宜，单花的花蜜量明显比毛庄农场大。另外，不同时期的花，花蜜量也有很大差异，凋零期花蜜量明显低于盛花期。同样是10朵左右的花，盛花期能采集满5微升的毛细管；而凋零期却只能采集满1微升的毛细管。2.3氨基酸含量的测定结果19 表4油菜花蜜氨基酸浓度（mmol/L）（贾鲁河）早上中午晚上初花期000000000盛花期2.50.3-2.52.5-5.03.752.5-5.02.5-5.03.751.25-2.52.-5.02.51.25-2.52.5-5.00.3-2.52.50.3-2.52.5-3.751.25-2.55.0-7.52.50.3-2.53.75-5.0凋零期2.5-5.00.3-2.55.02.5-5.00.3-2.52.5-5.06.256.252.5-5.0图4油菜花蜜氨基酸含量测定结果（贾鲁河）19 2.4糖含量测定结果表5油菜花蜜糖含量（%）（毛庄）早上中午晚上初花期000000000盛花期53506856.54764.550.551.565凋零期54.552.5625849.559.5525366表6油菜花蜜糖含量（%）（贾鲁河）早上中午晚上初花期000000000盛花期16.411.8141811.615.221.613.213.8凋零期22.21214.61914.81623.412.614.219 01020304050607080早上中午晚上时间糖含量%第1组第2组第3组图5油菜盛花期糖含量（%）（毛庄）3结论与讨论3.1关于氨基酸浓度从测得的油菜氨基酸浓度中可以发现：花蜜的氨基酸含量根本不是一个固定的数值，而是一个范围，同时晚上氨基酸含量较高，说明白天植物制造的氨基酸会有积累，来满足生长的需要。相比较而言，凋零期是所有花期中氨基酸含量最高的一个时期，这应该与植物的新陈代谢强度降低有关。3.2关于糖含量从整体上来看，泌蜜量与糖含量呈负相关，中午糖含量较低，早上和晚上较高，这可能与植物的运输有关;不同地点的花蜜糖含量差异较大，说明花蜜糖含量受土壤肥力、温度以及其他外界条件影响较大。19 参考文献：1．李左栋，刘静萱黄双全.植物分类学报,2006,44(3):320–3262.BakerHG,bakeri.Aminoacidsinnectarandtheirevoluntionarysignificance,1973,Nature241:543-5453.IrwinRE,AdlerLS,AgrawalAA.Communityandevolutionaryecologyofnectar.2004,Ecology85:1477-14784．J.Romeis,F.L.ackers.PhysiogicalEntomology,2000,25,247-2535．J.Romeis,F.L.ackers.PhysiogicalEntomology,2002,27，148-1566.MckennaMA,ThomsonJD.Atechniqueforsamplingandmeasuringsmallamountsoffloralnectar.1988,Ecology69:1306-13077.SwansonCA,ShuelRW.Thecentrifugemethodformeasuringnectaryield.PlantPhysilogy,1950,25,513-52019 河南农业大学本科毕业实习中期检查表学院植物保护学院检查时间实习地点实习时间指导教师学生人数实验进展情况，实习日志记录情况，是否按预期实习进度进行学生出勤情况、学习态度情况指导教师意见存在问题及意见、建议检查人签名：年月日19 河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书学位论文题目油菜花蜜氨基酸及糖含量分析学位级别学生姓名梁正学科专业植物科学与技术导师姓名学位论文是否保密如需保密，解密时间年月日独创性声明本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。特此声明。学生签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日学位论文使用授权及知识产权归属承诺本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷本和电子版本，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。本人完全了解《河南农业大学知识产权保护办法》的有关规定，在毕业离开河南农业大学后，就在校期间从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单位为河南农业大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河南农业大学所有,否则，承担相应的法律责任。注：保密学位论文在解密后适用于本授权书。学生签名：导师签名：学院领导签名：日期：年月日日期：年月日日期：年月日19 指导教师评语（主要评价论文的工作量、试验数据的可靠性、论文的主要内容与特点、写作水平等）：论文的工作量：试验数据的可靠性：论文的主要内容与特点、写作水平：签名：年月日答辩委员会评语及论文成绩（主要评价论文的性质、难度、质量、综合训练、答辩情况、不足等。评定论文成绩）：论文的性质、难度、质量：学生的综合训练、答辩情况、不足等：论文成绩：主任委员签名：年月日19